（正式版）DB15∕T 2815-2022 《玉米皮菌酶协同发酵蛋白饲料技术规程》

152022-09-09发布本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定本文件由内蒙古自治区畜牧业标准化技术委员会（SAM/TC1李学朋、刘敏、郜晋楠、胡建华、陈晓妮、王典I玉米皮菌酶协同发酵蛋白饲料技术规程GB/T6432饲料中粗蛋白的测定凯GB/T6434饲料中粗纤维的含量测定GB/T6682分析实验室用水规格和GB10648《饲料标签》国家标准第1号修GB/T23181微生物饲料添加剂通用玉米经过浸泡、破碎后分离出来的玉米表皮，经烘干、挤水、烘干等工序加工而124.1.1酶解设备可使用蒸煮罐酶解或者其他具有保温、搅拌功能的酶解设备/设施。4.1.2发酵设施可选择发酵池、发酵桶等，应具备保温、通风的功能。4.2原料要求4.2.1原料应无发霉变质无杂物。粗玉米皮为5～10目；细玉米皮过20目筛通过率85%以上。4.2.2发酵菌种应符合中华人民共和国农业部公告第2045号的规定。所用添加剂硫酸铵、磷酸二氢钾、氯化钠应符合饲料级，其他发酵所用的添加剂的种类和剂量应符合GB/T23181和中华人民共和国农业部公告第2625号的规定。4.2.4酶制剂所用纤维素酶的种类应符合中华人民共和国农业部公告第2625号的规定，其质量应符合QB/T2583标准，酶活力大于等于10000U/g。4.2.5菌种培养基枯草芽孢杆菌培养基：蛋白胨10g,酵母提取粉5g,氯化钠10g,蒸馏水1L,pH为7.0～7.4,121℃灭菌20min。酵母菌培养基：蛋白胨20g,酵母提取粉10g,葡萄糖20g,蒸馏水1L,pH为7.0～7.4,115℃灭菌30min。4.2.6菌液细胞数所用枯草芽孢杆菌细胞数均培养至1×10⁹CFU/mL～2×10⁹CFU/mL时使用；酵母菌细胞数培养至1×10⁹~2×10⁹个/mL时使用。发酵底物为原料、水及添加剂的混合物，成分为粗玉米皮75kg、细玉米皮25kg、自来水150L、饲料级硫酸铵5kg、糖蜜(10°Brix)5L、饲料级磷酸二氢钾0.5kg、饲料级氯化钠0.25kg。5生产工艺流程5.1生产工艺流程图生产工艺流程包括6个阶段，如图1所示。3菌种选用中国微生物普通菌种保藏中心的产朊假丝酵母CandidautilisCGMCC2.2878以业微生物菌种保藏中心的枯草芽孢杆菌BacillussubtilisCICC10090和酿酒酵母Saccharomyces5.2.2.1以1%接种量将枯草芽孢杆菌B.subtilisCICC10090种子液接种至LB培养基中，37℃培养至种子液细胞数达到1×10⁹CFU/ml～2×10℃FU/ml。5.2.2.2以1%接种量将产肮假丝酵母C.utilisCGMCC2.28种子液接种至YPD培养基中30℃培养至种子液细胞数达到1×10⁹~2×10⁹个/ml。5.2.2.3将菌种枯草芽孢杆菌B.subtilisCICC10090:丝酵母C.utilisCGMCC2.2878按1:1:10的比例混合均匀作为发酵菌剂备用。粗玉米皮为5～10目；细玉米皮过20目筛通过率85%以上，以3:1的比例混合。在发酵底物中加入纤维素酶0.1%,经设备内部充分搅拌均匀，在依据酶制剂生产说明书中的最适温5.3.3.1酶解后的发酵底物与发酵菌剂充分混合均匀后置于发酵设施，菌剂接种总量为12%,接种量5.3.3.2发酵可在发酵桶或发酵池内发酵，料层厚度应保持在发酵设备/设施高度的2/3处，发酵室温度在25℃~30℃,相对湿度不低于95%,发酵品温控制在30℃~35℃,发酵72h±2h。5.4.1酶解的最佳温度依据购买酶制剂使用说明进行，发酵的最佳温度为30℃~35℃,发酵时间为45.4.2冬季发酵应采取增温、保温措施，夏季发酵应采取降温措施，避免阳光直射。5.4.3发酵过程中每24h翻拌一次。5.4.4在发酵过程中，采用间歇通风调节品温在30℃~35℃;当品温高于35℃且连续通风仍不能降至35℃以下时，则应翻拌一次。5.5.3粗蛋白5.5.4真蛋白一级二级色泽均匀色泽稍不均匀表2玉米皮菌酶协同发酵蛋白饲料质量基准6.4.1符合感官要求、物理指标及卫生指标要求后，再根据6.4.2根据品质定级时，当样品的各项品质指标同时符合某一等级时，则判定所代表的该批次产品为产品质量检验合格后，装入带有单向阀的呼吸袋进行密封装袋5A.2试剂或材料A.2.1水GB/T6682，三级。A.2.2硫酸铵，化学纯。A.2.4五水硫酸铜，化学纯。A.2.6混合催化剂。称取0.4g五水硫酸铜、6.0g硫酸钾或硫酸钠，研磨均匀；或购买商品化的凯式A.2.7硼酸吸收液Ⅰ。称取20g硼酸，用水溶解并稀释1000mL。A.2.8硼酸吸收液Ⅱ。1%硼酸水溶液1000mL，加入0.1%溴甲酚绿乙醇溶液10ml，0.1%甲基红乙醇溶液7mL，4%氢氧化钠水溶液0.5mA.2.9氢氧化钠溶液Ⅰ。称取40.0g氢氧化钠，用水溶解，冷却至室温稀释至1000mA.2.10氢氧化钠溶液Ⅰ。称取40.0g氢氧化钠，用水溶解，冷却至室温稀释至1000mL。A.2.11硫酸铜溶液。称取100.0g五水硫酸铜，用水溶解，冷却至室温稀释至1000mL。A.3仪器设备A.3.1分析天平：感量0.0001g。A.3.3凯式烧瓶：250mL。A.3.4消煮管：250mL。A.3.6定氮仪：以凯式原理制造的各类型半自动、全自动定氮仪。A.4样品碎，全部通过0.42mm试验筛，混匀，装入密闭容器A.5样品处理6准确称取玉米皮0.5g～1g，加入75mL蒸馏水，记录刻度线，加热煮沸30min，期间维持液面约75mL处，加入2