DB65T 4066-2017 马铃薯脱毒技术规程

马铃薯脱毒技术规程2017-11-20实施2017-11-20实施新疆维吾尔自治区质量技术监督局发布I II 1 1 1 25病毒类型 2 2 2 29病毒检测 4 4 4附录A(资料性附录)组培设备、试剂 6附录B(资料性附录)MS培养基配方 8标准下载本标准按照GB/T1.1-2009《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写》给出的规则起草。本标准由新疆生产建设兵团第六师农业科学研究所提出。本标准由新疆维吾尔自治区农业标准化技术委员会归口。本项目起草单位：新疆生产建设兵团第六师农业科学研究所、五家渠质量技术监督局、自治区标准化研究院。本标准主要起草人：陈英、罗艳辉、张爱萍、李东方、刘雪莲、哈丽旦·艾比布拉、王航件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。NY/T401脱毒马铃薯种薯(苗)病毒检测技术规程2芽顶端部分(0.1mm~10mm)其中包括芽原基和叶原基。3将芽眼萌动的块茎外植体直接放于光照培养箱内，控制温度37℃±1℃(8h)20℃(16h),光照时间8h/d,光照强度10001x～20001x,连续处理6周～8周。马铃薯块茎芽长1cm～1.5cm。上述蔗糖一卡拉胶(或琼脂)溶液中，每加入一种母液需充分搅拌后再加下一液滴定pH值到5.8～6.0之间。不超过总体积的70%,并在培养器皿上编号，用聚丙烯膜(瓶盖)封口。在121℃温度下(103KPa)灭菌保持20min～25min。灭菌结束时高压锅压力指示表自然下降到0℃,将培养基由灭菌锅中取出，在室温下自然冷却。灭菌过的培养基置于灭菌室放置2d~3d,无污染方可使用。取块茎芽用1%洗洁精水溶液浸泡5min并用玻璃棒轻微搅动后，再用自来水冲洗30min～60min,无菌水冲洗1次~2次移入超净工作台。倒入75%酒精浸泡20s~30s,无菌水冲洗2次～3次，转入0.1%将预剥离的材料的芽消毒后，放在超净工作台上，剥除所有外叶，切取0.5cm～0.8cm的茎尖，接中到灌装有基本培养基MS的试管(瓶)中。温度23℃±2℃,光照时间16h/d,光照强度10001x～20001x。生根后，移到光照培养箱中，照时间12h/d,光照强度20001x～30001x,长成3cm~5cm高的芽苗，用于进行茎尖剥离。使用MS基本培养基配方附加不同种类和数量的激素，茎尖诱导分化培占体积为1/3,试管里的培养基做成斜面。封口膜(瓶盖)用聚丙烯材料。在121℃高压锅中消毒204标准下载高温处理过的块茎芽或芽长成的试管(瓶)苗。.1用高温处理过的块茎芽(长度小于5cm),消毒程序按照执行。.2消毒过块茎芽置于40倍变倍体显微镜下，用接种针剥取0.2mm～0.3mm带1个或2个叶原基的茎尖，接种于诱导分化培养基上面。每个试管(瓶)接种一个茎尖。接种针剥取0.2mm～0.3mm带1温度23℃±2℃,光照强度20001x～30001x,光照时间12h/d～14h/d。培养时间30d～40d。将茎尖剥离诱导成苗分别编号，连续快繁2次后，然后在超净工作台上打开试管(瓶)口，剪取每9.2.1编号的每个样品研磨后取3管，采用酶联免疫法(ELISA)检测或逆转录聚合酶链式反应法的试管(瓶)苗，作为核心苗扩繁、继代或保存。5经检测不带病毒的试管苗进行试种观察。将每个试管苗继代2次后取出一部分移栽到防虫网棚，结微型薯后再种植到田间试种观察，检验其是否发生变异。植株及所结块茎符合原品种的典型性状，它所对应的试管苗即为脱毒苗，脱除全部病毒。6(资料性附录)A.1.4分析天平、0.1g感应A.1.6各种规格的容量瓶、细口瓶(包括棕色)、广口瓶、移液枪、枪头、烧杯、量筒、玻璃棒、试剂A.1.10清洗室及灭菌室A.1.12组培瓶控水架、耐高压框子。A.1.16双层不锈钢推车。A.2.7若干辆双层不锈钢推车。A.3培养室(采光室)7A.4.3400mg/L含量的二氧化8(资料性附录)MS固体培养基配方表B.1MS固体培养基配方质量浓度(mg/L)硝酸钾(KNO₃)硝酸铵(NH₄NO₃)氯化钙(CaCl₂·2H₂O)硫酸镁(MgSO₄·7H₂O)磷酸二氢钾(KH₂PO₄)碘化钾(KI)硼酸(H₃BO₃)硫酸锰(MnSO₄·4H₂O0)硫酸锌(ZnSO₄·7H₂O)钼酸钠(Na₂MoO₄·2H₂O)硫酸铜(CuSO₄·5H₂O)氯化钴(CoC1·6H₂O)硫酸亚铁(FeSO..7H₂O)乙二胺四乙酸二钠(Na₂·EDTA·2H₂O)盐酸吡哆