DB62-T 4757-2023 玉米抗普通锈病田间鉴定技术规程

ICS07.080DB62DB62/T4757—2023玉米抗普通锈病田间鉴定技术规程2023-08-23发布2023-09-25实施IDB62/T4757—2023前言 12规范性引用文件 13术语和定义 14诱发病圃鉴定 15抗性评价 4附录A(规范性)玉米普通锈病病原形态特征与症状 6附录B(资料性)玉米抗普通锈病鉴定记载表、评价表 7IIDB62/T4757—2023本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。本文件由甘肃省农业农村厅提出并监督实施。本文件由甘肃省粮食油料作物栽培标准化技术委员会归口。本文件起草单位：河西学院、泉州师范学院、德农种业股份公司、甘肃省农业工程技术研究院、甘肃前进生物科技发展有限公司、临泽县农业技术推广中心、酒泉市通盈种苗有限公司、甘肃德光农业有限公司、庄浪县农业农村局、庄浪县乡村振兴事务服务中心。本文件主要起草人：雷玉明、雷鑫、濮超、王伟、郜护国、郑天翔、杨国振、马金、吴尧、刘晓刚、张琪、王生兰、李会文、王廷三、苏朋朋、程紫霞。本文件由河西学院负责解释。DB62/T4757—20231本文件规定了玉米普通锈病抗病性田间鉴定技术和抗病性评价标准。本文件适用于玉米普通锈病自然病圃鉴定、诱发病圃鉴定、田间管理、接种体制备、接种、病情调查、抗病性评价等技术要求及甘肃省种植玉米品种、种质资源抗病性田间鉴定和评价。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。NY/T1209农作物品种试验与信息化技术规程玉米DB62/T4180玉米主要病虫害综合防治技术规程下列术语和定义适用于本文件。3.1玉米普通锈病一种由玉米柄锈菌引起气流传播的玉米真菌性叶部病害。3.2玉米柄锈菌学名PucciniasorghiSchw.,属担子菌门、黑锈菌亚门、锈菌纲、锈菌目、柄锈菌科、柄锈菌属的一种专性寄生真菌。3.3抗性评价根据采用的技术标准判别玉米对普通锈病的反应程度和抗病水平的描述。4诱发病圃鉴定4.1诱发病圃选址选择四周相对封闭，距离玉米种植带500m～600m,在玉米普通锈病适发区，具备良好自然发病环境和可控制灌溉条件，地势平坦、土壤肥沃，有一定面积的地块作为诱发病圃。4.2试验设计4.2.1鉴定品种根据试验委托方协议或试验计划要求确定。DB62/T4757—202324.2.2对照材料以高感品种黄早四或当地常规种植的高感病品种为对照品种。试验材料、对照材料的小区设计采用随机区组排列，小区行长500cm～600cm,行距60cm,株距25cm,2行区，每行保苗25～30株，每50份鉴定材料设1组已知对照品种，不足50份按50份计，3次重复，鉴定小区四周设4行的感病诱发品种作保护行。4.3接种体制备4.3.1菌株分离确定玉米乳熟后期，在田间采集新鲜的典型普通锈病病叶，用刀片刮取夏孢子堆，置于干净的培养皿中，收集分离物，分离物按照A.1规定要求做出初步鉴定，确认为玉米柄锈菌(PucciniasorghiSchw.)。4.3.2菌株纯化纯化准备与方法应满足以下要求：a)选择长100cm×宽28cm×高30cm花盆，装富含有机质土壤，土壤湿度18%～21%,每盆点种5粒感病品种黄早四，株距20cm,置于25℃±2℃温室内培育，玉米生长6～7片叶时备用；b)将确定的分离物用无菌水稀释，配制成2.5×10s孢子/mL悬浮液，装入100mL～150mL小型手持喷雾器，均匀喷雾于叶片上，每株8mL～10mL,控制温室温度在25℃±2℃,相对温度≥90%,持续24h;接种后14d~16d后，叶片出现单个夏孢子堆的颜色、形状、大小、反应型表现一致时，用刀片刮取单个夏孢子堆，收集夏孢子粉于20mL无菌安瓿瓶中，即获得玉米普通锈病夏孢子纯化菌株，保存于-20℃冰箱里保存，备用。4.3.3菌株致病性测定病株致病性测定过程与方法应满足以下要求：a)取出保存菌株的安瓿瓶，在40℃~45℃温水中活化5min,打开安瓿瓶，用100mL无菌水冲洗安瓿瓶6～7次，冲洗液盛于1000mL无菌烧杯中，20℃~22℃黑暗条件下水化10h～12h,再加入无菌水稀释成2.5×10s孢子/mL悬浮液，转入手持喷雾器中，备用；b)手持盛有悬浮液的喷雾器，均匀喷雾于温室培育的6～7片叶黄早四叶片上，接种后温度、湿度、持续时间管理与4.3.2b)相同；c)接种后14d～16d后观察叶片症状与A.2规定一致，夏孢子堆和夏孢子形态特征与附录A.2规定一致，确定分离物为致病菌株。从发病叶片收集夏孢子菌株装入9cm×17cm无菌玻璃纸袋，储存在-20℃冰箱里保存，备用。4.3.4菌悬液配制取出保存菌株的玻璃纸带，将夏孢子粉倒入1000mL无菌烧杯中，用无菌水稀释，每500mL无菌水中加入0.05%吐温-20(Tween-20)1mL,搅动15min孢子完全悬浮，然后用无菌水稀释至2.5×105孢子/mL4.4接种4.4.1接种时间3DB62/T4757—2023鉴定玉米材料展叶10叶～12叶期。