临床生物化学检验 第4章 临床生物化学检验的方法与试剂盒

1临床生物化学检验第四章

临床生物化学检验的方法与试剂盒第四章

临床生物化学检验的方法与试剂盒教学目标与要求掌握：

临床生物化学检验方法的分级、参考物质的分级，

临床生物化学检验方法和参考物质之间的关系，

临床生物化学检验的方法学评价内容与指标，试剂盒的性能指标与评价方法。熟悉：

临床生物化学检验的方法学评价试验的方法。了解：

临床生物化学检验试剂盒的分类和特点

，试剂盒的质量标准。2第四章

临床生物化学检验的方法与试剂盒第一节

临床生物化学检验方法分级和参考物质一、临床生物化学检验方法分级国际临床化学联合会

(IFCC)根据分析方法的准确性与精密度的不同，将其分为三级。1.决定性方法（definitive

method）：仅极个别生化项目有该方法也称一级参考方法（primaryreferencemethod）

准确度最高，

系统误差最小，其测定结果与“真值”最为接近。

包括：重量分析法、中子活化法、同位素稀释-质谱分析法

(ID-MS)等。

用于评价参考方法及与一级参考物相互验证。

技术要求高、费用昂贵。3第四章

临床生物化学检验的方法与试剂盒第一节

临床生物化学检验方法分级和参考物质一、临床生物化学检验方法分级2.参考方法（referencemethod）也称二级参考方法（secondaryreferencemethod）

：

准确度与精密度已经被充分证实、且经公认的权威机构颁布的方法。

干扰因素少，系统误差很小，

较宽的分析范围并且线性良好；重复测定中的随机误差

可以忽略不计。可溯源到决定性方法。

用于评价常规方法的性能、误差大小和干扰因素；鉴定二级参考物和为质控血清定值；

商品试剂盒的质量评价等。4第四章

临床生物化学检验的方法与试剂盒第一节

临床生物化学检验方法分级和参考物质一、临床生物化学检验方法分级3.常规方法（routinemethod）也称推荐方法（recommendedmethod）或候选的参考方法：

具有足够的精密度、准确度和特异度，有适当的分析范围。

经济实用，其性能指标符合临床或其它目的的需要。

临床生化项目的常规检测，方法不唯一。

常规方法在作出评定以后，经有关学术组织认可，可以作为推荐方法

(recommended

method)。5第四章

临床生物化学检验的方法与试剂盒第一节

临床生物化学检验方法分级和参考物质二、临床生物化学检验参考物质（一）

参考物质的分级ISO对参考物质/参考物（reference

material,RM）

作的定义：具有一种或几种理化性质已经充分确定的特性

，

可用以校准仪器、

评价测量方法或给材料赋值的一种材料或物质

。

又称标准物质、

标准物、

标准品。校

准

物

质

(calibration

material)

：

在

校

准

函

数

中

其

值

被用作自变量的参考物质，

用于对测量系统校准或对材料赋值。正确性质控物质(trueness

control

material)：

在国内多称为质控物、质控品，用于评价一种测量系统的测量偏差。参考物质6第四章

临床生物化学检验的方法与试剂盒第一节

临床生物化学检验方法分级和参考物质二、临床生物化学检验参考物质（一）

参考物质的分级ISO对参考物质

(纯的或混合的固体、液体或气体)

的分级1.一级标准品

(原级参考物)

：数值已由决定性方法确定的稳定而均一的物质，所含杂质也已定量

，属于有证参考物质

(CRM)。用于评价和校正参考方法及为“二级标准品”定值。2.二级标准品

(次级参考物)

：示值必须用一级标准品和参考方法并由训练有素、能熟练掌握参考方法的操作者确定。用于常规方法的标化和控制物的定值。7第四章

临床生物化学检验的方法与试剂盒第一节

临床生物化学检验方法分级和参考物质二、临床生物化学检验参考物质（一）

参考物质的分级NIST(美国国家标准及技术研究院)：1967，胆固醇（SRMs

，911b）截止目前：

48个标准参考物质8第四章

临床生物化学检验的方法与试剂盒第一节

临床生物化学检验方法分级和参考物质二、临床生物化学检验参考物质（一）

参考物质的分级标准品

(standard）

可用做校准品

(calibrater)

