《牛呼吸道疾病综合征防控操作规程》

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DB15

内蒙古自治区地方标准

DB/TXX—XXX

牛呼吸道疾病综合征防控操作规程

TechnicalspecificationsForBovinerespiratorydiseasecomplexPreventionand

Control

征求意见稿

XXX--发布XX--实施

内蒙古自治区市场监督管理局发布

牛呼吸道疾病综合征防控操作规程

1范围

本文件规定了牛呼吸道疾病综合征的诊断和防治。

本文件适用于奶牛饲养场（户）、肉牛饲养场（户）和动物诊疗单位对牛呼吸道疾病综合征的防控。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，

仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本

文件。

GB19489实验室生物安全通用要求

GB/T27401实验室质量控制规范动物检疫

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

牛呼吸道疾病综合征（Bovinerespiratorydiseasecomplex）

牛呼吸道疾病综合征是由牛传染性鼻气管炎病毒、牛呼吸道合胞体病毒、牛副流感病毒3型、牛腺

病毒3型和7型、牛病毒性腹泻／黏膜病病毒、牛冠状病毒以及溶血性曼氏杆菌、多杀巴氏杆菌、睡眠

嗜组织杆菌、化脓隐秘杆菌和牛支原体等多种病毒或细菌以不同组合的方式引起的牛肺炎、运输热、支

气管炎等疾病的通称。

4缩略语

下列缩略语适用于本文件。

BRDC：牛呼吸道疾病综合征（Bovinerespiratorydiseasecomplex）

IBRV：牛传染性鼻气管炎病毒（Infectiousbovinerhinotracheitisvirus）

BRSV：牛呼吸道合胞体病毒（Bovinerespiratorysyncytialvirus）

BVDV/MD：牛病毒性腹泻/黏膜病病毒（Bovineviraldiarrhea-mucosaldisease）

BPIV-3：牛副流感病毒3型（Bovineparainfluenzavirustype3）

M.Bovis：牛支原体（Mycoplasmabovis）

CPE：致细胞病变效应（CytopathicEffect）

Vero细胞：非洲绿猴肾细胞（VerdaRenoCell）

MDBK细胞：牛肾细胞（MadinDarbyBovineKidneyCell）

BT细胞：牛鼻甲骨细胞（BovineTurbinateCell）

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5生物安全措施

样品采集的生物安全措施符合GB/T27401-2008的规定。

样品处理的生物安全措施符合GB19489的规定。

6临床诊断

6.1感染性因素

引起BRD的主要病原有：病毒性病原包括牛传染性鼻气管炎病毒（IBRV）、牛病毒性腹泻病毒（BVDV）、

牛呼吸道合胞体病毒（BRSV）和牛副流感病毒3型（BPIV-3）等；细菌性病原包括多杀巴氏杆菌

（Pasteurellamultocida）和牛结核分枝杆菌（Mycobacteriumbovis）；牛支原体（M.Bovis）等。

6.2非感染性因素

引起非感染性牛呼吸道疾病的主要因素有饲养管理和环境因素，如饲养密度过大、氨气含量过高、

长时间运输、应激等。

7诊断

7.1临床诊断

7.1.1流行病学

不同年龄和品种牛均可感染，幼龄动物易感，BRSV多发于1～5月龄犊牛，IBRV多发于20～60日龄犊

牛，BVDV多发于6～18月龄牛，BRSV多发于6月龄以内犊牛，牛结核分枝杆菌多发于奶牛。

一年四季均可发病，以冷热交替、气候剧变、闷热、潮湿、多雨的时候易发，其中BRSV感染有明显

的季节性，多暴发于冬季，呈散发性。病牛和隐性感染牛是本病自然流行的传染源，常通过空气、飞沫

和接触传播，也可通过胎盘侵入胎儿。

7.1.2临床症状

7.1.2.1病毒性病原

7.1.2.1.1牛传染性鼻气管炎

牛传染性鼻气管炎病毒是引起牛传染性鼻气管炎的病原。

急性病例可侵害整个呼吸道，对消化道的侵害较轻。病初高热达39.5℃～42℃，极度沉郁，拒食，

有多量黏脓性鼻漏，鼻黏膜高度充血，有浅溃疡，鼻镜因高度发炎被称为“红鼻子”。常因炎性渗出物

阻塞而呼吸困难。呼气中常有臭味。呼吸数加快，常有深部支气管性咳嗽。有结膜炎及流泪。有时可见

带血腹泻。重型病例数小时即死亡。

7.1.2.1.2牛病毒性腹泻/黏膜病病毒

急性感染牛突然发病，体温升至40℃～42℃，随体温升高，白细胞减少，继而增多，有的可发生

第二次白细胞减少。病牛精神沉郁、厌食，鼻、眼有浆液性分泌物，2～3d内可能有鼻镜及口腔黏膜

表面糜烂，舌面上皮坏死、流涎增多、呼气恶臭，通常在口腔损害之后发生严重腹泻，病初水泻，后带

黏液和血。部分病牛出现蹄叶炎及趾间皮肤糜烂坏死，导致跛行。

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慢性病例常出现鼻镜糜烂，眼部常有浆液性分泌物。门齿齿龈通常发红，典型的临床症状是由于蹄

