药检所实验室仪器操作教程

药检所实验室仪器操作教程药检所实验室作为药品质量监控的核心环节，其仪器操作的科学性与规范性直接关系到检验结果的准确性和可靠性。本文旨在系统阐述药检所常用实验室仪器的操作规程与注意事项，涵盖取样、前处理、分析检测及数据处理等关键环节，以期为实验室工作人员提供一套标准化、实用化的操作指南。内容涉及高效液相色谱仪、气相色谱仪、紫外可见分光光度计、原子吸收光谱仪等主流分析设备，并重点强调操作过程中的质量控制要点与异常情况处理方法。一、高效液相色谱仪（HPLC）操作规程高效液相色谱仪是药检所进行药物成分定量分析的核心设备，其操作需严格遵循以下步骤：1.仪器准备与系统检查开机前确认电源电压稳定，检查输液泵、检测器及色谱柱状态。首次使用或长时间停机后，需对系统进行充分排气，可通过泵前压力监测确认气密性。系统适用性试验（SST）必须每班次进行，包括理论塔板数、分离度、灵敏度等指标验证。色谱柱安装时需注意柱效方向，反相柱避免使用乙腈等强溶剂直接冲洗，以免柱膜溶胀。保护柱与色谱柱的连接必须使用专用管件，推荐使用0.45μm滤膜过滤流动相，以防颗粒堵塞。2.流动相配制与脱气流动相配制需在洁净环境中进行，容量瓶需预先干燥处理。水相溶剂使用双重蒸馏水或去离子水，有机相需经0.22μm滤膜过滤。高梯度洗脱程序中，需采用氩气在线脱气或使用真空脱气机，脱气时间不少于30分钟。流动相pH值调节需使用高纯度酸碱，避免使用金属离子干扰的试剂。缓冲盐溶液需冷藏保存，使用前需重新过滤，防止微生物滋生。梯度程序设置时需考虑柱温与流速匹配，初始流速一般设定为1.0ml/min。3.样品进样操作自动进样器需定期进行针头清洗与硅化处理，手动进样时需使用一次性进样针。样品制备需精确称量，溶解溶剂选择应避免与流动相相容性差的情况。含糖类药物样品需先经0.45μm滤膜过滤，以防结晶堵塞色谱柱。进样量根据峰形要求设定，一般控制在10-20μl。对于高浓度样品，需适当稀释至线性范围，峰面积过大时可能导致积分不准。样品瓶必须使用棕色玻璃瓶，防止紫外光分解。4.数据采集与处理检测波长选择需参考物质吸收光谱，二极管阵列检测器应同步采集全波长数据。积分参数设置需考虑峰宽与基线噪音，自动积分程序应定期验证。保留时间重复性需控制在±0.2%以内，峰面积相对标准偏差≤2%。系统适用性试验结果必须记录存档，包括峰高、峰面积、理论塔板数等关键参数。色谱图保存时需附带仪器参数、样品信息及操作人员记录，以便追溯分析过程。二、气相色谱仪（GC）操作规程气相色谱仪主要用于挥发性成分分析，其操作要点如下：1.载气与辅助气体控制载气（氮气）纯度需达到99.999%，使用前需经硅胶、活性炭等柱子净化。燃气与助燃气压力必须严格按厂家推荐值设定，点火前需确认火焰状态。气路系统必须定期检查泄漏，推荐使用氢氟化钠溶液涂抹管路连接处检测。2.进样系统操作分流/不分流进样器需定期清洁针座与隔膜，不分流进样时需确保隔膜密封性。样品量控制需根据组分挥发性调整，热解池温度应高于样品沸点20-30℃。进样口衬管使用前需用硅脂均匀涂抹，避免样品残留影响分离。3.检测器维护FID检测器使用前需确认氢气供应稳定，定期更换硅油。ECD检测器应使用高纯度乙硼烷，使用量需精确控制。检测器温度通常设置比柱温高50-100℃，以防冷凝物干扰。4.色谱柱选择与安装固定相选择需考虑样品极性与沸程，非极性柱适用于脂溶性成分分析。色谱柱安装时需避免弯曲，柱长误差控制在±1%以内。柱温箱升温速率一般设定为10-15℃/min，最高温度不得超过柱子耐受极限。三、紫外可见分光光度法操作规程紫外可见分光光度计是药检所常规检测设备，操作要点包括：1.仪器预热与调零仪器开机后需预热30分钟以上，使用前必须用空白溶液调零。光程选择应与样品浓度匹配，比色皿需用专用清洗液处理。自动清洗程序可减少人为误差，但需确认清洗液兼容性。2.样品制备要求溶液浓度需控制在吸光度0.1-0.8范围内，超过此范围需适当稀释。浑浊样品必须离心或过滤，不得直接测定。比色皿必须使用配套器校正光程，不同批次的比色皿光程差异不得超过0.005cm。3.数据采集与处理重复测定次数应不少于三次，取平均值报告结果。标准曲线应使用至少五点校准，相关系数需大于0.999。样品测定时需使用空白对照，以消除溶剂干扰。四、原子吸收光谱仪操作规程原子吸收光谱仪主要用于金属元素检测，操作注意事项如下：1.燃烧器与光源维护空心阴极灯必须使用配套电源，点火前需确认电极清洁。燃烧器缝隙宽度需精确调节，一般设定为0.6-0.8mm。乙炔气使用前需经稳压装置，防止回火事故。2.样品准备要求样品酸度需用高纯硝酸调节，pH值控制在1-2范围内。样品需用0.45μm滤膜过滤，避免盐分结晶堵塞雾化器。高浓度样品必须稀释，以防火焰不稳定。3.仪器校准与验证标准系列应使用单元素标准液配制，逐级稀释避免积累误差。背景校正必须定期检查，背景吸收不得超过0.01abs。灵敏度测试需使用标准参考物质，相对偏差控制在5%以内。五、质量控制与异常处理所有仪器操作必须执行SOP文件，每项检测过程需记录原始数据。定期进行仪器性能验证，包括精密度、准确度、线性范围等指标。异常情况处理需建立应急预案，如发现基线漂移应立即检查气路，峰形不对称需重新调整进样参数。数据审核时需重点检查系统适用性试验结果，对可疑数据必须复测确认。所有原始记录需存档三年以上，以符合药品监管要求。操作人员必须通过资质认证，每半年进行一次技能考核。六、实验室安全规范高压气瓶必须直立存放，使用前检查压力表读数。易燃易爆试剂需存放于通风橱内，禁止使用明火加热。所有仪器操作必须佩戴防护眼镜，处理有毒样品时需使用正压呼吸器。废弃溶