，

一般由试剂盒供应商提供和赋值

。

建

议用与新鲜血清相似的介质做校准品

，

避免基质效应

。

校准品的量值应有溯源性

，

不

同测定系统赋值不同。质控品多是成分相对稳定的混合血清

，

分为定值和非定值、

冻干或液体

，

添加了防腐

剂和保护剂等

。试剂盒供应商往往委托几家实验室在特定测定系统上测得的均值和标

准差来定值。一级标准品一般由国家标准计量局出具证书

，

是用高纯化学物质（纯度>99.98%）

直

接通过称重配制的溶液。二级标准品由参考实验室或权威学术组织出具证书

，

如SRM、

BCR、

IFCC

，

其成分

的浓度可用公认的参考方法测定。

质控品

标准品

校准品9二、临床生物化学检验参考物质（二）

参考物质与方法之间的关系

一级标准品由决定性方法定值

，用

于校正决定性方法、

评定及校正参考方法、为二级参考物定值。

二级参考物的定值源于一级参考物

和参考方法，

用于常规方法的评价、为质控物定值及常规测定的结果计算。

厂家校准物的定值源于二级参考物

和参考方法

，用于常规分析。第四章

临床生物化学检验的方法与试剂盒第一节

临床生物化学检验方法分级和参考物质一级标准品

决定性方法—

参考方法二级标准品校准品常规分析常规方法溯

源校

准10第四章

临床生物化学检验的方法与试剂盒第一节

临床生物化学检验方法分级和参考物质二、临床生物化学检验参考物质（二）

参考物质与方法之间的关系常规方法的选择原则1.

实用性

一般应具备微量、快速、费用低廉、应用安全。2.可靠性

一般具有较高的精密度和准确度，以及较大的检测范围。一般情况下，精密度（CV）应小于5%。准确度（偏差系数）应小于5%。11第四章

临床生物化学检验的方法与试剂盒第二节

临床生物化学检验方法的性能评价一、方法学性能评价的内容Evaluationofmethodology：通过实验途径来评价候选方法的性能是否能满足预期要求。1.

总误差

(total

error,

TE)：从样本收集开始到发出报告所有来源的检验误差，

由不精密度(随机误差)和偏倚(系统误差)组成。2.

精密度(precision)：在规定条件下对同一样本多次重复测量结果之间的接近程度。常用标准差

(s)和变异系数(CV)表示测定结果的不一致性，

即不精密度。基本性能指标。3.

正确度

(trueness)：大批测量结果的均值与真值的一致程度。用“偏倚”(bias)

表示。准确度(accuracy)

：单次测量结果与真值之间的一致程度。4.

分析灵敏度

(analytic

sensitivity)：校准曲线的斜率

，空白限

(limit

of

blank,

LoB)、

检出限

(limitofdetection,

LoD)和定量检出限

(limitofquantitation,

LoQ)是描述灵敏度的指标。12第四章

临床生物化学检验的方法与试剂盒第二节

临床生物化学检验方法的性能评价一、方法学性能评价的内容5.分析测量范围

(analytic

measurement

range,AMR)：患者样本未经任何处理

(稀释、浓缩等)

由检测系统直接测量得到的可靠范围

，也称线性范围(linear

range)。临床可报告范围(clinical

reportable

range,CRR)：定量检测项目向临床能报告的检测范围

，样本可经稀释、浓缩或其他预处理。6.

干扰

(interference)：测定某分析物的浓度或活性时

，受其他非分析物影响而导致测定结果增高（正干扰）或降低（负干扰）

。干扰影响测量的准确度。7.基质效应

(matrixeffect)：样本中除分析物之外的样品理化性质对分析物测量结果的影响。基质偏差（matrix

bias）

：调查偏差与校准偏差之差

，是用于描述基质效应的指标。通常认为新鲜血清、决定性方法或参考方法无基质效应。13NCCLS（美国国家临床实验室标准委员会，

1967）

CLSI

（美国临床和实验室标准研究院，

2005）先后制订了一系列评价方案(evaluation

protocols

，

EP)

