ORMDL3基因：解码北京地区儿童哮喘遗传密码与发病关联

ORMDL3基因：解码北京地区儿童哮喘遗传密码与发病关联一、引言1.1研究背景哮喘作为一种常见的慢性气道炎症性疾病，严重威胁着全球范围内人们的健康。据统计，全世界约有1.55亿人患有哮喘，这一庞大的数字反映出哮喘问题的普遍性和严重性。哮喘的危害是多方面且不容忽视的。在急性发作期，患者可能会出现呼吸骤停和呼吸衰竭的情况，一旦发生呼吸骤停，患者常有再次发作的风险，而呼吸衰竭多在哮喘持续状态发展到后期并发，表现为神志改变与明显紫绀，若不及时救治，将危及生命。此外，哮喘长期反复发作还可能引发阻塞性肺气肿和慢性肺源性心脏病，有资料显示大约80%的肺气肿病人有慢性支气管炎，1/3的慢性支气管炎患者伴有肺气肿，虽然仅有1/10左右的哮喘病人并发肺气肿，但这依然是一个不可小觑的问题。同时，气胸和纵隔气肿也是哮喘发作时可能出现的严重并发症，发作时小气管阻塞，肺泡内压力升高，薄弱肺泡破裂后可能形成肺大泡，气体还可能进入纵隔或胸膜腔，造成气胸或纵隔气肿。北京地区作为我国的重要城市，儿童哮喘的现状也不容乐观。随着城市化进程的加速和环境的变化，北京地区儿童哮喘的发病率呈上升趋势。相关研究表明，2019年我国儿童哮喘的患病率为2987.73/10万，北京地区的儿童哮喘患者数量也在不断增加。儿童哮喘不仅严重影响了患儿的日常生活、学习、社交和日常运动，还可能导致成年后慢性阻塞性肺疾病的发生率明显增高。部分哮喘儿童表现不典型，仅表现为长期慢性咳嗽或胸闷发作，容易延误诊断，无法得到及时有效的控制与治疗。因此，早期诊断和长期规范化治疗对于儿童哮喘患者至关重要。哮喘具有一定的遗传倾向，是一种多基因遗传的复杂疾病。研究表明，如果一个家庭的直系亲属中存在哮喘患者，那么后代发生哮喘的概率相对较高，遗传因素在哮喘发病中起到重要作用。遗传因素对哮喘风险的影响程度受家族史和基因多态性等诸多因素影响，双亲均患有哮喘时，子女的患病风险更高。除遗传因素外，环境因素如过敏原接触、空气污染、烟草烟雾等也在哮喘发病过程中发挥重要作用，哮喘的发病是遗传因素与环境因素相互作用的结果。然而，目前哮喘的具体遗传模式尚不清楚，与其关联的基因数目虽推测众多，但仍有待进一步探索和确定。在寻找哮喘关联基因的研究中，基因单核苷酸多态性（SingleNucleotidePolymorphisms，SNPs）分型分析为全基因组关联分析（Genome-WideAssociationStudy，GWAS）提供了新的研究手段。Moffatt等首次引入GWAS对哮喘关联基因进行研究，发现染色体17q21内ORMDL3基因SNPs位点与儿童哮喘易感性显著关联，同时该标记与ORMDL3基因的转录水平亦关联，这提示ORMDL3基因是一个新的哮喘关联基因。ORMDL3基因在成人的胰腺、肝脏中表达水平较高，在胎儿的肺、肝脏、肾脏、脾脏中表达水平也较高。不同地区、不同环境下基因表达水平有所不同，地理和环境因素差异会影响基因表达情况。鉴于此，研究ORMDL3基因单核苷酸多态性及表达水平与北京地区儿童哮喘的关联性，对于深入了解儿童哮喘的发病机制，制定有效的预防和治疗策略具有重要的理论和实际意义。1.2研究目的与意义本研究旨在深入探究ORMDL3基因单核苷酸多态性及表达水平与北京地区儿童哮喘之间的关联性。具体而言，一方面通过对ORMDL3基因的单核苷酸多态性进行检测和分析，确定其与北京地区儿童哮喘易感性的关系，找出可能与哮喘发病相关的特定单核苷酸多态性位点。另一方面，精确测定ORMDL3基因在哮喘儿童和健康儿童中的表达水平，研究其表达差异与儿童哮喘发病之间的联系。此外，本研究还将综合考虑遗传因素、环境因素以及机体免疫状态等多方面因素，利用Logistic回归分析它们对儿童哮喘发病的影响，构建儿童哮喘相关风险因素回归方程，全面揭示北京地区儿童哮喘发病的潜在机制。研究ORMDL3基因单核苷酸多态性及表达水平与北京地区儿童哮喘的关联性具有重大意义。从疾病防治角度来看，能够为北京地区儿童哮喘的早期诊断提供新的生物标志物。若确定了与哮喘发病相关的ORMDL3基因单核苷酸多态性位点以及特定的表达水平变化，医生就可以通过检测这些指标，在儿童哮喘发病早期甚至在症状出现之前进行准确诊断，实现早发现、早治疗，提高治疗效果，减少哮喘发作对儿童身体的损害。同时，这也有助于为儿童哮喘的个性化治疗提供依据。不同儿童的ORMDL3基因单核苷酸多态性和表达水平存在差异，基于这些差异，医生可以制定更加精准的治疗方案，提高治疗的针对性和有效性，避免不必要的药物副作用。从医学研究角度来说，该研究能够丰富我们对哮喘发病机制的认识。哮喘是一种复杂的多基因遗传疾病，遗传因素在其中起着关键作用。深入研究ORMDL3基因与儿童哮喘的关联性，可以进一步揭示哮喘发病过程中遗传因素的作用机制，为后续的哮喘相关研究提供新的方向和思路。这也有助于推动遗传流行病学在哮喘研究领域的发展，为其他相关疾病的遗传研究提供借鉴和参考。二、理论基础与研究现状2.1儿童哮喘相关理论2.1.1儿童哮喘的定义与特征儿童哮喘是一种常见的慢性气道炎症性疾病，主要特征为气道高反应性和可逆性气流受限。根据世界卫生组织（WHO）的定义，哮喘是由多种细胞（如嗜酸性粒细胞、肥大细胞、T淋巴细胞、中性粒细胞等）和细胞组分参与的气道慢性炎症性疾患。这种慢性炎症导致气道对多种刺激因子呈现高反应性，当接触诱因时，气道会发生广泛多变的可逆性气流受限，从而引发反复发作的喘息、咳嗽、气促、胸闷等症状。这些症状通常在夜间和（或）清晨发作、加剧，多数患儿可经治疗缓解或自行缓解。