叶炎及趾间皮肤糜烂坏死而致的跛行。通常皮肤呈屑状，在髻甲、颈部及耳后最明显。

母牛妊娠期感染后流产，或产先天性缺陷犊牛，最常见的缺陷是小脑发育不全。

7.1.2.1.3牛呼吸道合胞体病毒

潜伏期为2d～8d，感染初期仅局限于呼吸道感染，一般不表现临床症状或仅表现轻微症状，厌

食，咳嗽、流黏液至浆液脓性鼻涕，呼吸频率轻度至中度增加，呼吸音异常；严重时会呼吸频率可高于

80次/min，呼吸急促，肺壁的肺音刺耳，剧烈咳嗽，口、鼻、眼分泌物大量增加；重症牛呼吸困难，并

有皮下气肿性大庖，精神沉郁。

7.1.2.1.4牛副流感病毒3型

潜伏期为2d～5d。病牛体温升高可达41℃，鼻镜干燥，继而流黏脓性鼻液，眼大量流泪，有脓性

结膜炎。呼吸困难，咳嗽，有时张口呼吸，睡觉时有明显的呼噜声。听诊肺前下部有纤维素性胸膜炎和

支气管肺炎临床症状。部分病牛发生黏液性腹泻，有时可见脱落肠黏膜。

7.1.2.2细菌性病原

7.1.2.2.1巴氏杆菌病

主要由多杀性巴氏杆菌引起。又称牛出血性败血症。潜伏期2d～5d。

浮肿型:除呈现全身临床症状外，在颈部、咽喉部及胸前的皮下结缔组织还出现迅速扩展的炎性水

肿，同时伴发舌及周围组织的高度肿胀；病牛舌伸出口外，呈暗红色，呼吸高度困难，皮肤和黏膜普遍

发绀，往往因窒息而死；病程多为12h～36h。偶尔发生下痢或某一肢体发生肿胀。

肺炎型:主要表现为纤维素性胸膜肺炎临床症状。病畜便秘，有时下痢并混有血液。病程较长的可

从3d到1周左右。

7.1.2.2.2牛结核病

是由牛结核分枝杆菌引发的慢性消耗病。

肺结核：病程一般多呈间歇性缓慢的经过，全身进行性消瘦、干咳、呼吸功能障碍。病初表现为干

咳，后期逐渐转为痰湿性干咳，听诊时肺部常有哕声。

7.1.2.3牛支原体肺炎

感染牛表现慢性肺炎，呼吸困难、呼吸抑制甚至窒息，伴有高热、脓性眼鼻分泌物、水样腹泻或血

便等症状，常引起支原体肺炎及关节、乳腺和角膜等炎症。

7.1.3病理变化

7.1.3.1病毒性腹泻

7.1.3.1.1牛传染性鼻气管炎

病牛呼吸道黏膜高度发炎，有浅溃疡，其上被覆腐臭黏脓性渗出物。涉及咽喉、气管及大支气管黏

膜，可能有成片的化脓性肺炎。病程中期呼吸道上皮细胞中出现核内包涵体。真胃黏膜常有发炎及溃疡，

大小肠可有卡他性肠炎。

不论病牛是否出现神经临床症状，本病的主要特征性病理变化是由神经胶质细胞增生和细胞套管状

漫润构成的三叉神经节炎以及以延髓感觉神经通路为主要部位的非化脓性脑炎。

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7.1.3.1.2牛病毒性腹泻病毒

整个口腔可见糜烂灶。典型病变是食管黏膜糜烂斑呈纵行排列。胃黏膜可见出血、糜烂。小肠黏膜

肿胀、出血，黏膜脱落甚至形成黏膜管套，肠内容物含有黏液、血液和脱落黏膜，尤以空肠和回肠严重。

肠系膜淋巴结肿胀、充血、出血和水肿。

7.1.3.1.3牛呼吸道合胞体病毒

呼吸道黏膜充血，支气管、细支气管充满粘稠的脓性渗出液，伴有水肿、出血和透明膜的形成，最

终导致肺气肿和肺水肿，呼吸道中可见典型的间质性肺炎，特别是肺的颅腹侧，合并的面积可以从几个

小叶到总肺面积的一半，纵隔淋巴结肿大出血，小叶间隔水肿变宽。

7.1.3.1.4牛副流感病毒3型

剖检病理变化主要见于呼吸道。上呼吸道黏膜发生卡他性炎症，鼻腔和副鼻窦积聚大量黏脓性渗出

物；支气管黏膜肿胀、出血，管腔中有纤维素块；两侧肺前下部肺泡因充满纤维素而膨胀、硬实，病肺

切面呈红-灰色肝变，小叶间水肿、变宽。胸腔积聚浆液纤维素性渗出液，胸膜表面有纤维素附着。支

气管和纵隔淋巴结水肿、出血，心内外膜下、胸膜、胃肠道黏膜有出血斑点，有些大骨骼肌可在两侧对

称的发生直径5mm～10mm灰黄色病灶。

