《鲜烟叶样品的制备液氮法》编制说明

1工作简况

1.1任务来源

本项目是由国家烟草专卖局2012年下达的烟草行业标准制定计

划（国烟科[2012]118号），合同号为2012B062。

1.2项目承担单位、协作单位及主要分工

该标准项目的牵头承担单位为中国烟草总公司郑州烟草研究院

（杨军），协作承担单位为云南省烟草农业科学研究院（崔国民）。中

国烟草总公司郑州烟草研究院主要负责标准项目的总体统筹和协调，

指导实施方案制定以及标准制定的各项具体工作；云南省烟草农业科

学研究院负责烟草调制过程鲜烟叶样品的制备技术研究。

1.3主要工作过程

本标准制定工作于2012年4月签订项目合同。

2012年6月制定完成了鲜烟叶样品采集制备方案；

2012年9月完成大田关键生育期鲜烟叶样品采集工作，共采集

样品903个；同期完成烘烤过程鲜烟叶样品的采集工作，共采集样品

96个；

2012年12月完成大田鲜烟叶样品代谢组学和分子生物学试验

研究；完成烘烤试验鲜烟叶样品淀粉和蛋白质含量的检测；

2013年1月撰写“鲜烟叶样品制备液氮法”标准文本的草稿

及年度试验总结报告；

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2013年3月完成代谢组学和分子生物学补充实验；

2013年4月根据补充实验研究结论对鲜烟叶样品采集制备方

案进行修正和完善，形成初稿；

2013年5月邀请有关专家对“鲜烟叶样品制备液氮法”标准

文本及研究报告进行完善；形成征求意见稿。

1.4标准主要起草人及其所做的工作

根据“全国烟草标准化技术委员会制、修订工作细则”的要求，由

承担单位组织了林福呈、杨军、崔国民、金立锋、魏春阳、李锋、王

燃、罗朝鹏、武明珠等起草人为主的起草小组，负责该标准的起草工

作。其中，项目负责人杨军负责标准制定的各项具体工作；林福呈负

责项目的总体协调和技术指导；崔国民与魏春阳负责标准项目协调、

标准条款起草；崔国民负责烟草调制过程鲜烟叶样品的制备技术研

究；金立锋、魏春阳、李锋、王燃、罗朝鹏、武明珠、赵高坤、黄维

等负责样品采集、制备、分析检测研究与验证。

2相关领域的国、内外标准研究和制修订情况

目前，与烟草鲜烟叶采集制备尚没有完善或发布的相关国家标

准，烟草基因组重大专项的实施需要大量新鲜烟叶样本的采集制备、

分析等工作，重大专项需要行业内外多家实验共同参与，为保证样本

的后期样本数据的通用性，需要对烟叶样本进行统一标准化的采集、

制备、运输、保存。因此，目前亟须建立行业内外通用的鲜烟叶样品

的制备标准，同时经过两年多代谢组学及表达谱样品制备实践，项目

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组已经具备制定规范的烟叶样本的条件。

该标准将对烟草基因组计划重大专项及行业其他需要采集鲜烟

叶的样本进行严格规范，鲜烟叶样本采集制备将更加统一，对于不同

实验室后期数据交流与共享具有重要意义。目前，国外无相关的标准

研究。

3标准制定的原则及主要内容确定的依据

3.1标准适用范围

本标准规定了烟草生育期和烘烤过程中鲜烟叶样品采集、制作、

保存和运输的技术要求。

本标准适用于烤烟、白肋烟和香料烟，其他类型烟草可参照使用。

3.2标准编制原则

标准的制定，能够为最大限度减小烟草鲜烟叶取样过程和样品运

输保存过程的代谢物及RNA等含量变化为技术参考，确保实验室所

用样本最大限度体现烟叶样本的原有理化特性，从而真实反应烟叶生

理变化规律。

3.3标准主要内容确定的依据

烟草是重要的模式作物及经济作物，代谢物是烟草品质及香气的

主要物质基础，蛋白质、DNA、RNA及是烟叶品质形成的可调控体

内因子，烟草基因组学暨主要从这四个层面研究烟草品质形成机理、

探讨建立有效调控手段。这些物质研究材料主要是新鲜烟叶样本，同

时为了研究的实用性，大部分研究取材直接从大田进行取样，取样点

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遍布全国，取样点距离实验室较远，需要长距离运输回到实验室。