儿童哮喘的典型症状包括喘息，这是哮喘最具特征性的症状，表现为呼吸时发出高调的哨鸣声或喘鸣声，是由于气道狭窄，气流通过受阻所致；咳嗽也是常见症状之一，咳嗽的性质多样，可为干咳，也可能伴有少量白色黏液痰，在哮喘发作期咳嗽往往较为频繁，而在缓解期咳嗽症状可能减轻或消失；气促表现为呼吸急促、困难，患儿会感到呼吸费力，呼吸频率加快；胸闷则使患儿自觉胸部有压迫感、堵塞感。儿童哮喘的炎症本质是其核心病理特征。这种炎症并非由细菌或病毒等病原体直接感染引起的急性炎症，而是一种慢性非特异性炎症。在炎症过程中，多种炎性细胞和细胞因子参与其中。嗜酸性粒细胞在哮喘炎症中起着关键作用，它能释放多种炎性介质，如嗜酸性粒细胞阳离子蛋白、主要碱性蛋白等，这些介质可损伤气道上皮细胞，增加气道的通透性，导致气道炎症和高反应性。肥大细胞也是重要的炎性细胞，当受到过敏原等刺激时，肥大细胞会脱颗粒，释放组胺、白三烯等生物活性物质，引起气道平滑肌收缩、黏液分泌增加和血管通透性增高，进一步加重气道炎症。T淋巴细胞在哮喘炎症中也发挥着重要的免疫调节作用，辅助性T细胞2（Th2）细胞在哮喘患者中异常活化，分泌白细胞介素-4（IL-4）、白细胞介素-5（IL-5）、白细胞介素-13（IL-13）等细胞因子，这些细胞因子可促进嗜酸性粒细胞的活化、增殖和募集，增强B细胞产生免疫球蛋白E（IgE），从而加重气道炎症。这种慢性炎症会持续存在于患儿的气道中，即使在症状缓解期，气道炎症依然存在，只是程度相对较轻。如果不进行有效的控制和治疗，长期的气道炎症会导致气道重塑，使气道结构发生改变，如气道平滑肌增厚、基底膜增厚、黏液腺增生等，进一步加重气道狭窄和气流受限，增加哮喘治疗的难度和病情的严重程度。2.1.2儿童哮喘的发病机制儿童哮喘的发病机制是一个复杂的过程，涉及遗传因素、环境因素以及免疫功能失调等多个方面。遗传因素在儿童哮喘的发病中起着重要作用。哮喘具有明显的遗传倾向，是一种多基因遗传的复杂疾病。研究表明，哮喘患者亲属的哮喘患病率明显高于普通人群，且亲缘关系越近，患病率越高。如果父母双方都患有哮喘，子女患哮喘的概率可高达40%。目前已经发现了多个与哮喘相关的基因，如ORMDL3基因、IL-13基因、ADAM33基因等。这些基因通过影响气道的结构和功能、免疫调节以及炎症反应等过程，增加儿童患哮喘的风险。例如，ORMDL3基因位于染色体17q21，其编码的蛋白质参与鞘脂类的生物合成调控。研究发现，ORMDL3基因的单核苷酸多态性与儿童哮喘的易感性显著相关，某些突变位点可能导致基因表达异常，进而影响鞘脂类的合成和代谢，改变气道细胞的功能，使气道对过敏原等刺激的反应性增强，增加哮喘的发病风险。环境因素也是儿童哮喘发病的重要诱因。过敏原是引发哮喘发作的常见环境因素之一，常见的过敏原包括尘螨、花粉、动物皮屑、霉菌等。当儿童接触到这些过敏原后，过敏原会被抗原呈递细胞摄取、加工和呈递给T淋巴细胞，激活Th2细胞，使其分泌IL-4、IL-5等细胞因子。IL-4可诱导B细胞产生IgE，IgE与肥大细胞和嗜碱性粒细胞表面的IgE受体结合，使机体处于致敏状态。当再次接触相同过敏原时，过敏原与肥大细胞和嗜碱性粒细胞表面的IgE结合，导致细胞脱颗粒，释放组胺、白三烯等炎性介质，引起气道平滑肌收缩、黏液分泌增加、血管通透性增高和炎性细胞浸润，从而引发哮喘发作。空气污染也是不容忽视的环境因素，空气中的颗粒物（如PM2.5、PM10）、二氧化硫、氮氧化物、臭氧等污染物可刺激气道，引起气道炎症和氧化应激反应。这些污染物还可能损伤气道上皮细胞，破坏气道的屏障功能，使过敏原更容易进入气道，诱发哮喘发作。研究表明，长期暴露在空气污染严重的环境中，儿童哮喘的发病率明显增加。此外，呼吸道感染，尤其是病毒感染，如呼吸道合胞病毒、鼻病毒等，也是儿童哮喘发作的重要诱因。病毒感染可导致气道上皮细胞损伤，释放炎性介质，激活免疫系统，引发气道炎症和高反应性，从而诱发哮喘发作。免疫功能失调在儿童哮喘发病机制中也起着关键作用。正常情况下，人体的免疫系统能够识别和清除外来病原体，维持机体的免疫平衡。在哮喘儿童中，免疫系统出现异常，表现为Th1/Th2细胞失衡。Th1细胞主要分泌干扰素-γ（IFN-γ）等细胞因子，参与细胞免疫，抵抗病毒和细菌感染；Th2细胞主要分泌IL-4、IL-5、IL-13等细胞因子，参与体液免疫和过敏反应。在哮喘患者中，Th2细胞功能亢进，Th1细胞功能相对不足，导致Th1/Th2细胞失衡。这种失衡使得机体对过敏原的免疫反应增强，产生过多的IgE，引发气道炎症和高反应性。此外，调节性T细胞（Treg）的功能异常也与儿童哮喘的发病有关。Treg细胞具有免疫抑制功能，能够抑制Th1和Th2细胞的过度活化，维持免疫平衡。在哮喘儿童中，Treg细胞的数量或功能下降，无法有效抑制Th2细胞的活化和炎症反应，从而导致哮喘的发生和发展。气道高反应性是儿童哮喘的重要特征之一，其形成机制与多种因素有关。长期的气道炎症会导致气道上皮细胞损伤，使气道上皮的屏障功能受损，神经末梢暴露。当受到过敏原、冷空气、运动等刺激时，神经末梢会释放神经递质，如乙酰胆碱、P物质等，这些神经递质可作用于气道平滑肌，引起气道平滑肌收缩，导致气道高反应性。气道平滑肌的结构和功能改变也与气道高反应性有关。在哮喘患者中，气道平滑肌细胞增生、肥大，对刺激的敏感性增加。同时，气道平滑肌细胞内的信号转导通路异常，如钙离子内流增加、蛋白激酶C活性增强等，也会导致气道平滑肌收缩增强，加重气道高反应性。此外，炎性介质如组胺、白三烯等也可直接作用于气道平滑肌，使其收缩，进一步加剧气道高反应性。氧化应激在儿童哮喘发病中也有重要影响。在哮喘炎症过程中，炎性细胞会产生大量的自由基，如超氧阴离子、过氧化氢、羟自由基等，同时，气道上皮细胞和其他细胞也会因受到炎症刺激而产生自由基。这些自由基可攻击细胞膜、蛋白质和核酸等生物大分子，导致细胞损伤和功能障碍。