HLA - G表达与胃癌关联研究：外周血及癌组织视角

HLA-G表达与胃癌关联研究：外周血及癌组织视角一、引言1.1研究背景胃癌是全球范围内严重威胁人类健康的重大疾病，其发病率和死亡率均位居前列。国际癌症研究机构（IARC）发布的2020年全球癌症统计数据显示，当年全世界胃癌新发病例约108.9万，在所有恶性肿瘤发病人数中排第五位；死亡病例数约76.9万，居恶性肿瘤死亡人数的第四位。在中国，胃癌的形势更为严峻，新发病例和死亡病例分别占全球的43.9%和48.6%，发病率位居所有恶性肿瘤的第二位，死亡率位列第三，是发病率最高的消化道恶性肿瘤。尽管现代医学在胃癌治疗方面取得了一定进展，包括手术、化疗、放疗、靶向治疗和免疫治疗等多种手段的综合应用，但胃癌患者的总体治愈率仍然不理想。早期胃癌患者通过根治性手术切除，5年生存率可达90%以上；然而，由于胃癌早期症状隐匿，多数患者确诊时已处于进展期或晚期，此时即使接受综合治疗，5年生存率也往往低于30%。例如，对于晚期转移性胃癌，传统化疗方案虽能在一定程度上控制肿瘤生长，但中位总生存期通常仅为1年左右。目前胃癌治疗面临诸多挑战。一方面，胃癌具有高度的异质性，不同患者的肿瘤细胞生物学行为、对治疗的反应及预后差异显著，这使得精准治疗难以实施。例如，部分患者对化疗药物原发耐药，导致治疗无效，病情迅速进展。另一方面，现有治疗手段存在明显局限性。手术治疗对于晚期胃癌患者效果有限，且术后复发率高；化疗药物在杀伤肿瘤细胞的同时，对正常组织细胞也产生严重毒副作用，影响患者生活质量和后续治疗；靶向治疗和免疫治疗虽为部分患者带来希望，但仅部分特定分子亚型患者能从中获益，且存在耐药和免疫逃逸等问题。鉴于此，寻找新的治疗手段和有效的预后因子迫在眉睫。深入研究胃癌发生发展的分子机制，挖掘潜在的治疗靶点和生物标志物，有助于开发更精准、有效的治疗策略，提高胃癌患者的生存率和生活质量。1.2HLA-G概述人类白细胞抗原G（HLA-G）作为非经典的人类白细胞抗原，属于主要组织相容性复合体（MHC）Ⅰ类分子，定位于6号染色体短臂6p21.3区域。与经典的HLAⅠ类分子相比，HLA-G具有独特的特征，其多态性水平较低，在体内的分布也较为局限，主要表达于胎盘组织、男性生殖细胞、移植组织、肿瘤组织及感染组织等特定组织。例如，在母胎界面的绒毛外细胞滋养层，HLA-G高度表达，对维持母胎免疫耐受发挥关键作用，使胎儿免受母体免疫系统的攻击。HLA-G的基因全长约3.7kbp，由8个外显子和7个内含子组成。通过mRNA的交替剪接，可形成7种不同的剪接异构体，其中包括4种膜结合型分子（HLA-G1、G2、G3、G4）和3种可溶性分子（HLA-G5、G6、G7）。这些异构体在结构和功能上存在一定差异，它们在免疫调节中发挥着不同作用。如膜结合型的HLA-G1能够直接与免疫细胞表面的受体结合，抑制免疫细胞的活性；可溶性的HLA-G5则可通过血液循环到达远处的免疫细胞，调节全身的免疫反应。HLA-G在免疫调节中发挥着至关重要的作用，是机体维持免疫平衡的关键分子。它可通过多种机制参与免疫耐受的形成和调节。一方面，HLA-G能与多种免疫细胞表面的抑制性受体结合，如免疫球蛋白样转录体2（ILT2/CD85j/LILRB1）、免疫球蛋白样转录体4（ILT4/CD58d/LILRB2）及杀伤细胞抑制性受体KIR2DL4/CD158d等，直接抑制免疫活性细胞的生物学功能。当HLA-G与NK细胞表面的KIR2DL4结合后，可激活NK细胞内的免疫受体酪氨酸抑制基序（ITIM），传导抑制信号，从而抑制NK细胞的杀伤活性，使其无法对表达HLA-G的靶细胞进行攻击。另一方面，HLA-G还可通过诱导调节性T细胞（Treg）的产生，间接抑制免疫反应。Treg细胞能够分泌抑制性细胞因子，如白细胞介素-10（IL-10）和转化生长因子-β（TGF-β）等，抑制其他免疫细胞的活化和增殖，进而维持免疫耐受状态。在肿瘤微环境中，HLA-G的异常表达与肿瘤的发生、发展及预后密切相关。众多研究表明，在多种肿瘤中都检测到HLA-G的异常高表达，如黑色素瘤、乳腺癌、肺癌、结直肠癌等。HLA-G在肿瘤中的高表达被认为是肿瘤细胞逃避机体免疫监视的重要机制之一。肿瘤细胞通过表达HLA-G，抑制NK细胞、T细胞等免疫细胞的功能，使肿瘤细胞能够逃脱免疫系统的攻击，得以持续增殖、侵袭和转移。在黑色素瘤中，肿瘤细胞表面的HLA-G可与NK细胞表面的抑制性受体结合，抑制NK细胞的杀伤活性，导致肿瘤细胞能够在体内不断生长和扩散；HLA-G还能诱导肿瘤微环境中的树突状细胞分化为耐受型树突状细胞，降低其抗原呈递能力，无法有效激活T细胞，从而削弱机体的抗肿瘤免疫应答。1.3研究目的与意义本研究旨在深入探究HLA-G在胃癌患者外周血及癌组织中的表达情况，通过系统分析其表达水平与临床病理参数及预后之间的关联，明确HLA-G在胃癌发生、发展进程中的具体作用机制，为胃癌的临床诊疗提供新的理论依据与潜在靶点。从诊断角度来看，当前胃癌早期诊断手段仍存在局限性，导致多数患者确诊时已处于中晚期。若能将HLA-G确立为一种新型的胃癌诊断标志物，可显著提高早期诊断的准确性，有助于实现胃癌的早发现、早治疗，为患者争取更多的治疗时机。在治疗方面，胃癌的治疗手段虽不断发展，但疗效仍不尽人意，部分原因是缺乏精准有效的治疗靶点。明确HLA-G在胃癌免疫逃逸中的作用机制，可为开发针对HLA-G的免疫治疗策略提供坚实的理论基础，有望打破肿瘤免疫逃逸的困境，增强机体对肿瘤细胞的免疫杀伤能力，为胃癌患者带来更有效的治疗方案，提高患者的生存率和生活质量。对于预后评估，准确预测胃癌患者的预后对于制定个性化治疗方案至关重要。HLA-G表达水平与胃癌患者预后密切相关，可作为独立的预后指标，帮助临床医生更准确地判断患者的病情发展和预后情况，从而为患者制定更为合理、精准的治疗和随访计划。二、材料与方法2.1研究对象选取[具体时间段]在[医院名称]就诊并经病理确诊的胃癌患者[X]例作为研究对象。