（高清版）DB13∕T 5457-2021 马铃薯对黄萎病抗性评价技术规程

13I本文件规定了马铃薯对黄萎病(Verticilliumwilt)抗性的室内评价和田间评价的方法及程序。下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版标准病情指数(50.0)与同批次评价试验中感病对照品种病情指数的比值，记作K。养室(使温度保持在20℃~28℃)、不锈钢锅、电磁炉、培养皿、试管、剪子、镊子、三角瓶等。选择马铃薯黄萎菌强致病力菌株，在马铃薯琼脂培养基(PDA)上活化7d~10d,挑取菌落边缘1条件下恒温振荡培养5d后用2层灭菌纱布滤除菌丝，得到分生孢子悬浮液。在显微镜下用血球计数2将供试马铃薯品种及感病对照品种的种薯置于25℃催芽15d左右，待芽长至0.5cm后，用75%酒精消毒刀具，自尾芽开始切成立体小三角块(25g～50g),保证每块至少有1～2个芽眼。25℃摊开放置4h,待薯块切口风干后播种于薄壁塑料育苗盆。育苗盆口径为20cm,下部垫灭菌土(大田土壤重量：育苗基质重量=1:1,121℃,0.1MPa～0.15MPa,1h)5cm～6cm,压实，每盆放置3上部覆土厚度为3cm～4cm,灌足自来水，在温室中培养(培养温度为20℃~28℃,出苗后10h光照，14h黑暗。阴天开补光灯，光照过强使用遮阳网)。每个品种播种5盆作为1次重复，重复4次。采用人工伤根接种法。待马铃薯出苗后15d,用消毒的壁纸刀将花盆底部切掉，再用壁纸刀沿花盆底部平切伤根，然后放到底部铺有2cm灭菌土的同样新花盆中，置于接种液(2.0L)中浸泡30人工黄萎病圃应建立在马铃薯代表性产区或土壤气候条件相似、有利于黄萎病发生的地区；要求发病均匀，正常年份感病对照品种的病情指数达到40.0～60.0;病圃地势平坦，排灌方便，周围选用带短绒的棉花毛籽作为繁殖病原菌的营养基质。首先将棉花毛籽放入容器中，加入自来水 (洗涤灵浓度0.1%)将棉籽浸没，浸泡过夜；次日将棉籽装入纱袋中并用甩干机甩干，然后装入菌种繁殖袋中(每袋3.0kg),用棉塞和报纸封口，高压湿热灭菌1h(121℃,0.1MPa～0.15MPa)备将培养好的接种物用搅拌机或铁锨搅拌均匀至单粒棉籽基本分开状态于地表，随即浅层(约20cm)旋耕，使接种物与土壤混合均匀。按照当地种植方式播种马铃薯于人工病圃中，每个品种重复3～4次，每个重复至少20株。病情严重度分成五个级别，病级值分别为0,1,2,3和4。各病级症状描述如下：1级：病株显症叶片数占总叶片数的比例≤25%,叶肉变为淡黄色或呈不规则形的黄色病斑；2级：25%<病株显症叶片数占总叶片数的比例≤50%,叶部褪绿形成病斑，病斑颜色大部分为3级：50%<病株显症叶片数占总叶片数的比例≤75%,有少数叶片凋落；34级：病株显症叶片数占总叶片数的比例＞75%，多为褐色枯斑，有的病株叶片脱落成光杆，整病情指数（DI计算结果精确到小数点后1位）相对病情指数（RDI）感病对照品种病情指数在40.0～60.0之间可采用相对病情指数，超出范围 相对病情指数（RDI计算结果保留小数点后1位 9抗性评价123454A.1病原菌的分类地位A.2培养特性和孢子形态梗上的瓶梗末端逐个割裂。空气干燥时，孢子在瓶梗末端聚集成堆，空气湿润时，则形成孢子球。显微镜下制片观察时，孢子即散开，只留下梗端新生出的单个孢A.3症状盆栽马铃薯苗期黄萎病发病症状：下部叶片先表现症状，叶片或叶