常见临床样本的处理方法

常见临床样本的处理方法演讲人：日期:目录CATALOGUE血液样本处理尿液样本处理组织样本处理痰液与呼吸道样本处理粪便样本处理通用原则与安全01血液样本处理PART采集与抗凝技术静脉穿刺标准化操作采用无菌技术选择合适的静脉穿刺点，避免溶血或组织液污染，确保采血针与采血管匹配，减少样本误差。抗凝剂选择与比例控制特殊人群采血注意事项根据检测项目选用合适的抗凝剂（如EDTA、肝素、枸橼酸钠），严格遵循抗凝剂与血液体积比例，防止凝血或过度稀释影响结果。针对婴幼儿或凝血功能障碍患者，需采用小规格采血针或预冷抗凝管，减少创伤并保证样本质量。123温度与时间控制使用防漏、防震的专用运输容器，标注生物危害标识，确保样本在运输过程中不发生泄漏或交叉污染。生物安全防护稳定性评估与记录对易降解指标（如血糖、乳酸）需记录采集至检测的时间间隔，必要时添加稳定剂以延长样本有效期限。需根据检测项目要求选择常温、冷藏（2-8℃）或冷冻（-20℃以下）运输，避免反复冻融导致细胞破裂或生化成分降解。运输与储存要求离心与分离步骤根据样本类型设定转速（如3000rpm）和时间（10-15分钟），确保血浆/血清与血细胞分层清晰，避免纤维蛋白残留。离心参数标准化使用无菌吸管或自动化分装系统分离上清液，避免触碰中间层（如白细胞层）或沉淀物，减少交叉污染风险。分层操作规范将分离后的血浆/血清分装至冻存管，标注唯一标识码并记录分装体积，便于后续检测或长期保存。分装与标识管理02尿液样本处理PART指导患者清洁外阴或尿道口后，弃去初始尿液，收集中段尿液于无菌容器中，避免污染。清洁中段尿采集使用专用防腐容器，记录总尿量并混匀后取部分送检，需严格避免样本遗漏或污染。24小时尿液收集针对无法自主排尿的患者，需由医护人员通过导尿或膀胱穿刺获取样本，确保无菌操作。导尿与穿刺采集收集方法规范冷藏保存根据检测项目选择硼酸、甲苯或甲醛等防腐剂，抑制微生物生长并稳定尿液成分。化学防腐剂添加分装与标记长期保存需分装至冻存管，标注患者信息及采集时间，避免反复冻融影响检测结果。若样本无法在2小时内检测，需置于4℃冰箱保存，但不超过24小时，以防细菌繁殖或成分降解。防腐与保存措施化学与微生物检测准备检测尿沉渣时需以1500-2000rpm离心5分钟，取沉淀物镜检，上清液用于生化分析。离心处理高浓度样本需过滤或稀释后检测，避免试剂干扰，如蛋白尿需稀释后测微量白蛋白。过滤与稀释接种前需混匀样本，必要时进行革兰染色预判，选择合适培养基以提高检出率。微生物培养前处理03组织样本处理PART活检与固定流程无菌操作规范活检过程中需严格遵循无菌原则，使用消毒器械和容器，避免样本污染。对于不同组织类型（如肿瘤、炎症或正常组织），需针对性选择取样部位以确保诊断准确性。030201固定液选择与处理常用固定剂如10%中性缓冲福尔马林，需确保组织与固定液体积比为1:10以上。固定时间需根据组织厚度调整，通常不超过24小时，以避免过度交联影响后续检测。样本标记与记录每份样本需标注患者信息、取材部位及时间，并同步录入病理信息系统，确保追溯性。特殊样本（如微小组织）需单独标注以防丢失。包埋与切片技术脱水与透明化处理组织需经过梯度乙醇脱水（70%至100%），再经二甲苯透明化，以彻底去除水分并增强石蜡渗透性。此过程需严格控制时间，避免组织脆化或收缩。切片厚度与平整度常规切片厚度为4-5微米，需使用一次性刀片或定期更换刀片以减少划痕。切片后需漂浮于温水浴中展平，避免褶皱影响染色。石蜡包埋方向控制包埋时需根据诊断需求调整组织方向（如肿瘤切面需包含最大病灶面积），并使用冷台快速固化石蜡，确保包埋块硬度均匀。染色与显微检查准备常规HE染色步骤依次进行苏木精染色（核染色）、分化液返蓝、伊红染色（胞质染色），最后脱水封片。染色时间需根据室温及试剂批次微调，确保核质对比清晰。特殊染色应用针对特定成分（如胶原纤维、黏液等）可选择Masson三色、PAS等染色法。