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文档简介

中国兽医协会发布I请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。1犬细小病毒时间分辨荧光免疫层析检测方法本文件适用于检测犬粪便中的CPV抗原，可用于CPV的免疫筛NY/T541兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范犬细小病毒Canineparvovir4技术原理25.1仪器5.2材料按照NY/T541中的规定进行样品的采集与处理，并做好个人防护。握住肛拭子手插入犬肛门的1~2cm处擦拭或在肛门内轻轻旋转3~5将采集样本的肛拭子放入含有至少500μL样本稀样本稀释液管中的检测样本，垂直缓慢滴加100μL于加样孔内，避光常温放置15min。3将孵育后的检测卡放入便携式荧光分析仪进行检测，5min内完成读值。光信号，仪器将检测线（T线）和质控线（C线）上即为样本中CPV抗原的检测值（软件自带计算功能，能准确计算出T/C值）。9结果判定4A.1质控血清的制备A.1.1犬细小病毒阳性血清的制备A.1.2犬细小病毒阴性血清的制备A.2抗体的制备A.2.1犬细小病毒单克隆抗体的制备A.2.1.1重组蛋白的表达成了犬细小病毒VP2蛋白融合表达目的基因序列，连接至pET-28a原核表达载体构建重组质粒A.2.1.2单克隆抗体的制备将正常兔的血清通过ProteinAAgarose亲和层析分离纯化获得兔IA.2.3羊抗兔二抗的制备用兔IgG作为抗原，免疫山羊后，提取羊A.3荧光微球垫的制备A.3.1荧光微球的选择和准备a)纳米粒度仪检测镧系荧光微球粒径200nm~320nm，单分散系数PDI为＜0.1。c)最大激发光波长345nm，最大发射光波长为614nm。5d)镧系荧光微球液体避光保存，在2℃~8℃中呈乳白色，荧光颜色为橙色。A.3.2荧光微球标记抗体的制备A.3.3荧光微球垫的制备A.4包被片材的制备A.4.1包被溶液的制备A.4.2包被将已划线的硝酸纤维素膜放置于干燥架上，37℃(±2℃)干燥2h~3h，放入装有干燥剂的铝箔A.5样品垫的制备将20cm×30cm的玻璃纤维素膜平铺于洁净的玻璃平板上，将2A.6检测卡的制备6A.6.1制备环境A.6.2贴条A.6.3切条在室温（15℃~25℃)及湿度≤30%RH条件下，将已组装条机将检验合格的半成品裁切为2.7mm(±0.1mm）宽的

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