选择性必修3　阶段28　基因工程

阶段28基因工程选择性必修3生物技术与工程202X/01/01汇报人：【滚动判断】1.DNA聚合酶的作用机制是催化以DNA为模板的子链延伸。(

)2.启动子是基因编码区中RNA聚合酶识别并结合的部位。(

)3.神经细胞兴奋后恢复为静息状态的过程消耗ATP。(

)4.小鼠体内血糖浓度对胰高血糖素的分泌存在反馈调节。(

)5.受到光刺激后光敏色素的结构会发生变化，进而影响特定基因的表达。(

)6.

脱分化和再分化的本质都是基因的选择性表达。(

)√×√√√√7.

悬浮生长的动物细胞传代培养和原代培养都需要使用胰蛋白酶或胶原蛋白酶，必须控制好酶的用量和处理时间。(

)8.

动物细胞培养时添加适量抗生素有助于实现“无毒”。(

)9.

动物细胞融合和植物细胞融合操作步骤相同，但诱导融合的手段不完全相同。(

)10.

单克隆抗体制备时多次注射同种抗原蛋白，主要目的是大量获得免疫过的B细胞。(

)11.

单克隆抗体制备过程中，克隆化培养后再用选择培养基筛选获得能产生特定抗体的杂交瘤细胞。(

)×××√×12.

耐高温的DNA聚合酶浓度过低会引起非特异性扩增产物增多。(

)13.

与传统的抗生素抗性基因相比，用GFP(绿色荧光蛋白基因)作为标记基因具有可定性、定量和定位分析的显著优点。(

)14.Mg2＋浓度过高或引物太短会引起非特异性扩增产物增多。(

)15.

某PCR的一对引物的退火温度差异不能太大，否则影响扩增效果。(

)16.

引物设计时可在引物的3′端添加合适的酶切位点或同源序列，便于基因表达载体的构建。(

)×√√√×【基础填空】1.

基因工程的原理是____________，优点是定向改造生物的____________、克服远缘杂交不亲和障碍。2.

重组DNA技术的基本工具(1)限制性内切核酸酶(简称：限制酶)，主要是从______生物中分离纯化出来的。可以识别______的核苷酸序列并切开特定部位的两个核苷酸之间的____________键，产生________________________。基因重组遗传性状原核特定磷酸二酯黏性末端或平末端(2)DNA连接酶连接两个_______________，恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的____________键。按来源可分为E.coliDNA连接酶和___________________，两者都能连接______________________，但是E.coliDNA连接酶连接平末端的效率比后者___很多。目的基因和载体____________能避免自身环化和反向连接，提高连接的有效性。DNA片段磷酸二酯T4DNA连接酶黏性末端和平末端低定向连接(3)载体①种类：______、λ噬菌体的衍生物或噬菌体、动植物病毒等。②特点：具有一个或多个______________________；在受体细胞中能进行____________，或整合到受体DNA上，随受体DNA同步复制；具有____________，便于筛选______________________________。③载体上的______基因一般是一些抗生素的抗性基因，作用是______________________________________________________。天然的质粒必须经过____________才能作为载体。质粒限制酶的切割位点自我复制标记基因含有目的基因的受体细胞标记便于重组DNA分子的筛选或供重组DNA的鉴定和选择人工改造3.

基因工程中获取目的基因的方法有：______________________、_____________________、人工合成等。4.PCR技术的三个步骤为：第一步______，加热至90℃以上，DNA解链为单链；第二步______，冷却至50℃左右，引物结合到互补DNA链；第三步______，加热至72℃左右，耐高温的DNA聚合酶(Taq酶)从引物起始进行互补链的合成。如此重复循环多次。5.

基因表达载体的组成：__________________________________________________等。启动子是__________________识别和结合的部位，驱动转录。利用PCR获取和扩增变性复性延伸启动子、目的基因、终止子、标记基因、复制原点RNA聚合酶构建基因文库获取6.

农杆菌转化法用于将目的基因导入______细胞；将目的基因导入动物细胞的方法常用_______________；将目的基因导入微生物细胞的方法：一般先用______处理细胞使其处于一种能吸收周围环境中______分子的生理状态，然后再将重组的基因表达载体导入其中。还可利用病毒的_________实现对相应宿主细胞的特异性导入。7.

