GAT2062-2023法庭科学生物检材中MDMB4enPINACA等42种合成大麻素及代谢物检验液相色谱质谱法

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法庭科学生物检材中MDMB-4en-PINACA等42种合成大麻素及代

谢物检验液相色谱-质谱法

1范围

本文件规定了法庭科学生物检材（血液、尿液和唾液）中MDMB-4en-PINACA等42种合成大麻素及

代谢物的液相色谱-质谱（LC-MS）检验方法。

本文件适用于法庭科学生物检材（血液、尿液和唾液）中MDMB-4en-PINACA等42种合成大麻素及

代谢物的定性分析和定量分析。其他检材可参照使用。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，

仅该日期对应的版本适用于本文件。不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本

文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GA/T122毒物分析名词术语

3术语和定义

GA/T122界定的术语和定义适用于本文件。

4原理

以空白样品和添加样品作对照，按平行操作的要求，对生物检材（血液、尿液和唾液）中42种合成

大麻素及代谢物（化合物信息见附录A）进行提取、净化及浓缩。采用液相色谱-质谱法检测，以保留

时间、质谱特征离子对和离子对丰度比作为定性判断依据；以色谱峰面积作为定量依据，用外标-单点

校正法或外标-校准曲线法进行定量分析。

5试剂和材料

5.1试剂

实验用水应符合GB/T6682中规定的一级水。除非另有说明，在分析中使用的试剂均为色谱纯，试

剂包括：

a)乙腈；

b)1.0mol/L氢氧化钠溶液（以配制100mL为例）：称取4.0g氢氧化钠（分析纯），用水溶解并

定容至100mL：

c)磷酸盐缓冲液（以配制500mL为例）：称取6.0g磷酸二氢钠（分析纯），加入450mL水溶解，

用1.0mol/L氢氧化钠溶液调pH值至（6.0±0.1），再加水定容至500mL；

d)5%甲醇溶液（以配制100mL为例）：量取5mL甲醇和95mL水，混匀；

e)50%甲醇溶液（以配制100mL为例）：量取50mL甲醇和50mL水，混匀；

1

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f)0.1%甲酸甲醇溶液（以配制1000mL为例）：移取甲酸1.0mL，用甲醇稀释并定容至1000mL，