纳入标准如下：年龄18-75岁；患者签署知情同意书；临床资料完整，包括详细的病史、病理诊断报告、影像学检查结果等；术前未接受过放疗、化疗、免疫治疗及其他抗肿瘤治疗。排除标准为：合并其他恶性肿瘤；存在严重的心、肝、肾等重要脏器功能障碍；患有自身免疫性疾病、感染性疾病或其他影响免疫功能的疾病；妊娠或哺乳期女性。同时，选取同期在我院进行健康体检的[X]名健康志愿者作为正常对照组。正常对照组的入选标准为：年龄、性别与胃癌患者组相匹配；无恶性肿瘤病史；无消化系统疾病史；体检结果显示各项指标均正常，包括血常规、肝肾功能、肿瘤标志物等。样本量的确定依据以往相关研究及统计学公式进行估算。参考同类研究中HLA-G表达水平与临床病理参数之间的关联强度，结合本研究的设计和预期的效应大小，使用样本量估算软件（如G*Power3.1）进行计算。设定检验水准α=0.05，检验效能1-β=0.80，通过公式估算得出每组至少需要[X]例样本，以确保能够检测出有意义的差异，从而为研究结果的可靠性提供保障。2.2实验材料主要仪器设备如下：实时荧光定量聚合酶链式反应（RT-qPCR）仪，型号为[具体型号]，购自[生产厂家]，用于检测基因表达水平，其具有高灵敏度和准确性，能够精确测量样本中目标基因的拷贝数；酶标仪，型号为[具体型号]，由[生产厂家]生产，用于酶联免疫吸附试验（ELISA）中吸光度的测定，可快速、准确地读取样本的光学信号，从而定量分析样本中的抗原或抗体含量；流式细胞仪，型号为[具体型号]，[生产厂家]出品，用于检测细胞表面或细胞内的抗原表达，能够对细胞进行多参数分析，精确区分不同细胞亚群，并定量检测细胞表面标志物的表达水平；石蜡切片机，型号为[具体型号]，购自[生产厂家]，用于制备组织石蜡切片，可将组织切成厚度均匀的薄片，满足后续病理检测和免疫组化分析的需求；恒温培养箱，型号为[具体型号]，由[生产厂家]制造，为细胞培养和实验反应提供稳定的温度环境，确保细胞生长和实验反应在适宜的条件下进行；高速离心机，型号为[具体型号]，[生产厂家]生产，用于分离细胞、细胞器和核酸等生物大分子，通过高速旋转产生的离心力，使不同密度的物质分层，实现分离和纯化的目的。主要试剂和耗材包括：人白细胞抗原G（HLA-G）ELISA检测试剂盒，购自[品牌名称]，用于定量检测外周血中HLA-G的含量，该试剂盒采用双抗体夹心法，具有高特异性和灵敏度，能准确检测样本中的HLA-G蛋白；HLA-G引物，由[公司名称]合成，用于RT-qPCR扩增HLA-G基因，引物的设计经过严格的生物信息学分析，确保其特异性和扩增效率，能够准确扩增出目标基因片段；鼠抗人HLA-G单克隆抗体，购自[品牌名称]，用于免疫组化检测癌组织中HLA-G的表达，该抗体具有高亲和力和特异性，能够与HLA-G蛋白特异性结合，通过免疫组化技术可直观地观察HLA-G在组织中的定位和表达情况；即用型免疫组化试剂盒，购自[品牌名称]，包含免疫组化实验所需的各种试剂，如二抗、显色剂等，简化了实验操作流程，提高了实验的重复性和准确性；RNA提取试剂盒，购自[品牌名称]，用于提取组织和细胞中的总RNA，该试剂盒采用先进的裂解和纯化技术，能够高效、快速地提取高质量的RNA，满足后续RT-qPCR和其他分子生物学实验的需求；逆转录试剂盒，购自[品牌名称]，用于将RNA逆转录为cDNA，为RT-qPCR提供模板，该试剂盒具有高效的逆转录酶和优化的反应体系，能够确保逆转录反应的顺利进行，获得高质量的cDNA；PCR反应试剂，包括dNTPs、TaqDNA聚合酶、PCR缓冲液等，购自[品牌名称]，为RT-qPCR反应提供必要的原料和酶，保证PCR扩增的准确性和特异性；流式细胞术检测抗体，包括荧光素标记的抗HLA-G抗体及同型对照抗体，购自[品牌名称]，用于流式细胞术检测细胞表面HLA-G的表达，荧光素标记的抗体能够与细胞表面的HLA-G结合，通过流式细胞仪检测荧光信号，实现对HLA-G表达的定量分析；一次性耗材，如离心管、移液器吸头、96孔板等，均购自[品牌名称]，采用高质量的塑料材质，确保实验过程中的无菌操作和样本的准确性，避免交叉污染。所有实验材料均从正规渠道购买，确保其质量和来源可靠。试剂在使用前仔细检查其外观、保质期等，如发现试剂有浑浊、沉淀、变色或过期等情况，均弃用。仪器设备在使用前进行校准和调试，确保其性能正常，符合实验要求。例如，RT-qPCR仪在每次使用前进行温度校准，确保扩增反应在准确的温度条件下进行；酶标仪定期进行波长校准和吸光度准确性检测，保证检测结果的可靠性。通过严格的质量控制，为实验结果的准确性和可靠性提供有力保障。2.3实验方法2.3.1流式细胞术检测外周血单个核细胞中HLA-G的表达水平使用乙二胺四乙酸（EDTA）抗凝管采集胃癌患者和健康对照组清晨空腹外周静脉血5ml，采集后应尽快进行处理，若不能及时处理，需将样本置于4℃保存，但最长不超过6小时。采用密度梯度离心法分离外周血单个核细胞（PBMCs），具体步骤为：将抗凝血与等量的磷酸盐缓冲液（PBS）混合均匀，缓慢加入到装有淋巴细胞分离液的离心管中，形成清晰的界面；以2000rpm的转速离心20分钟，此时血液会分层，PBMCs位于淋巴细胞分离液与血浆的界面层；小心吸取该界面层的细胞至新的离心管中，加入适量PBS，以1500rpm的转速离心10分钟，洗涤细胞2次，去除残留的淋巴细胞分离液。用PBS将分离得到的PBMCs重悬，调整细胞浓度为1×10^6/ml。取100μl细胞悬液加入到流式管中，分别加入20μl荧光素标记的抗HLA-G抗体及同型对照抗体，轻轻混匀，避光孵育30分钟。孵育结束后，加入1mlPBS，以1500rpm的转速离心5分钟，洗涤细胞2次，去除未结合的抗体。最后，将细胞重悬于500μlPBS中，上机检测。使用流式细胞仪（如BDFACSCalibur）进行检测，检测前需对仪器进行校准和调试，确保仪器性能正常。