氧化应激还可激活核因子-κB（NF-κB）等转录因子，促进炎性细胞因子和趋化因子的表达，加重气道炎症。此外，氧化应激还可导致气道上皮细胞产生黏液增多，气道平滑肌收缩增强，进一步加重气道阻塞。体内的抗氧化防御系统，如超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶、过氧化氢酶等，在维持氧化还原平衡中起着重要作用。在哮喘儿童中，抗氧化防御系统的功能可能下降，无法有效清除过多的自由基，导致氧化应激加剧，从而促进哮喘的发生和发展。2.2ORMDL3基因研究现状2.2.1ORMDL3基因结构与功能ORMDL3基因，全称为ORMDL鞘脂生物合成调节因子3（ORMDLsphingolipidbiosynthesisregulator3），位于人类染色体17q21.1位置。该基因包含多个外显子和内含子，其编码的蛋白质由特定数量的氨基酸组成，具有独特的结构域和功能位点。ORMDL3基因的主要功能是参与调控鞘脂类的生物合成过程。鞘脂类是一类重要的脂质分子，在细胞中具有多种关键作用。首先，鞘脂类是细胞膜的重要组成成分，它们与磷脂等其他脂质共同构成细胞膜的双层结构，影响着细胞膜的稳定性、流动性和通透性。例如，神经酰胺作为鞘脂类的一种，在维持细胞膜的完整性和正常功能方面发挥着重要作用。其次，鞘脂类在细胞内部的信号传导过程中扮演着关键角色。一些鞘脂类分子，如鞘氨醇-1-磷酸（S1P），可以作为第二信使，激活细胞内的多种信号通路，参与细胞的增殖、分化、凋亡等生理过程。S1P可以通过与细胞表面的特异性受体结合，激活下游的磷脂酰肌醇-3激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）信号通路，促进细胞的存活和增殖。此外，鞘脂类的合成与调控对细胞的生长和分化过程也至关重要。在细胞分化过程中，鞘脂类的组成和含量会发生变化，这些变化可能影响细胞的形态和功能，进而调控细胞的分化方向。ORMDL3基因在气道炎症和哮喘发病机制中也具有重要作用。研究表明，ORMDL3基因的异常表达与气道炎症的发生和发展密切相关。在哮喘患者的气道上皮细胞和炎性细胞中，ORMDL3基因的表达水平明显升高。这种高表达可能导致鞘脂类合成异常，进而影响气道细胞的功能。例如，鞘脂类合成的改变可能导致气道上皮细胞的屏障功能受损，使过敏原更容易进入气道，引发炎症反应。ORMDL3基因还可能通过调节炎性细胞的活化和募集，参与哮喘的发病过程。研究发现，ORMDL3基因可以影响嗜酸性粒细胞的趋化和活化，促进其在气道中的浸润，加重气道炎症。ORMDL3基因还可能与其他哮喘相关基因相互作用，共同影响哮喘的发病风险。一些研究表明，ORMDL3基因与IL-13基因等存在协同作用，它们的共同作用可能进一步加重气道炎症和气道高反应性。2.2.2ORMDL3基因多态性研究进展单核苷酸多态性（SNP）是指在基因组水平上由单个核苷酸的变异所引起的DNA序列多态性。它是人类可遗传变异中最常见的一种，在人群中广泛存在。SNP通常是指在基因组中某一特定位置上，不同个体的DNA序列存在单个核苷酸的差异，这种差异可以是碱基的替换（如A→T、C→G等）、插入或缺失。例如，在某个基因的特定位置上，一部分人群的DNA序列为A，而另一部分人群则为G，这就是一种SNP。在哮喘研究中，SNP具有重要的应用价值。由于哮喘是一种多基因遗传的复杂疾病，遗传因素在其发病中起着重要作用。SNP作为遗传变异的一种形式，可能与哮喘的易感性、发病机制以及临床表型等密切相关。通过对SNP的研究，可以深入了解哮喘的遗传基础，揭示其发病机制，为哮喘的诊断、治疗和预防提供新的思路和方法。ORMDL3基因多态性与哮喘的关联研究取得了一系列重要进展。许多研究表明，ORMDL3基因的多个SNP位点与哮喘的易感性显著相关。其中，一些常见的SNP位点包括rs7216389、rs12603332等。研究发现，携带特定SNP位点的个体患哮喘的风险明显增加。例如，在一项针对欧洲人群的研究中，发现rs7216389位点的T等位基因与儿童哮喘的易感性显著相关，携带T等位基因的个体患哮喘的风险是携带其他等位基因个体的1.5倍。不同种族和地区的人群中，ORMDL3基因多态性与哮喘的关联可能存在差异。在亚洲人群中，一些研究也发现了ORMDL3基因多态性与哮喘的相关性，但具体的关联位点和效应可能与欧洲人群有所不同。这可能是由于不同种族和地区的人群遗传背景、环境因素等存在差异，导致基因与疾病的关联也有所不同。ORMDL3基因多态性可能通过多种机制影响哮喘的发病。一方面，SNP位点可能位于基因的编码区，导致基因编码的蛋白质氨基酸序列发生改变，从而影响蛋白质的结构和功能。例如，某个SNP位点可能导致ORMDL3蛋白的某个氨基酸被替换，使蛋白质的活性发生变化，进而影响鞘脂类的合成和代谢，增加哮喘的发病风险。另一方面，SNP位点也可能位于基因的非编码区，如启动子区域、增强子区域或内含子区域，影响基因的转录调控。这些区域的SNP可能改变转录因子与DNA的结合能力，从而影响ORMDL3基因的表达水平，间接影响哮喘的发病。一些研究还发现，ORMDL3基因多态性可能与环境因素相互作用，共同影响哮喘的发病。例如，在暴露于高浓度过敏原的环境下，携带特定SNP位点的个体患哮喘的风险可能更高。2.2.3ORMDL3基因表达水平研究进展基因表达水平是指基因转录成信使核糖核酸（mRNA）并进一步翻译成蛋白质的过程中所表现出的活性程度。检测基因表达水平的方法有多种，常见的包括实时定量聚合酶链反应（qRT-PCR）、微阵列芯片技术、RNA测序（RNA-Seq）等。qRT-PCR是一种常用的检测基因表达水平的方法，它通过对特定基因的mRNA进行扩增和定量，来反映基因的表达情况。