DB3717∕T 23-2024 植物种苗组培技术规程

ICS65.020.20

CCSB05

3717

菏泽市地方标准

DB3717/T23—2024

植物种苗组培技术规程

Technicalcodeofplantmicropropagation

2024-06-28发布2024-07-28实施

菏泽市市场监督管理局  发布

DB3717/T23—2024

目次

前言........................................................................................................................................................................II

1范围...................................................................................................................................................................1

2规范性引用文件..............................................................................................................................................1

3术语和定义......................................................................................................................................................1

4培养基的配制..................................................................................................................................................1

4.1母液的配制...............................................................................................................................................1

4.2植物接种培养基.......................................................................................................................................1

5植物材料的选择与外植体灭菌......................................................................................................................2

5.1植物组培苗外植体母本圃种植...............................................................................................................2

5.2植物材料选择时间...................................................................................................................................2

5.3植物材料部位的确定和选择...................................................................................................................2

5.4仪器和植物外植体材料的灭菌...............................................................................................................2

5.5仪器及培养基的最少消毒时间...............................................................................................................2

5.6仪器和培养基与外植体消毒...................................................................................................................2

5.7植物外植体的无菌操作...........................................................................................................................3

6组织培养苗试管培养......................................................................................................................................3

6.1愈伤组织诱导分化培养...........................................................................................................................3

6.2增殖继代培养...........................................................................................................................................3

6.3植物组织生根培养...................................................................................................................................3

6.4组织苗炼苗移栽.......................................................................................................................................3

6.5移栽穴盘苗的管理...................................................................................................................................3

7包装与运输......................................................................................................................................................3

7.1包装...........................................................................................................................................................3

7.2运输...........................................................................................................................................................4

附录A（规范性）培养基母液配制................................................................................................................5

附录B（规范性）不同植物品种常用培养基配法........................................................................................6

附录C（规范性）生物调节物质母液的配制................................................................................................7

附录D（规范性）植物不同器官消毒顺序....................................................................................................9

附录E（规范性）器皿及培养基的最少灭菌时间......................................................................................10

附录F（规范性）仪器和培养基的消毒压力和温度与排气的关系..........................................................11

附录G（规范性）植物外植体材料的灭菌常用消毒剂效果......................................................................12

附录H（规范性）ABT生根粉种类及使用浓度............................................................................................8

附录I（规范性）不同植物激素种类与使用浓度........................................................................................13

I

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前言

本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》给出的规则

起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。

本文件由菏泽市林业局提出、归口并组织实施。

本文件起草单位：菏泽市林业科学研究院、菏泽市林业产业发展中心、菏泽市自然资源和规划局、

菏泽市行政审批踏勘评审中心、菏泽林业技术服务中心、郓城县阳光花卉有限公司。

本文件主要起草人：袁全国﹑王金国﹑任升﹑李艳玲﹑陈和平、晁新胜﹑罗松﹑李新艳﹑刘金锦﹑

王海燕﹑苏丽娟﹑张淼﹑王传印﹑左传侦。

II

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植物种苗组培技术规程

1范围

本文件规定了植物种苗组培的术语和定义、培养基配制、接种操作流程、包装和运输。

本文件适用于菏泽市植物种苗的组培。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，

仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本

文件。

GB/T1965-2003日光温室和塑料大棚结构与性能要求

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

种苗germchit

种子播种发芽后，一般生长到2对真叶，适合移植到其它环境生长的幼小植株。

3.2

组培苗tissuecultureseedling

利用植物器官、组织、细胞、原生质体，在无菌和适宜的人工条件下，培育植株。

4培养基的配制

4.1母液的配制

4.1.1MS培养基母液的配制

培养基母液配制参见附录A。不同植物品种常用培养基配制方法见附录B。配制好的母液瓶上分别

贴上标签，注明母液号﹑配制倍数﹑日期及配制1L培养基时应取的量。定容后贮藏于冰箱中保存备用。

4.1.2生物调节物质母液的配制

生物调节物质母液的配制见附录C，定容后贮藏于冰箱中保存备用，若贮藏时间过长，发生乳析现

象应震荡均匀后使用。

4.2植物接种培养基

4.2.1配制

1

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4.2.1.1先将贮藏的母液依次按顺序摆放好,再准备好各种玻璃器皿﹑量筒﹑烧杯﹑吸管﹑玻璃棒﹑漏