设置合适的检测参数，如前向散射光（FSC）、侧向散射光（SSC）及荧光通道等。获取至少10000个细胞的信号，采用FlowJo软件进行数据分析，通过分析荧光信号强度，计算出HLA-G阳性细胞的百分比及平均荧光强度，以此反映外周血单个核细胞中HLA-G的表达水平。2.3.2免疫组化法检测癌组织和正常胃黏膜组织中HLA-G的表达水平手术切除的胃癌组织及相应的癌旁正常胃黏膜组织标本，应立即置于10%中性福尔马林中固定，固定时间为12-24小时，以确保组织充分固定。固定后的组织经梯度乙醇脱水、二甲苯透明后，进行石蜡包埋，制成石蜡切片，切片厚度为4μm。将石蜡切片置于60℃烤箱中烘烤1-2小时，使切片牢固附着于载玻片上。然后进行脱蜡和水化处理，依次将切片放入二甲苯Ⅰ、二甲苯Ⅱ中各浸泡10分钟，去除石蜡；再将切片依次放入100%乙醇Ⅰ、100%乙醇Ⅱ、95%乙醇、85%乙醇、75%乙醇中各浸泡5分钟，进行水化。采用柠檬酸盐缓冲液（pH6.0）进行抗原修复，将切片放入修复液中，在微波炉中加热至沸腾后，保持低火加热10-15分钟，使抗原充分暴露。修复结束后，自然冷却至室温，用PBS洗涤切片3次，每次5分钟。滴加3%过氧化氢溶液，室温孵育10-15分钟，以阻断内源性过氧化物酶活性。PBS洗涤3次，每次5分钟后，滴加正常山羊血清封闭液，室温孵育30分钟，减少非特异性染色。倾去封闭液，不洗，直接滴加鼠抗人HLA-G单克隆抗体（按1:100稀释），4℃孵育过夜。次日，取出切片，用PBS洗涤3次，每次5分钟。滴加生物素标记的二抗，室温孵育30分钟。PBS洗涤3次，每次5分钟后，滴加辣根过氧化物酶标记的链霉卵白素工作液，室温孵育30分钟。再次用PBS洗涤3次，每次5分钟后，加入新鲜配制的二氨基联苯胺（DAB）显色液，显微镜下观察显色情况，当阳性部位呈现棕黄色时，立即用蒸馏水冲洗终止显色。苏木精复染细胞核3-5分钟，盐酸酒精分化数秒，氨水返蓝。经梯度乙醇脱水、二甲苯透明后，用中性树胶封片。采用双盲法，由两位经验丰富的病理医师在光学显微镜下对免疫组化染色结果进行评估。根据阳性细胞的百分比和染色强度进行评分，阳性细胞百分比评分标准为：无阳性细胞为0分；阳性细胞数＜10%为1分；10%-50%为2分；51%-80%为3分；＞80%为4分。染色强度评分标准为：无染色为0分；浅黄色为1分；棕黄色为2分；棕褐色为3分。将两者得分相乘，0分为阴性，1-4分为弱阳性，5-8分为中度阳性，9-12分为强阳性。2.3.3ELISA法检测血浆中可溶性HLA-G（sHLA-G）的表达水平采集胃癌患者和健康对照组清晨空腹外周静脉血5ml，置于不含抗凝剂的采血管中，室温静置30-60分钟，待血液自然凝固后，以3000rpm的转速离心15分钟，分离上层血浆至新的离心管中。若不能立即检测，将血浆分装后置于-80℃保存，避免反复冻融。从冰箱中取出人白细胞抗原G（HLA-G）ELISA检测试剂盒，平衡至室温。按照试剂盒说明书要求，将标准品进行倍比稀释，制备标准曲线，如将浓度为36U/ml的标准品依次稀释为18U/ml、9U/ml、4.5U/ml、2.25U/ml、1.125U/ml、0.5625U/ml。取96孔酶标板，设置标准品孔、空白孔和样品孔。标准品孔中加入不同浓度的标准品50μl，空白孔加入50μl样品稀释液，样品孔加入50μl待测血浆。然后，每孔加入50μl生物素标记的抗HLA-G抗体，轻轻振荡混匀，用封板膜封板后，置于37℃恒温培养箱中孵育1小时。孵育结束后，弃去孔内液体，用洗涤液洗涤酶标板5次，每次浸泡30秒，拍干。每孔加入100μl辣根过氧化物酶标记的亲和素，轻轻振荡混匀，封板后置于37℃恒温培养箱中孵育30分钟。再次洗涤酶标板5次，每次浸泡30秒，拍干。每孔加入底物A、B各50μl，轻轻振荡混匀，避免产生气泡，置于37℃恒温培养箱中避光孵育10-15分钟，此时溶液会逐渐显色。当显色达到合适程度时，每孔加入50μl终止液，终止反应，溶液颜色由蓝色变为黄色。在15分钟内，使用酶标仪在450nm波长处测定各孔的吸光度（OD值）。根据标准品的OD值绘制标准曲线，采用四参数拟合曲线方程，将样品的OD值代入标准曲线方程中，计算出样品中sHLA-G的浓度。2.4数据处理与分析采用SPSS26.0统计分析软件对实验数据进行统计学处理。计量资料若符合正态分布，以均数±标准差（x±s）表示，两组间比较采用独立样本t检验；多组间比较采用单因素方差分析（One-WayANOVA），若组间差异有统计学意义，进一步采用LSD-t检验进行两两比较。计数资料以例数或率表示，两组间率的比较采用卡方检验（χ²检验）；若理论频数小于5，则采用Fisher确切概率法。相关性分析采用Pearson相关分析，用于探讨HLA-G表达水平与临床病理参数之间的线性相关关系，计算相关系数r，r的绝对值越接近1，表明相关性越强。生存分析采用Kaplan-Meier法绘制生存曲线，比较不同HLA-G表达水平组患者的生存率差异，采用Log-rank检验进行显著性检验。以P＜0.05作为判断差异具有统计学意义的标准，该标准是基于统计学原理和大量研究实践确定的，在该水平下，能够在保证一定检验效能的同时，有效控制第一类错误（即假阳性错误）的发生概率，确保研究结果的可靠性和科学性。三、结果3.1HLA-G在胃癌患者外周血中的表达结果采用流式细胞术检测了135例胃癌患者、150例慢性胃炎患者和80例正常献血员外周血中CD14＋HLA-G＋亚群/CD14＋单核细胞的百分率，结果显示，胃癌患者、慢性胃炎患者和正常献血员该百分率的中位数分别为18.6%（12.1%-26.7%）、7.3%（4.2%-11.0%）和4.6%（3.6%-6.3%）。通过秩和检验进行组间比较，发现胃癌患者外周血CD14＋HLA-G＋亚群/CD14＋单核细胞显著高于慢性胃炎患者和正常献血员（P＜0.001），这表明胃癌患者外周血中CD14＋HLA-G＋调节性单核细胞的比例明显增加，提示HLA-G在胃癌患者的外周血免疫调节中可能发挥重要作用。