精密度评价：

EP5-A2

线性范围评价：

EP6-A

干扰试验：

EP7-A2

方法对比评价：

EP9-A2

定量方法的初步评价：

EPEP10-A2

定性方法的评价：

EP12-A

基质效应评价：

EP14-A2第四章

临床生物化学检验的方法与试剂盒第二节

临床生物化学检验方法的性能评价二、方法学评价试验分析误差的类型评价试验初步试验最后试验随机误差

(RE)批内重复性试验天间重复性试验恒定误差

(CE)干扰试验方法比较试验比例误差

(PE)回收试验*购进一条新生化仪，需评价精密度、正确度和分析测量范围；*评价一个新方法，则需评价其全部内容。评价实验的过程就是对误差的测定14第四章

临床生物化学检验的方法与试剂盒第二节

临床生物化学检验方法的性能评价二、方法学评价试验（一）

重复性试验

目的：

测定候选方法的随机误差，评价方法的精密度。

指标：

变异系数CV、标准差。CV越小，精密度越好，反之则差，故称其为不精密度。

推荐标准：美国国会1988年临床实验室修正案（clinical

laboratory

improvement

amendment，

CLIA

′88）推荐的常规化学分析项目允许误差

(EA)

:一般情况下，

EA是医学决定水平（Xc）与CLIA′88推荐的可接受性能的1/4的乘积

，不同的医学决定水平有不同的EA。

普通标准：

1.96s

≤EA

，可以初步接受。依据是95%的随机误差值为1.96s。15第四章

临床生物化学检验的方法与试剂盒第二节

临床生物化学检验方法的性能评价二、方法学评价试验（一）

重复性试验1.评价前准备①熟悉评价对象和评价方案。②

试验用试剂应是同批次配制

，或同一批号的商品试剂盒和参考物

，仪器也应处于良好的工作状态。③

试验用样品一般选择2个（亦可更多）

，一个在参考范围或在医学决定水平附近

，另一个

为异常值（被测物在疾病时增高用高值，

降低时用低值）

；试验样品的介质应与临床样品

一致

，并应妥善保存

，应保证在整个试验过程中稳定。④

先作一个初步的批内精密度测定（

一个样品重复测定20次计算均值、标准差和变异系

数）

，如果批内精密度不符合生产厂家规定的质量标准

，则联系厂家对仪器进行修理或保养

，直到批内精密度符合生产厂家规定的质量标准才能进行下面的试验。16第四章

临床生物化学检验的方法与试剂盒第二节

临床生物化学检验方法的性能评价二、方法学评价试验（一）

重复性试验2.评价步骤用2个样品每天测定2批，批间测定间隔不得少于2h。每批测定均作2份，至少共测定20天。每批测定至少做一个质控。3.批内精密度计算公式

n−1

nΣXi

−

(ΣXi

)

22CV批内（%）

=ΣXi

n

100sx

x

=s

=17

天

数

结果1

结

均值批1

结果1

结

均值批2

日平均值

…

表2.

中间计算结果表

批1

批2天数

（均值批1-均值批2）21

…

Sums

(1)(2)

(3)

1果批果2批1理析整分据计数统①4.第四章

临床生物化学检验的方法与试剂盒第二节

临床生物化学检验方法的性能评价二、方法学评价试验（一）

重复性试验

表1.

原始试验数据整理表

（结果1

－结果2

）2

（结果1

－结果2

）2

18第四章

临床生物化学检验的方法与试剂盒第二节

临床生物化学检验方法的性能评价二、方法学评价试验（一）

重复性试验4.统计分析②统计计算：首先计算参数A、

B和Sr，然后计算批内、批间、天间和总变异系数。B

=

(Xi••

−

X•••)