检查转基因抗虫棉是否培育成功(1)分子水平的检测，包括通过_____等技术检测棉花的染色体DNA上是否插入了Bt基因(DNA分子杂交技术)或检测Bt基因是否转录出了mRNA(分子杂交技术)；从转基因棉花中提取蛋白质，用相应的抗体进行_______________杂交，检测Bt基因是否翻译成Bt抗虫蛋白等。(2)需要进行_______________水平的鉴定。植物显微注射法Ca2＋DNA侵染性PCR抗原—抗体个体生物学8.

蛋白质工程通过对基因操作来实现对天然蛋白质的改造的主要原因是：①__________________________________________________________________；②______________________________________________________。9.DNA在________________________和_______________________中溶解度低，而在_______________________________中溶解度较高。DNA鉴定的主要流程是“溶”(DNA粗提物溶解在2mol·L－1NaCl溶液中)→“加”(__________________)→“沸”(_______________)→“冷”(冷却后观察蓝色的出现)。蛋白质具有十分复杂的空间结构，而基因的结构相对简单，容易改造改造后的基因可以遗传给下一代，而被改造的蛋白质无法遗传0.14mol·L－1的NaCl溶液体积分数为95%的酒精水和2mol·L－1的NaCl溶液加二苯胺试剂沸水浴处理10.

高中阶段不选择猪血作为粗提取DNA材料的原因是______________________________________________________________________。11.

变性温度主要取决于______的长度和G、C的比例；退火温度主要取决于______的长度和_____________，延伸温度主要取决于耐高温的DNA聚合酶的最适温度，延伸时间主要取决于__________________。模板哺乳动物的血液中大部分是不含DNA的成熟红细胞，只有白细胞中含有DNA引物G、C的比例目的DNA的长度【情境填空】1.

将一个基因从DNA分子上切割下来，需要切割___处，同时产生___个黏性末端或平末端。而切割质粒则只需要限制酶切割1次，因为______________________。2.ATP、GTP、CTP和UTP是细胞内的四种高能磷酸化合物，它们彻底水解的产物中只有______不同。推测GTP参与RNA合成时的作用可能是提供______和______。24质粒是环状DNA分子碱基能量原料3.

基因工程选择合适的受体细胞非常重要(1)人类第一个转基因药物选择大肠杆菌作为受体细胞的主要原因是______________________________________________。(2)如要利用基因工程获取糖蛋白、有生物活性的胰岛素，应采用真核生物酵母菌，而不能用大肠杆菌作为受体细胞，理由是___________________________________________________________________________________________________________________________________。(3)选择受精卵作为获得乳腺生物反应器的原因主要是________________________________。其单细胞、繁殖快，便于目的基因的表达和分离糖蛋白、有生物活性的胰岛素的合成需内质网和高尔基体的加工、运输等，而大肠杆菌只有核糖体这一种细胞器，没有内质网、高尔基体等其全能性高，便于目的基因的表达(4)检验某乳腺生物反应器的基因表达载体构建是否成功，宜选择__________________(填“受精卵”或“乳腺上皮细胞”)，其主要原因是____________________________________________________________________。4.

检测棉花中导入的抗虫基因是否表达的最简便的方法是_______________________________________________________________________________________________________________________________。乳腺上皮细胞乳腺上皮细胞从功能上类似于动物的乳腺组织，便于目的基因快速表达通过采摘抗虫棉的叶片饲喂棉铃虫，来确定棉花抗虫特性以及抗性的程度(对照组为在普通棉花叶片上接种等量棉铃虫，观察其生存情况)5.电泳可以直观对比DNA的完整性，分子大小不同的DNA在凝胶上迁移速率不同，从而产生不同的条带。下图是从甜菜细胞基因组中提取到的总DNA凝胶电泳结果，其中M是已知大小的不同DNA的混合物。实验结果显示A、B方法提取的总DNA电泳结果只有一条带，而C方法有明显的“拖尾”现象。(1)只出现一条带的原因是________________________________________________。(2)出现“拖尾”现象的原因是________________________________________________________。甜菜细胞基因组DNA分子都比较大，不容易分离DNA发生随机断裂或降解，形成许多大小不等的DNA片段6.

传统基因表达载体的构建需要__________________________酶，与传统PCR产物克隆不同，无缝克隆的载体末端和引物末端具有