混匀；

g)含0.1%甲酸的10mmol/L甲酸铵溶液（以配制1000mL为例）：称取0.63g甲酸铵，用水溶解，

加入1mL甲酸，用水稀释并定容至1000mL，混匀；

h)0.1%甲酸乙腈溶液（以配制1000mL为例）：移取甲酸1.0mL，用乙腈稀释并定容至1000mL，

混匀；

i)标准溶液：

1)标准物质储备液：根据MDMB-4en-PINACA等42种合成大麻素及代谢物的纯度和盐型换

算后，各称取适量，分别用甲醇配制成1.0mg/mL的标准物质储备液，密封，-18℃以下

保存，有效期12个月。或采用市售标准溶液；

2)单一标准工作溶液：移取MDMB-4en-PINACA等42种合成大麻素及代谢物标准物质储备

液，分别用甲醇配制成浓度为1.0µg/mL单一标准工作溶液，密封，0℃~4℃保存，有效

期6个月。实验中所用其他浓度的单一标准工作溶液均由1.0µg/mL标准工作溶液用甲醇

配制得到；

3)1.0µg/mL混合标准工作溶液：分别移取MDMB-4en-PINACA等42种合成大麻素及代谢

物的标准物质储备溶液，用甲醇配制成浓度为1.0µg/mL的混合标准物质工作溶液，密封，

0℃~4℃保存，有效期6个月。实验中所用其他浓度的混合标准工作溶液均由标准物质储

备液配制得到。

注：混合标准工作溶液中所含物质种类可根据实际需要选择。

5.2材料

材料包括：

a)具盖离心管；

b)具塞玻璃试管；

c)容量瓶；

d)有机系微孔滤膜：0.22µm；

e)固相萃取柱：Oasis®HLB柱（3cc，60mg）或等效固相萃取柱。

注：Oasis®HLB柱是Waters公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不是表示对该产

品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。

6仪器和设备

仪器和设备包括：

a)液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子源（ESI）；

b)电子天平：实际分度值（d）小于或等于0.01mg；

c)振荡器；

d)超声波清洗器；

e)离心机；

f)移液器；

g)氮吹浓缩器。

7操作方法

7.1定性分析

2

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7.1.1样品前处理

7.1.1.1检材样品

蛋白沉淀法：移取血液、尿液或唾液等检材样品0.5mL于具盖离心管中，加入2mL乙腈，振荡10min，

以不低于8000r/min离心10min，取上清液经有机系微孔滤膜过滤，作为检材样品提取液，供仪器检测。

固相萃取法：移取血液、尿液或唾液等检材样品0.5mL于具盖离心管中，加入1mL磷酸盐缓冲溶

液，混匀，以不低于8000r/min离心10min，取上清液转移至固相萃取柱（使用前根据需要进行活化）

中，上清液过柱流速不超过0.5mL/min，用5%甲醇溶液3mL淋洗，用0.1%甲酸甲醇溶液3mL洗脱，

洗脱液过柱流速不超过2.0mL/min，收集洗脱液，置于浓缩器上40℃以下浓缩至干，残留物用50%甲

醇溶液200μL溶解，经有机系微孔滤膜过滤，作为检材样品提取液，供仪器检测。

注：检材样品取样量、乙腈体积、缓冲溶液体积及定容体积可根据实际情况调整。

7.1.1.2质控样品

取等量相似基质的空白样品两份于具盖离心管中，一份作为空白样品，一份添加标准工作溶液，使

目标物浓度为5ng/mL（蛋白沉淀法）或0.5ng/mL（固相萃取法），作为添加样品，与检材样品平行操

作，得到空白样品提取液和添加样品提取液，供仪器检测。

注：添加样品中目标物的种类可根据实际需要选择。

7.1.2仪器检测

7.1.2.1液相色谱-串联质谱仪条件

参考条件1（可根据不同品牌仪器和不同样品等实际情况进行调整）：

a)色谱柱：HypersilGOLDC18(2.1mm×100mm，1.9µm)或其他等效色谱柱；

注：HypersilGOLDC18为Thermo公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不是表示

