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文档简介
ICS65.020.01
CCSB15
DB42
湖北省地方标准
DB42/T1780—2021
绿豆尾孢菌叶斑病抗性鉴定技术规程
Codeofpracticeforevalutaionofresistancetoleafspotcausedbycercospora
canescensinmungbean
2021-12-23发布2022-02-23实施
湖北省市场监督管理局发布
DB42/T1780—2021
目 次
前言.....................................................................................................................................................................Ⅲ
引言.....................................................................................................................................................................Ⅴ
1范围.................................................................................................................................................................1
2规范性引用文件.............................................................................................................................................1
3术语和定义.....................................................................................................................................................1
3.1绿豆尾孢菌叶斑病.................................................................................................................................1
4接种体制备.....................................................................................................................................................2
4.1病原菌的分离及鉴定.............................................................................................................................2
4.2致病性测定.............................................................................................................................................2
4.3病原菌的繁殖和保存.............................................................................................................................2
5鉴定材料准备.................................................................................................................................................2
5.1种子选择.................................................................................................................................................2
5.2鉴定材料种植.........................................................................................................................................2
6接种.................................................................................................................................................................2
6.1接种体制备.............................................................................................................................................2
6.2接种叶片.................................................................................................................................................2
6.3接种方法.................................................................................................................................................3
7病情调查.........................................................................................................................................................3
7.1调查时间.................................................................................................................................................3
7.2病情分级.................................................................................................................................................3