I−12A=2IB：天间变异估计值Xi••

：第

i天全部测定的平均值(Xi1

•

−

Xi2

•

)2Xi2

•

：第

i天第2批测定的平均值Xi1

•

：第

i天第1批测定的平均值A：批间变异估计值

；I:总天数X•••

：

测定总均值19第四章

临床生物化学检验的方法与试剂盒第二节

临床生物化学检验方法的性能评价二、方法学评价试验（一）

重复性试验Sr

：批内标准差J

:每天测定的样品数（共2个）Xij1

：第

i天内样品J的第一次测定结果Xij2

：第i天内样品J的第二次测定结果Srr

：批间标准差sr

=4.统计分析②统计计算：首先计算参数A、B和Sr，然后计算批内、批间、天间和总变异系数。CV批间(%)=CV天间(%)=s

r

=

A2−

r2s

d

=

B2

−

d2rr

dd

r

100X•••σ

=

1

1

(Xij1

−Xij2

)24IiISdd

：天间标准差S

2dd

100X•••

100

S

2r

100X•••CV批内(%)=S2

+

S2

+

S2CV总(%)=20第四章

临床生物化学检验的方法与试剂盒第二节

临床生物化学检验方法的性能评价二、方法学评价试验（二）

方法对比试验

目的：测定候选方法的比例系统误差和恒定系统误差。评价方法的正确度/准确度。

采用的方法：方法比较试验（按EP9-A2方案进行）。

指标：

相关系数

采用的比较方法要求：参考方法或推荐方法。如无参考方法或推荐方法，

公认的常规方法须具备：①比候选方法有更好的精密度。②干扰已知。③与候选方法使用相同的计量单位。21第四章

临床生物化学检验的方法与试剂盒第二节

临床生物化学检验方法的性能评价二、方法学评价试验（二）

方法对比试验1.比较前准备和评价步骤①比较前准备

应熟悉所用的仪器、候选方法、

比

较方法和评价方案。

试验样品：

应收集新鲜的正常和异

常的临床样品

，应有足够宽的浓度

范围

，各浓度应有合适的比例(见

表3)

，样本应妥善保管

，在稳定期内测定。表3.

方法比较试验中资料分配的建议22第四章

临床生物化学检验的方法与试剂盒第二节

临床生物化学检验方法的性能评价二、方法学评价试验（二）

方法对比试验1.比较前准备和评价步骤

样品数至少为40个；

每个样品用2种方法分别作双份测定（样本量要足够）

；

每天测定8个样品，双份测定时：

第一次按顺序1，

2······7

，8，第二次8，

7······2，

1，共测试5天。23第四章

临床生物化学检验的方法与试剂盒第二节

临床生物化学检验方法的性能评价二、方法学评价试验（二）

方法对比试验样品号(i)

Xi1比较方法（X）试验方法（Y）Xi2

DXi

DXi’Yi1

Yi2

DYiDYi’1Xi1/2表示第i号样品第1次/第2次用比较方法测定的结果Yi1/2表示第i号样品第1次/第2次用候选方法测定的结果2.统计分析①数据整理表4.

方法对比试验数据整理4024…（二）

方法对比试验2.统计分析②离群点的检查超过控制限的数据为离群点数据。

只有1个离群点数据，

可直接剔除

后进行统计

出现2个或以上的离群点，

应查找

原因后剔除、补做。第四章

临床生物化学检验的方法与试剂盒第二节

临床生物化学检验方法的性能评价二、方法学评价试验25第四章

临床生物化学检验的方法与试剂盒第二节

临床生物化学检验方法的性能评价二、方法学评价试验（二）

方法对比试验2.统计分析③候选方法（Y）与比较方法（X）相关回归分析相关系数r

的计算：Xij表示第i号样品第j次用比较方法测定的结果Yij表示第i号样品第j次用候选方法测定的结果X/Y表示全部样品用比较方法/候选方法测定的均值r

=

σ

σ(Xij

−X)(Yij

−Y)

σ

σ(Xij

−X)2

σ

σ(Yij

−Y)2r

≥

0.975或决定系数

r2

≥

0.95，说明两方法的相关性良好σ

σ(Xij

−X)(Yij

−Y)

b

=

σ

σ(Xij

−X)2回归方程的计算：Y=a+bXa=

Y

－

(b×

X

)26第四章

临床生物化学检验的方法与试剂盒第二节

临床生物化学检验方法的性能评价二、方法学评价试验（三）

线性范围试验

目的：

判断对某一分析方法测得的浓度或活性值与设定的浓度或活性值之间的比例关系的范围。

常规方法应具有较宽的分析范围

，至少应包含95％的临床样

本

，包括临床可能出现的最高值和最低值。线性范围（linearrange）

：检测信号与被测物浓度呈线性时的被测物浓度范围。测量范围（measuring

range

，分析范围）：在允许误差极限内所能检测的被测物浓度范围。27第四章

临床生物化学检验的方法与试剂盒第二节

临床生物化学检验方法的性能评价二、方法学评价试验（三）

线性范围试验1.评价前准备：按EP6-A方案进行。①熟悉仪器、评价方案和试剂。②

评价样品的介质应与实际测定的样品一致

，理想的样品是病人的低值或高值样品（不易收集到）

。高值样品可用患者的混合样品加入分析物

，用正常人样品作为低值样品。③

线性评价应至少有5个不同浓度：

可选择低值和高值样品各一个

，低值样品为1号，高值样品为5号；二者按体积3:1混匀为2号

，等份混匀为3号，

1:3混匀为4号

，形成系列

评价样品。2.