对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。

b)柱温：30℃；

c)流动相A：含0.1%甲酸的10mmol/L甲酸铵溶液；

d)流动相B：0.1%甲酸甲醇溶液；

e)流速：0.3mL/min；

f)进样体积：5µL；

g)洗脱：梯度洗脱，条件见表1；

表1梯度洗脱条件

时间

流动相A流动相B

min

0.090%10%

0.590%10%

3.025%75%

5.025%75%

5.55%95%

9.05%95%

9.0190%10%

12.090%10%

3

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h)扫描方式：正离子扫描；

i)检测方式：多反应监测（MRM）；

j)鞘气压力：38Arb；

k)辅助气压力：10Arb；

l)电喷雾电压：3.8kV；

m)离子源温度：350℃；

n)离子传输管温度：350℃；

o)碰撞气：氩气（Ar）；

p)定性、定量离子对和保留时间、射频透镜压力和碰撞能量等条件见表2。

表2定性、定量离子对和保留时间、射频透镜压力、碰撞能量条件

保留时间射频透镜压力碰撞能量

目标物定量离子对定性离子对

minVeV

331.2>201.124

ADB-BUTINACA331.2>201.15.3878

331.2>286.214

331.2>215.123

AB-PINACA331.2>215.15.4274

331.2>286.214

343.2>213.125

ADB-4en-PINACA343.2>213.15.4759

343.2>298.111

MDMB-4en-PINACA344.2>213.121

344.2>213.15.7175

butanoicacidmetabolite344.2>298.113

344.3>214.220

ADBICA344.3>214.25.7877

344.3>327.210

345.2>215.124

ADB-PINACA345.2>215.15.8978

345.2>300.215

ADB-BUTINACA347.2>217.023

N-(4-hydroxybutyl)347.2>302.14.4865

347.2>302.115

metabolite

348.3>232.119

5F-ABICA348.3>232.14.7581

348.3>331.210

4F-MDMB-BUTICA349.2>144.137

349.2>218.04.9070

butanoicacidmetabolite349.2>218.010

349.2>233.123

5F-AB-PINACA349.2>304.14.7982

349.2>304.115

350.2>219.121

4F-MMB-BUTINACA350.2>219.15.12111

350.2>290.214

357.2>144.137

MDMB-4en-PICA357.2>212.16.0897

357.2>212.115

358.2>213.123

MDMB-4en-PINACA358.2>213.16.5678

358.2>298.115

ADB-BUTINACA361.2>231.123

361.2>231.14.4664

N-butanoicacidmetabolite361.2>316.115

4

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表2定性、定量离子对和保留时间、射频透镜压力、碰撞能量条件（续）