斗等。称好琼脂﹑蔗糖，配好生长调节剂。准备好蒸馏水和封瓶口用的绳子﹑封口纸。

4.2.1.2根据培养基的配方分别用吸管吸取培养基母液，把依母液的浓度量取规定量滴入量筒中。加

完母液依培养基的配方计算出所需生长调节剂的量，吸取滴入量筒中，定容到1000ml所需的体积。把

定容的培养基液倒入含有0.6%～1.0%琼脂﹑1%～5%蔗糖的加热容器内继续加热，不断搅拌，直至使

琼脂完全溶解。

4.2.1.3接种培养基的pH值控制在5.5～6.0，用0.1N～1N的HCL(NaOH)对培养基pH值进行调整。

4.2.2分装

趁热分装培养基，一般占试管、三角瓶等容器1/3～1/4左右为宜。注意避免培养基粘到瓶壁上，防

止感染杂菌。

4.2.3消毒

分装好的培养基、无菌水、接种工具放入高压消毒锅中(灭菌压力0.11MPa～0.14MPa,120℃～

126℃,15min～20min)，不要装入太满影响蒸汽循环。高压灭菌后培养基取出，放置凝固后接种使用。

5植物材料的选择与外植体灭菌

5.1植物组培苗外植体母本圃种植

将性状优良的组培苗种植在温室内,加强水肥管理,使植株生长健壮,减少植物体表面的细菌﹑真菌

﹑微生物的数量。

5.2植物材料选择时间

3月植物外植体形成愈伤组织最多，7月次之，最次12月愈伤组织形成最少，确定最佳时间为3月份。

5.3植物材料部位的确定和选择

根据组织培育目的，可选择根﹑茎﹑叶等组织和器官，一般选择植物的茎段作为植物培育外植体。

5.4植物不同器官灭菌顺序

见附件D。

5.5仪器及培养基的最少消毒时间

见附录E。器皿和金属器械灭菌采用高温高压蒸汽灭菌法，器皿、金属器械和培养基的最少灭菌时

间参见附录。

5.6仪器﹑培养基与外植体消毒

5.6.1仪器﹑培养基的消毒压力和温度与排气的关系

见附录F。

5.6.2植物外植体材料的灭菌常用消毒剂效果

见附录G。

2

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5.6.3无菌室的灭菌

接种前一天,高锰酸钾与甲醛混合产生的雾化气体封闭无菌室灭菌，并紫外灯照射30min。

5.7植物外植体的无菌操作

植物组织的整个接种过程均需无菌操作。将灭菌冲洗干净的嫩梢0.5cm～1cm小段放在超净工作台

无菌的环境中,用左手镊子夹住茎尖,右手用解剖刀除去幼芽的外面部分,切取顶端0.5mm～1mm大小的芽

接种在灭菌的培养基中进行愈伤组织分化培养，可将病毒除去。

6组织培养苗试管培养

6.1愈伤组织诱导分化培养

MS+6-BA0.5mg/L+2·4-D1mg/L+KT0.5mg/L+3%蔗糖+0.7%琼脂,pH值为6.0左右，培养室温25±2℃，

每天12h光照。（不同植物激素使用种类与浓度见附录H）。

6.2增殖继代培养

6.2.1愈伤组织脱分化培养后，切下形成的小芽，接种在MS+6-BA2mg/L+IAA0.5mg/L+3%蔗糖+0.7%

琼脂,pH值为6.0左右的培养基上进行增殖培养,经24周器官分化,形成纤弱小芽。

6.2.2芽长至12cm时切下转到MS+6-BA（2mg/L∼）+KT（0.3mg/L）+IAA（0.5mg/L）+3%蔗糖+0.7%

琼脂,pH值为6.0∼左右的培养基上,用于壮苗。随着继代增殖培养逐渐减少6-BA的用量，最后一次继代

增殖培养可以加少量的IAA﹑NAA﹑IBA便于外植体的复壮与生根。

6.3植物组织生根培养

生长健壮、适于生根的丛生无根苗,接种在1/2MS(大量元素减半)+NAA0.2-0.5mg/L+IBA2.0mg/L+3%

蔗糖+0.7%琼脂,PH值6.0左右的培养基上，培养30～40天,基部切口处产生新根。

6.4组织苗炼苗移栽

6.4.1当组培苗新根长至1㎝～5㎝,苗高5cm～8cm时,培养瓶内加入少量无菌水,转移到23℃～25℃的

温室中接受自然光的照射，3天～6天后取出试管,无菌蒸馏水冲干净黏附在根部的琼脂。