测定样本：至少5个不同浓度的样品

(X)

随机排列；每个样品重复测定4次

(Y)；要求分析在当天完成。28第四章

临床生物化学检验的方法与试剂盒第二节

临床生物化学检验方法的性能评价二、方法学评价试验（三）

线性范围试验3.统计分析(1)数据整理与离群点的检查：4次重复测定结果由高到低排序（见表5）。(2)多项式线性回归分析：首先假设数据是非线性的。(3)组内变异试验：计算各组内变异均方差(SS组内)，判断组内变异是否可接受计算公式：SS组内

=∑Y2

–

(∑Y)2/4；

P

=最大SS组内/总SS组内

若

P>

P0.05

，则组内变异可接受。(4)线性失拟误差（lackoffit,

LOF）检查：对非线性误差的估计称为LOF。计算公式：

LOF

=SS剩

–总SS组内

[SS剩

（剩余平方和）=

SS总

–总SS回]方差

F

=

5LOF/总SS组内29第四章

临床生物化学检验的方法与试剂盒第二节

临床生物化学检验方法的性能评价二、方法学评价试验（三）

线性范围试验3.统计分析多项式线性回归分析分为两步：

第一步判断非线性多项式拟合数据是否比线性好。

第二步是当非线性多项式拟合数据点比线性好时，判断最适非线性模型与线性拟

合之间的差值是否小于预先设定的该方法的允许偏差。如：预设精密度和线性的允许误差分别设为2%和5%。30二、方法学评价试验（三）

线性范围试验3.统计分析一次多项式模型：直线

，这是判断某种方法是否为线性的最适方程。(b0

和b1不反映非线性）二次多项式模型：

一种抛物线反应曲线

，有增加趋势（曲线上升）

或减少趋势（曲线下降）

两种。

(b2为非线性系数）三次多项式模型：一种“S”形反应曲线

，在测量范围的两端呈非线性。(b2

，

b3为非线性系数）t

=

bi/SEi

；df=L

×

F-Rdf

=

5

×

2-4

=6L：不同浓度样品数；

F：

每个样品重复测量次数

Rdf：

回归模型中各系数的数量总和。根据阶别、

系数符号、

系数值、

系数SE、

自由度

查t值表

，若b2

，

b3与0比较无显著差异

，则该方法在测定范围内存在线性关系。第四章

临床生物化学检验的方法与试剂盒第二节

临床生物化学检验方法的性能评价31第四章

临床生物化学检验的方法与试剂盒第二节

临床生物化学检验方法的性能评价二、方法学评价试验（三）

线性范围试验表5.

线性评价的测定数据与离群点检查(肌酐测定，浓度单位

μmol/L)3.统计分析线性失拟误差检查：F=0.505，

F>F

0.05组内变异试验：P=0.43，

P>P

0.05线性回归方程

(一次多项式模型)：

Y=0.00564+1.002XD1和D2数据都未发现离群点结论：线性良好32第四章

临床生物化学检验的方法与试剂盒第二节

临床生物化学检验方法的性能评价二、方法学评价试验（四）

回收试验回收：

分析方法正确测定加入常规分析样品中的纯分析物的能力。目的：测定比例系统误差，以衡量候选方法的准确度。1.方法（1）分析样品：将被分析的纯品标准液加入样品中。（2）基础样品：

原样品加入同量的无分析物的溶液。（3）

回收量：

分析样品和基础样品测定结果的差值。2.

