DB1307∕T394-2022 母驴人工授精技术规程

ICS65.020.30

CCSB43

DB1307

张家口市地方标准

DB1307/T394—2022

母驴人工授精技术规程

2022-10-27发布2022-11-27实施

张家口市市场监督管理局发布

DB1307/T394—2022

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定

起草。

本文件由张家口市农业农村局提出并归口。

本文件起草单位：阳原县农业农村局、中国农业大学、张家口桑阳牧业有限公司、张家口市农产品

质量安全监督检验中心。

本文件主要起草人：曾申明、庞洁、沈学梅、王海丽、韩海军、武开、白海宾、闫冬梅、肖江龙、

贾建平、祁建平、李靖、李楠、王佳敏。

I

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母驴人工授精技术规程

1范围

本文件规定了母驴人工授精的发情鉴定、精液准备、输精、妊娠鉴定、数据记录和废弃物无害化处

理操作技术要求。

本文件适用于张家口地区内母驴的人工授精操作。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，

仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本

文件。

GB/T39171—2020废塑料回收技术规范

3术语与定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

hCG

指人绒毛膜促性腺激素。

3.2

GnRH

指促性腺激素释放激素。

3.3

CASA

指计算机辅助精液分析系统。

4发情鉴定

4.1试情法

挑选体质健壮、性欲旺盛的种公驴进行试情。牵拉种公驴在母驴圈舍外部通道走动，或者拴系在母

驴圈内的柱桩上。处于发情期的母驴表现出愿意接近公驴，并有弓腰举尾、阴唇闪合、频繁排尿、后肢

张开、两耳向颈部收拢、口部频繁开合等行为；未发情母驴则躲避公驴，甚至在公驴靠近时，有蹴踢和

啃咬等抗拒行为。

4.2B超直肠发情鉴定

1

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4.2.1所需设备及试剂

B型超声波诊断仪、一次性长臂手套、润滑剂、促排卵药物、注射器。

4.2.2母驴的发情鉴定

将待检母驴用保定栏固定后，检查者在操作前修剪并磨平指甲，清洗消毒手臂，戴上一次性长臂手

套并抹上润滑剂，在母驴后方将手握成锥形缓慢插入肛门。若直肠内有粪便可用手清除，待直肠内部干

净且直肠壁舒缓时，将手臂深入触摸卵巢。然后，将B型超声波诊断仪探头握在手心，平行并紧贴直肠

壁下缘，依次检查母驴子宫体、子宫角和卵巢卵泡发育状态。卵泡发育形态参照附录B.1。母驴发情阶

段一般分为以下四个阶段：

a)间情期：卵泡上有多个小卵泡、直径为10mm～20mm；子宫角和子宫体回声均匀，没有液体存

留；此阶段母驴阴道干涩，不接受爬跨，抗拒直肠检查；

b)发情前期：卵巢上出现优势卵泡，体积增加较快，卵泡内充满液体，卵泡直径一般为20mm～30

mm；子宫角出现水肿，阴道有少量稀薄粘液流出；部分母驴出现发情行为，表现为接近公驴，少部分出

现口部反复开合、两耳向颈部收拢；

c)发情期：优势卵泡快速生长，直径达到30mm以上，此时母驴出现明显的发情行为，主动接近公

驴、接受爬跨、频繁排尿，口部反复开合、两耳向颈部收拢；子宫角水肿明显；

d)发情后期：卵泡破裂排卵，检查时可见明显黄体，母驴性情逐渐安静；子宫角水肿消失。

4.2.3发情母驴的处理

诊断结束后，准确记录母驴的卵泡、子宫和黄体状态，在母驴后背标记卵泡发育情况，挑选出优势

卵泡直径在30mm以上的母驴，注射l.0mL的GnRH类似物或2000IUhCG，优势卵泡直径在35mm

的母驴在当天下午输精，而优势卵泡直径在30mm～35mm的母驴在第二天下午进行输精。

5精液准备

5.1所需设备及试剂

一次性长臂手套、显微镜、CASA系统、量筒、温度计、恒温水浴锅、假阴道、集精杯、稀释液、

润滑剂、高压蒸汽灭菌锅、精液分装瓶、烧杯、毛巾、温水、消毒液、酒精、纱布、20mL注射器、载

玻片、盖玻片。

5.2采精前准备

5.2.1稀释液的准备

在发情鉴定当天，按照发情母驴的数量准备稀释液，力求新鲜，稀释液配好后要进行灭菌，然后在

4℃保存。在采精前半小时，将稀释液置于37℃水浴锅中预热待用。

5.2.2采精器具的准备

采精所用的器具及相关用品，提前清洗消毒，安装假阴道时，将内胎两头翻转套在外壳的两端，并

用橡胶圈加以固定，然后用70%酒精对内部进行消毒，放入35℃恒温箱中备用。

5.2.3发情母驴的准备

挑选发情母驴，要求性情温顺，将母驴牵到采精大厅拴系在栏柱上，用清水冲洗母驴臀部和外阴部，

可收集发情母驴尿液以刺激公驴性欲。

2

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5.3精液采集