4.4.2接种方法用一个带刻度的10mL注射器吸取孢子悬浮液，从鉴定玉米材料心叶与其下的展开叶叶鞘相接处以下1cm处注射，或者注射到喇叭口，接种量控制5mL/株～6mL/株。要求针头向下倾斜刺入，不宜刺穿，以心叶处冒出水珠为准。4.5.1环境控制鉴定接种前5d~7d应进行田间灌溉，或在雨后进行接种；接种后若天气干旱，应及时进行田间浇灌。4.5.2生育期判定田间玉米生育期判定符合NY/T1209规定要求。4.5.3施肥与灌水不同生育期的施肥与灌溉水平与大田玉米相同。4.5.4病虫草害防治整个生育期间病虫草防治应满足以下要求：a)整个生育期间不进行病害防治；b)整个生育期间虫害防治按照DB62/T4180的规定执行；c)玉米苗期，结合中耕人工除草一次。4.6病情调查4.6.1调查时间接种后14d～16d调查1次。4.6.2调查方法鉴定材料每个重复随机调查10穴，每穴1株，共10株，每株玉米果穗上方和下方各3片叶，总计60片叶，按照附录A.1规定要求，调查记载病叶数，逐叶按照表1发病程度统计病情级别数并记载，调查结果记载表样式见B.1。4.6.3病情分级与严重度以果穗上部和下部叶片的数量和病斑面积占叶面积的百分比表示发病程度，发病程度特征应符合表1;病情级别依据普通锈病发病程度由轻到重，采取数值连续法划分1～7级；严重度级值依据病情级别由小到大，采取数值间隔法赋予每个级别0～11的代表值，用以表示玉米叶片普通锈病的受害程度。表1玉米普通病鉴定病情级别及严重度划分标准病情级别104DB62/T4757—2023表1玉米普通病鉴定病情级别及严重度划分标准(续)病情级别严重度级值发病程度特征21果穗上部3片叶和下部3片叶病斑占叶面积5%以下33果穗上部3片叶和下部3片叶病斑占叶面积的5.1%～10%以下45果穗上部3片叶和下部3片叶病斑占叶面积的10.1%～25%57果穗上部3片叶和下部3片叶病斑占叶面积的25.1%～40%69果穗上部3片叶和下部3片叶病斑占叶面积的40.1%～65%7果穗上部3片叶和下部3片叶病斑占叶面积的65.1%以上，叶片枯死4.6.4普遍率计算以受侵染叶片数占调查总叶片数的百分率表示，用以表示发病的普遍程度，采用公式(1)计算普遍率。I——普遍率；d——发病叶片数；M——调查总叶片数。4.6.5病情指数计算以玉米普通锈病的普遍率和叶片受侵染的严重程度数值化的综合表示指标，用以衡量玉米群体受普通锈病的危害程度，采用公式(2)计算。DI——病情指数；∑——为累加符号，从0级病级数开始累加；M——调查总叶片数；Smax——为最高病情级数的严重度级值。5抗性评价5.1有效性判别当感病对照品种的病情级别达到7级以上时，该批次鉴定有效。5.2抗性评价标准依据鉴定材料的病情指数(DI)确定其抗病水平，划分标准应符合表2。DB62/T4757—20235表2玉米对普通锈病的抗性评价病情指数(DI)抗性评价类别缩写0.0免疫I0.0<DI≤10.0高抗HR10.0<DI≤30.0抗病R30.0<DI≤50.0MR50.0<DI≤70.0感病SDI>70.0高感HS5.3重复鉴定与评价同一鉴定品种2年鉴定抗性类别不同的，则需要做第三次抗性鉴定。5.4.1同一鉴定品种2年的抗性类别一致时，则此抗性类别为最终鉴定结论。5.4.2同一鉴定品种做第三次抗性鉴定时，取2次一致的抗性类别为最终鉴定结论。5.4.3对鉴定材料作出综合评价，综合评价表样式见B.2。6DB62/T4757—2023(规范性)玉米普通锈病病原形态特征与症状A.1学名和形态描述A.1.1学名玉米柄锈菌PucciniasorghiSchw.A.1.2形态特征玉米柄锈菌的夏孢子堆黄褐色，椭圆形至长椭圆形，大小1.0mm。夏孢子圆形至卵开多，淡褐色至金黄褐色，大小约为(22μm～33μm)×(20μm～28μm),细胞壁表面布满短且稠密的细刺，赤道附近有4个发芽孔。玉米柄锈菌的冬孢子堆黑色，椭圆形或矩形，大小1.0mm～2.0mm。冬孢子长椭圆形或棍棒形，栗褐色，双细胞，隔膜处略溢缩，冬孢子表面光滑，大小为(16μm~23μm)×(29μm~54μm),冬孢子着生在冬孢子柄顶端或歪生，具长柄，黄褐色或淡黄色，柄长80μm～100μm。A.2症状玉米普通锈病以侵染玉米叶片为主，其次危害叶鞘、苞叶。发病初期叶片主脉两侧产生乳白色至淡黄色针尖状病斑，逐渐扩展形成圆形至长椭圆形、黄褐色隆起病斑，隆起叶片表皮组织破裂散出铁锈状夏孢子。发病后期叶片正面、背面中脉处或近叶鞘处产生椭圆形、黑色冬孢子堆。DB62/T4757—20237(资料性)玉米抗普通锈病鉴定记载表、评价表B.1玉米抗普通锈病田间调查记载表玉米抗普通锈病田间调查记载表样式见图B.1。鉴定方式：生育期：播种时间：年月日接种时间：接种部位：