回收率计算回收率（%）

=（Tt–Tb

）/C

×

100%；理想的回收率为100%Tt：分析样品的测定结果；Tb：基础样品的测定结果Tt–Tb：回收量；

C：分析样品中加入的纯分析物的浓度（加入后浓度）

=C0

×V0/TV33第四章

临床生物化学检验的方法与试剂盒第二节

临床生物化学检验方法的性能评价二、方法学评价试验（四）

回收试验注意事项

准确吸量，避免因加样不准影响结果；

样品中加入标准液后，总的浓度必须在方法的分析测量范围内；一般须加入高、

中、低不同浓度做回收试验，计算平均回收率。

加入标准液后，最好使试验样品的被测浓度达到医学决定水平。

加入标准液的体积一般在10%以内。若稀释过大，误差将发生改变，甚至消失。34第四章

临床生物化学检验的方法与试剂盒第二节

临床生物化学检验方法的性能评价二、方法学评价试验（五）

干扰试验

目的：

判断评价方法给出的结果是否受非分析物影响及影响程度，

即测定方法的恒定系统误差。按EP7-A2方案执行。

干扰：在测定某分析物时

，受另一非分析物影响而导致测定结果增高（正干扰）或

降低（负干扰）。

干扰物质：分为内源性（样品中存在的）和外源性（外界污染的）两类。内源性干扰物：血清中固有的代谢产物

，如血清中的甘油、胆红素、脂类、蛋白质、血红蛋白等；治疗药物

，肠道营养等。（如干扰物质随病理生理因素影响

，将引起随机误差）外源性干扰物：样品收集中的添加物如抗凝剂、

防腐剂、稳定剂

，容器和塞子的污染等；试剂中的杂质和杂酶等。35第四章

临床生物化学检验的方法与试剂盒第二节

临床生物化学检验方法的性能评价二、方法学评价试验（五）

干扰试验1.试验前准备(1)

应做的干扰物主要为病人样本中常出现的黄疸、脂血和溶血，某些药物（如维生素C）等，实验常用的抗凝剂、防腐剂等。(2)质量保证，不存在系统误差；批内精密度在可接受范围内；应不存在前后结果的交叉污染；试验过程有质控监督。36第四章

临床生物化学检验的方法与试剂盒第二节

临床生物化学检验方法的性能评价二、方法学评价试验（五）

干扰试验2.

干扰试验方法

干扰值

=

各组均值-

未加干扰物相应组的均值(1)“配对差异”（paired-difference）试验：将不同浓度的干扰物加入到试验样本中

，然后分别

测定加与不加干扰物的样本

，比较二者有无偏差

，并了解干扰物浓度与偏差程度的关系。

基础样本：

选择来自健康、没有进行药物治疗的新鲜标本。

测试和对照样本：在基础样本中加入一定量的干扰物或配制干扰物所用的溶剂，加入体积应不

超过1/20。

测试方式：

按交互顺序分析测试和对照标本，测定次数一般为3次。

建立有临床意义差别的标准（dmax最大允许干扰值）：被称为参考干扰限或者干扰标准，是统计分析时假设无效还是有效的判断标准。37第四章

临床生物化学检验的方法与试剂盒第二节

临床生物化学检验方法的性能评价二、方法学评价试验（五）

干扰试验2.

干扰试验方法

如干扰值<允许误差(EA)的临界值，则干扰物引起的偏差可接受(2)

用患者样品作偏差分析：

参照CLSI文件EP9

-A2《用病人标本进行方法学比对和偏倚估计》

挑选测试组和对照组标本

，并选择合适的参考方法或特异性好的比较方法。根据参考方法（比较方法）测定值偏倚图评价是否有系统偏倚。

本分析用来证实某类病人样本中是否存在未知的干扰物

，进一步肯定加入干扰物试验的结论。

挑选测定组(含有疑似干扰物)和对照组标本：两组分析物浓度范围应大致相同

，每组样品需20~40个。

选择合适的参考方法或特异性好的比较方法：应该用参考方法来达到此目的。如选择其他比较方法，

应具有较好的精密度和特异性

，最好是检测原理不同的方法。

在尽可能短的时间内（通常2h内）

，用两种方法

(候选方法和比较方法)重复测定每个标本。38第四章

临床生物化学检验的方法与试剂盒第二节

临床生物化学检验方法的性能评价三、临床生物化学检验方法的性能判断（一）

方法学性能标准性能标准（performance

standards,PS）也称分析目标

，应根据不同的应用目的（筛选、诊断、预后、监测）而异。由允许分析误差

(allowable

analytical

error,

EA)

和医学决定水平

(medicaldecision

level，

MDL)这两项内容决定：①允许分析误差EA：

95％样品的允许误差限度。②

医学决定水平：用Xc表示，

临床判断结果具有临床意义的被分析物浓度。对于每一医学决定水平都应使用在一定Xc值下的EA值。39第四章

临床生物化学检验的方法与试剂盒第二节

临床生物化学检验方法的性能评价三、临床生物化学检验方法的性能判断（二）

单值判断标准1.

