T∕GDPMAA 0023-2025 自发性强直性脊柱炎食蟹猴解剖病理学检查规程

ICS11.100CCSC05

GDPMAA团 体 标 准T/GDPMAA0023—2025自发性强直性脊柱炎食蟹猴解剖病理学检查规程Standardproceduresfortheanatomicalpathologicalexaminationofspontaneousankylosingspondylitisinmacacafascicularis（发布稿）（本文件完成时间：2025-10-20）2025-10-30发布 2025-11-1实施广省精医学用学会   发布T/GDPMAA0023T/GDPMAA0023—2025PAGE\*ROMANPAGE\*ROMANIII目 次前言 II引言 III范围 1规范性引用文件 1术语和定义 1检查程序 1解剖病理学检查 2称重 2麻醉 2外观检查 2安乐死 2大体剖检 2组织病理学检查 4检查报告 6检查报告撰写要求 6检查报告内容 6附录A（资料性） 大体剖检观察 7附录B（资料性） 骨标本病理学组织取材 9附录C（资料性） 病理组织制片 10附录D（资料性） 病理组织制片（硬组织切片） 12参考文献 13前 言本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。本文件的某些内容可能涉及专利。本文件发布机构不承担识别专利的责任。本文件由广东省生物技术研究院（原广东省实验动物监测所）提出。本文件由广东省精准医学应用学会归口。（原广东省实验动物监测所引 言（AnkylosingSpondylitis，AS）为以骶髂关节和脊柱附着点炎症为主要症状的一种（葡萄膜炎（主动脉炎（肺纤维化（炎症性肠病为了规范强直性脊柱炎食蟹猴的解剖病理学检查，确保实验数据的准确性和可靠性，制定本文件。T/GDPMAA0023T/GDPMAA0023—2025PAGEPAGE5自发性强直性脊柱炎食蟹猴解剖病理学检查规程范围本文件适用于强直性脊柱炎食蟹猴的解剖病理学检查。规范性引用文件本文件没有规范性引用文件。术语和定义下列术语和定义适用于本文件。实验动物食蟹猴 LaboratoryMacacaFascicularis经人工饲育，对其携带的微生物和寄生虫等实行质量控制，遗传背景明确或者来源清楚，用于科学研究、教学、生产和检定以及他科学实验的食蟹猴。[来源：T/CALAS109—2021,定义3.1]强直性脊柱炎AnkylosingSpondylitis(AS)以骶髂关节和脊柱附着点炎症为主要症状的一种全身性自身免疫性疾病。[来源：T/CALAS108—2021,定义2.3]兽医解剖病理学VeterinaryAnatomicalPathology以通过肉眼、显微镜、免疫学等方法对患病动物的机体、器官和组织的形态学进行检查，并对疾病进行诊断的学科。[来源：DB11/T1462.1—2017,定义3.2]检查程序自发性AS食蟹猴解剖病理学检查程序见图1。图1检查程序解剖病理学检查称重麻醉在麻醉前，动物应禁食至少8h~12h，认真核对动物信息无误后，根据动物体重等计算麻醉药使用量，进行常规麻醉。外观检查包括以下内容：毛发和皮肤：检查体温是否升高,全身或局部是否出现肿胀等炎症迹象，毛发是否有异常脱落或被污染等；脊柱：观察动物脊柱的形态是否发生异常改变，如过度弯曲、变形或僵硬等；尾部：观察动物尾部的形态是否发生异常改变，如僵硬、结节、竹节样改变等；其它骨关节：观察动物髋部及四肢外周关节是否有隆起、膨胀或畸形等异常改变；肌肉：观察动物全身主要肌肉群是否发生异常改变，特别是脊柱附近的肌肉是否萎缩；眼球：使用检眼镜检查动物角膜、虹膜、巩膜等部位是否存在充血、水肿或破损等。安乐死在深麻醉状态下，使用腹主动脉或腹股沟动脉放血安乐死。大体剖检解剖程序进行体表、皮下、腹腔、盆腔、胸腔、头颈部、中轴关节和外周关节的剖检。