宣城市中医院科研实验技术如ELISA分子生物学操作考核

宣城市中医院科研实验技术（如ELISA、分子生物学）操作考核一、单选题（每题2分，共20题）1.ELISA实验中，酶标板的洗涤步骤错误的是？A.每次洗涤后需彻底拍干B.使用洗涤液时应充分振荡C.洗涤次数一般为3-5次D.洗涤液需使用pH7.4的缓冲液2.分子生物学实验中，PCR扩增的目的产物大小通常通过哪种方法检测？A.琼脂糖凝胶电泳B.酶联免疫吸附测定C.高效液相色谱D.荧光定量PCR3.ELISA实验中，HRP标记的二抗用于检测何种标记的一抗？A.荧光标记的一抗B.生物素标记的一抗C.HRP标记的一抗D.蛋白A标记的一抗4.分子克隆实验中，限制性内切酶识别的序列通常具有什么特点？A.任意核苷酸序列B.特定回文结构C.随机分布无规律D.仅含嘌呤碱基5.ELISA实验中，背景值过高的可能原因是？A.抗体浓度过高B.样本干扰C.试剂纯度低D.微孔板质量问题6.实时荧光PCR实验中，SYBRGreenI染料的检测原理是？A.与引物结合后荧光增强B.直接标记模板链C.与特异性探针结合D.依赖荧光淬灭剂7.ELISA实验中，酶标仪检测的最佳波长范围是？A.300-400nmB.450-600nmC.700-800nmD.900-1000nm8.分子生物学实验中，DNA聚合酶在PCR扩增中的作用是？A.剪切DNA链B.合成新的DNA链C.检测DNA突变D.降解DNA9.ELISA实验中，质控品（质控品）的用途是？A.评估实验重复性B.检测样本浓度C.校准仪器参数D.补充实验样品10.实时荧光PCR实验中，引物二聚体形成的可能原因是？A.引物设计不合理B.模板浓度过高C.退火温度过高D.荧光探针质量差二、多选题（每题3分，共10题）1.ELISA实验中，以下哪些步骤属于关键操作？A.微孔板封闭B.样本稀释C.试剂混匀D.酶标仪检测2.分子生物学实验中，PCR扩增的优化参数包括？A.退火温度B.引物浓度C.循环次数D.聚合酶选择3.ELISA实验中，影响结果准确性的因素有？A.试剂储存条件B.操作者手抖C.微孔板清洁度D.仪器校准状态4.实时荧光PCR实验中，以下哪些属于常见干扰因素？A.样本RNA降解B.引物设计不特异C.液体加样误差D.试剂未混匀5.分子克隆实验中，质粒提取的步骤包括？A.细菌裂解B.蛋白酶K消化C.氯仿萃取D.乙醇沉淀6.ELISA实验中，竞争性ELISA的原理是？A.样本抗原与标记抗原竞争结合位点B.信号强度与样本浓度成正比C.用于检测小分子物质D.需要酶标二抗7.实时荧光PCR实验中，熔解曲线分析的目的有？A.检测引物二聚体B.评估PCR特异性C.计算扩增效率D.比较不同样本扩增能力8.ELISA实验中，间接ELISA的步骤顺序是？A.样本孵育B.加入酶标二抗C.加入底物显色D.加入生物素标记一抗9.分子生物学实验中，基因测序的常用方法包括？A.Sanger测序B.二代测序C.数字PCRD.基因芯片10.ELISA实验中，样本前处理的注意事项包括？A.避免反复冻融B.使用高纯度裂解液C.过滤去除沉淀D.立即酶标检测三、判断题（每题2分，共15题）1.ELISA实验中，酶标板的洗涤次数越多，结果越准确。（×）2.分子生物学实验中，PCR扩增产物可通过肉眼直接观察。（×）3.ELISA实验中，HRP标记的二抗可检测生物素标记的一抗。（√）4.实时荧光PCR实验中，引物设计应避免3'端互补。（√）5.ELISA实验中，背景值越高，说明实验特异性越好。（×）6.分子克隆实验中，限制性内切酶的识别序列必须是回文结构。（√）7.ELISA实验中，酶标仪检测时需使用空白调零。（√）8.实时荧光PCR实验中，熔解曲线越尖锐，说明PCR特异性越差。（×）9.ELISA实验中，间接法比直接法更适用于高丰度抗原检测。（√）10.