（正式版）DB53∕T 1425-2025 《极小种群野生植物 滇桐组培繁殖技术规程》

极小种群野生植物滇桐组培繁殖技术规程2025-06-07发布2025-09-07实施I本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件本文件主要起草人：罗桂芬、孙卫邦、杨佳俊、杨静、马永1极小种群野生植物滇桐组培繁殖技术规程增殖培养、壮苗与生根培养、炼苗移栽等技术要求。本文件适用于极小种群野生植物滇桐组培繁殖。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。LY/T1882林木组织培养育苗技术规程3术语和定义LY/T1882界定的术语和定义适用于本文件。分布地域狭窄或呈间断分布、种群和个体数量少、人为干扰严重和随时有灭绝风险的野生植物。组织培养tissueculture无菌条件下，将离体的植物器官、组织、细胞以及原生质体培养在人工培养基和人工控制的环境中，使其再生新植株的过程和技术。用于建立植物组织培养的离体植物器官、组织、细胞以及原生质体。将消毒后的外植体接种到特定培养基中，经过一段时间的培养，使之长出愈伤组织、顶芽、腋芽、丛芽等的过程。增殖培养multiplicationculture离体芽苗、愈伤组织或悬浮培养细胞不断倍增的培养过程。生根培养rootingculture诱导无根离体芽苗产生根的培养过程。2MS:培养基发明人名字的缩写(MurashigeandSkoog)。6-BA:6-苄基腺嘌呤(6-benzyladenine)IBA:吲哚-3-丁酸(indole-3-but其中外植体的消毒及诱导、增殖、生根等环节中所涉及的培养室培养条件：温度23℃≤300,光照强度1000Lux~1500Lux,光照时间10h/d。3月～5月、9月～12月。采集的外植体宜当天消毒接种。若需长途运输，控制在3a)剪去外植体上叶片，保留叶柄0.3cm～0.5cm,剪成1.0cm~1.5cm带芽的茎段，于1%的肥皂液中浸泡10min后用流动的自来水清洗干净；3b)用75%酒精消毒8s～10s,无菌水冲洗3次后，用10%次氯酸钠溶液消毒5min～6min,再用无菌水冲洗3次～5次。MS+6-BA0.1mg/L～2.0mg/L+NAA0.5mg/L+蔗糖30g/L+琼脂5g/L,pH5.8。MS基本培养基母将消毒外植体叶柄和茎段两端切去0Iem~0.2cm,按照芽生长方向朝上原则，竖直或者倾斜接MS+6-BA0.5mg/L～1.0mg/L+NAA0.1mg/L～0.8mg/L+蔗糖30g/L+琼脂5g/L,pH5.8。腋芽和丛芽生长至2cm~3cm时，将其切成带1个~2个节的茎段，接种于增殖培养基，增殖周期50d～60d。MS+IAA0.5mg/L～1.0mg/L+IBA0.5mg/0mg/L+蔗糖30g/L+琼脂5g/L,pH5.8。增殖培养的茎段和丛芽生长至3cm~4cm时，切下生长健壮、形态正常、带顶芽、长2cm～3cma)植株生长健壮、叶形叶色正常，具3片～4片展开叶；b)株高3cm～5cm;c)根数量多于3条，根长1cm～2cm。4将组培苗移植于遮光率60%～70%、湿度<50%的大棚内，闭瓶炼苗7d～10d,使组培苗适应自然基质按珍珠岩：腐殖土：生红土=1:2:3体积比配制，用多菌灵800倍液喷pH5.8～6.8,覆盖塑料膜密封消毒7d。将炼苗后的瓶苗取出，洗净根部培养基，及时栽入容器中，浇透定根水。a)移栽到大棚后30d内，温度20℃~30℃,遮光率70%～80%,空气湿度70%～80%,基质含水量40%～50%;b)移栽30d后，逐步增加光照强度，每7d喷施70%甲基托布津可湿性粉剂800倍液1次和全营养素叶面肥500倍液1次，连续喷施4次～5次。5(资料性)扩大倍数积(ml)吸取量硝酸钾按药品称取量，用纯净水分别完全溶解后混合，定容至1L,4℃冷藏，密封保存。磷酸二氢钾按药品称取量，用纯净水分别溶解后混合，定容至1L,常温，密封保存。碘化钾乙二胺四乙酸二钠按药品称取量，用1L,4℃冷藏，密封保存。物2按药品称取量，用纯净水分别溶解后混合，定容至1L,4℃冷藏，密封保存。VB₅或者VPP6(资料性)常