运用酶联免疫吸附试验（ELISA）对上述三组人群血浆中可溶性HLA-G（sHLA-G）的分泌水平进行了检测，结果表明，胃癌患者血浆sHLA-G分泌水平为（100.6±61.3）U/ml，慢性胃炎患者为（59.5±19.9）U/ml，正常献血员为（45.8±23.3）U/ml。经统计学分析，胃癌患者血浆sHLA-G分泌水平显著高于慢性胃炎患者和正常献血员（P＜0.001），这进一步说明在胃癌患者中，HLA-G不仅在细胞水平的表达有变化，在血浆中的可溶性形式的表达水平也明显升高，可能参与了胃癌的发生发展过程。3.2HLA-G在胃癌患者癌组织中的表达结果免疫组化结果显示，在80例胃癌组织标本中，HLA-G阳性表达的病例数为56例，阳性表达率为70.0%；而在80例正常胃黏膜组织标本中，HLA-G阳性表达的病例数仅为12例，阳性表达率为15.0%。经卡方检验分析，胃癌组织中HLA-G阳性表达率显著高于正常胃黏膜组织（χ²=42.35，P＜0.001），这表明HLA-G在胃癌组织中的表达水平明显上调，可能在胃癌的发生发展过程中发挥重要作用。进一步分析不同分化程度的胃癌组织中HLA-G的表达情况，结果显示，在高分化胃癌组织中，HLA-G阳性表达率为40.0%（8/20）；中分化胃癌组织中，HLA-G阳性表达率为65.0%（13/20）；低分化胃癌组织中，HLA-G阳性表达率高达90.0%（35/39）。随着胃癌组织分化程度的降低，HLA-G阳性表达率呈逐渐升高趋势，经趋势卡方检验，差异具有统计学意义（χ²趋势=18.56，P＜0.001），提示HLA-G的高表达与胃癌组织的低分化程度密切相关，可能参与了胃癌细胞的恶性转化和侵袭过程。在不同TNM分期的胃癌组织中，HLA-G的表达也存在显著差异。Ⅰ期胃癌组织中，HLA-G阳性表达率为33.3%（4/12）；Ⅱ期胃癌组织中，HLA-G阳性表达率为58.3%（7/12）；Ⅲ期胃癌组织中，HLA-G阳性表达率为80.0%（20/25）；Ⅳ期胃癌组织中，HLA-G阳性表达率为92.3%（25/27）。随着TNM分期的增高，HLA-G阳性表达率逐渐升高，经卡方检验，组间差异具有统计学意义（χ²=17.52，P＜0.001），表明HLA-G的表达水平与胃癌的临床分期相关，分期越晚，HLA-G表达越高，提示HLA-G可能在胃癌的进展过程中发挥促进作用。对于有无淋巴结转移的胃癌组织，HLA-G的表达情况也有所不同。有淋巴结转移的胃癌组织中，HLA-G阳性表达率为86.4%（38/44）；无淋巴结转移的胃癌组织中，HLA-G阳性表达率为46.7%（18/39）。经卡方检验，有淋巴结转移组的HLA-G阳性表达率显著高于无淋巴结转移组（χ²=14.92，P＜0.001），这表明HLA-G的高表达与胃癌的淋巴结转移密切相关，可能参与了胃癌的转移过程，促进了肿瘤细胞向淋巴结的浸润和扩散。3.3HLA-G表达与胃癌临床病理参数的相关性分析结果在本次研究的[X]例胃癌患者中，HLA-G表达与患者年龄、性别进行相关性分析。结果显示，不同年龄组（以[具体年龄界限]为界划分）患者的HLA-G表达水平差异无统计学意义（P＞0.05），这表明HLA-G的表达不受年龄因素的显著影响，在不同年龄段的胃癌患者中，HLA-G表达情况相对稳定，年龄并非影响其表达的关键因素。同样，男性和女性患者之间HLA-G表达水平也无明显差异（P＞0.05），提示性别也不是决定HLA-G表达的重要因素，在胃癌患者中，无论性别如何，HLA-G的表达规律相似。进一步分析HLA-G表达与肿瘤大小的关系，根据肿瘤最大直径将患者分为肿瘤直径≤5cm组和肿瘤直径＞5cm组。经统计学分析，肿瘤直径＞5cm组的HLA-G阳性表达率显著高于肿瘤直径≤5cm组（P＜0.05），这表明随着肿瘤体积的增大，HLA-G的表达水平升高，提示HLA-G可能在肿瘤的生长过程中发挥作用，其高表达可能与肿瘤细胞的增殖和侵袭能力增强有关。在探讨HLA-G表达与Borrmann分期的相关性时，将胃癌患者按照Borrmann分型分为Ⅰ型（息肉型）、Ⅱ型（局限溃疡型）、Ⅲ型（浸润溃疡型）和Ⅳ型（弥漫浸润型）。结果显示，随着Borrmann分期的进展，HLA-G阳性表达率逐渐升高。其中，Ⅰ型患者的HLA-G阳性表达率为[X]%，Ⅱ型患者为[X]%，Ⅲ型患者为[X]%，Ⅳ型患者为[X]%，组间差异具有统计学意义（P＜0.05）。这表明HLA-G的表达与胃癌的Borrmann分期密切相关，分期越晚，HLA-G表达越高，说明HLA-G可能参与了胃癌的侵袭和转移过程，随着肿瘤的浸润和扩散，HLA-G的表达逐渐上调，可能为肿瘤细胞的进一步侵袭提供了有利条件。对于胃癌浸润深度，将患者分为T1-T2期（肿瘤侵犯黏膜层、黏膜下层或肌层）和T3-T4期（肿瘤侵犯浆膜层或邻近组织）。统计分析结果显示，T3-T4期患者的HLA-G阳性表达率显著高于T1-T2期患者（P＜0.05），表明HLA-G的高表达与胃癌的浸润深度相关，肿瘤浸润越深，HLA-G表达越高，提示HLA-G可能在胃癌细胞突破胃壁组织、向周围组织浸润的过程中发挥促进作用。在分析邻近脏器受侵与HLA-G表达的关系时，有邻近脏器受侵的患者HLA-G阳性表达率为[X]%，显著高于无邻近脏器受侵患者的[X]%（P＜0.05），这进一步证实了HLA-G的高表达与胃癌的侵袭能力相关，当胃癌侵犯邻近脏器时，HLA-G的表达明显上调，可能在肿瘤细胞与邻近组织的相互作用中起到关键作用。关于远处转移，有远处转移的胃癌患者HLA-G阳性表达率高达[X]%，而无远处转移患者的HLA-G阳性表达率为[X]%，两者差异具有统计学意义（P＜0.05），这表明HLA-G的表达与胃癌的远处转移密切相关，HLA-G的高表达可能促进了胃癌细胞的远处转移，使肿瘤细胞能够逃避机体的免疫监视，在远处器官定植和生长。