检查内容应检查与AS大体解剖解剖检查需重点观察的内容AS中轴关节包括：脊柱：形态学观察：观察脊柱的整体形态，是否有僵硬、畸形或异常弯曲（如脊柱侧凸、前凸或后凸）等。重点检查腰椎和胸椎部分脊柱，观察是否有明显的骨质增生或骨质疏松。仔细检查各脊椎之间的间隙是否正常，有无椎间隙变窄或融合等迹象。活动度评估：尝试轻轻弯曲、伸展和旋转动物脊柱，观察是否有活动受限。周围软组织检查：检查脊柱周围的肌肉组织是否有萎缩、纤维化、脂肪化或充血、肿胀、坏死及钙化等异常改变。检查脊柱周围脂肪垫的大小、形态和质地，是否存在充血、肿胀、坏死或钙化的迹象。检查脊柱周韧带组织是否有增厚、硬化或其他异常改变；骶髂关节：检查骶髂关节位置的骨组织是否光滑，注意是否有骨质增生或侵蚀的现象。观察骶髂关节周围的软组织，如韧带、关节囊和肌肉，是否有粘连、增厚或萎缩；尾椎：观察尾椎的整体形态，是否有僵硬、畸形或骨结节等。观察尾椎周围的软组织，如韧带、关节囊和肌肉，是否有粘连、增厚或萎缩。外周关节尝试轻轻弯曲、伸展和旋转关节，评估关节活动是否受限，以及受限的程度。检查关节囊是否受到炎症或退变的影响，可表现为增厚、纤维化或钙化。其他组织脏器包括：眼球：检查眼球壁是否存在充血、出血或渗出等情况；肠道：检查肠黏膜是否出现充血、出血、溃疡、糜烂或脱落，肠道壁增厚等情况；心脏：观察各心房和各心室大小是否正常，观察心肌及各瓣膜的厚度和形态，需特别留意瓣膜是否有增厚、变形或钙化，是否存在瓣膜狭窄或关闭不全的迹象；肾脏：检查是否存在萎缩或肿大，颜色变淡，表面及切面是否有不光滑的情况；肺脏：检查肺脏的大小、颜色、质地、表面有无异常，需留意肺叶是否纤维化的迹象；肝脏：评估肝脏的形态，注意是否有肿大或缩小，检查肝脏的颜色是否正常，注意是否有异常的苍白、黄疸或暗红色。切面颜色是否均匀，是否有出血、坏死或脂肪变性等；胸腺：检查胸腺的形态是否饱满、对称，有无变形、肿大或萎缩。评估胸腺是否有萎缩时，需结合年龄，萎缩也可能是正常的年龄相关性变化；脾脏：检查脾脏是否肿大或萎缩，观察颜色是否异常（苍白、暗红），质地是否硬韧或松脆；淋巴结：检查肠系膜及颈部淋巴结，注意其大小与质地。AS检查时需注意组织脏器的大小、形态、颜色、质地等是否正常。大体标本留样组织病理学检查检查内容组织标本取材规范标本的取材，对于有病变的标本，取材应包括病变部位、病变与正常组织的交界处以及正常部位。骨标本的取材，往往需要电锯切割及脱钙处理。实验方法参见附录B。病理组织制片包括：骨标本：进行必要的脱钙及脱钙后的标本脱水后进行常规石蜡包埋和切片，苏木素-伊红（HE）染（MassonOS、C；D。非骨标本：常规石蜡切片，苏木素-伊红（HE）染色，必要时进行特殊染色（如Masson三色染色、番红O-固绿染色及茜素红S染色等、免疫组织化学、免疫荧光以及原位杂交染色鉴定），实验方法参见附录C。阅片及诊断脊柱包括：附着点：韧带与骨骼相连部位的炎症情况；韧带：韧带是否出现变性、坏死、血管新生、炎症细胞浸润和聚集、纤维化、钙化、软骨化和骨化等现象；椎体：椎体边缘是否有新生骨质形成，不同椎体之间是否有骨桥形成；椎体内部的骨小梁是否变细、数量减少；软骨板下方与椎体相连的部分是否完整，有无破坏和侵蚀的痕迹；骨髓腔内的细胞成分变化，有无明显的炎症细胞浸润、聚集和纤维化以及病灶内的血管新生等现象；观察椎体骨髓腔内脂肪细胞的数量和分布情况，可使用软件计算脂肪细胞面积占比，进行量化，评估其是否有异常增多；椎间盘：观察椎间盘组织的退变情况，特别是纤维环的变性、断裂和纤维化，注意发生纤维化的椎间盘组织内是否有炎症细胞浸润、聚集，血管新生，纤维化，钙化，软骨化和骨化等现象，检查椎骨边缘是否有新生骨的形成，特别是否有连接相邻椎骨的现象；脊柱旁肌肉：需关注肌肉萎缩、炎症浸润、纤维化、脂肪浸润等病理学改变，并注意与脊柱病变和其他组织病变的关联；脊柱旁脂肪垫：需关注脂肪坏死、炎症细胞浸润、纤维化、新生血管形成等方面的病理学改变，并注意与脊柱病变和其他并发症的关联。