需严格对照阳性对照样本，避免假阴性或假阳性结果。封片与镜检前处理封片时使用中性树胶，避免气泡产生。镜检前需校准显微镜光源和焦距，并按照从低倍到高倍的顺序系统观察，重点关注组织结构和细胞形态异常。04痰液与呼吸道样本处理PART采集诱导方法自然咳痰法支气管肺泡灌洗术（BAL）雾化吸入诱导法指导患者清晨空腹漱口后深咳，采集下呼吸道分泌物，避免唾液污染，样本需在2小时内送检以保证病原体活性。对于咳痰困难患者，采用高渗盐水雾化刺激支气管分泌，严格监控患者血氧饱和度，防止支气管痉挛等不良反应。通过纤维支气管镜注入无菌生理盐水并回收灌洗液，适用于肺部感染病原学诊断，需注意操作中避免气道黏膜损伤。培养与接种标准选择性培养基应用根据疑似病原体选择血琼脂、巧克力琼脂或麦康凯培养基，针对结核分枝杆菌需使用罗氏培养基并延长培养周期。厌氧菌处理流程样本需立即转入厌氧转运瓶，接种至预还原培养基，并在厌氧环境下培养，防止氧气暴露导致假阴性。采用10μL接种环分区划线，确保单菌落分离，避免交叉污染，同时记录菌落形态特征辅助鉴定。定量接种技术分子检测预处理核酸提取优化采用硅胶膜吸附柱法或磁珠法提取RNA/DNA，添加溶菌酶破解结核分枝杆菌细胞壁，提高核酸得率。抑制剂去除策略同步检测内参基因（如人类β-actin）确认样本质量，设置阴性对照和阳性对照监控扩增效率，确保结果可靠性。样本中加入蛋白酶K消化粘蛋白，配合离心柱纯化步骤，消除痰液中多糖和色素对PCR反应的干扰。多重PCR质控05粪便样本处理PART收集与保存规范防腐剂应用针对寄生虫检测可添加10%福尔马林或PVA固定液；细菌培养需避免使用防腐剂，直接冷藏保存以维持微生物存活率。采样量与时间要求采集拇指大小的粪便样本（约5-10g），优先选择含黏液或血丝部分。样本需在排出后1小时内送检，若延迟需冷藏保存（2-8℃），但不超过24小时以维持病原体活性。无菌容器选择使用专用防漏、密封性良好的无菌容器收集样本，避免污染或泄漏，确保样本完整性。容器材质需耐腐蚀且不含抑菌成分，防止影响后续检测结果。寄生虫筛查技术直接涂片镜检生理盐水或碘液涂片后高倍镜检，快速识别虫卵、幼虫或原虫滋养体，适用于阿米巴、贾第鞭毛虫等常见寄生虫的初步筛查。浓缩法检测采用甲醛-乙酸乙酯沉淀法或蔗糖浮聚法，提高低载量虫卵的检出率，尤其适用于钩虫、蛔虫等肠道线虫感染的诊断。免疫学检测通过ELISA或胶体金试纸条检测寄生虫特异性抗原（如隐孢子虫、血吸虫），灵敏度高且可区分活动性感染与既往感染。选择性培养基应用针对沙门氏菌、志贺氏菌等肠道致病菌，使用SS琼脂或麦康凯琼脂进行分离培养，抑制正常菌群生长以提高目标菌检出率。病原体培养流程厌氧菌培养条件艰难梭菌等厌氧菌需在厌氧罐或专用培养箱中（含5%氢气、10%二氧化碳、85%氮气）培养48-72小时，辅以毒素检测确认致病性。病毒分离技术轮状病毒或诺如病毒需通过离心富集后接种于特定细胞系（如MA104细胞），观察细胞病变效应（CPE）并结合PCR验证。06通用原则与安全PART消毒与废弃物处理使用有效消毒剂（如含氯消毒液或75%酒精）对工作台面及器械进行定期消毒，医疗废弃物需分类密封后由专业机构集中处置。个人防护装备使用实验人员必须穿戴符合标准的防护服、手套、口罩及护目镜，确保在处理临床样本时避免直接接触潜在有害物质，降低感染风险。实验室分区管理严格划分清洁区、半污染区和污染区，样本处理应在生物安全柜内进行，防止气溶胶扩散和交叉污染。生物安全防护措施确保采集容器无菌、抗凝剂比例准确，避免溶血或脂血干扰检测结果，严格记录采集时间与患者信息。质量控制要点样本采集标准化根据不同样本类型（如血液、尿液、组织）制定离心速度、温度及保存条件，防止细胞破裂或成分降解影响分析准确性。预处理流程规范定期对离心机、分光光度计等设备进行校准，每批次实验需同步运行阴性质控品和阳性质控品以监控系统误差。仪器校准与质控品检测样本需置于防漏初级容器中，外加吸湿材料和中层密封袋，