8抗病性评价.....................................................................................................................................................3
8.1鉴定有效性判别.....................................................................................................................................3
8.2抗病性评价标准.....................................................................................................................................3
附录A（资料性）培养基制备方法................................................................................................................4
附录B（规范性）鉴定记载表格....................................................................................................................5
I
DB42/T1780—2021
前 言
本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构与起草规则》的规
定起草。
请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。
本文件由湖北省农业科学院粮食作物研究所提出。
本文件由湖北省农业农村厅提出并归口管理。
本文件起草单位：湖北省农业科学院粮食作物研究所、湖北省农业科学院植保土肥研究所、十堰市
农业科学院。
本文件主要起草人：刘昌燕、万正煌、焦春海、李莉、黄薇、张凡、陈宏伟、刘良军、韩雪松、彭
宣和。
本文件实施应用中的疑问，可咨询湖北省农业农村厅，联系电话邮箱：
hbsnab@126.com。对本文件的有关修改意见建议请反馈至湖北省农业科学院粮食作物研究所，联系电话：
III
DB42/T1780—2021
引 言
绿豆（Vignaradiata(Linn.)Wilczek）具有极强的生产适应性、独特的营养价值、良好的保健功效、
有效的固氮养地功能，已成为湖北省的特色产业，在保障农民增收致富、改善广大居民膳食结构、促进
农业可持续发展、保护农业多样性等方面起到了非常重要的作用。由变灰尾孢（cercosporacanescens）
引起的绿豆尾孢菌叶斑病是绿豆生产上的重要病害，轻者减产20～50%，严重的高达90%以上。培育抗病
品种是控制该病最有效的方法之一，而建立快速简便的抗性鉴定体系是进行绿豆尾孢菌叶斑病抗病育种
的关键。为此，我们通过多年的试验研究，制定出本文件，可有效克服绿豆尾孢菌叶斑病抗病性鉴定难
题，为绿豆抗病资源筛选和抗病品种的选育提供技术支持。
V
DB42/T1780—2021
绿豆尾孢菌叶斑病抗性鉴定技术规程
1范围
本文件规定了绿豆尾孢菌叶斑病接种体准备、鉴定材料准备、接种、病情调查和抗病性评价。
本文件适用于绿豆尾孢菌叶斑病室内离体叶片人工接种鉴定及评价。
2规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，
仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本
文件。
GB4404.2粮食作物种子第2部分：豆类
3术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。
3.1
绿豆尾孢菌叶斑病cercosporaleafspot
由变灰尾孢（Cercosporacanescens）所产生的叶部症状的病害。
4接种体准备
4.1病原菌的分离及鉴定
将从田间采集的发病叶片用无菌水冲洗干净，从病健交界处切取3 mm×3 mm小块组织；用75%乙醇溶
液浸泡2 s～3 s,再用1%次氯酸钠消毒3 min,后用灭菌水冲洗3次,用无菌吸水纸吸干,然后接种到V8培养
基上,在28 ℃条件下培养；待菌丝长出后转入V8培养基进一步纯化，并于4℃低温下保存备用。
4.2致病性测定
将分离物回接绿豆叶片进行致病性测定，致病性测定采用离体叶片菌丝块接种法。
4.3病原菌的繁殖和保存
接种所用分离物应采用强致病力菌株。在接种前需要进行病原物接种体的繁殖，常用培养基为V8
培养基，在28 ℃恒温培养箱，待菌丝布满整个平板，菌株斜面保存于4 ℃冰箱中。
4.4接种体的制备
将保种的分离物在V8培养基（见附录A）上于28℃恒温培养箱中活化培养，待菌丝长满平板后，
再用无菌的、直径6 mm的打孔器在活化好的菌株菌落生长边缘打孔，将菌丝面朝下接种在V8培养基中
1
DB42/T1780—2021
进行扩大繁殖，以备接种。
5鉴定材料准备
5.1种子选择
取颗粒饱满，大小相近的绿豆种子进行表面消毒，用75%乙醇消毒20 s，1%次氯酸钠消毒3 min，最
后用无菌水洗3次；表面消毒后的种子放在2～3层喷有水的吸水纸上备用，取已知的感病品种作为对照。
豆类种子质量应满足GB4404.2的要求。
5.2种子处理
将培养土高温高压灭菌后，分装到培养盘内,整平,压实苗床,控制土壤相对含水量约70 %～80 %,表
面消毒后的种子点播到培养盘内，用细土层覆盖种子；25℃12 h光照/12 h黑暗交替培养，定期观察绿豆
苗生长情况，适时浇水。
6接种
6.1接种时期
接种时期为第一对单叶平展，采集复叶叶片，清水洗净后放在塑料盒内湿润的吸水纸上,叶片的正
面向上。
6.2接种方法
在接种叶片中部稍偏叶脉部位用灭菌牙签扎一小伤口,取菌饼将菌丝面朝下接种到绿豆叶片伤口之
上，接种后，塑料盒用保鲜膜封紧保湿，放入温室25 ℃条件下培养并与吸水纸放入盒中保持湿润，12 h
光照/12 h黑暗交替培养，一个品种4个重复，每个重复10片叶子。
7病情调查
7.1调查时间
接种后第7 d进行调查。
7.2病情分级
测量叶片病斑大小，根据病斑大小平均值，进行分级，按照附录B的表格进行记载，划分标准见表1。
表1绿豆抗尾孢菌叶斑病鉴定病情级别划分
病情级别病斑描述
0无可见侵染病斑
1叶片上仅有小点状病斑，直径2 mm以下
2病斑直径3 mm以下，边缘褐色
3直径3 mm～6 mm以上的中型斑，边缘褐色，中央有灰白色坏死组织
4直径6 mm以上的不规则型病斑
2
DB42/T1780—2021
8抗病性评价
8.1鉴定有效性判别
当设置的感病或高感对照材料达到病情级别3或者4级，该批次抗叶斑病鉴定视为有效。参鉴材料中
初次鉴定表现为抗病的品种需进行重复鉴定，以进一步确定其抗性及稳定性。
8.2抗病性评价标准
依据鉴定材料发病程度（病情级别）确定其抗性水平，划分标准见表2。
表2绿豆对尾孢菌叶斑病抗性的评价标准
病情级别抗性
0高抗Highresistance(HR)
1抗Resistance(R)
2中抗Moderateresistance（MR）
3感Susceptibility(S)
4高感HighSusceptibility(HS)
3
DB42/T1780—2021
AA
附录A
（资料性）
培养基制备方法
表A.1给出了V8培养基。
表A.1V8培养基制备方法
培养基名称配方灭菌条件
V8果汁200ml，CaCO33.0
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