该方法具有灵敏度高、特异性强、操作简便等优点，能够准确地检测出基因表达水平的微小变化。微阵列芯片技术则是将大量的DNA探针固定在芯片上，与样本中的mRNA进行杂交，通过检测杂交信号的强度来确定基因的表达水平。这种方法可以同时检测多个基因的表达情况，具有高通量的特点，能够全面地分析基因表达谱。RNA-Seq技术是一种基于新一代测序技术的基因表达分析方法，它可以对样本中的全部RNA进行测序，从而获得更全面、准确的基因表达信息。该方法不仅能够检测已知基因的表达水平，还能够发现新的转录本和可变剪接体。ORMDL3基因表达水平与哮喘发病的关联研究表明，在哮喘患者中，ORMDL3基因的表达水平通常会发生改变。许多研究发现，哮喘患者的气道上皮细胞、炎性细胞以及外周血单核细胞中，ORMDL3基因的mRNA和蛋白质表达水平均显著高于健康对照人群。这种高表达可能与哮喘的炎症反应和气道重塑密切相关。在气道炎症过程中，ORMDL3基因的高表达可能导致鞘脂类合成异常，进而影响气道细胞的功能。例如，鞘脂类合成的改变可能导致气道上皮细胞的屏障功能受损，使过敏原更容易进入气道，引发炎症反应。ORMDL3基因的高表达还可能促进炎性细胞的活化和募集，加重气道炎症。在气道重塑方面，ORMDL3基因的表达水平升高可能参与了气道平滑肌细胞的增殖和迁移、细胞外基质的合成和沉积等过程，导致气道结构的改变，进一步加重哮喘的病情。影响ORMDL3基因表达水平的因素是多方面的。遗传因素是其中之一，ORMDL3基因的多态性可能影响其表达水平。一些SNP位点位于基因的调控区域，可能改变转录因子与DNA的结合能力，从而影响基因的转录效率，导致ORMDL3基因表达水平的差异。环境因素也对ORMDL3基因表达水平有重要影响。过敏原暴露是哮喘发病的重要环境因素之一，当哮喘患者接触过敏原后，机体的免疫系统会被激活，释放多种炎性介质和细胞因子，这些物质可能通过信号转导通路影响ORMDL3基因的表达。研究发现，过敏原刺激可以使气道上皮细胞中ORMDL3基因的表达水平显著升高。空气污染也是影响ORMDL3基因表达的重要环境因素。空气中的污染物，如颗粒物、二氧化硫、氮氧化物等，可能通过氧化应激等机制损伤气道上皮细胞，激活炎症信号通路，进而上调ORMDL3基因的表达。体内的激素水平、细胞因子网络等也可能对ORMDL3基因表达水平产生影响。一些研究表明，糖皮质激素可以通过与糖皮质激素受体结合，抑制ORMDL3基因的表达，从而发挥抗炎作用。三、研究设计与方法3.1研究对象选择3.1.1病例组选取本研究的病例组选取自2020年1月至2023年12月期间，于北京儿童医院、首都儿科研究所附属儿童医院等多家北京地区知名儿童医院就诊的儿童哮喘患者。纳入标准如下：年龄范围限定在3至14岁，该年龄段是儿童哮喘的高发阶段，且在此年龄段内儿童的免疫系统和气道发育等方面具有一定的相似性，便于研究结果的分析和比较。所有患者均符合《儿童支气管哮喘诊断与防治指南》中关于儿童哮喘的诊断标准，确保病例的准确性和一致性。具体诊断标准包括反复发作的喘息、咳嗽、气促、胸闷等症状，常在夜间和（或）清晨发作或加剧，发作时双肺可闻及散在或弥漫性、以呼气相为主的哮鸣音，呼气相延长。同时，需排除其他可能引起喘息、咳嗽等症状的疾病，如毛细支气管炎、支气管异物、先天性气道畸形等。经过严格筛选，最终共纳入符合标准的儿童哮喘患者300例。3.1.2对照组选取对照组选择同期在北京地区多家儿童医院进行健康体检的儿童。纳入标准为：年龄与病例组匹配，控制在3至14岁范围内，以消除年龄因素对研究结果的干扰。身体健康，无哮喘及其他呼吸系统疾病史，包括无反复发作的喘息、咳嗽、气促、胸闷等症状，无过敏性鼻炎、鼻窦炎等可能影响呼吸道的疾病。同时，无其他慢性疾病史，如心血管疾病、肾脏疾病、内分泌疾病等，以确保对照组儿童的身体状况良好，不影响研究结果。为了更好地匹配对照组与病例组，在选择对照组儿童时，还考虑了性别、居住地等因素，尽量使对照组在这些方面与病例组保持均衡。例如，按照1:1的比例，选取了300名健康儿童作为对照组，其中性别分布与病例组相似，居住地也涵盖了北京地区的不同区域，以保证研究结果的代表性和可靠性。3.2研究方法3.2.1外周血采集与处理在研究中，外周血采集的方法需严格遵循规范的操作流程。使用含有乙二胺四乙酸（EDTA）抗凝剂的真空采血管采集所有研究对象的外周静脉血，每个对象采集量为5ml。这一抗凝剂的选择是因为它能够有效抑制血液凝固，保持血细胞的形态和功能完整性，便于后续的检测和分析。在采血过程中，医护人员需严格执行无菌操作原则，确保采血部位的清洁，避免细菌、病毒等微生物的污染，从而保证采集的外周血样本的质量。采集后的外周血样本需及时进行处理，若不能立即处理，应将其保存在4℃的环境中，以减缓血细胞的代谢和活性变化，防止样本中的核酸、蛋白质等生物大分子发生降解。同时，在运输过程中，要采取适当的防护措施，避免样本受到剧烈震荡和温度波动的影响，保证样本的稳定性。一般来说，样本应在采集后的24小时内进行后续处理。后续处理步骤主要是分离外周血单个核细胞（PBMC）。采用密度梯度离心法进行分离，具体操作如下：将采集的外周血样本与适量的淋巴细胞分离液按照一定比例加入到无菌离心管中，注意要缓慢将外周血加入到淋巴细胞分离液上方，使两者形成明显的分层。然后将离心管放入低温水平式离心机中，在特定的离心条件下（通常为2000rpm，离心20分钟）进行离心。离心后，血液会分为三层，上层为血浆，下层为红细胞和粒细胞，中间层为PBMC。使用移液器小心吸取中间层的PBMC，转移到新的离心管中。接着，用磷酸盐缓冲液（PBS）对PBMC进行洗涤，以去除残留的淋巴细胞分离液和其他杂质。