鲜烟叶样品制备规程是获得好的生物学（尤其是“组学”）数据

的前提。烟草中各类物质包括DNA、RNA、蛋白质及代谢物都容易

受环境的影响，在实际分析过程中，包括取样、运输、保存和样品制

备对各种生物组分分析影响非常关键，很多文献和不同实验室的经验

都证明了这一点。因此，一个好的实验操作流程是获得真实数据的前

提，不同的实验室采取不同的样品制备技术会获得大相径庭的结果，

所以非常有必要确定烟草鲜烟叶样品制备规程。

烟草鲜烟叶样品制备规程是获得归范、可比、标准数据的前提，

有利于不同研究单位的数据对接。随着烟草基因组的测序和重大专项

的展开，越来越多的研究单位开展以鲜烟叶为样本有关的生物学研

究，不同单位可能采用不同的样品制备方法，有的单位对怎样进行样

品制备还存在疑惑，不同单位获得的数据之间的可比性较差，浪费了

实验经费和时间，所以有统一的鲜烟叶样品制备规范不仅给各研究单

位提供的准确实用的取样方法，而且可以有效利用不同研究层面的研

究数据，实现不同项目组实验数据的可比、交流、共享。

我们这两年来通过开展烟草代谢组学项目与烟草表达谱项目，已

经制定了一套严格完整的鲜烟叶取样规程，实验结果分析表明取样时

间尽量缩短（控制在10min之内），样品取下标记后迅速浸入液氮，

完全速冻后，采用干冰完全包埋尽快（长途使用航空）运回实验室，

-80℃保存，可以保证样本中总代谢物及总RNA基本不变。

标准的制定根据“全国烟草标准化技术委员会制、修订工作细则”

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的要求，严格按照国家行业标准制定程序及格式开展标准制定工作。

标准制定的具体依据详见标准技术验证报告。

3.4本标准在标准技术内容、水平方面的情况

本标准为新制定的烟草行业标准。

本标准是在两年来烟草代谢组学及表达谱项目鲜烟叶样品采样

实践和数据分析基础上制定的。本标准的术语、定义、适用范围等方

面，符合现有的烟草代谢组学和生物学科学研究实际，有利于促进烟

草基因组计划工作高效、规范、有序进行。

本标准的制定和发布实施，对基因组重大专项有关鲜烟叶样本制

备规程、确保基因组重大专项项目数据真实可靠、交叉使用及共享具

有重要意义。

4标准预期产生的社会、经济效益

本标准为国家烟草专卖局标准制订项目，本标准适用于烟草代谢

组学和生物学研究的科研单位。本标准发布实施后，将使基因组重大

专项及涉及鲜烟叶样本其他项目样本采集规范化，保证烟草生物学研

究数据真实、可靠，促进不同实验室开展数据交流及共享。

5采用国际标准和国外先进标准的情况

本标准为新制定的烟草行业标准，未采用相关国际标准。目前烟

草生物相关研究尚没有相关标准。

本标准是基于保证鲜烟叶真实生物学状态，促进烟草基因组计划

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相关项目可以进行有效数据交流、共享角度制定的。本标准对确保烟

草基因组计划顺利实施具有一定意义。

6与有关的现行法律、法规和强制性标准的关系

本标准与其他现行法律、法规并无冲突之处。

7重大分歧意见的处理经过和依据

无。

8作为强制性标准或推荐性标准的建议及主要依据

本标准建议为推荐性标准。

理由：不属于国家标准法中规定的强制性标准的范围。

9标准宣贯的要求和措施建议

本标准适用于从事以鲜烟叶为材料进行烟草代谢组学和生物学

研