分子生物学实验中，DNA聚合酶在PCR扩增中是不可缺少的。（√）11.ELISA实验中，样本浓度过高会导致信号饱和。（√）12.实时荧光PCR实验中，荧光淬灭剂的作用是增强信号。（×）13.分子克隆实验中，质粒提取后需立即测序验证。（√）14.ELISA实验中，酶标二抗需在封闭后加入。（×）15.实时荧光PCR实验中，循环阈值（Ct值）越低，说明扩增效率越高。（√）四、简答题（每题5分，共5题）1.简述ELISA实验中背景值过高的可能原因及解决方法。答：背景值过高的原因包括：①试剂纯度低（如洗涤液含杂质）；②样本干扰（如高浓度盐离子）；③微孔板清洁度差；④抗体非特异性结合。解决方法：①使用高纯度试剂；②优化样本前处理；③严格清洗微孔板；④增加封闭步骤。2.简述实时荧光PCR实验中引物二聚体形成的可能原因及优化方法。答：原因：①引物设计不特异（如GC含量不均）；②退火温度过高；③引物浓度过高。优化方法：①重新设计引物（如增加GC含量梯度）；②降低退火温度；③减少引物用量；④增加巢式PCR。3.简述ELISA实验中质控品的作用及检测方法。答：质控品用于评估实验重复性和准确性，检测方法：①设置高、中、低浓度质控品；②与样本同步操作；③计算Cv值（变异系数）评估稳定性；④与标准曲线对比检测偏差。4.简述分子克隆实验中质粒提取的步骤及关键点。答：步骤：①细菌裂解（碱裂解法）；②蛋白酶K消化（去除蛋白质）；③氯仿萃取（去除脂质）；④乙醇沉淀（回收质粒）。关键点：①裂解温度需精确控制；②避免反复冻融；③乙醇沉淀后需干燥无水乙醇。5.简述ELISA实验中样本前处理的注意事项。答：①避免反复冻融（导致蛋白质变性）；②使用高纯度裂解液（避免杂质干扰）；③过滤去除沉淀（防止堵塞微孔）；④立即酶标检测（防止样本降解）。五、论述题（每题10分，共2题）1.论述ELISA实验中影响结果准确性的关键因素及优化策略。答：影响ELISA结果准确性的关键因素：①试剂质量（如抗体特异性）；②操作规范（如洗涤充分性）；③仪器校准（如酶标仪波长）；④样本处理（如样本干扰）。优化策略：①选用高纯度试剂；②严格按SOP操作；③定期校准仪器；④增加样本预实验验证。2.论述实时荧光PCR实验中影响扩增效率的因素及解决方法。答：影响因素：①模板质量（如RNA降解）；②引物设计（如二聚体形成）；③反应体系（如镁离子浓度）；④仪器性能（如荧光检测灵敏度）。解决方法：①使用高质RNA；②优化引物设计（如引入限制性位点）；③精确调整反应体系；④定期维护仪器。答案与解析一、单选题答案1.D2.A3.B4.B5.C6.A7.B8.B9.A10.A二、多选题答案1.ABCD2.ABCD3.ABCD4.ABCD5.ABCD6.AC7.ABC8.ABCD9.AB10.ABCD三、判断题答案1.×2.×3.√4.√5.×6.√7.√8.×9.√10.√11.√12.×13.√14.×15.√四、简答题解析1.背景值过高的原因及解决方法-原因：试剂纯度低、样本干扰、微孔板清洁度差、抗体非特异性结合。-解决方法：使用高纯度试剂、优化样本前处理、严格清洗微孔板、增加封闭步骤。2.引物二聚体形成的可能原因及优化方法-原因：引物设计不特异、退火温度过高、引物浓度过高。-优化方法：重新设计引物、降低退火温度、减少引物用量、增加巢式PCR。3.质控品的作用及检测方法-作用：评估实验重复性和准确性。-检测方法：设置高、中、低浓度质控品，同步操作，计算Cv值，对比标准曲线。4.质粒提取的步骤及关键点-步骤：碱裂解、蛋白酶K消化、氯仿萃取、乙醇沉淀。-关键点：精确控制裂解温度、避免反复冻融、干燥无水乙醇沉淀。5.样本前处理的注意事项-注意事项：避免反复冻融、使用高纯度裂解液、过滤去除沉淀、立即检测。五、论述题解析1.ELISA实验影响因素及优化策略-关键因素：试剂质量、操