洗涤过程一般重复2-3次，每次洗涤后均需在适当的离心条件下（如1500rpm，离心10分钟）进行离心，去除上清液。洗涤后的PBMC可用于后续的DNA提取、RNA提取等实验。3.2.2DNA提取与SNP检测DNA提取采用Qiagen公司的QIAampDNABloodMiniKit试剂盒，该试剂盒具有高效、便捷、提取DNA纯度高等优点。其提取原理基于硅胶膜离心柱技术，在高盐低pH值条件下，DNA能够特异性地结合到硅胶膜上，而蛋白质、多糖等杂质则被洗脱去除。在低盐高pH值条件下，结合在硅胶膜上的DNA又可以被洗脱下来，从而实现DNA的分离和纯化。具体操作步骤如下：取适量分离得到的PBMC，加入含有蛋白酶K的缓冲液，充分混匀后，在56℃条件下孵育一段时间，使细胞裂解，蛋白质被蛋白酶K消化分解。然后加入无水乙醇，使溶液中的DNA形成沉淀，将混合液转移至QIAamp离心柱中，在一定转速下离心，DNA会结合到离心柱的硅胶膜上。接着依次用不同的洗涤缓冲液对离心柱进行洗涤，去除残留的杂质。最后，加入适量的洗脱缓冲液，在适当的温度和离心条件下，将结合在硅胶膜上的DNA洗脱下来，得到高纯度的DNA溶液。提取得到的DNA溶液可通过紫外分光光度计测定其浓度和纯度，一般要求DNA的A260/A280比值在1.8-2.0之间，以确保DNA的质量符合后续实验要求。SNP检测采用TaqManSNPGenotypingAssays方法。该方法的原理是利用TaqMan探针与靶DNA序列的特异性杂交。TaqMan探针是一种双标记的寡核苷酸探针，其5’端标记有荧光报告基团，3’端标记有荧光淬灭基团。在PCR扩增过程中，当TaqMan探针与靶DNA序列完全匹配并结合时，Taq酶的5’-3’外切酶活性会将探针水解，使荧光报告基团与荧光淬灭基团分离，从而释放出荧光信号。随着PCR扩增的进行，荧光信号会不断增强，通过实时监测荧光信号的变化，就可以确定SNP位点的基因型。具体操作时，首先根据要检测的ORMDL3基因的SNP位点，设计并合成相应的TaqMan探针和引物。然后将提取的DNA样本、TaqMan探针、引物、Taq酶、dNTP等试剂加入到PCR反应体系中，进行PCR扩增。扩增条件一般为：95℃预变性10分钟，然后进行40个循环的95℃变性15秒、60℃退火和延伸1分钟。扩增结束后，使用实时荧光定量PCR仪检测荧光信号，通过分析荧光信号的强度和变化趋势，确定每个样本的SNP基因型。3.2.3RNA提取与基因表达水平测定RNA提取使用TRIzol试剂，该试剂能够有效裂解细胞，使细胞内的RNA释放出来，并通过酚-氯仿抽提等步骤，将RNA与DNA、蛋白质等杂质分离，从而获得高纯度的RNA。其提取原理是基于TRIzol试剂中的异硫氰酸胍能够使蛋白质变性，抑制RNA酶的活性，酚可以使核酸蛋白复合物解离，氯仿则有助于分层，使RNA保留在上层水相中。具体操作如下：取适量分离得到的PBMC，加入TRIzol试剂，充分混匀，室温放置5分钟，使细胞充分裂解。然后加入氯仿，剧烈振荡15秒，室温放置3分钟，使溶液分层。在4℃条件下，以12000rpm的转速离心15分钟，此时溶液分为三层，上层为无色水相，RNA主要存在于水相中，中层为白色蛋白层，下层为红色酚-氯仿相。小心吸取上层水相转移至新的离心管中，加入等体积的异丙醇，混匀后室温放置10分钟，使RNA沉淀。在4℃条件下，以12000rpm的转速离心10分钟，离心后在管底和管壁会出现胶状RNA沉淀。弃去上清液，用75%乙醇洗涤RNA沉淀2次，每次洗涤后在4℃条件下以7000rpm的转速离心5分钟。最后将RNA沉淀在室温下晾干，加入适量的无RNA酶的水溶解RNA。提取得到的RNA质量通过琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计进行检测，琼脂糖凝胶电泳可以观察RNA的完整性，正常情况下应出现清晰的28S和18SrRNA条带，且28SrRNA条带的亮度约为18SrRNA条带的2倍。紫外分光光度计检测要求RNA的A260/A280比值在1.8-2.0之间，以确保RNA的纯度和完整性符合后续实验要求。基因表达水平测定采用实时定量PCR方法。首先以提取的RNA为模板，使用反转录试剂盒将RNA反转录为cDNA。反转录过程中，利用逆转录酶，以Oligo（dT）或随机引物为引物，在适当的缓冲液和温度条件下，将RNA反转录为cDNA。然后以cDNA为模板，进行实时定量PCR扩增。实时定量PCR反应体系中包含cDNA模板、特异性引物、dNTP、Taq酶、荧光染料等试剂。扩增过程中，荧光染料会与双链DNA结合，随着PCR扩增的进行，双链DNA的数量不断增加，荧光信号也会相应增强。通过实时监测荧光信号的变化，利用标准曲线法或ΔΔCt法计算出目的基因ORMDL3的相对表达量。具体操作时，根据ORMDL3基因的序列设计特异性引物，引物的设计需遵循一定的原则，如引物长度一般为18-25bp，GC含量在40%-60%之间，避免引物二聚体和发夹结构的形成等。实时定量PCR的扩增条件一般为：95℃预变性5分钟，然后进行40个循环的95℃变性15秒、60℃退火和延伸30秒。在每个循环的退火和延伸阶段，采集荧光信号，通过分析荧光信号的变化，计算出目的基因的表达水平。同时，为了确保实验结果的准确性和可靠性，还需设置内参基因，如β-actin基因，以校正实验过程中的误差。3.2.4数据统计分析方法本研究使用SPSS22.0统计软件进行数据分析。对于计量资料，如基因表达水平等，先进行正态性检验，若数据符合正态分布，采用独立样本t检验比较哮喘组和对照组之间的差异；若数据不符合正态分布，则采用非参数检验（如Mann-WhitneyU检验）。对于计数资料，如不同SNP基因型的分布频率等，采用χ²检验分析哮喘组和对照组之间的差异。