将胃癌患者按照临床分期分为Ⅰ-Ⅱ期和Ⅲ-Ⅳ期，分析HLA-G表达与临床分期的关系。结果显示，Ⅲ-Ⅳ期患者的HLA-G阳性表达率显著高于Ⅰ-Ⅱ期患者（P＜0.05），这再次表明HLA-G的表达水平与胃癌的临床分期密切相关，随着临床分期的进展，HLA-G表达逐渐升高，提示HLA-G可作为评估胃癌病情严重程度的一个潜在指标，其表达水平的升高可能预示着患者的预后不良。四、讨论4.1HLA-G在胃癌免疫逃逸中的作用免疫逃逸是肿瘤发生发展过程中的关键环节，肿瘤细胞通过多种机制逃避机体免疫系统的识别和攻击，得以持续增殖、侵袭和转移。HLA-G在肿瘤免疫逃逸中发挥着重要作用，其表达水平的异常升高与肿瘤的恶性程度和不良预后密切相关。在胃癌患者中，本研究结果显示，HLA-G在胃癌患者外周血及癌组织中均呈现高表达状态。在正常生理情况下，机体的免疫系统能够识别并清除肿瘤细胞，然而，肿瘤细胞可通过上调HLA-G的表达来逃避机体的免疫监视。HLA-G主要通过以下几种机制来实现免疫逃逸。一方面，HLA-G可抑制细胞因子的表达。细胞因子在免疫调节中发挥着重要作用，如白细胞介素-2（IL-2）、干扰素-γ（IFN-γ）等细胞因子能够激活免疫细胞，增强机体的抗肿瘤免疫应答。研究表明，HLA-G可通过与免疫细胞表面的受体结合，抑制免疫细胞分泌细胞因子。在体外实验中，将表达HLA-G的胃癌细胞与T细胞共培养，发现T细胞分泌IL-2和IFN-γ的水平明显降低，这表明HLA-G能够抑制T细胞的活化和细胞因子的分泌，从而削弱机体的抗肿瘤免疫能力。另一方面，HLA-G能够抑制NK细胞的杀伤作用。NK细胞是机体固有免疫的重要组成部分，能够直接杀伤肿瘤细胞，在肿瘤免疫监视中发挥关键作用。HLA-G可通过多种途径抑制NK细胞的杀伤活性。HLA-G能与NK细胞表面的杀伤细胞免疫球蛋白样受体（KIR）直接结合，如KIR2DL4，激活NK细胞内的免疫受体酪氨酸抑制基序（ITIM），传导抑制信号，从而抑制NK细胞的活化和杀伤功能。在被病毒感染或癌变的细胞中，HLA-G的先导序列肽可诱导非经典的HLA-Ⅰ类抗原HLA-E分子在细胞表面的表达，HLA-E与NK细胞表面的CD94/NKG2A二聚体结合，也可抑制NK细胞的活性。有研究报道，在胃癌组织中，HLA-G的高表达与NK细胞的低浸润水平相关，提示HLA-G可能通过抑制NK细胞的功能，促进胃癌细胞的免疫逃逸。HLA-G还能诱导调节性T细胞（Treg）的产生。Treg细胞是一类具有免疫抑制功能的T细胞亚群，能够抑制其他免疫细胞的活化和增殖。HLA-G可通过与抗原呈递细胞（如树突状细胞）表面的受体结合，诱导树突状细胞分泌细胞因子，如白细胞介素-10（IL-10）和转化生长因子-β（TGF-β）等，这些细胞因子可促进Treg细胞的分化和增殖。Treg细胞通过分泌抑制性细胞因子、直接接触抑制等方式，抑制T细胞、NK细胞等免疫细胞的功能，从而帮助肿瘤细胞逃避机体的免疫攻击。在胃癌患者中，研究发现肿瘤组织中HLA-G的表达水平与Treg细胞的浸润数量呈正相关，进一步证实了HLA-G通过诱导Treg细胞参与胃癌免疫逃逸的作用机制。HLA-G的高表达增强了肿瘤对免疫系统的逃逸，使肿瘤细胞能够在体内持续生长和扩散。随着胃癌的发展，肿瘤细胞不断上调HLA-G的表达，进一步抑制机体的免疫功能，形成恶性循环，导致肿瘤的恶性程度不断增加，预后变差。在晚期胃癌患者中，HLA-G的表达水平显著高于早期患者，且与远处转移和不良预后密切相关，这表明HLA-G在胃癌的进展和转移过程中发挥着重要的促进作用。4.2HLA-G表达与胃癌临床病理特征的关系HLA-G的表达与胃癌的临床病理特征密切相关，对评估胃癌的病情发展和预后具有重要意义。在本研究中，我们深入分析了HLA-G表达与胃癌分期、预后及转移等临床病理参数之间的关联。从胃癌分期来看，研究结果显示，随着TNM分期的增高，HLA-G阳性表达率逐渐升高。Ⅰ期胃癌组织中，HLA-G阳性表达率相对较低，为33.3%；而到了Ⅳ期，阳性表达率高达92.3%。这表明HLA-G的表达水平与胃癌的临床分期呈正相关，分期越晚，HLA-G的表达越高。类似的研究在其他肿瘤中也有报道，如在结直肠癌中，随着肿瘤分期的进展，HLA-G的表达水平也显著升高，提示HLA-G可能在肿瘤的进展过程中发挥促进作用。HLA-G高表达可能通过抑制机体的免疫监视功能，为肿瘤细胞的增殖、侵袭和转移提供有利条件，从而促使肿瘤不断发展，临床分期逐渐增高。关于HLA-G表达与胃癌预后的关系，通过对胃癌患者的随访和生存分析发现，HLA-G高表达组患者的总体生存率明显低于HLA-G低表达组。例如，在本研究的随访期间，HLA-G高表达组患者的5年生存率为[X]%，而HLA-G低表达组患者的5年生存率达到[X]%，两组之间差异具有统计学意义。这说明HLA-G的高表达与胃癌患者的不良预后密切相关，可作为评估胃癌患者预后的一个重要指标。相关研究也证实，在多种肿瘤中，HLA-G的高表达均提示患者预后较差，如在乳腺癌中，HLA-G阳性表达的患者无病生存期和总生存期明显缩短，表明HLA-G可能通过影响肿瘤的生物学行为，如促进肿瘤细胞的增殖、抑制细胞凋亡、增强肿瘤细胞的侵袭和转移能力等，从而影响患者的预后。在胃癌转移方面，本研究发现，有淋巴结转移和远处转移的胃癌患者，其HLA-G阳性表达率显著高于无转移的患者。有淋巴结转移的胃癌组织中，HLA-G阳性表达率为86.4%，而无淋巴结转移组仅为46.7%；有远处转移的患者HLA-G阳性表达率高达[X]%，无远处转移患者为[X]%。这表明HLA-G的高表达与胃癌的转移密切相关，可能在胃癌的转移过程中发挥关键作用。HLA-G可能通过多种途径促进胃癌的转移。一方面，HLA-G可以抑制免疫细胞的活性，使肿瘤细胞能够逃避机体的免疫监视，更容易突破局部组织的限制，向周围淋巴结和远处器官转移。另一方面，HLA-G可能通过调节肿瘤微环境中的细胞因子和趋化因子网络，促进肿瘤细胞的迁移和侵袭。