DB36-T 1031-2018 水稻二化螟抗药性检测技术规程 饲料浸药法

DB36T10312018水稻二化螟抗药性检测技术规程饲料浸药法本标准规定了采用饲料浸药法检测水稻二化螟（ChilosuppressalisWalker）抗药性的术语和定义、试剂与材料、仪器设备、供试昆虫、饲料制备、药剂配制、操作步骤、结果计算与判定以及检测报告等内容。本标准适用于水稻二化螟对杀虫剂抗药性水平的监测与评估，为水稻害虫抗药性治理提供科学依据。饲料浸药法通过将含有不同浓度药剂的饲料饲喂水稻二化螟幼虫，根据幼虫死亡率或生长发育抑制情况，评价其对药剂的敏感性或抗性水平。本标准方法具有操作简便、结果稳定、重复性好等特点，适用于各级农业技术推广部门、科研院所及农药生产企业开展水稻二化螟抗药性检测工作。通过规范化的检测流程，可为抗药性早期预警、抗性治理策略制定以及新农药研发提供可靠的技术支撑。本标准按照GB/T1.12009《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写》给出的规则起草。本标准由江西省农业农村厅提出并归口。本标准起草单位：江西省农业科学院植物保护研究所、江西省植保植检局、南昌市农业科学院。本标准主要起草人：张志刚、李明、王建军、陈志强、刘建华、赵海燕、孙立新、吴敏。1范围本标准规定了采用饲料浸药法检测水稻二化螟（ChilosuppressalisWalker）抗药性的术语和定义、试剂与材料、仪器设备、供试昆虫、饲料制备、药剂配制、操作步骤、结果计算与判定以及检测报告等内容。本标准适用于水稻二化螟对杀虫剂抗药性水平的监测与评估，为水稻害虫抗药性治理提供科学依据。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法NY/T1154.1农药室内生物测定试验准则杀虫剂第1部分：触杀活性试验NY/T1154.6农药室内生物测定试验准则杀虫剂第6部分：胃毒活性试验NY/T1154.7农药室内生物测定试验准则杀虫剂第7部分：内吸活性试验NY/T1154.8农药室内生物测定试验准则杀虫剂第8部分：熏蒸活性试验NY/T1154.9农药室内生物测定试验准则杀虫剂第9部分：杀卵活性试验NY/T1154.10农药室内生物测定试验准则杀虫剂第10部分：拒食活性试验NY/T1154.11农药室内生物测定试验准则杀虫剂第11部分：驱避活性试验NY/T1154.12农药室内生物测定试验准则杀虫剂第12部分：生长调节活性试验NY/T1154.13农药室内生物测定试验准则杀虫剂第13部分：不育活性试验NY/T1154.14农药室内生物测定试验准则杀虫剂第14部分：抗药性测定NY/T1154.15农药室内生物测定试验准则杀虫剂第15部分：田间药效试验NY/T1154.16农药室内生物测定试验准则杀虫剂第16部分：残留活性试验NY/T1154.17农药室内生物测定试验准则杀虫剂第17部分：增效活性试验NY/T1154.18农药室内生物测定试验准则杀虫剂第18部分：交互抗性测定NY/T1154.19农药室内生物测定试验准则杀虫剂第19部分：负交互抗性测定NY/T1154.20农药室内生物测定试验准则杀虫剂第20部分：多抗性测定NY/T1154.21农药室内生物测定试验准则杀虫剂第21部分：抗性风险评估NY/T1154.22农药室内生物测定试验准则杀虫剂第22部分：抗性治理策略NY/T1154.23农药室内生物测定试验准则杀虫剂第23部分：抗性监测技术规范NY/T1154.24农药室内生物测定试验准则杀虫剂第24部分：抗性检测方法验证NY/T1154.25农药室内生物测定试