计算公式

表6.

单值判断指标

误差类别

判断指标

备注随机误差

(RE)比例误差

(PE)1.96STM＜EA(｜R-100｜)(Xc/100)＜EASTM=重复试验的标准差R=平均回收率由干扰试验测出对比试验回归方程包括随机和系统误差恒定误差

(CE)

｜

偏差

｜

＜EA系统误差

(SE)|(a+bXc)-Xc｜＜EA总误差

(TE

＝RE+SE)1.96STM+｜(a+bXc)-Xc｜＜TEA2.结果判断

可接受性能的估计指标。样本数较小，用于初步估量。40第四章

临床生物化学检验的方法与试剂盒第二节

临床生物化学检验方法的性能评价三、临床生物化学检验方法的性能判断（三）

可信区间判断标准95％可信区间、可信上限及可信下限统计学表明

，测定结果的可靠性与测定次数有关

，次数愈多

，结果反映真实性愈强。为了估量分析误差的不确定性

，对于每一误差可计算其可信区间

，用可信上限与可信下限代替单值的估量，

EU为误差的可信上限，

EL为误差的可信下限。Westgard推荐95%的可信区间，EU是误差单侧的95％上限，EL是误差单侧的95％下限

，用此判断候选方法的可接受性比较可靠。41误差类别试验判断指标

EU<EA排除指标

EL

>EA随机误差

(RE)重复性1.96STM

＜

EA1.96STM

>

EA比例误差

(PE)回收(｜RU或RL-100｜)U

(Xc/100)

＜EA(｜RU或RL-100｜)L

(Xc/100)>EA恒定误差

(CE)干扰|d｜+t(sd)/

√N

＜

EA|d｜-t(sd)

/

√N

>

EA系统误差

(SE)方法对比|(a+bXc±W)-Xc｜U＜EA(a+bXc±W)-Xc｜L

>EA总误差

(TE

＝RE+SE)重复性和方法对比√(1.96STNL)2+W2

+｜(a+bXc)

-Xc｜＜EA√(1.96STNL)2+W2

+|

(a+bXc)-Xc｜>EA第四章

临床生物化学检验的方法与试剂盒第二节

临床生物化学检验方法的性能评价三、临床生物化学检验方法的性能判断（三）

可信区间判断标准表7.

可信区间判断指标W：回归线可信区间的宽度42第四章

临床生物化学检验的方法与试剂盒第二节

临床生物化学检验方法的性能评价四、临床生物化学检验方法和程序的分析性能验证（一）

分析性能验证内容至少应包括正确度、精密度和可报告范围。如使用自建检测系统，应全面评估正确度、

精密度、可报告范围、生物参考区间等分析性能符合预期用途。（二）

分析性能要求1.适用时

，性能标准不低于国家标准(WS/T403-2012)、行业标准和地方法规的要求。2.