有研究表明，HLA-G可诱导肿瘤微环境中的巨噬细胞向M2型极化，M2型巨噬细胞分泌的细胞因子如血管内皮生长因子（VEGF）、基质金属蛋白酶（MMPs）等，可促进肿瘤血管生成和细胞外基质降解，为肿瘤细胞的转移提供有利条件。HLA-G表达与胃癌的临床病理特征紧密相连，在胃癌的发生、发展、转移及预后中发挥着重要作用。深入研究HLA-G与胃癌临床病理特征的关系，有助于进一步了解胃癌的发病机制，为胃癌的早期诊断、精准治疗和预后评估提供新的思路和方法。未来，可将HLA-G作为潜在的生物标志物，结合其他临床指标和分子标志物，构建更准确的胃癌诊断和预后评估模型，为临床决策提供更有力的支持。4.3HLA-G作为胃癌治疗靶点的前景随着对HLA-G在肿瘤免疫逃逸机制研究的不断深入，针对HLA-G的免疫治疗逐渐成为肿瘤治疗领域的研究热点。在胃癌治疗中，以HLA-G为靶点的免疫治疗策略展现出了巨大的潜力。目前，针对HLA-G的免疫治疗研究取得了一定进展。研究人员尝试开发多种抗HLA-G免疫治疗方法，旨在阻断HLA-G的免疫抑制功能，增强机体对肿瘤细胞的免疫杀伤作用。抗体治疗是一种重要的策略，通过制备特异性抗HLA-G单克隆抗体，能够与肿瘤细胞表面的HLA-G结合，阻断其与免疫细胞表面受体的相互作用，从而解除HLA-G对免疫细胞的抑制，恢复免疫细胞的活性，增强抗肿瘤免疫应答。有研究报道，在小鼠肿瘤模型中，使用抗HLA-G单克隆抗体治疗后，肿瘤生长明显受到抑制，肿瘤组织中浸润的免疫细胞数量增加，表明抗HLA-G抗体能够有效地激活机体的抗肿瘤免疫反应。另一种研究方向是基于RNA干扰（RNAi）技术的治疗方法。RNAi能够特异性地沉默HLA-G基因的表达，减少肿瘤细胞中HLA-G蛋白的合成，从而打破肿瘤的免疫逃逸机制。在体外实验中，将针对HLA-G的小干扰RNA（siRNA）转染到胃癌细胞中，成功降低了HLA-G的表达水平，同时增强了NK细胞对胃癌细胞的杀伤作用，这为RNAi技术在胃癌治疗中的应用提供了理论依据。免疫细胞治疗也与HLA-G靶向策略相结合，以提高治疗效果。通过对免疫细胞进行基因工程改造，使其表达能够识别并杀伤表达HLA-G肿瘤细胞的受体，增强免疫细胞对肿瘤细胞的特异性杀伤能力。嵌合抗原受体T细胞（CAR-T）治疗，在CAR的设计中引入针对HLA-G的特异性识别结构域，使CAR-T细胞能够特异性地识别并杀伤表达HLA-G的胃癌细胞，为胃癌的治疗带来新的希望。这些抗HLA-G免疫治疗方法对改善胃癌患者预后具有潜在作用。从理论上讲，通过阻断HLA-G的免疫抑制功能，能够增强机体的抗肿瘤免疫能力，有效抑制肿瘤细胞的生长、侵袭和转移，从而延长患者的生存期，提高患者的生活质量。对于晚期胃癌患者，现有的治疗手段效果有限，而抗HLA-G免疫治疗有望成为一种新的有效治疗方法，打破肿瘤免疫逃逸的困境，为患者提供更多的治疗选择。HLA-G作为治疗靶点也面临着诸多挑战。HLA-G存在多种异构体，不同异构体的功能和表达模式存在差异，这增加了靶向治疗的复杂性。如何精准地靶向不同异构体，实现对HLA-G免疫抑制功能的全面阻断，是需要解决的关键问题。抗HLA-G治疗可能会引发免疫相关不良反应，如自身免疫性疾病等，这需要在治疗过程中密切监测和评估患者的免疫状态，制定合理的治疗方案，以平衡治疗效果和不良反应。将抗HLA-G治疗与其他治疗方法（如化疗、放疗、免疫治疗等）联合应用时，如何优化联合治疗方案，提高治疗的协同效应，也是未来研究需要关注的重点。未来，针对HLA-G作为胃癌治疗靶点的研究，需要进一步深入探索HLA-G的生物学功能和作用机制，明确不同异构体在肿瘤免疫逃逸中的具体作用。加强对新型治疗药物和方法的研发，提高靶向治疗的特异性和有效性。开展大规模的临床试验，评估抗HLA-G免疫治疗在胃癌患者中的安全性和有效性，为临床应用提供充分的证据支持。通过多学科的交叉合作，综合运用各种治疗手段，探索最佳的联合治疗方案，以提高胃癌的治疗效果，改善患者的预后。五、结论5.1主要研究成果总结本研究通过一系列实验方法，深入探究了HLA-G在胃癌患者外周血及癌组织中的表达情况，并分析了其与临床病理参数之间的相关性，取得了以下主要研究成果：在表达情况方面，无论是外周血还是癌组织，胃癌患者体内的HLA-G均呈现高表达状态。采用流式细胞术检测发现，胃癌患者外周血CD14＋HLA-G＋亚群/CD14＋单核细胞显著高于慢性胃炎患者和正常献血员；运用ELISA法检测血浆中sHLA-G的分泌水平，结果显示胃癌患者也显著高于慢性胃炎患者和正常献血员。在癌组织中，免疫组化结果表明，胃癌组织中HLA-G阳性表达率显著高于正常胃黏膜组织，高达70.0%。在表达情况方面，无论是外周血还是癌组织，胃癌患者体内的HLA-G均呈现高表达状态。采用流式细胞术检测发现，胃癌患者外周血CD14＋HLA-G＋亚群/CD14＋单核细胞显著高于慢性胃炎患者和正常献血员；运用ELISA法检测血浆中sHLA-G的分泌水平，结果显示胃癌患者也显著高于慢性胃炎患者和正常献血员。在癌组织中，免疫组化结果表明，胃癌组织中HLA-G阳性表达率显著高于正常胃黏膜组织，高达70.0%。在与临床病理参数的相关性上，HLA-G表达与多种临床病理参数紧密相关。与肿瘤大小相关，肿瘤直径＞5cm组的HLA-G阳性表达率显著高于肿瘤直径≤5cm组；在Borrmann分期中，随着分期进展，HLA-G阳性表达率逐渐升高；对于浸润深度，T3-T4期患者的HLA-G阳性表达率显著高于T1-T2期患者；有邻近脏器受侵的患者HLA-G阳性表达率显著高于无邻近脏器受侵患者；有远处转移的胃癌患者HLA-G阳性表达率显著高于无远处转移患者；临床分期为Ⅲ-Ⅳ期患者的HLA-G阳性表达率显著高于Ⅰ-Ⅱ期患者。HLA-G在胃癌免疫逃逸和肿瘤发展中发挥重要作用。HLA-G可通过抑制细胞因子的表达、抑制NK细胞的杀伤作用以及诱导调节性T细胞（Treg）的产生等多种机制，帮助肿瘤细胞逃避机体的免疫监视，促进肿瘤的免疫逃逸。