TSHRH-0322020-化妆品紧致、抗皱功效测试体外角质形成细胞活性氧（ROS）抑制测试方法

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T/SHRH032-Anti-wrinklyandFirmingLiftingEfficacyTestofCosmetics-InvitroTestMethodofReactiveOxygenSpecies(ROS)Inhibitionwithkeratinocytes 上海日用化学品行业协会T/SHRHT/SHRH032-T/SHRHT/SHRH032-目前 1234567891011121314GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1T/SHRHT/SHRH032-T/SHRHT/SHRH032-GB/T6682—2008SN/T3899—2014SN/T2328—2009化妆品急性毒性的角质细胞试验。humanreactiveoxygenfluorescence2',7'-二氯荧光黄双乙酸盐(2',7'-Dichlorodi-hydrofluoresceindiacetate，DCFH-DA)无自发平成正比。过氧化氢（H2O2）ROS精度0.1mg​CO2培养箱：375%CO2​​​可调节移液枪：1000μL、200μL、50μL、10μL​​​GB/T6682P7过氧化氢（H2O2）ROS250μM，具体刺激浓度也可根据试验室培养细胞特点或选用的细胞系特性进ROSROS0.05E（配置见附录据历史资料，试验可接受标准为：阳性对照ROS30/EDTA[3]T251mL，T753mL。的规格可根据试验需求进行调整，1224662mL，12241mLCO224h±2h62mL，12241mLCO224h±2h30min250μM。PBS31mLDCFH-DACO230min，孵育结束后，PBS3T/SHRHT/SHRH032-T/SHRHT/SHRH032-3000r/min3min1mLPBS，3000r/min3min500μLPBSFITC参照9.1细胞消化步骤，进行细胞消化及终止操作，终止结束后，将细胞收集至1.5mLEppendorf，3000r/min3min，弃掉上清液。FITC488nmImageJImageProPlusT−抑制率(%)=（1C−

）×100%…………………SD统计测得的各组平行孔间荧光强度的标准差（StandardDeviation，SD）ROS受试物与阴性对照相比，ROS（P<0.05），说明受ROST/SHRHT/SHRH032-T/SHRHT/SHRH032- ──1~4 ──30μg ──15 42.5µL325mLPBS1.5mmol/L250µmol/L。现用现配。0.05%VEVE5%（m/v），1:1000.05%。现用现T/SHRHT/SHRH032-RajindarS.Sohal,WilliamC.OrrTheredoxstresshypothesisofaging.FreeRadicalBiology&Medicine52(2012)539-555.MichelleVaz,NarsaMachireddy,AshleyIrvingOxidant-InducedCellDeathandNrf2-DependentAntioxidativeResponseAreControlledbyFra-1/AP-1.MolecularandCellularBiology.1694–1709[3]Coecke,S.Ballla,M.Bowe,G,Guidanceongoodcell