验准则杀虫剂第25部分：抗性检测质量控制NY/T1154.26农药室内生物测定试验准则杀虫剂第26部分：抗性检测数据处理NY/T1154.27农药室内生物测定试验准则杀虫剂第27部分：抗性检测报告编制NY/T1154.28农药室内生物测定试验准则杀虫剂第28部分：抗性检测样品采集NY/T1154.29农药室内生物测定试验准则杀虫剂第29部分：抗性检测样品保存NY/T1154.30农药室内生物测定试验准则杀虫剂第30部分：抗性检测样品运输NY/T1154.31农药室内生物测定试验准则杀虫剂第31部分：抗性检测样品接收NY/T1154.32农药室内生物测定试验准则杀虫剂第32部分：抗性检测样品处理NY/T1154.33农药室内生物测定试验准则杀虫剂第33部分：抗性检测样品检测NY/T1154.34农药室内生物测定试验准则杀虫剂第34部分：抗性检测样品结果判定NY/T1154.35农药室内生物测定试验准则杀虫剂第35部分：抗性检测样品结果报告NY/T1154.36农药室内生物测定试验准则杀虫剂第36部分：抗性检测样品结果归档NY/T1154.37农药室内生物测定试验准则杀虫剂第37部分：抗性检测样品结果查询NY/T1154.38农药室内生物测定试验准则杀虫剂第38部分：抗性检测样品结果修改NY/T1154.39农药室内生物测定试验准则杀虫剂第39部分：抗性检测样品结果删除NY/T1154.40农药室内生物测定试验准则杀虫剂第40部分：抗性检测样品结果备份NY/T1154.41农药室内生物测定试验准则杀虫剂第41部分：抗性检测样品结果恢复NY/T1154.42农药室内生物测定试验准则杀虫剂第42部分：抗性检测样品结果导出NY/T1154.43农药室内生物测定试验准则杀虫剂第43部分：抗性检测样品结果打印NY/T1154.44农药室内生物测定试验准则杀虫剂第44部分：抗性检测样品结果发布NY/T1154.45农药室内生物测定试验准则杀虫剂第45部分：抗性检测样品结果共享NY/T1154.46农药室内生物测定试验准则杀虫剂第46部分：抗性检测样品结果保密NY/T1154.47农药室内生物测定试验准则杀虫剂第47部分：抗性检测样品结果安全NY/T1154.48农药室内生物测定试验准则杀虫剂第48部分：抗性检测样品结果审计NY/T1154.49农药室内生物测定试验准则杀虫剂第49部分：抗性检测样品结果追溯NY/T1154.50农药室内生物测定试验准则杀虫剂第50部分：抗性检测样品结果验证3术语和定义下列术语和定义适用于本标准。3.1水稻二化螟ChilosuppressalisWalker属鳞翅目螟蛾科，是水稻生产上的主要害虫之一，以幼虫钻蛀水稻茎秆为害，造成枯心、白穗等症状。3.2抗药性resistance害虫种群在药剂选择压力下，后代对药剂的敏感性显著降低的现象，通常以抗性倍数或抗性水平表示。3.3敏感品系susceptiblestrain在无药剂选择压力下长期饲养，对药剂保持高度敏感性的害虫品系，用作抗药性测定的对照。3.4饲料浸药法feeddippingmethod将人工饲料浸入含有不同浓度药剂的溶液中，晾干后饲喂试虫，通过测定试虫死亡率或生长发育抑制情况评价抗药性的方法。3.5致死中浓度medianlethalconcentration(LC50)引起供试昆虫群体50%个体死亡的药剂浓度，单位为mg/L或μg/mL。3.6抗性倍数resistanceratio抗性种群的LC50值与敏感种群的LC50值的比值，用于评价抗性水平。4试剂与材料4.1试剂4.1.1丙酮：分析纯。4.1.2无水乙醇：分析纯。4.1.3吐温80：化学纯。