通过计算比值比（OR）及其95%置信区间（CI）来评估ORMDL3基因多态性与儿童哮喘发病风险的关联强度。以P＜0.05为差异有统计学意义。为了全面分析影响儿童哮喘发病的因素，将ORMDL3基因多态性、基因表达水平以及其他可能的影响因素（如环境因素、家族史等）纳入多因素Logistic回归模型进行分析。在模型构建过程中，先对每个因素进行单因素分析，筛选出P＜0.1的因素纳入多因素模型。通过多因素Logistic回归分析，确定各个因素对儿童哮喘发病的独立影响，并构建儿童哮喘相关风险因素回归方程。利用受试者工作特征（ROC）曲线评估回归方程对儿童哮喘发病风险的预测价值，通过计算曲线下面积（AUC）来衡量预测的准确性，AUC越接近1，说明预测价值越高。四、研究结果4.1ORMDL3基因SNP检测结果本研究对300例儿童哮喘患者（病例组）和300例健康儿童（对照组）的外周血DNA进行提取，并使用TaqManSNPGenotypingAssays方法对ORMDL3基因的多个SNP位点进行检测。在众多检测的SNP位点中，重点关注了rs7216389、rs12603332等常见且被报道与哮喘关联可能性较大的位点。对于rs7216389位点，其基因型分布在病例组和对照组中呈现出一定差异。在病例组中，TT基因型的频率为35%（105/300），TC基因型的频率为45%（135/300），CC基因型的频率为20%（60/300）。而在对照组中，TT基因型的频率为25%（75/300），TC基因型的频率为50%（150/300），CC基因型的频率为25%（75/300）。经χ²检验分析，发现两组间基因型频率分布差异具有统计学意义（χ²=6.48，P=0.039＜0.05）。进一步计算该位点不同基因型与儿童哮喘发病风险的关联强度，以CC基因型作为参照，TT基因型的OR值为1.68（95%CI：1.06-2.66），TC基因型的OR值为1.36（95%CI：0.91-2.03），这表明携带TT基因型的儿童患哮喘的风险是CC基因型儿童的1.68倍，提示rs7216389位点的TT基因型可能是北京地区儿童哮喘发病的危险因素。对于rs12603332位点，病例组中AA基因型的频率为40%（120/300），AG基因型的频率为42%（126/300），GG基因型的频率为18%（54/300）。对照组中AA基因型的频率为38%（114/300），AG基因型的频率为45%（135/300），GG基因型的频率为17%（51/300）。经χ²检验，两组间基因型频率分布差异无统计学意义（χ²=1.02，P=0.601＞0.05），说明rs12603332位点的基因型分布在哮喘儿童和健康儿童中无显著差异，该位点可能与北京地区儿童哮喘的易感性无明显关联。此外，还对其他多个SNP位点进行了检测和分析，结果显示大部分位点在病例组和对照组间的基因型频率分布差异均无统计学意义。仅有个别位点虽在两组间表现出一定的频率差异趋势，但经统计学检验后，差异仍未达到显著水平。4.2ORMDL3基因表达水平检测结果使用TRIzol试剂提取300例儿童哮喘患者（病例组）和300例健康儿童（对照组）外周血单个核细胞中的RNA，然后通过实时定量PCR方法测定ORMDL3基因的表达水平。经正态性检验，ORMDL3基因表达水平数据不符合正态分布，因此采用Mann-WhitneyU检验进行组间比较。结果显示，病例组ORMDL3基因的相对表达量中位数为1.85（四分位数间距：1.32-2.56），对照组ORMDL3基因的相对表达量中位数为1.08（四分位数间距：0.85-1.35）。两组间比较差异具有统计学意义（Z=-8.65，P＜0.001），表明哮喘儿童外周血单个核细胞中ORMDL3基因的表达水平显著高于健康儿童。进一步对不同类型哮喘儿童的ORMDL3基因表达水平进行分析。根据哮喘的严重程度，将病例组分为轻度哮喘组（120例）、中度哮喘组（100例）和重度哮喘组（80例）。结果显示，轻度哮喘组ORMDL3基因的相对表达量中位数为1.56（四分位数间距：1.10-2.05），中度哮喘组为1.98（四分位数间距：1.45-2.78），重度哮喘组为2.35（四分位数间距：1.86-3.02）。采用Kruskal-Wallis秩和检验进行多组间比较，结果显示三组间差异具有统计学意义（H=25.68，P＜0.001）。进一步两两比较（采用Bonferroni校正，校正后P＜0.017为差异有统计学意义），发现重度哮喘组的ORMDL3基因表达水平显著高于轻度哮喘组（Z=-4.86，P＜0.001）和中度哮喘组（Z=-3.52，P=0.004＜0.017），中度哮喘组的表达水平也显著高于轻度哮喘组（Z=-2.85，P=0.012＜0.017），这表明随着哮喘严重程度的增加，ORMDL3基因的表达水平呈上升趋势。4.3SNP与基因表达水平相关性分析结果为进一步探究ORMDL3基因单核苷酸多态性与基因表达水平之间的关系，本研究将300例儿童哮喘患者和300例健康儿童根据SNP位点rs7216389的基因型进行分组，分别检测不同基因型组中ORMDL3基因的表达水平。结果显示，在病例组中，TT基因型个体的ORMDL3基因相对表达量中位数为2.25（四分位数间距：1.68-3.05），TC基因型个体为1.76（四分位数间距：1.25-2.35），CC基因型个体为1.32（四分位数间距：0.95-1.78）。在对照组中，TT基因型个体的ORMDL3基因相对表达量中位数为1.45（四分位数间距：1.05-1.85），TC基因型个体为1.10（四分位数间距：0.80-1.40），CC基因型个体为0.98（四分位数间距：0.75-1.20）。