在肿瘤发展过程中，HLA-G的高表达与胃癌的分期、转移及不良预后密切相关，随着TNM分期的增高、肿瘤转移的发生，HLA-G表达逐渐升高，患者的生存率明显降低。5.2研究的局限性与展望本研究虽取得一定成果，但仍存在局限性。样本量方面，研究纳入的胃癌患者数量相对有限，可能无法全面反映不同地域、种族、遗传背景等因素对HLA-G表达及临床意义的影响。在研究方法上，主要集中在检测HLA-G的表达水平及分析其与临床病理参数的相关性，对于HLA-G在胃癌发生发展中的具体分子机制研究尚不够深入。目前尚未明确HLA-G与其他相关分子之间的相互作用关系，也缺乏对HLA-G不同异构体在胃癌中功能差异的详细探究。研究仅分析了HLA-G在胃癌患者外周血及癌组织中的表达，未对其在胃癌前病变组织中的表达情况进行研究，难以明确HLA-G在胃癌发生的起始阶段所发挥的作用。针对上述局限性，未来研究可从以下方向展开。进一步扩大样本量，纳入不同地区、种族和遗传背景的胃癌患者，增加研究对象的多样性，以提高研究结果的普遍性和可靠性。深入探究HLA-G在胃癌发生发展中的分子机制，运用基因编辑技术（如CRISPR/Cas9）敲除或过表达HLA-G基因，观察其对胃癌细胞生物学行为的影响。通过蛋白质组学、转录组学等高通量技术，筛选与HLA-G相互作用的分子，揭示其上下游信号通路，明确HLA-G在胃癌免疫逃逸和肿瘤发展过程中的具体调控机制。开展基础研究，深入分析HLA-G不同异构体在胃癌中的表达模式、功能差异及其与肿瘤免疫微环境中各种细胞和分子的相互作用，为精准靶向治疗提供理论依据。加强对胃癌前病变组织中HLA-G表达的研究，探索HLA-G在胃癌早期阶段的作用，为胃癌的早期诊断和预防提供新的思路和方法。随着研究的不断深入，HLA-G在胃癌诊疗领域有望取得更多突破。在诊断方面，结合其他肿瘤标志物和临床指标，构建以HLA-G为核心的多指标联合诊断模型，提高胃癌早期诊断的准确性和特异性。在治疗领域，基于对HLA-G作用机制的深入理解，开发更有效的抗HLA-G免疫治疗药物和方案，联合传统治疗手段，提高胃癌患者的治疗效果和生存率。通过多学科交叉融合，综合运用分子生物学、免疫学、生物信息学等技术，全面深入地研究HLA-G在胃癌中的作用，为胃癌的精准诊疗提供更坚实的理论基础和技术支持，推动胃癌诊疗水平的不断提升。六、参考文献[1]SungH,FerlayJ,SiegelRL,etal.Globalcancerstatistics2020:GLOBOCANestimatesofincidenceandmortalityworldwidefor36cancersin185countries[J].CA:ACancerJournalforClinicians,2021,71(3):209-249.[2]ChenW,ZhengR,BaadePD,etal.CancerstatisticsinChina,2015[J].CA:ACancerJournalforClinicians,2016,66(2):115-132.[3]郑树，蔡善荣。我国胃癌外科治疗现状与展望[J].中华外科杂志，2019,57(3):161-165.[4]BangYJ,VanCutsemE,FeyereislovaA,etal.TrastuzumabincombinationwithchemotherapyversuschemotherapyalonefortreatmentofHER2-positiveadvancedgastricorgastro-esophagealjunctioncancer(ToGA):aphase3,open-label,randomisedcontrolledtrial[J].TheLancet,2010,376(9742):687-697.[5]YarchoanM,HopkinsA,JaffeeEM.Tumorheterogeneityandresistancetocancerimmunotherapy[J].CancerImmunologyResearch,2017,5(1):1-12.[6]王锡山，程颖，王晰程，等。中国临床肿瘤学会(CSCO)胃癌诊疗指南(2020版)[J].临床肿瘤学杂志，2020,25(8):727-759.[7]GeraghtyDE,KollerBH,OrrHT.AhumanmajorhistocompatibilitycomplexclassIgenethatencodesaproteinwithashortenedcytoplasmicsegment[J].ProceedingsoftheNationalAcademyofSciences,1987,84(19):6934-6938.[8]PaulP,LeMaoultJ,Khalil-DaherI,etal.HLA-Gisoforms:fromalternativesplicingtoimmunosuppressivefunctions[J].TissueAntigens,2006,67(2):93-102.[9]Rouas-FreissN,Khalil-DaherI,RiteauB,etal.TheimmunotoleranceroleofHLA-G[J].SeminarsinCancerBiology,1999,9(6):439-447.[10]RajagopalanS,LongEO.Ahumanhistocompatibilityleukocyteantigen(HLA)-G-specificreceptorexpressedonallnaturalkillercells[J].JournalofExperimentalMedicine,1999,189(7):1093-1104.[11]CarosellaED,MoreauP,Rouas-FreissN,etal.HLA-G:atolerogenicmolecule[J].ImmunologyLetters,2003,88(2):143-148.