DB34∕T 3991-2021 禽蛋中替米考星残留的测定 高效液相色谱法

ICS67.050

CCSX04

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安徽省地方标准

DB34/T3991—2021

禽蛋中替米考星残留的测定高效液相色

谱法

Determinationoftilmicosinresiduesinegg-highperformanceliquidchromatography

2021-09-03发布2021-10-03实施

安徽省市场监督管理局发布

DB34/T3991—2021

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定

起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。

本文件由安徽省兽药饲料监察所提出。

本文件由安徽省农业农村厅归口。

本文件起草单位：安徽安丰堂动物药业有限公司、安徽省兽药饲料监察所、利辛县双飞养殖专业合

作社、安徽省动物卫生监督所、安徽省动物疫病预防与控制中心、安徽省农科院畜牧兽医研究所、桐城

市畜牧兽医管理中心、宣州区畜牧兽医管理局。

本文件主要起草人：张莉、刘红云、张士卿、苗文萍、章天霞、蔡一杰、郑举、吴蕾、李珲、王雨

霜、刘文文、王群、马瑞钰、丁常宏、杜腾飞。

I

DB34/T3991—2021

禽蛋中替米考星残留的测定高效液相色谱法

1范围

本文件规定了禽蛋中替米考星残留检测的试样制备及高效液相检测方法。

本文件适用于禽蛋中替米考星的残留测定。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，

仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本

文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

3术语和定义

本文件没有需要界定的术语和定义。

4原理

试样中的替米考星加乙腈经涡旋匀浆后离心取上清液，正己烷液液分配去脂，固相萃取柱净化，旋

转蒸发浓缩，经色谱柱梯度洗脱分离，用紫外检测器检测，以保留时间进行定性，外标法定量。

5试剂和材料

5.1用水符合GB/T6682中一级用水的规定。

5.2甲醇：色谱纯。

5.3乙腈：色谱纯。

5.4正己烷：分析纯。

5.5无水硫酸钠：分析纯。

5.6磷酸：分析纯。

5.7二丁胺：分析纯。

5.8氢氧化钠：分析纯。

5.9替米考星对照品：≥95.0％。

5.10固相萃取柱：HLB（6mL，200mg）或同等柱效。

5.11替米考星标准溶液的制备：取替米考星对照品25.0mg，精密称定，置25mL容量瓶中，加乙

腈制成每1mL中含1mg的溶液，精密量取5mL，置25mL量瓶中，用磷酸溶液稀释至刻度，摇匀，

制成0.2mg/mL的标准储备液。在试验中用磷酸溶液配置成不同浓度的标准工作液，现配现用。

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5.12磷酸溶液的配制：取水900mL，加磷酸5.71g，用12.5mol/L氢氧化钠溶液调节pH值至2.5

±0.1，加水至1000mL。

5.1312.5mol/L氢氧化钠溶液的配制：称取50g氢氧化钠，溶于水，加水稀释至100mL。

5.14乙腈饱和的正己烷的配制：取100mL的正己烷加入10mL的乙腈，充分振荡混合后，上层溶液

为乙腈饱和的正己烷。

5.15磷酸二丁胺缓冲液：取二丁胺16.8mL，加磷酸溶液（1→10）70mL，边加边搅拌，放冷后，

用磷酸调节pH至2.5±0.1，加水至100mL。

6仪器和设备

6.1高效液相色谱仪(配有紫外检测器或二级管阵列检测器、柱温箱)。

6.2分析天平：感量0.1mg、0.01mg。

6.3离心机：低温冷冻离心机（≥6770G）。

6.4超声波清洗机。

6.5涡旋混合机。

6.6微孔滤膜：孔径0.45μm纤维素滤膜。

6.7旋转蒸发器。

7试样的制备

取待测新鲜的禽蛋去壳，充分搅拌，匀质。于-18℃以下保存。

8分析步骤

8.1提取

称取5g±0.05g试样，置于50mL离心管中，用10mL乙腈匀浆5min，高速冷冻6770G离

心10min，移取上清液于50mL离心管中。离心管中的残渣再用10mL乙腈重复提取，合并上清液。

在合并的上清液中加入无水硫酸钠3.0g，乙腈饱和的正己烷20mL，涡旋1min，6770G离心10min，

弃去上层正己烷。取下层溶液备用。

8.2净化

将HLB固相萃取柱分别用5mL甲醇和乙腈依次润洗，加入提取液5mL，过柱，弃去淋洗液，用

5mL乙腈进行洗脱，收集洗脱液于茄形瓶中，于40℃旋转蒸发至近干，浓缩液加入1.00mL磷酸溶

液溶解，过0.45µm滤膜后，转移至2mL进样瓶中，待测定。

8.3测定

8.3.1高效液相色谱条件

色谱柱：ODSC18(4.6mm×250mm，5μm)。

流动相：水—磷酸二丁胺缓冲液（975：25）为流动相A，乙腈为流动相B，按表1程序进行梯度洗

脱。

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流速：1.0mL/min。

柱温：30℃。

检测波长：280nm。

进样量：10μL。

表1梯度洗脱程序

时间流动相A流动相B

（min）（％）（％）

08218

306040

328218

408218

8.3.2取试样溶液、标准溶液上机测定，按外标法以峰面积定量，标准溶液及试样溶液中替米考星峰

面积均应在仪器检测的线性范围内（见附录A）。

8.4空白实验

在不含替米考星的试样，采用完全相同的测定步骤进行测定（见附录A）。

8.5结果的计算与表述

试料中替米考星残留量（μg/kg）按公式(1)计算：

·········································································(1)

式中：

X——供试试样中替米考星含量，单位为微克/每千克（μg/kg）；

C——经标准曲线求得的试样溶液中替米考星浓度，单位为微克/每毫升（μg/mL）；

m——试样质量，单位为克（g）；

V——定容体积，单位为毫升（mL）

f——稀释倍数

注：结果表示——平行测定结果用算术平均值表示，计算结果保留3位有效数字。

9检测方法的灵敏度、准确度和精密度

9.1灵敏度

本方法检出限为2µg/kg，定量限为20µg/kg。

9.2准确度

本方法在20μg/kg～100μg/kg添加浓度水平上的回收率为70％～110％。

9.3精密度

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本方法的批内变异系数CV％≤10％，批间变异系数CV％≤15％。

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附录A

（资料性）

空白样品添加替米考星对照品溶液和空白样品色谱图

空白样品添加替米考星对照品溶液和空白样品色谱图见图A.1、图A.2。

图A.1空白样品中添加1.0ng/mL替米考星色谱图（峰