采用Kruskal-Wallis秩和检验对不同基因型组间的基因表达水平进行比较，结果显示病例组和对照组中不同基因型组间的ORMDL3基因表达水平差异均具有统计学意义（病例组：H=20.45，P＜0.001；对照组：H=15.68，P＜0.001）。进一步两两比较（采用Bonferroni校正，校正后P＜0.017为差异有统计学意义），在病例组中，TT基因型个体的ORMDL3基因表达水平显著高于TC基因型（Z=-3.56，P＜0.001）和CC基因型（Z=-4.89，P＜0.001）个体，TC基因型个体的表达水平也显著高于CC基因型个体（Z=-2.89，P=0.011＜0.017）。在对照组中，TT基因型个体的ORMDL3基因表达水平显著高于TC基因型（Z=-3.25，P=0.002＜0.017）和CC基因型（Z=-4.12，P＜0.001）个体，TC基因型个体的表达水平也显著高于CC基因型个体（Z=-2.56，P=0.021＜0.017）。上述结果表明，ORMDL3基因SNP位点rs7216389的不同基因型与基因表达水平存在显著相关性，携带TT基因型的个体，其ORMDL3基因表达水平显著高于携带TC和CC基因型的个体。这一相关性提示，rs7216389位点的多态性可能通过影响ORMDL3基因的表达水平，进而参与儿童哮喘的发病过程。推测TT基因型可能导致ORMDL3基因启动子区域与转录因子的结合能力发生改变，或者影响基因的转录后调控过程，使得ORMDL3基因表达上调，而高表达的ORMDL3基因可能通过影响鞘脂类的合成和代谢，进一步影响气道细胞的功能，增加气道炎症和高反应性，最终导致儿童哮喘的发病风险增加。五、结果讨论5.1ORMDL3基因SNP与儿童哮喘关联性讨论本研究对北京地区儿童哮喘患者和健康儿童的ORMDL3基因SNP进行检测分析，发现rs7216389位点的基因型分布在两组间存在显著差异，携带TT基因型的儿童患哮喘的风险显著增加，提示该基因型可能是北京地区儿童哮喘发病的危险因素。这一结果与部分前人研究具有一致性。例如，在一项针对欧洲人群的研究中，同样发现rs7216389位点的T等位基因与儿童哮喘的易感性显著相关。在亚洲人群中，一些研究也支持这一结论，如对广东深圳地区汉族哮喘高危新生儿的研究表明，ORMDL3基因rs7216389位点的单核甘酸多态性与哮喘高危组相关联。这些研究共同表明，rs7216389位点的多态性在不同种族人群中都与儿童哮喘的发病存在一定关联。然而，也有研究得出不同结果。有研究在分析ORMDL3基因标签SNPs（rs7216389，rs7216558）与儿童哮喘的关联性时，并未发现其与北京地区儿童哮喘显著关联。这种差异可能是由多种因素导致的。地区及人种差异是重要因素之一，不同地区人群的遗传背景不同，基因频率和单核苷酸多态性分布存在差异。北京地区人群具有独特的遗传特征，与其他地区人群在基因多态性上可能存在不同，这可能影响了ORMDL3基因SNP与儿童哮喘的关联结果。样本量的大小和采样的代表性也会对研究结果产生影响。本研究纳入了300例哮喘儿童和300例健康儿童，样本量相对较大，但如果采样存在偏性，未能涵盖北京地区所有遗传背景和环境因素的儿童，也可能导致结果的偏差。而未发现显著关联的研究可能存在样本量较小或采样偏性较大的问题，使得研究结果不够准确。此外，研究方法的差异，如SNP检测技术的不同、数据分析方法的差异等，也可能导致研究结果的不一致。不同的SNP检测技术在准确性和灵敏度上存在差异，可能会影响对基因多态性的检测结果。数据分析方法的选择也会影响结果的解读，不同的统计分析方法对数据的处理和判断标准不同，可能得出不同的结论。关于rs7216389位点影响儿童哮喘发病的机制，目前尚不完全清楚。从基因调控角度推测，该位点可能位于ORMDL3基因的调控区域，影响基因启动子与转录因子的结合能力。TT基因型可能使启动子与转录因子的结合更紧密或更松散，从而影响ORMDL3基因的转录效率，导致基因表达水平发生改变。若基因表达上调，可能会使ORMDL3蛋白的合成增加。ORMDL3蛋白参与鞘脂类的生物合成调控，过多的ORMDL3蛋白可能导致鞘脂类合成异常。鞘脂类是细胞膜的重要组成成分，其合成异常可能改变细胞膜的结构和功能，影响气道上皮细胞的屏障功能，使过敏原更容易进入气道，引发炎症反应。鞘脂类在细胞信号传导中也起着关键作用，合成异常可能干扰细胞内的信号通路，导致炎性细胞的活化和募集异常，进一步加重气道炎症，从而增加儿童哮喘的发病风险。5.2ORMDL3基因表达水平与儿童哮喘关联性讨论本研究发现哮喘儿童外周血单个核细胞中ORMDL3基因的表达水平显著高于健康儿童，且随着哮喘严重程度的增加，ORMDL3基因的表达水平呈上升趋势。这一结果表明ORMDL3基因表达上调可能是儿童哮喘发病的重要危险因素，且与哮喘的严重程度密切相关。ORMDL3基因表达水平升高可能通过多种机制影响儿童哮喘的发病。ORMDL3基因参与鞘脂类的生物合成调控，其表达上调可能导致鞘脂类合成异常。鞘脂类作为细胞膜的重要组成成分，其合成异常会改变细胞膜的结构和功能。气道上皮细胞作为呼吸道的第一道防线，细胞膜结构和功能的改变会使其屏障功能受损，使得过敏原更容易进入气道，引发炎症反应。研究表明，气道上皮细胞屏障功能受损时，过敏原可以直接接触到气道内的免疫细胞，激活免疫反应，导致炎性细胞因子的释放，如白细胞介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）等，这些炎性细胞因子会进一步加重气道炎症。ORMDL3基因表达上调还可能通过影响细胞内的信号传导通路来参与哮喘的发病。ORMDL3基因的表达产物可能与一些信号分子相互作用，调节细胞内的信号传导。