保留时间射频透镜压力碰撞能量

目标物定量离子对定性离子对

minVeV

4F-MDMB-BUTICA361.2>144.132

361.2>216.14.8177

N-(4-hydroxybutyl)metabolite361.2>216.115

362.2>144.140

5F-ADBICA362.2>232.15.0168

362.2>232.121

5F-MDMB-PICAbutanoicacid363.2>144.137

363.3>232.15.0899

metabolite363.2>232.115

363.3>144.140

4F-MDMB-BUTICA363.3>218.15.26105

363.3>218.115

364.2>233.120

5F-AMB364.2>233.15.38117

364.2>304.215

365.2>135.227

APICA365.2>135.27.32158

365.2>214.121

366.3>107.238

APINACA366.3>135.27.67110

366.3>135.220

367.2>206.124

5F-CUMYL-PICA367.2>249.15.61113

367.2>249.114

368.3>233.118

5F-CUMYL-PINACA368.3>233.16.1591

368.3>250.110

370.0>107.236

4F-ABUTINACA370.2>135.37.0884

370.0>135.322

AMB-FUBINACAbutanoic370.2>253.020

370.2>253.05.14106

acidmetabolite370.2>324.113

5F-EMB-PICA375.1>230.116

N-(5-hydroxypentyl)375.1>230.14.92102

375.1>144.135

metabolite

377.2>144.139

5F-MDMB-PICA377.2>144.15.5076

377.2>232.117

377.2>144.138

5F-EMB-PICA377.2>232.15.4985

377.2>232.115

378.2>233.223

5F-ADB378.2>233.25.8176

378.2>318.215

MDMB-4en-PINACA378.2>247.120

pentanediolbutanoicacid378.2>247.14.46119

metabolite378.2>332.215

378.2>243.119

CUMYL-THPINACA378.2>243.15.5691

378.2>260.110

378.3>233.123

5F-EMB-PINACA378.3>304.15.79117

378.3>304.116

ADB-FUBINACA383.2>253.0383.2>253.05.237624

5

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383.2>338.014

表2定性、定量离子对和保留时间、射频透镜压力、碰撞能量条件（续）

保留时间射频透镜压力碰撞能量

目标物定量离子对定性离子对

minVeV

383.2>252.013

AMB-FUBICA383.2>252.05.32100

383.2>109.234

384.2>253.020

AMB-FUBINACA384.2>324.15.6475

384.2>324.114

384.2>93.243

5F-APINACA384.2>135.27.22114

384.2>135.220

386.2>241.124

MDMB-CHMINACA386.2>241.17.18103

286.2>326.216

391.2>144.139

5F-EDMB-PICA391.2>232.15.9476

391.2>232.118

397.2>233.022

PX-2397.2>233.04.9776

397.2>352.114

397.2>109.235

MDMB-FUBICA397.2>252.05.7696

397.2>252.014

398.2>253.124

MDMB-FUBINACA398.2>253.16.15115

398.2>338.116

AMB-FUBINACA400.2>269.121

400.2>269.15.05127

5-hydroxypentylmetabolite400.2>340.115

5F-MDMB-PICA和5F-EMB-PICA为同分异构体，在上述条件下，保留时间接近，定性离子对相同，

离子对丰度比接近。当目标物中存在5F-MDMB-PICA和5F-EMB-PICA时，可通过参考条件2分析。

参考条件2（可根据不同品牌仪器和不同样品等实际情况进行调整）：

a）色谱柱：ACQUITYUPLCBEHC18(2.1mm×100mm，1.7µm)或其他等效色谱柱；

注：ACQUITYUPLCBEHC18为Waters公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不是