骶髂关节包括：韧带：观察包括骨间韧带在内的骶髂关节韧带是否出现变性、坏死、血管新生、炎症细胞浸润和聚集、纤维化、钙化、软骨化和骨化等现象；韧带附着的骶骨和髂骨：骨组织是否存在侵蚀，是否有新生骨质形成。骨小梁是否变细、数量减少；骨髓腔内的细胞成分变化，有无明显的炎症细胞浸润、聚集和纤维化以及病灶内的血管新生等现象；观察骶骨及髂骨骨髓腔内脂肪细胞的数量和分布情况，可使用软件计算脂肪细胞面积占比，进行量化，评估其是否有异常增多；滑膜：观察滑膜是否有细胞增生的现象，并注意是否有大量炎症细胞的浸润；关节囊：观察关节囊是否有增厚，并伴有纤维化和钙化现象；软骨：观察骶髂关节软骨的破坏情况，包括软骨表面的粗糙化、溃疡形成和软骨基质的丧失；软骨下骨：注意软骨下骨质的硬化现象，包括软骨下骨质的增厚和密度增加；关节间隙：观察关节间隙的宽度，是否有明显的狭窄或增宽迹象。注意是否有骨桥（骨赘）形成，导致骶髂关节部分或完全融合。外周关节关注韧带和肌腱骨附着点的炎症、滑膜炎、纤维组织增生、新骨形成和骨质融合等改变。眼球注意葡萄膜是否有炎症的病理表现，包括炎症细胞浸润和组织增生等。肠道注意肠壁是否有炎症细胞浸润、聚集和溃疡形成。心脏注意有无主动脉根部炎症、瓣膜增厚和钙化、骨化。肾脏肺脏观察肺泡壁是否有增厚、纤维化或炎症细胞浸润。注意间质组织是否有异常增生或纤维化。肝脏注意肝细胞、胆管上皮细胞是否发生变性和坏死，汇管区是否有炎症细胞浸润、聚集。胸腺Hassall脾脏淋巴结其他大体解剖检查发现异常的器官和组织也应进行组织病理学检查。需注意增生或萎缩，变性，坏死，炎症等组织病理学改变。检查报告检查报告撰写要求病理检查报告内容的表述和书写应准确、详实、完整、规范，尽量使用病理学规范术语。检查报告内容报告内容应包括：动物编号、性别、年龄、体重、组织标本取材部位等；解剖病理学检查结果：包括大体解剖的描述、镜下检查描述、综合分析与诊断结果；具有动物病理诊断经验和资质的病理学专业人员签名并注明报告时间。体表检查

附 录 A（资料性）大体剖检观察胸腔、腹腔及盆腔主要步骤如下：沿正中线从颌下至耻骨前缘的皮肤切开，并向两侧分离，检查皮下组织；剪开腹部肌肉，打开腹腔，原位检查腹腔脏器；去除胸骨肋骨表面的肌肉，打开胸腔，摘取胸骨和肋骨（包括肋骨和软骨交接处），检查胸腔脏器。检查后用生理盐水湿润的纱布覆盖；在胸腔脏器的表面或者在组织器官上洒生理盐水，从而防止组织干燥；25mm将胃至结肠、胰腺、肠系膜淋巴结、肠系膜和大网膜一同摘出。分离胰腺、肠系膜淋巴结。保留胃和十二指肠（3cm），沿胃大弯将胃和十二指肠剪开，用生理盐水洗去内容物，检查粘膜，如有必要，将其固定在纸板上，粘膜面朝上；5cm摘取肝脏和胆囊，使用注射器抽出胆汁，观察胆汁，记录体积，将胆囊切开，观察胆囊粘膜面，称重后，保留肝脏左侧叶、中叶（25mm）。肝脏其他叶需要切开检查；摘取肾上腺；摘取输尿管，贴在纸上，可用“P”标示近肾端；摘取肾脏，在左肾一端表面切口标记。称重后，左肾在肾门附近横切，右肾在肾乳头附近纵切，观察切面。固定需要部位，剩余的肾脏组织丢弃；雄性：摘取睾丸、附睾区分左右并检查。雌性：摘取卵巢和输卵管并检查；切断耻骨联合，暴露盆腔。雄性：摘取膀胱、前列腺和精囊腺。雌性：摘取膀胱、阴道、子V摘取直肠，剪开检查粘膜面，如必要，固定在标记为“Re”的纸板上；摘取胸腺，如果不能辨认胸腺时，取其所在部位组织，如需称重，需用备注说明；摘取心脏，从右心房至心尖切开，心尖至肺动脉切开。再将肺静脉至左心房及左心室切开，心尖到大动脉切开。观察肺动脉瓣、乳头肌、三尖瓣、右心房、主动脉瓣、二尖瓣、左心房及心室心内膜；在胸腔入口处剪断食管和气管，与主动脉和肺（包括主支气管）一起取出。提交主动脉、食1cm头部、脊柱及四肢主要步骤如下：分离寰椎与枕骨，取下整条脊柱及周围的韧带、肌肉及脂肪垫等软组织并进行检查；摘取眼球和视神经摘取眼睑、瞬膜或第三眼睑。剔除眼球和视神经周围的组织；摘取颌下腺和颈部淋巴结，分离颌下腺和颌下淋巴结；摘取腮腺；摘取甲状腺和甲状旁腺；摘取舌下腺，将舌、咽、喉、扁桃体一起摘出。舌取中间部；去除头盖骨上的皮肤和肌肉，采集脑；摘取垂体；将动物放置于仰卧位或侧卧位，摘取骨骼肌（股二头肌、股四头肌和/或腓肠肌）坐骨神经，将坐骨神经固定在纸上面。取下并检查四肢关节周围的韧带等软组织。脱钙前取材