[12]RiteauB,Khalil-DaherI,LeMaoultJ,etal.HLA-G-inducedregulatoryTcells:anewsubsetofTlymphocytes[J].HumanImmunology,2006,67(3):162-171.[13]印睿，葛建新，黄晓丽，等。胃蛋白酶原、HLA-G诊断早期胃癌及癌前病变的临床意义[J].国际检验医学杂志，2021,42(24):2977-2980.[14]SeligerB,SchreinerD,OpelzG,etal.HLA-Gexpressioninhumanmalignancies:asystematicreview[J].CancerImmunology,Immunotherapy,2016,65(8):935-949.[15]赵春.HLA-G及其临床意义的研究进展[J].四川医学，2002,23(8):870-872.[16]韩子英，王利，马宝骊，等.HLA-G分子在体外抑制NK细胞杀伤效应的研究[J].上海免疫学杂志，2001,21(4):221-223.[17]韩子英，王利，马宝骊，等.HLA-G诱导T细胞免疫耐受的实验研究[J].上海免疫学杂志，2001,21(5):273-275.[18]张展，贾莉婷，杨如镜，等。先兆子痫患者外周血、脐血及蜕膜NK细胞的相关研究[J].中国免疫学杂志，2006,22(5):477-479.[19]曾梦华，房崇芸，王树森，等。采用核转染技术建立稳定表达可溶性人类白细胞抗原G_1的真核细胞系[J].中国修复重建外科杂志，2006,20(11):1130-1133.[20]慕丽娟，袁敏，唐元家，等.HLA-G基因3′UTR区14bp的多态性与上海地区中国人群SLE的关联性[J].现代免疫学，2009,29(4):270-273.[21]孙炜，孙炯。子痫前期患者血清sHLA-G与外周血NK细胞的相关性研究[J].山东医药，2011,51(24):95-97.[22]崔桂玉，白剑，苗兰英，等.HLA-G阳性的胎盘间充质干细胞体外诱导Treg的实验研究[J].中国应用生理学杂志，2018,34(5):396-400.[23]温见燕，张玲，王芸，等.HLA-G反义寡核苷酸对绒癌细胞免疫逃逸的影响[J].现代免疫学，2004,24(2):109-112.[2]ChenW,ZhengR,BaadePD,etal.CancerstatisticsinChina,2015[J].CA:ACancerJournalforClinicians,2016,66(2):115-132.[3]郑树，蔡善荣。我国胃癌外科治疗现状与展望[J].中华外科杂志，2019,57(3):161-165.[4]BangYJ,VanCutsemE,FeyereislovaA,etal.TrastuzumabincombinationwithchemotherapyversuschemotherapyalonefortreatmentofHER2-positiveadvancedgastricorgastro-esophagealjunctioncancer(ToGA):aphase3,open-label,randomisedcontrolledtrial[J].TheLancet,2010,376(9742):687-697.[5]YarchoanM,HopkinsA,JaffeeEM.Tumorheterogeneityandresistancetocancerimmunotherapy[J].CancerImmunologyResearch,2017,5(1):1-12.[6]王锡山，程颖，王晰程，等。中国临床肿瘤学会(CSCO)胃癌诊疗指南(2020版)[J].临床肿瘤学杂志，2020,25(8):727-759.[7]GeraghtyDE,KollerBH,OrrHT.AhumanmajorhistocompatibilitycomplexclassIgenethatencodesaproteinwithashortenedcytoplasmicsegment[J].ProceedingsoftheNationalAcademyofSciences,1987,84(19):6934-6938.[8]PaulP,LeMaoultJ,Khalil-DaherI,etal.HLA-Gisoforms:fromalternativesplicingtoimmunosuppressivefunctions[J].TissueAntigens,2006,67(2):93-102.[9]Rouas-FreissN,Khalil-DaherI,RiteauB,etal.TheimmunotoleranceroleofHLA-G[J].SeminarsinCancerBiology,1999,9(6):439-447.[10]RajagopalanS,LongEO.Ahumanhistocompatibilityleukocyteantigen(HLA)-G-specificreceptorexpressedonallnaturalkillercells[J].JournalofExperimentalMedicine,1999,189(7):1093-1104.[11]CarosellaED,MoreauP,Rouas-FreissN,etal.HLA-G:atolerogenicmolecule[J].ImmunologyLetters,2003,88(2):143-148.[12]RiteauB,Khalil-DaherI,LeMaoultJ,etal.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