7.1.3.2细菌性腹泻

7.1.3.2.1巴氏杆菌病

浮肿型：咽喉部或颈部皮下，有时延及肢体部皮下有浆液浸润；切开水肿部流出深黄色液体，有时

伴有出血；咽周围组织和会咽软骨韧带呈黄色胶样浸润；咽淋巴结和颈前淋巴结高度肿胀；上呼吸道黏

膜卡他性潮红。

肺炎型：主要表现胸膜炎和格鲁布性肺炎，胸腔中有大量浆液性纤维素性渗出液。整个肺有不同肝

变期的变化，小叶间淋巴管增大变宽，肺切面呈大理石状；有些病例由于病程发展迅速，在较多的小叶

里能同时发生相同阶段的变化；肺泡里有大量的红细胞，使肺病理变化呈弥漫性出血景象，病程进一步

发展，可出现坏死灶，呈污灰色或暗褐色，通常无光泽；有时有纤维素性心包炎和腹膜炎，心包与胸膜

粘连，内含干酪样坏死物。

7.1.3.2.2牛结核病

感染早期，剖检可见肺门部位和肺门淋巴结等处可产生特异性白色或者淡黄色的结核结节，结节大

小、深浅不等，切面组织呈干酪样坏死病灶或钙化病灶,有时局部组织坏死的组织可溶解化并逐渐软化,

排异物后可产生小空洞等。感染中期和后期，可同时在胸膜、纵隔胸膜、胸腔内和胸腔壁等处看到大量

密集分布的结核结节的增生，形如珍珠状，形成“珍珠胸”。

7.1.3.3支原体肺炎

剖检可见肺部化脓、坏死，病变组织切面可见白色较硬纤维结节，随处可见白色干酪样物质，肺

尖叶、心叶可见化脓性物质，胸腔大量积液，似有纤维样，肺发绀且与胸壁粘连。

7.1.4结果判定

出现上述临床症状和病理变化，可初步判定为牛腹泻疾病疑似病例。

7.2实验室诊断

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7.2.1主要仪器设备

37℃恒温细菌培养箱、CO2细胞培养箱、T25细胞培养瓶漩涡振荡器、倒置显微镜、电镜、电泳

仪、水平电泳槽、凝胶成像仪、不同规格可调移液器与枪头、PCR仪、台式高速离心机、接种环、无菌

棉拭子、培养皿、不同规格离心管、PCR管

7.2.2主要试剂

生理盐水、商品化细菌培养基、细菌微量生化反应管及指示剂、病原诊断血清、PBS、DMEM、胎牛

血清、MDBK细胞、Vero细胞、BT细胞、无酶水、Taq酶、电泳缓冲液、琼脂糖、DNAMarker

7.2.3样品采集

7.2.3.1黏液样品

将无菌棉拭子伸入鼻腔内刮取黏液，放入装有3mLPBS管中；地上有刚掉落的鼻黏液时无菌采集。

编号并记录相关信息。

7.2.3.2组织样品

取病死牛鼻腔黏液、气管、支气管、肺、关节液等，置于无菌密封袋或采样杯内。

7.2.4样品处理

7.2.4.1样品用于病毒检测：将采集的黏液放入盛有3mLPBS管中，充分振荡，4℃、12000r/min离

心5～8min，取上清编号备用；称取1g组织样品置于研钵，充分研磨后加5mLPBS，混匀，4℃、

12000r/min离心5min，取上清编号备用。-80℃冰箱保存。或直接接种细胞。

7.2.4.2样品用于细菌和支原体检测：将黏液用无菌接种环接种于增菌培养基；直接取少许组织样品

接种于增菌培养基。

7.2.5病原检测

7.2.5.1病毒检测

7.2.5.1.1电镜检查

将采集的黏液或组织样品用PBS制成1:4悬液，装入盛有玻璃珠的管内充分震荡30min，取

悬液3000r/min离心30min，取上清液，15000r/min离心30min，取上清，再以40000～50000r/min

离心3h～5h，弃上清，加1～2滴蒸馏水悬浮管内沉淀，2%磷钨酸染色，电镜下观察病毒粒子形

态。

7.2.5.1.2病毒分离鉴定

将处理的样品接种适宜细胞（MDBK细胞、Vero细胞、BT细胞）进行病毒分离培养，根据中和试

验（固定血清-稀释病毒法）计算每组的LD50和中和指数，对病毒进行鉴定。