检测系统不精密度的要求：

以能力验证/室间质评评价界限作为TEa

，重复性不精密度

<1/4TEa；中间

（室内）不精密度<1/3TEa；或小于规定的不精密度。3.实验室内分析系统定期比对要求：样品数n≥20

，浓度应覆盖测量范围

，包括医学决定

水平

，计算回归方程

，在医学决定水平下的系统误差<1/4TEa.43第四章

临床生物化学检验的方法与试剂盒第三节

临床生物化学检验试剂盒的性能评价一、临床生物化学检验试剂盒的分类与特点试剂盒（regengt

kit）

：用于检验项目测定的含有使用说明书的所有配套试剂的

组合。试剂盒组分可包括抗体、

酶、缓冲液、稀释液、校准物、控制物或其它物

品和材料。

方法学：化学法、酶法、免疫法。

物理性状：固体试剂、液体试剂。

组合方法：单一试剂、双试剂。

正在发展的形式：快速反应试剂、卡式试剂、多项同测组合试剂、

浓缩试剂。试剂盒中的校准品

：

用二级标准品和常规方法测定得到

，

常规测定中的标准

。

和新鲜病人样品有基体差异。试剂盒的分类44固体试剂：冻干试剂、粉状试剂、干片试剂等。

优点：运输方便、保存期长

缺点：组份均一性较差，

瓶间差较大。水质的优劣对试剂的稳定性和测定结果的可靠性有相当大的影响。液体试剂：

优点：稳定性高，组份高度均一，瓶间差小，测定重复性好，使用方便。避免了外源性水质对试剂的影响，

性能较稳定，

测定结果较为准确。

缺点：保存时间较短，

不便于运输。第四章

临床生物化学检验的方法与试剂盒第三节

临床生物化学检验试剂盒的性能评价一、临床生物化学检验试剂盒的分类与特点试剂盒的特点45单液体试剂盒：

优点：操作简单，特别适用于半自动生化分析仪和小型自动生化分析仪。

缺点：稳定性较差，抗干扰能力差液体双试剂盒：

优点：

提高了抗干扰反应的能力（试剂Ⅰ与样品中的干扰物质反应，反应5分钟后，再用试剂Ⅱ启动真正的反应）

；稳定性能优良（全液体化试剂无需任何辅助试剂和蒸馏水）

；试剂组分高度均一

（提高了测定的重复性）。第四章

临床生物化学检验的方法与试剂盒第三节

临床生物化学检验试剂盒的性能评价一、临床生物化学检验试剂盒的分类与特点试剂盒的特点46第四章

临床生物化学检验的方法与试剂盒第三节

临床生物化学检验试剂盒的性能评价二、临床生物化学检验试剂盒的性能指标、评价方法与质量标准试剂盒的性能指标：包括外观（目测检查

，符合生产企业规定的正常外观要求）、净含量（液体试剂的净含量应不少于标示值）

、试剂空白、分析灵敏度（试剂盒

测试n单位被测物时

，用已知浓度或活性的样品测试试剂盒

，记录在试剂盒规定

参数下产生的吸光度改变

，换算为n单位吸光度差值/变化率

，应符合生产企业给定范围）

、空白限（透射比浊法适用：用试剂盒测试空白样本

，重复测试20次，计算均值和标准差

，空白限应不大于生产企业给定范围）

、线性、重复性、批内瓶间差、批间差、准确度和稳定性（效期稳定性、热稳定性、复溶稳定性）。47第四章

临床生物化学检验的方法与试剂盒第三节

临床生物化学检验试剂盒的性能评价二、临床生物化学检验试剂盒的性能指标、评价方法与质量标准是判定试剂质量的一个有效指标1.NADH底物：副反应、中性缓冲液，空白吸光度需

>

1.02.

色素原底物：底物自发水解3.Trinders反应：发色基团的氧化，空白吸光度需<0.051.

试剂空白吸光度：

用蒸馏水做空白调零

，用指定的空白液加入试剂作为样品测试

，测定在待测波长下

，记录37℃条件下稳定30s后的吸光度

，连续测定

3次

，取其平均值作为试剂空白吸光度。试剂空白48第四章

临床生物化学检验的方法与试剂盒第三节

临床生物化学检验试剂盒的性能评价二、临床生物化学检验试剂盒的性能指标、评价方法与质量标准2.试剂空白吸光度自变化：对于速率法试剂盒

，用指定的空白液加入试剂作为样品测试时

，在待测波长、

37℃条件下稳定30s后，

每30s测定一次吸光度，

连续测定5min

，计算5min内的吸光度变化(ΔA/min）。试剂空白吸光度变化速率无法反映试剂盒的稳定性，试剂空白吸光度变化速率主要反映干扰程度和仪器的稳定性。试剂空白491.

相对偏差

：直接用试剂盒测定参考物质（平行3次）

，评价测定均值与靶值的偏离程度。也可用由参考方法定值的高、

中、低三个浓度的人混合血清

，用试剂盒平行测定3次

，计算均值与定值的相对偏差。

3次结合均符合为合格。如有1次不符合

，应连续测定20次

，计算相