表示对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。

b）柱温：40℃；

c）流动相A相：0.1%甲酸溶液；

d）流动相B相：0.1%甲酸乙腈溶液；

e）流速：0.4mL/min；

f）进样体积：5µL；

g）洗脱：梯度洗脱，条件见表3；

h）扫描方式：正离子扫描；

i）检测方式：多反应监测（MRM）；

j）鞘气压力：38Arb；

k）辅助气压力：10Arb；

l）电喷雾电压：3.8kV；

6

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m）离子源温度：350℃；

n）离子传输管温度：350℃；

o）碰撞气：氩气（Ar）；

p）定性、定量离子对和保留时间、射频透镜压力、碰撞能量条件见表4。

表3梯度洗脱条件

时间

流动相A流动相B

min

0.050%50%

6.350%50%

6.45%95%

7.45%95%

7.550%50%

9.050%50%

表4定性、定量离子对和保留时间、射频透镜压力、碰撞能量

保留时间射频透镜压力碰撞能量

目标物定量离子对定性离子对

minVeV

377.2>144.139

5F-MDMB-PICA377.2>144.14.2676

377.2>232.117

377.2>144.138

5F-EMB-PICA377.2>232.14.0985

377.2>232.115

7.1.2.2进样

分别吸取空白样品提取液、添加样品提取液、检材样品提取液、标准工作溶液，按7.1.2.1仪器条件

进行分析。进样顺序和进样次数应确保结果有效。

7.2定量分析

7.2.1样品前处理

移取血液、尿液或唾液等液体检材样品0.5mL两份，按7.1.1进行操作，得到检材样品提取液，供仪

器检测。

取与检材样品等量的相似基质空白样品，与检材样品平行操作，得到空白样品提取液，供仪器检测。

采用外标-单点校正法定量时，取与检材样品等量的相似基质空白样品两份，添加目标物标准工作

溶液，与检材样品平行操作，得到添加样品提取液，供仪器检测。检材样品中目标物含量应为添加样品

中目标物含量的（100±50）%。

采用外标-校准曲线法定量时，取与检材样品等量的相似基质空白样品，添加目标物标准工作溶液，

配制成目标物浓度在1.0ng/mL~100ng/mL（蛋白沉淀法）或0.5ng/mL~50ng/mL（固相萃取法）范围内的

添加样品，与检材样品平行操作，得到添加样品提取液，供仪器检测。校准曲线应不少于6个浓度点（包

括空白样品）。检材样品中目标物的含量应在校准曲线的线性范围内。

7.2.2仪器检测

7.2.2.1液相色谱-串联质谱仪条件

7

GA/TXXXX-XXXX

同7.1.2.1。

7.2.2.2进样

分别吸取空白样品提取液、添加样品提取液、检材样品提取液、标准工作溶液，按7.1.2.1仪器条件

进样分析。每份检材样品提取液和添加样品提取液各进样分析2～3次。

7.2.3计算

7.2.3.1含量计算

7.2.3.1.1外标-校准曲线法

记录检材样品提取液和添加样品提取液中目标物的保留时间和峰面积值，以添加样品提取液中目标

物的峰面积的平均值为纵坐标、添加样品中目标物的含量为横坐标进行线性回归，得到线性方程。根据

检材样品提取液中目标物的峰面积值，按公式(1)计算出检材样品中目标物的含量。

y-b

...........................................................................（1）

a

式中：

ω—检材样品中目标物的含量；

y—检材样品提取液中目标物的峰面积的平均值；

a—线性方程的斜率；

b—线性方程的截距。

7.2.3.1.2外标-单点校正法

记录检材样品提取液和添加样品提取液中目标物的保留时间和峰面积值，按公式（2）计算检材样

品中目标物的含量。

A×'

=............................................................................（2）

A'

式中：

ω—检材样品中目标物的含量；

A—检材样品提取液中目标物的峰面积的平均值；

A′—添加样品提取液中目标物的峰面积的平均值；

ω′—添加样品中目标物的含量。

7.2.3.2相对相差计算

记录7.2.3.1中计算得到的检材样品中目标物的含量，按公式（3）计算相对相差：

-

RD=×100%...............................................................（3）

式中：

RD—相对相差；

ω1、ω2—两份检材样品中目标物的含量；

Xω—两份检材样品中目标物含量的平均值。

8

GA/TXXXX-XXXX

8结果评价

8.1定性结果评价

8.1.1阳性结果评价

在相同条件下进行样品测定时，检材样品中目标物的色谱峰保留时间与标准工作溶液一致（相对误

差在±2.5%之内）、目标物的定性离子对（至少两对）与标准工作溶液一致，且离子对丰度比与浓度

接近的标准工作溶液相比，相对偏差不超过表3规定的范围，空白样品无干扰，则可判断检材样品中检

出目标物。

表3离子对相对丰度比的最大允许相对偏差范围

离子丰度比＞50%＞20%～50%≤＞10%～20%≤10%

最大允许相对偏差±20%±25%±30%±50%

8.1.2阴性结果评价

检材样品未出现与目标物标准工作溶液一致的色谱峰，且添加样品中出现与目标物标准工作溶液一

致的色谱峰，空白样品无干扰，则可判断检材样品中未检出目标物。

8.2定量结果评价

如果检材样品中目标物含量的RD小于或等于20%，定量数据可靠，其含量按两份检材的平均值计

算。如果检材样品中目标物含量的RD大于20%，定量数据不可靠。应按7.2重新提取检验。

方法检出限参见附录B。

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附录A

（资料性）

化合物基本信息

42种合成大麻素及代谢物的基本信息见表A.1。

表A.142种合成大麻素及代谢物的基本信息

简称中文名称化学式结构式CAS编号

N-(1-氨基-3,3-二甲基

ADB-BUTINACA-1-氧代丁-2-基)-1-丁C18H26N4O22682867-55-4

基-1H-吲唑-3-甲酰胺

N-(1-氨甲酰基-2-甲基

AB-PINACA丙基)-1-戊基吲唑-3-甲C18H26N4O21445752-09-9

酰胺

N-(1-氨基-3,3-二甲基

-1-氧代丁-2-基)-1-(4-

ADB-4en-PINACAC19H26N4O22659308-44-6

戊烯-1-基)-1H-吲唑-3-

甲酰胺

3,3-二甲基-2-[1-(4-戊

MDMB-4en-PINACA

烯-1-基)-1H-吲唑-3-甲C19H25N3O3暂无

butanoicacidmetabolite

酰氨基]丁酸

N-(1-氨甲酰基-2,2-二

ADBICA甲基丙基)-1-戊基吲哚C20H29N3O21445583-48-1

-3-甲酰胺

10

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简称中文名称化学式结构式CAS编号

表A.142种合成大麻素及代谢物的基本信息（续）

简称中文名称化学式结构式CAS编号

N-(1-氨甲酰基-2,2-二

ADB-PINACA甲基丙基)-1-戊基吲唑C19H28N4O21633766-73-0