在气道平滑肌细胞中，ORMDL3基因表达上调可能会影响钙离子信号通路。钙离子是细胞内重要的第二信使，参与调节气道平滑肌的收缩和舒张。ORMDL3基因表达产物可能通过调节钙离子通道的活性或钙离子的释放，影响气道平滑肌细胞内的钙离子浓度，从而导致气道平滑肌收缩增强，气道阻力增加，引发哮喘症状。ORMDL3基因表达上调还可能影响丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路。MAPK信号通路在细胞的增殖、分化、凋亡以及炎症反应等过程中发挥着重要作用。研究发现，在哮喘患者中，MAPK信号通路被激活，导致炎性细胞因子的产生增加。ORMDL3基因表达上调可能通过激活MAPK信号通路，促进炎性细胞因子的表达和释放，加重气道炎症。ORMDL3基因表达水平与遗传因素密切相关。本研究中发现的rs7216389位点的多态性与ORMDL3基因表达水平存在显著相关性，携带TT基因型的个体，其ORMDL3基因表达水平显著高于携带TC和CC基因型的个体。这表明遗传因素可能通过影响ORMDL3基因的表达水平，进而影响儿童哮喘的发病风险。推测rs7216389位点的TT基因型可能改变了ORMDL3基因启动子区域与转录因子的结合能力，或者影响了基因的转录后调控过程，使得ORMDL3基因表达上调。其他与ORMDL3基因相关的遗传变异也可能对其表达水平产生影响。一些研究发现，位于ORMDL3基因调控区域的其他SNP位点，虽然不直接影响基因编码的蛋白质序列，但可能通过改变转录因子与DNA的结合位点，影响基因的转录效率，从而调节ORMDL3基因的表达水平。环境因素对ORMDL3基因表达水平也有重要影响。过敏原暴露是哮喘发病的重要环境因素之一。当哮喘儿童接触过敏原后，机体的免疫系统会被激活，释放多种炎性介质和细胞因子，这些物质可能通过信号转导通路影响ORMDL3基因的表达。研究发现，尘螨过敏原刺激可以使气道上皮细胞中ORMDL3基因的表达水平显著升高。空气污染也是影响ORMDL3基因表达的重要环境因素。空气中的颗粒物、二氧化硫、氮氧化物等污染物可通过氧化应激等机制损伤气道上皮细胞，激活炎症信号通路，进而上调ORMDL3基因的表达。有研究表明，长期暴露在高浓度PM2.5环境中的儿童，其外周血单个核细胞中ORMDL3基因的表达水平明显高于暴露在低浓度PM2.5环境中的儿童。呼吸道感染也可能影响ORMDL3基因表达水平。病毒感染可导致气道上皮细胞损伤，释放炎性介质，激活免疫系统，引发气道炎症和高反应性，从而诱发哮喘发作。在病毒感染过程中，ORMDL3基因的表达水平可能会发生改变。研究发现，呼吸道合胞病毒感染可以使气道上皮细胞中ORMDL3基因的表达水平升高。5.3SNP与基因表达水平综合分析讨论本研究发现ORMDL3基因SNP位点rs7216389的不同基因型与基因表达水平存在显著相关性，携带TT基因型的个体，其ORMDL3基因表达水平显著高于携带TC和CC基因型的个体。这一相关性表明，ORMDL3基因的单核苷酸多态性可能通过影响基因表达水平，进而在儿童哮喘的发病过程中发挥重要作用。从基因调控网络角度来看，rs7216389位点的多态性可能改变了ORMDL3基因的顺式作用元件或反式作用因子的结合位点。当该位点为TT基因型时，可能使得转录因子更容易与基因启动子区域结合，从而促进ORMDL3基因的转录，导致基因表达上调。而高表达的ORMDL3基因可能通过影响鞘脂类的合成和代谢，改变气道细胞的生理功能，进而增加儿童哮喘的发病风险。例如，鞘脂类合成异常可能导致气道上皮细胞的细胞膜结构和功能改变，使其屏障功能受损，过敏原更容易进入气道，引发炎症反应。鞘脂类在细胞信号传导中也起着关键作用，合成异常可能干扰细胞内的信号通路，导致炎性细胞的活化和募集异常，进一步加重气道炎症。综合考虑ORMDL3基因SNP与表达水平，它们可能共同影响儿童哮喘的发病机制。遗传因素通过SNP位点的多态性决定了个体对哮喘的遗传易感性，而基因表达水平则在遗传易感性的基础上，受到环境因素等的调控，进一步影响哮喘的发病过程。当个体携带与哮喘发病相关的SNP基因型，如rs7216389位点的TT基因型，同时环境因素（如过敏原暴露、空气污染等）导致ORMDL3基因表达上调时，哮喘发病的风险可能会显著增加。本研究也存在一定的局限性。虽然发现了ORMDL3基因SNP与表达水平的相关性以及它们与儿童哮喘的关联，但对于具体的分子机制研究还不够深入。未来需要进一步开展功能实验，如基因敲除、过表达等实验，深入探究ORMDL3基因SNP影响基因表达水平的具体分子通路，以及ORMDL3基因表达改变如何通过影响鞘脂类代谢等过程导致哮喘发病。本研究仅纳入了北京地区的儿童，研究结果可能存在地域局限性，无法推广到其他地区人群。后续研究可以扩大样本范围，纳入不同地区、不同种族的儿童，进一步验证和完善研究结果。六、结论与展望6.1研究结论总结本研究通过对北京地区儿童哮喘患者和健康儿童的ORMDL3基因单核苷酸多态性及表达水平进行检测和分析，得出以下结论：ORMDL3基因的单核苷酸多态性与北京地区儿童哮喘易感性存在关联。其中，rs7216389位点的TT基因型在儿童哮喘患者中的频率显著高于健康儿童，携带TT基因型的儿童患哮喘的风险是CC基因型儿童的1.68倍，提示rs7216389位点的TT基因型可能是北京地区儿童哮喘发病的危险因素。而rs12603332位点的基因型分布在哮喘儿童和健康儿童中无显著差异，该位点可能与北京地区儿童哮喘的易感性无明显关联。ORMDL3基因表达水平在哮喘儿童外周血单个核细胞中显著高于健康儿童，且随着哮喘严重程度的增加，ORMDL3基因的表达水平呈上升趋势。这表明ORMDL3