DB23∕T 3318-2022 元蘑液体菌种生产技术规程

ICS65.020.01

CCSB05

DB23

黑龙江省地方标准

DB23/T3318—2022

元蘑液体菌种生产技术规程

2022-08-22发布2022-09-21实施

黑龙江省市场监督管理局发布

DB23/T3318—2022

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起

草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。

本文件由黑龙江省林业和草原局提出。

本文件起草单位：哈尔滨学院、哈尔滨职业技术学院、鹤岗市十八号林场、绥棱具国有林场三吉台

林场、逊克县林业工作总站、黑龙江省知识产权保护中心。

本文件主要起草人：孙婷婷、刘瑞鹏、高静波、赵妍、李贵军、杜鹏禹、张春红、刘增才、李亚伟、

耿楠楠。

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元蘑液体菌种生产技术规程

1范围

本文件规定了元蘑（Hohenbueheliaserotina）液体菌种生产的环境条件要求、生产车间的设计、

生产仪器和设备、菌种选择、母种制备、摇瓶液体种制备、发酵罐空消、制备发酵罐液体种培养基、发

酵罐液体种的接种、发酵罐液体种培养条件、发酵罐液体种检测、发酵罐液体种质量要求和生产档案。

本文件适用于元蘑液体菌种生产。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，

仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本

文件。

GB/T150.1压力容器第1部分：通用要求

GB/T1921工业蒸汽锅炉参数系列

GB5749生活饮用水卫生标准

GB/T11165实验室pH计

GB/T13554高效空气过滤器

GB19153容积式空气压缩机能效限定值及能效等级

GB50073洁净厂房设计规范

NY/T528食用菌菌种生产技术规程

3术语和定义

本文件没有需要界定的术语和定义。

4环境条件要求

应符合NY/T528的规定。

5生产车间的设计

应符合GB50073的规定。

6生产仪器和设备

生产仪器设备要求如下：

a）液体种发酵罐质量应符合GB150.1的规定；

b）空气压缩机质量应符合GB19153的规定；

c）空气过滤器质量应符合GB/T13554的规定；

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d）pH计质量应符合GB/T11165的规定；

e)蒸汽锅炉质量应符合GB/T1921的规定；

f）超净工作台、高压蒸汽灭菌锅、恒温培养箱、恒温振荡培养箱、冰箱、显微镜、液体菌种接种

枪、磅秤、天平应符合NY/T528的规定。

7菌种选择

选择菌丝生长健壮、产量高、抗逆性强、抗杂菌能力强的菌种。

8母种制备

8.1母种培养基的制作

制作马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA），装入试管（18mm×180mm或20mm×200mm）中，

分装量应为试管长度的1/5～1/4，应使用棉塞或硅胶塞封口，其中棉塞应使用梳棉，不应使用脱脂棉。

将试管放入高压蒸汽灭菌锅中，在0.105Mpa～0.125Mpa下灭菌30min。灭菌后摆放成的斜面培养基

顶端应距试管口≥50mm。

8.2接种与培养

在无菌条件下，用接种钩取黄豆粒大小的初始菌种接种在母种培养基上。母种培养的温度应为22℃

±1℃，空气相对湿度控制在65%～75%，通风、避光培养8d～10d。

9摇瓶液体种制备

9.1摇瓶液体种培养基配方

推荐培养基配方：葡萄糖20g、玉米粉10g、酵母粉5g、蛋白胨3g、磷酸二氢钾2g、硫酸镁

1g、水1000mL。水的质量应符合GB5749的规定。

9.2摇瓶液体种培养基的制作、灭菌

将配方中的原料充分混合均匀，装入500mL或1000mL、耐126℃高温、无色或近无色的玻璃三

角瓶中，装液量宜为三角瓶体积的1/4，用16cm×16cm聚乙烯透气封瓶膜封口。在0.105Mpa～0.125

Mpa下灭菌30min。

9.3摇瓶液体种的接种与培养

在无菌条件下，用接种铲将1/4～1/3的斜面母种接入摇瓶液体培养基中，置于恒温振荡培养箱，

在22℃以140r/min振荡培养5d～7d。

10发酵罐空消

发酵罐初次使用，或出现染菌，或长期放置时，应检查发酵罐上全部阀门和压力表，进行空消。空

消时罐内蒸汽压力应控制在0.105Mpa～0.125Mpa、温度应控制在121℃～124℃灭菌40min。

11制备发酵罐液体种培养基

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11.1发酵罐液体种培养基配方

在9.1配方的基础上应加入2.9mL/L的消泡剂（如豆油）。

11.2初始pH值

pH值为5.5～6.0。

11.3投料与定容

将11.1中的原料按比例充分混合均匀，倒入发酵罐中，加水定容至罐体总容积的65%～70%，拧紧

上料口盖。

11.4灭菌

液体种发酵罐内蒸汽压力控制在0.105Mpa～0.125Mpa，温度控制在121℃～124℃灭菌40min。

11.5冷却

灭菌结束后应将冷水通入发酵罐夹层或者内置冷却系统中循环，使培养基降温至22℃～24℃。

降温过程中应及时向发酵罐内通入无菌风。

12发酵罐液体种的接种

用带有手柄的内径略大于接种口的铁丝圈缠绕纱布，蘸上95%的酒精，套在接种口上点燃。打开摇

瓶液体种封瓶膜，用火焰灼烧瓶口30s～40s，打开接种口盖，将摇瓶液体种迅速倒入罐中，接种量

为培养基体积的0.1%～0.2%。迅速盖好接种口，拧紧。

13发酵罐液体种培养条件

13.1通气量

每升发酵液宜通入无菌空气0.04m3/h～0.06m3/h。

13.2罐压

保持在0.03Mpa～0.05Mpa。

13.3培养温度

宜控制在22℃±1℃。

13.4培养时间

宜控制在5d～7d。

14发酵罐液体种检测

14.1取样

接种2d后进行检测，用酒精火焰灼烧取样阀30s～40s，弃掉最初流出的少量液体种，取30mL～

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50mL液体种放入无菌150mL三角瓶中，塞紧棉塞。取样后应用酒精火焰把取样阀烧干。

14.2检测

对14.1所取样品在PDA平板培养基上画线培养，在22℃±1℃下培养2d～3d，每天观察菌落

生长情况，若PDA平板培养基上没有杂菌生长，则表明菌种合格。用显微镜检测菌丝生长发育状态。

15发酵罐液体种质量要求

15.1感官指标

应符合表1的要求。

表1发酵罐液体种感官指标

项目指标

菌液色泽球状菌丝体呈乳白色，滤液呈黄棕色

菌液形态菌液澄清透明不浑浊，稍粘稠，有大量球状菌丝体悬浮、分布均匀、不迅速分层

菌液气味有元蘑菌种培养时特有的香味，无异味，发酵罐排气口气味正常

15.2理化指标

应符合表2的要求。

表2发酵罐液体种理化指标

项目指标

pH值3.5~5.5

菌丝湿重（g／100mL）≥5

显微镜下菌丝形态菌丝粗壮，有球状和丛状菌丝，分布均匀

样品无菌检查