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152024-06-14发布本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定I油莎豆根际土壤中假单胞菌分离鉴定技术规程本文件规定了油莎豆根际土壤中假单胞菌的菌株分离、菌本文件适用于油莎豆根际土壤中假单胞菌的分离鉴定，也可适用于其它植物根际土壤中假单胞菌GB/T6682分析实验室用水规格和GB8538食品安全国家标准饮用天然矿泉SN/T4624.17入境环保用微生物菌剂检测方法第17部分：恶3.1甲胺、12g/L琼脂的配方分别称取试剂，加蒸馏水至1L，加入10ml甘油，搅拌均匀，调沸至完全溶解。将配制好的CN培养基121℃灭菌15min，待培养基冷却至50℃~60℃后，依次加入终来博），配制成TSA培养基，倾注到灭菌平板上，培养基厚度至少高5mm，4℃避光保存，保持干燥，4.2根际土样本制备1品放入含20ml无菌PBS缓冲液袋无菌离心管中，放置于摇床120rpm/min，室温震荡20min。用无菌镊4.3菌株纯化管吸取25ml该样品溶液置于盛有225ml用无菌生理盐水袋无菌三角瓶中，充分混匀，制成1:10样品匀振荡混匀，制成1:100样品匀液，以此类推，制备1:1000和1:10000样品匀液。选取1:1000或1:10000样根据SN/T4624.17中的方法，将4.气泡产生，若有气泡产生则为阳性反应，无气泡为阴性反应。该菌会产生气泡，呈阳性反将待测菌株在TSB培养基（不加琼脂的TSA琼脂培养基）中30℃培养24h，将菌液收集于2mL灭菌DNA模板溶液。将DNA溶液加双蒸水稀释5～10倍，用紫外分光光度计测定260nm和280nm的吸光值，提取后的DNA模板溶液的A260/A280应在1.8～2.0——rpoD(F:5'TGAAGGCGARATCGAAATCGCCAA3'R:5'YGCMGWCAGCTT2）：将目的条带切下，用胶回收试剂盒收集PCR产物后，送到公司进行测序反应，将两个基因的测序结分离的菌株在TSA琼脂培养基平板上呈现革兰氏染色镜检时应呈红色、杆状、单个散在分布6.2种水平结果判定在97

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