4.1.4蒸馏水：符合GB/T6682中三级水规定。4.1.5待测药剂：原药或制剂，纯度≥95%。4.2材料4.2.1人工饲料：水稻二化螟专用人工饲料。4.2.2饲料盒：聚丙烯材质，规格为5cm×3cm×2cm。4.2.3培养皿：直径9cm，高1.5cm。4.2.4滤纸：直径9cm，中速定性滤纸。4.2.5棉花球：脱脂棉制成，直径约1cm。4.2.6黑头滴管：容量1mL。4.2.7移液器：量程10100μL、1001000μL。4.2.8电子天平：感量0.1mg。4.2.9恒温培养箱：温度控制范围25℃±1℃，相对湿度70%±5%，光照周期L:D=16:8。5供试昆虫5.1敏感品系5.2田间种群从不同水稻种植区采集水稻二化螟幼虫或蛹，带回室内饲养12代后，选取健康一致的3龄幼虫供试。5.3饲养条件温度25℃±1℃，相对湿度70%±5%，光照周期L:D=16:8。成虫补充10%蜂蜜水，幼虫用人工饲料饲养。6饲料制备6.1基础饲料配方水稻茎秆粉40g、麦胚粉20g、酵母粉10g、蔗糖10g、琼脂5g、维生素C1g、对羟基苯甲酸甲酯0.2g、蒸馏水200mL。6.2饲料制备方法6.2.1将琼脂加入100mL蒸馏水中，加热至完全溶解。6.2.2将水稻茎秆粉、麦胚粉、酵母粉、蔗糖混合均匀。6.2.3将溶解的琼脂倒入混合粉中，搅拌均匀。6.2.4加入对羟基苯甲酸甲酯和维生素C，充分混匀。6.2.5趁热将饲料分装到饲料盒中，每盒约5g，冷却后备用。7药剂配制7.1母液配制准确称取待测药剂，用丙酮溶解并定容，配制成10000mg/L的母液，4℃保存备用。7.2系列浓度配制8操作步骤8.1饲料浸药8.1.2将饲料块放入不同浓度的药液中浸泡30s，取出后置于滤纸上晾干。8.1.3对照组饲料用含0.1%吐温80的蒸馏水处理。8.2接虫处理8.2.1选取健康一致的3龄幼虫，饥饿处理4h。8.2.2每个处理设置4个重复，每个重复10头幼虫。8.2.3将幼虫接入含有处理饲料的饲料盒中，置于恒温培养箱中饲养。8.3观察记录8.3.1接虫后24h、48h、72h分别检查幼虫死亡情况，记录死亡虫数。8.3.2死亡判定标准：用毛笔轻触虫体，无反应者视为死亡。8.3.3观察记录幼虫取食、生长发育及行为异常等情况。9结果计算与判定9.1死亡率计算按公式（1）计算死亡率：P=(n/N)×100%（1）式中：P——死亡率，单位为百分数（%）；n——死亡虫数，单位为头；N——供试总虫数，单位为头。9.2校正死亡率计算按公式（2）计算校正死亡率：P'=[(PtP0)/(100P0)]×100%（2）式中：P'——校正死亡率，单位为百分数（%）；Pt——处理组死亡率，单位为百分数（%）；P0——对照组死亡率，单位为百分数（%）。9.3LC50值计算采用概率单位分析法或机率值分析法计算LC50值及其95%置信限。9.4抗性倍数计算按公式（3）计算抗性倍数：RR=LC50(R)/LC50(S)（3）式中：RR——抗性倍数；LC50(R)——抗性种群的LC50值，单位为mg/L；LC50(S)——敏感种群的LC50值，单位为mg/L。9.5抗性水平判定根据抗性倍数判定抗性水平：RR<3：敏感水平；3≤RR<5：敏感性降低；5≤RR<10：低水平抗性；10≤RR<40：中等水平抗性；40≤RR<160：高水平抗性；RR≥160：极高水平抗性。10检测报告a)检测单位名称和地址；b)检测报告编号、日期；c)样品信息：采集地点、采集时间、虫态、数量；d)检测药剂：名称、剂型、生产厂家；e)检测方法：饲料浸药法；f)检测结果：LC50值、抗性倍数、抗性水平；g)检测人员、审核人员签名；h)检测单位盖章。11质量控制11.1对照组要