DB65T 3191-2010 乙酰溴法测定棉花纤维中的苯丙烷类化合物含量

B乙酰溴法测定棉花纤维中的苯丙烷类化合物含量TheAcetylbromidemethodforanalysingthecontentofphenylaprapanoid2010-12-30实施2010-12-30实施新疆维吾尔自治区质量技术监督局发布IDB65/T3191—2010本标准依据GB/T1.1—2009《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写》和GB/T20001.4-2001《标准编写规则第4部分：化学分析方法》编写。本标准由新疆农业科学院提出。本标准由新疆维吾尔自治区农业厅归口。本标准起草单位：新疆农业科学院核技术生物技术研究所。本标准起草人：范玲，胡文冉，曹双瑜1DB65/T3191—2010乙酰溴法测定棉花纤维中的苯丙烷类化合物含量本标准规定了棉花纤维样品的准备、标准曲线的绘制、乙酰溴法测定棉花纤维中苯丙烷类化合物含本标准适用于评估棉花纤维中总的苯丙烷类化合物的含量。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6097-2006棉纤维试验取样方法3术语和定义3.1苯丙烷类化合物：由莽草酸经芳香氨基酸(L-苯丙氨酸和L-酪氨酸),再通过脱氢、羟基化、偶合等反应而形成的一类由一个或一个以上C₆-C₃结构单元连在一起构成的天然产物。包括简单苯丙烷类、香豆素类、木质素类、黄酮类等大多数的天然芳香族化合物。3.2乙酰溴法：在冰乙酸和加热条件下，利用乙酰溴中的溴取代苯丙烷类化合物中a-C的羟基从而使苯丙烷类化合物形成乙酰衍生物而溶于乙酸中，同时糖类化合物在酸化的乙酰溴中水解，根据苯丙烷类化合物中苯氧基结构在紫外280nm波长处的吸收值与苯丙烷化合物的浓度值成正比，从而通过测定280nm波长处的吸收值测定苯丙烷类化合物的含量。4试剂乙酰溴(Sigma-Aldrich,强腐蚀性试剂);碱木质素(Sigma-Aldrich):TritonX-100(分析纯);Tris-HCI(分析纯);NaCI(分析纯);丙酮(分析纯);NaOH(分析纯);冰乙酸(分析纯);盐酸羟胺(分析纯)。5仪器设备天平(ACCULABALC-310.3型);MYLAB通风橱；电热恒温震荡水槽(DKZ-2型);紫外-可见分光光度计(CINTRA-20型)。6准备工作6.1采样2DB65/T3191—2010采摘种植在大田自然成熟的棉花纤维，按GB/T6097-2006《棉纤维试验取样方法》进行取样，反复挑拣棉花纤维，彻底拣去棉花纤维中的非纤维杂质。6.2匀一化缓冲液(HBuffer)的配制50mmol/LTris-HCl,10g/LTritonX-100,1mol/LNaCl;pH8.36.3酸化乙酰溴溶液的配制6.4棉花纤维样品的准备称取1.0g棉样，分别用40mL均一化缓冲液(H-buffer)清洗两次，40mL80%丙酮洗两次，40mL纯丙酮洗一次，避免可溶物质对分析的干扰。每次清洗后都涡旋、反复挤压、最后用金属夹蒜器将纤维中的残留溶液挤干，45℃烘干备用。7.标准曲线的绘制溴木质素溶液。以不含木质素的溶液为空白基础背景，用紫外/可见分光光度计在280nm处测定吸光光度值，获得吸光光度值与溶液木质素含量之间的线性回归方程。8棉花纤维中苯丙烷类化合物的测定8.1准确称取0.10g清洗过的棉纤维，置于30mL血清瓶(聚四氟乙烯内垫的瓶盖)内，加5mL酸水浴105min;8.2反应完成后将血清瓶取出置于冰浴中快速冷却以终止反应。加10mL冰乙酸将反应溶液转入50mL容量瓶内，加4mol/LNaOH4.5mL混匀后，再加入5mol/L盐酸羟胺1.5mL混匀，用冰乙酸定8.3空白背景溶液的配制：5mL酸化乙酰溴溶液中加10mL冰乙酸，加4mol/L·NaOH4.5mL混匀后，再次加5mol/L盐酸羟胺1.5mL混匀，用冰乙酸定容至50mL,静止30min;8.4以不含木质素的空白背景溶液为基础，用紫外分光光度计在280nm处测定吸光值。如果测定的吸光度值不在所用的标准曲线的吸光值范围内，则用冰乙酸稀释所测溶液。8.5棉花纤维中苯丙烷类化合物含量的计算8.5.1根据标准曲线和测定溶液的吸光度值计算溶液的浓度C=a+b×AB280a——回归方程的截距；b——回归方程的回归系数；3DB65/T3191—201