6.4.2将清洗干净的试管苗在50%可湿性粉剂多菌灵30～70倍液与ABT生根剂液中浸泡（ABT生根

粉种类与浓度见附录I），定植在混合基质中，混合基质配方是泥炭：蛭石：珍珠岩（2：1：1）。注

意覆盖小拱棚及遮阴网，避强光且保湿；移栽前试管苗浇灌0.5g/L的多菌灵溶液进行基质消毒。

6.5移栽穴盘苗的管理

温度控制在15℃～28℃，相对湿度控制在80%～90%，光照强度控制在5000LX～10000LX。施肥用

10%MS培养基浇灌。每3天喷施稀释1000～1500倍的多菌灵或百菌清等杀菌剂一次。

7包装与运输

7.1包装

3

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试管苗及穴盘苗包装:将代有试管的组培苗装在泡沫箱里,外面在用纸箱包装；穴盘苗连同穴盘放在

纸箱里，层层放置，保持立体空间。每箱贴上标签,注明品种﹑等级﹑规格﹑数量、产地等放在托盘上

运输。

7.2运输

及时冷藏运输,避免极端天气。

4

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附录A

（规范性）

培养基母液配制

培养基母液配置见表A.1。

表1.1培养基母液配置

母液体积1L培养基吸取

母液编号化合物名称规定量扩大倍数称取量

(ml)量(ml)

KNO₃19001019000

NH4NO₃16501016500

MgSO4·7H2O370103700

KH2PO4170101700

母液11000100

CaCl2·2H2O440104400

MnSO4·4H2O22.31002230

ZnSO4·7H2O8.6100860

H3BO36.2100620

MnSO4·4H2O22.31002230

ZnSO4·7H2O8.6100860

H3BO36.2100620

母液2IK0.8310083100010

Na2MoO4·2H2O0.2510025

CuSO4·5H2O0.0251002.5

CaCl26H2O0.0251002.5

Na2-EDTA37300----

母液310005

FeSO4•7H2O27800----

甘氨酸2.050100

维生素B10.45020

母液4维生素B60.5502550010

烟酸0.55025

肌醇100505000

5

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附录B

（规范性）

不同植物品种常用培养基配法

不同植物品种常用培养基配法见表B.1。

表1.2不同植物品种常用培养基配法

名称愈伤组织诱导分化培养基继代增值培养基生根培养基

泡桐MS+6-BA1.0mg/L+KT0.2mg/LMS+6-BA2.0mg/L+NAA0.2mg/L1/2MS+IBA2.0mg/L+NAA0.2mg/L+B90.5mg/L

康乃

MS+6-BA0.5mg/L+2·4-D1mg/LMS+6-BA2.0mg/L+NAA0.5mg/L1/2MS+IBA2.0mg/L+NAA0.5mg/L

馨

苹果MS+6-BA0.5mg/L+KT2.0mg/LMS+6-BA0.5mg/L+GA35mg/L1/2MS+IBA2.0mg/L+NAA1.0mg/L

满天

MS+6-BA0.5mg/L+KT0.5mg/LMS+6-BA2.0mg/L+KT0.5mg/L1/2MS+NAA0.5mg/L

星

猕猴

MS+6-BA3.0mg/L+KT0.5mg/LMS+IBA0.5mg/L+ZT2.0mg/L1/2MS+IBA2.0mg/L+0.4~0.5%活性炭

桃

水仙MS+ZT2.0+NAA0.5mg/L+IAA0.5mg/LMS+NAA2.0mg/L+IAA0.5mg/L1/2MS+IBA0.1mg/L+NAA0.5mg/L