5.3.1假阴道的准备

预先向安装好的假阴道夹层中灌入40℃～42℃热水，灌注量以假阴道夹层体积的2/3为宜，到采

精时假阴道内温度为38℃左右。假阴道内腔压力主要靠充气来调节，可根据采精公驴阴茎大小进行调

整，假阴道在灌水充气后，内胎呈“Y”型，入口为较浅的漏斗状为宜。采精前将润滑剂均匀涂抹在假

阴道入口至内胎1/3深处，或者在采精前用精液稀释液冲洗。假阴道结构，参见附录B.2。

5.3.2公驴外生殖器的清洗

待公驴阴茎勃起后，用0.1%高锰酸钾溶液擦洗阴茎及包皮，再用无菌温水冲洗，最后用灭菌纱布

或纸巾擦干。

5.3.3精液采集

采精时，采精员右手持假阴道把柄处，将假阴道靠在右臂肘处，当公驴爬跨时，立即站立于母驴右

后侧，迅速将阴茎导入假阴道内。阴茎插入假阴道后经几次抽动即可射精，射精后顺势使阴茎从假阴道

中退出，将假阴道的集精杯端缓慢下倾，并打开活塞放气，迅速将精液送入精液处理室进行品质鉴定和

稀释。

5.4精液品质鉴定

精液品质鉴定要求在37℃条件下进行，检查操作要迅速、轻缓，避免人为损伤精子，取样要均匀，

评定结果要准确而客观。

5.4.1精液体积

将集精杯中的精液沿装有三层专用滤纸漏斗一侧，缓缓倒入带刻度的无菌量筒中，去除精液中的灰

尘和杂质等。然后，读取量筒的数值，记录精液体积。射精量一般为30mL～150mL。

5.4.2颜色

驴精液在正常情况下为乳白色或灰白色，精子密度越高颜色越深，反之越浅。精液若出现红色、绿

色、黄褐色等异常颜色，不能用于输精。

5.4.3气味

新鲜公驴精液略带腥味，出现浓烈刺鼻性气味的精液不能用于输精。

5.4.4密度

用CASA系统直接测定或用血球计数板结合稀释倍数计算精液密度。

5.4.5活力

精液分析需在安装37℃恒温台的显微镜上进行，用CASA系统直接测定；或统计视野下直线前进运

动的精子占总精子数的比例，至少需要统计三个不同视野的数值，然后取平均数。精子活力在70%以上

的精液才可用于输精。

5.4.6畸形率

3

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公驴精液一般每一个月检查一次畸形率。用CASA系统直接测定；或者精液与姬姆萨溶液或蓝墨水

混合后在载玻片上涂片，等风干后，在显微镜下统计形态异常精子占总精子数的比例，至少需要统计三

个不同视野的数值，然后取平均数。精子畸形率不超过15%的精液才可用于输精。

5.5精液稀释

精液采集后，立即将精液等量倒入50mL离心管中，配比平衡后，放入普通离心机，在室温条件下，

1000×g离心10min。离心结束后，去除上清液至剩余体积约5mL左右。根据输精母驴数和总精子数，

确定稀释倍数（每个输精剂量为10mL，其中至少含有10亿个有效精子）。然后，缓慢加入预热的稀释

液，在稀释过程中轻轻摇动。在稀释后，缓慢将离心管颠倒3～5次，使精子和稀释液充分混匀，混匀

后再检测一次精子活力，确保精子活力没有下降。最后，分装到输精瓶或无胶塞的一次性塑料注射器中，

即可进行输精。注意，在整个处理和运输过程中，防止剧烈震荡而导致的精子畸形率上升。

6输精

输精应在专门的配种室进行。发情母驴在保定后，将尾部缠绕吊起，掏除直肠里的宿粪。先用含中

性皂液的清水洗涤母驴外阴部粪污，再用清水冲洗，擦干后消毒，准备输精。输精管可以用牛输精枪外

套，或猪子宫深部输精软管，要求无菌。输精时，输精员站在母驴后侧，右手并拢呈锥形，将输精管尖

端夹持于食指与中指间，手心略向左下方伸入阴道，并缓慢向前触摸子宫颈口，用拇指轻轻捅开子宫颈，

顺势将输精管插入子宫颈内约10cm处，挤压精液分装软瓶或推动注射器，将精液缓慢注入子宫内，然

后拉出输精管，并轻轻按摩子宫颈，防止精液回流。母驴在输精后48h检查排卵状况，如果没有排卵

还需要再输精一次，直至排卵。

7妊娠鉴定

妊娠鉴定在输精后的第21天进行。妊娠鉴定时将待检母驴保定，利用直肠B型超声波诊断仪检查

子宫体、子宫角和卵巢，操作方法同母驴发情鉴定。妊娠母驴卵巢上有黄体，胚胎显示为黑色圆球，并

在子宫腔内游离；已附植的胚胎显示为黑色囊泡，胎儿为白色悬挂于子宫内壁。胚胎发育参见附录B.3。

8数据记录

详细记录母驴的卵泡发育情况、公驴精液品质及配种妊娠等情况，记录格式参见附录A。

9废弃物无害化处理

母驴人工授精过程中产生的废弃物处理按GB/T39171—2020执行。

4

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附录A

（资料性）

母驴人工授精操作记录表

A.1母驴发情检查与配种记录

记录表的格式见表A.1。

表A.1母驴发情检查与配种记录表

下次

卵巢子宫输精施用药物

日期序号耳号检查其他

左侧右侧情况公驴号剂量时间名称剂量时间

1

2

A.2公驴精液采集与处理记录

记录表的格式见表A.2。

表A.2公驴精液处理与输精记录表

采精日期序号耳号射精量精子密度活力畸形率稀释倍数配种数配种母驴号妊娠母驴号

1

2

A.3母驴妊娠检查记录

记录表的格式见表A.3。

表A.3母驴妊娠检查记录表

卵巢

日期