《人源类器官构建与培养技术体系要求》征求意见稿

2人源类器官构建与培养技术体系通用要求2.1.1下列文件中的内容通过本文件的规范性引用而成为本文件必不可少的条2.1.2GB/T37864-2019生物样本库2.1.3GB/T38736-2020人类生2.1.4GB/T39766-2021人类2.1.5GB/T39767-2021人2.1.6GB/T39768-2021人类2.1.7GB/T40352.1-2021人类组织样本采集与处理第2.1.8GB/T40364-2021人类2.1.9GB/T43459-2023洁净室及受控环境中细2.1.10WS233-2017病原微生物实验2.1.11ISO/TS20658:2017医学实验室样品采集、运2.1.12ISO14644-1:2023洁净室及相关受控环境第1部分：空气洁净度等级3三维培养支架（Three-dimensional模拟体内细胞外基质（ECM）的仿生材料，为类器官提供三维生长空间和分4.1环境设施要求b）环境参数4分区功能描述核心设备（应配）扩展设备（宜配）接收区接收、核对样本信息、初步处理样本生物安全柜条码扫描仪电子天平样本暂存冰箱（4℃)处理区样本解离、细胞分离及预处理操作离心机组织解离仪恒温震荡仪流式细胞分选仪倒置显微镜自动细胞计数仪培养区类器官接种、培养及传代程序化细胞复苏仪移液器程序降温仪存储区存储样本、试剂和耗材超低温冰箱样本信息管理系统液氮罐进行无菌检测；生长因子应标注活性单位（IU/mg宜分装后-80℃保存，培养耗材应使用超低吸附培养板，符合YY/T0681.1生物相容性要求；漏移液枪头和离心管应无菌、无DNase/RNase，宜使用独立包装和低吸附材建立试剂验收标准（见表2关键试剂（如三维培养支架）每批次需进行试剂类型检测项目合格标准三维培养支架凝胶时间（37℃)20-30分钟完全培养基PH值（37℃)7.2-7.4消化酶细胞存活率（解离后）例》关于人类遗传资源采集、保藏及国际合作的管控要求；5类器官样本采集应满足合GB/T37864-2019和GB/T40352应选择无坏死区域切取样本，体积宜≥5mm³；离体后应立即转移至含4℃b）穿刺活检/内镜样本应使用无菌穿刺器械，取样量宜≥3条（长度≥1cm）；离体时间超过246样本接收→初步清洗→机械分离→酶解消化→细胞悬液制备→a）机械解离：组织块应切割为0.5-1mm3均匀碎片；宜使用眼科剪进行精细剪切a）三维培养支架处理：应使用预冷三维培养支架（4℃解冻三维培养支架与细胞悬液体积比宜≥70%；混合液分配至培养孔后，应静置固化（37℃,30-45a）培养参数：温度应在37±0.5℃；CO2浓度应在5±0.2%；培养基覆盖厚度宜培养基pH值7b）技术参数：离心速度宜为200×g（离心半径10cm，5分钟传代比例宜为样本重悬收集→离心去三维培养支架→冻存液重悬→程序降温→液氮层级检测项目检测方法合格标准8一级形态一致性HE染色类器官细胞核形态、胞浆结构需与原始组织高度相似二级标志物表达免疫组化肿瘤类器官需表达与原始肿瘤组织一致的免疫组化标志物正常组织类器官需通过分化标志物验证其细胞组成与功能分化状态三级遗传稳定性全外显子测序/转录组测序STR分型匹配度≥80%（依据《细胞株鉴定指南》T/CRHA002-2022确保类器官来源的准确性WES检测应显示与原始组织高度一致的基因突变谱，关键驱动基因突变需完全匹配转录组测序应与原始组织具有相似的基因表达谱类器官信息管理系统（OIMS）应包含表99.2.2标识规范9.3.1分级存储9.3.2环境监控9.4.1