人参MS+6-BA0.1mg/L+KT0.5mg/LMS+6-BA0.1mg/L+IBA0.5mg/L1/2MS+IBA1mg/L+NAA0.5mg/L

甜橙MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.4mg/LMS+6-BA1.0mg/L+IBA0.5mg/L1/2MS+IBA1mg/L+NAA0.4mg/L

菠萝MS+6-BA2.0mg/L+NAA2.0mg/LMS+6-BA0.5mg/L+IBA1mg/L+NAA0.5mg/L1/2MS+IBA0.1mg/L+NAA0.5mg/L

蝴蝶

MS+GA30.4mg/L+NAA0.2mg/L+KT0.3mg/LMS+GA30.2mg/L+NAA0.2mg/L+KT0.02mg/L1/2MS+IBA1mg/L+NAA0.5mg/L+0.5%活性炭

兰

6

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附录C

（规范性）

生物调节物质母液的配制

生物调节物质母液的配制见表C.1。

表1.3生物调节物质母液的配制

名称溶质浓度(mg/ml)称取量(单位:mg)母液体积(ml)

IAA95%酒精少量0.110100

NAA95%酒精少量0.110100

IBA95%酒精少量0.110100

KT1NHCL少量0.110100

6-BA1NHCL少量0.110100

ZT95%酒精少量0.110100

7

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附录D

（规范性）

植物不同器官消毒顺序

植物不同器官消毒顺序见表D.1。

表1.4植物不同器官消毒顺序

消毒顺序

器官

消毒前消毒消毒后备注

纯酒精浸泡15分钟,用10%次氯酸钙20~30min,无菌水冲洗3次，放在无菌环用幼芽与幼根产生愈伤组

种子

无菌水冲洗再用1%溴水浸泡5min。境中发芽。织。

无菌水反复冲洗，清除内部组

果实纯酒精迅速清洗2%的次氯酸钠浸泡15min获得无菌组织。

织和种子。

直接接种在培养基上或切

茎切段洗涤液清洗2%的次氯酸钠浸泡15min无菌水清洗3~5次

取组织进行培养

贮藏2%次氯酸钠浸泡取出消毒材料内部组织进

自来水冲洗无菌水清洗3~5次

器官20~30min行培养

用自来水清洗吸干用洗70%的酒精漂洗;2%次氯无菌水冲洗3次,无菌滤纸吸嫩叶﹑叶片平放或扦插在

叶片

涤液清洗酸钠浸泡20~30min干。培养基中。

8

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附录E

（规范性）

仪器和培养基的最少灭菌时间

仪器和培养基的最少灭菌时间见表E.1。

表1.5仪器和培养基的最少灭菌时间

容器的体积(ml)在121℃下最少灭菌时间(min)

20~5015

7520

250~50025

100030

150035

200040

9

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附录F

（规范性）

仪器﹑培养基的消毒压力和温度与排气的关系

仪器﹑培养基的压力和温度与排气的关系见表F.1。

表1.6仪器﹑培养基的压力和温度与排气的关系

排气温度(℃)空气的排除量

压力(磅)完全排除2/3排除1/2排除1/3排除未排除

5109100949072

1011510910510090

15121115112109100

20126121118115109

25130126124121115

10

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附录G

（规范性）

植物外植体常用消毒剂效果

植物外植体常用消毒剂效果见表G.1。

表1.7植物外植体常用消毒剂效果

消毒剂使用浓度(%)去除的难易消毒时间(min)效果

次氯酸钙9~10易5~30很好

次氯酸钠2易5~30很好

过氧化氢10~12最易5~15好

溴水1~2易2~10很好

硝酸银1较难5~30好

抗菌剂4~50