附 录 B（资料性）骨标本病理学组织取材脱钙脱钙液选择EDTA脱钙液，脱钙液与骨组织体积比例至少为15:1，一周换2次新鲜的脱钙液，脱钙终点以骨组织无气泡发生或软化，或用大头针轻轻能刺进为标准。脱钙后取材脱钙结束后，从脱钙液中取出骨组织，切取0.3cm～0.5cm厚度，标记好对应位置，放入与其相应编号的包埋盒中，用流水冲洗3～4h，冲洗完成后进入待脱水状态。T/GDPMAA0023T/GDPMAA0023—2025PAGEPAGE10脱水脱水试剂

附 录 C（资料性）病理组织制片脱水所需试剂包括70%乙醇、80%乙醇、95%乙醇、无水乙醇、二甲苯、石蜡（熔点56~58°C）。脱水程序703802.5h952h95I（2hI（40mi、无水乙醇II（40min）、无水乙醇III（1h）、二甲苯I（30min）、二甲苯II（40min）、二甲苯III（1h）、石蜡I（1h）、石蜡II（1h）、石蜡III（1h）。包埋注意事项如下：65-70℃左右；10min根据组织块的大小选择合适的包埋模；先将少量石蜡注入包埋模内，迅速将组织块夹入其中，用无齿镊将组织切面轻压至包埋模底，并与之持平，最后将包埋模移至冷却台上冷却，使组织固定于包埋模底；将脱水盒放到包埋模上面，再灌注石蜡；把包埋模移到冷却台上，冷却后将脱水盒与包埋模分离。切片注意事项如下：5min3µm~4µm，特殊实验要求除外；把切片展平，用毛笔或镊子分离，光滑面朝下，放入冷水槽中伸展。摊片注意事项如下：37℃～48℃左右，防止蜡片离散；捞片使用防脱载玻片，捞取的组织切片贴于载玻片空白区域的中央。一次制备多张切片时，注意组织切片方向的一致性；检查玻片有无破损、皱褶、是否完整。烘片注意事项如下：贴好切片的载玻片可以置于烘片机上进行烘片；37℃～4830min烘干玻片后，检查玻片是否干燥，若未完全干燥则置于鼓风干燥箱内继续烘片，若干燥则置于玻片架，待烤片和染色。烤片注意事项如下：使用鼓风干燥箱进行烤片；65℃左右；30min。染色（苏木素-伊红（HE））注意事项如下：染色试剂染色所需试剂包括70%乙醇、80%乙醇、95%乙醇、无水乙醇、二甲苯、TO透明剂、盐酸乙醇、伊红（醇溶）、苏木素。染色程序二甲苯I（20min）、二甲苯II（20min）、无水乙醇I（5min）、无水乙醇II（5min）、95%乙醇I（5min）、80%乙醇（5min）、70%乙醇（5min）、纯水（5min）、苏木素（10min）、自来水1min5s15mi95mi（1mi、958s95%乙醇I895I（8s5miI（5mi、TO透明剂I（20min）、TO透明剂II（20min）。染色标准为胞核被染成蓝色，胞浆被染成红色，着色适中，染色均匀，色泽鲜艳，清晰透彻，染色质呈颗粒状。封片注意事项如下：染色结束后，取出浸泡在透明剂中的载玻片，拭去过多的透明剂；1根据组织切片选择适当大小的盖玻片；将盖玻片斜立在载玻片上适当的位置，轻轻放下，封固，避免产生气泡。操作者避免对着切片呼气；核对玻片质量，如是否封片胶过多、封片方向错误、气泡过多，如存在以上问题则重新封片，无则置于通风橱中晾干。脱水脱水试剂

附 录 D（资料性）病理组织制片（硬组织切片）脱水所需试剂包括70%乙醇、95%乙醇、无水乙醇、二甲苯。脱水程序70%乙醇（1d）、95%乙醇I（2d）、无水乙I醇（1d）、无水乙醇II（1d）、二甲苯（1d），以上程序均在4℃冰箱进行。渗透包括以下方式:I（75ml25ml3h）2d，4渗透