7.2.5.1.3免疫荧光染色

应用相应的病毒抗体对细胞培养物进行免疫荧光检测。根据荧光信号强弱判定结果。

7.2.5.1.4PCR检测

应用普通或荧光定量PCR/RT-PCR方法进行病原核酸扩增及检测。

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7.2.5.1.5ELISA检测

应用ELISA试剂盒，根据说明书进行病原检测。

7.2.5.1.6胶体金试纸条检测

应用商品化试剂盒，根据说明书进行病原检测。

7.2.5.2细菌检测

7.2.5.2.1细菌分离

将采集的黏液或组织样品，用相应细菌培养基培养。

巴氏杆菌用5%鲜血琼脂培养基培养，可见光滑、湿润、灰白色、露珠状、不溶血的菌落。牛结核

分枝杆菌生长繁殖速度较慢，一般需2～5周可见菌落，可先用4%NaOH处理，再接种到改良罗氏培养

基上培养，可见不透明、干酪状乳白色颗粒。

7.2.5.2.2染色镜检

将分离纯化的Pm进行革兰染色，牛结核分枝杆菌可用抗酸染色法，显微镜下观察细菌形态。巴氏杆

菌镜下呈两级浓染的短杆菌，散在分布，牛结核分支杆菌镜下可观察到呈束状排列的红色细长、略弯曲

杆菌。

7.2.5.2.3生化鉴定

将分离纯化的菌用相应的生化鉴定管进行生化特性鉴定，根据伯杰细菌手册统计结果。

7.2.5.2.4血清学鉴定

对牛结核分枝杆菌进行定期抗体检测。

7.2.5.2.5分子检测

用特异性的引物进行病原的普通或荧光定量PCR检测。

7.2.5.3支原体检测

7.2.5.3.1分离培养

将样品加入支原体液体培养基中，置37℃、5%CO2培养箱中培养3d～5d，当培养基颜色由红色变

为黄色时，进行盲传并接种到支原体固体培养基中培养3d～5d。当观察到有菌落生长时，挑取单个菌

落接种到支原体液体培养基中，如此交替培养重复3次或4次，进行纯化。

支原体固体培养基上可生长出典型的“煎蛋样”的针尖大小透明菌落。

7.2.5.3.2染色镜检

挑取特征性单个菌落进行吉姆萨染色，镜下可见蓝紫色球形颗粒；用支原体染色液，镜下呈蓝色颗

粒。

7.2.5.3.3生化鉴定

将符合镜检结果的支原体菌落根据《中国药典》进行生化检测及结果判定。

7.2.5.3.4分子检测

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用特异性引物进行病原的普通或荧光定量PCR检测。

7.3综合诊断

7.3.1初诊

符合流行病学、临床症状和病理变化可初步诊断为牛呼吸道疾病综合征。

7.3.2确诊

符合流行病学、临床症状和病理变化，实验室诊断任一检测结果为阳性可判定为牛呼吸道疾病综合

征。

8预防

8.1注重饲养管理，保证饲料质量，加强饲料安全性。

8.2管控卫生条件，保持饲料和饮水的清洁、卫生，及时将牛舍中的粪污、杂草等清理干净。

8.3确保合理的养殖密度，避免饲养密度过大。

8.4定期消毒，每隔3d～5d消毒1次，采用暖风炉管道送风，在保证舍内温度的前提下，中午开

门窗，自然通风，减少舍内氨气浓度，保证牛舍干燥、卫生、舒适、温暖。

8.5坚持自繁自养，如引进牛则必须进行健康检查；牛结核病存在问题的牛场，定期进行抗体检测，

标记阳性牛，血清抗体阳性牛的初乳丢弃，出现临床症状的标记牛及时淘汰。

8.6引进牛时尽量避免长时间运输，对运输工具及车辆进行消毒；运输过程中，将牛进行隔断，确保

牛只运输途中空间干净整洁。

8.7引进牛应隔离饲养30d后进行健康检查才能混群。

8.8免疫接种，可接种IBEV/BVDV二联灭活疫苗、BRD疫苗、BRSV疫苗、巴氏杆菌疫苗等，随着国内

疫苗种类的丰富，及时调整免疫程序。

8.9避免应激，消除可能降低机体抵抗力的各种应激因素。

8.10初生犊牛及时