DB63∕T278-1996(2020) 野牦牛（含1∕2野血牦牛）冷冻精液

ICS

备案号：DB63DB63

准标方地省海青

DB63/T278—1996

野牦牛（含1/2野血牦牛）

冷冻精液

1997-03-20发布1997-06-20实施

青海省技术监督局发布

DB63/T278—1996

目次

前言...................................................................................II

1范围..................................................................................1

2规格、质量............................................................................1

3冷冻精液的检查方法：..................................................................1

4冷冻精液的包装、标记、贮存、运输......................................................2

附录A..................................................................................3

附录B..................................................................................5

I

DB63/T278—1996

前言

本标准自1997年8月1日实施。

本标准的附录A、附录B均为标准的附录。

本标准由青海省畜牧厅提出。

本标准由青海省大通种牛场、青海省畜牧兽医总站负责起草。

本标准主要起草人：李创业、戴海琦。

本标准主要审稿人：杨荣珍。

II

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野牦牛（含1/2野血牦牛）

冷冻精液

1范围

本标准规定了野牦牛(包括野血牦牛)冷冻精液的规格、质量、检查方法及包装、标记己贮存、运输

等。

本标准适用于野牦牛、含1／2野血牦牛冷冻精液的制作。

2规格、质量

2.1剂型：细管、颗粒。

2.2剂量：细管，中型0.5毫升；微型0.25毫升；颗粒，0.1±0.0l毫升。

2.3活力

解冻后活力不低于0.3(指呈直线前进运动的精子百分率为30%)。精子复苏率(下限)为50.0%。

2.4每一剂量中呈直线前进运动的精子数(下限)

2.4.1细管：每支不应少于1000万个。

2.4.2颗粒：每粒不应少于1000万个。

2.5解冻后的精子畸形率(上限为)20%。

2.6解冻后的精子顶体完整率(下限)为40%。

2.7解冻后的精液无病原性微生物，每毫升精液中的细菌菌落数(上限)为1000个。

2.8解冻后的精子存活时间

在5—8℃贮存时下限为12小时，在20℃贮存时下限为6小时。野牦牛(含1/2野血)冷冻精液必须符

合上述各项指标，否则不得使用。

3冷冻精液的检查方法：

3.1活力检查

3.1.1细管冻精

投入到40±2℃温水中直接解冻，然后取一滴(0.4～0.5毫升)压片镜检。

3.1.2颗粒冻精

取一灭菌干燥的指形试管(或小安瓿瓶)注入2.9%二水柠檬酸钠液1.6～2毫升，加热到40±2℃后

快速投入冻精一粒(一次一粒，多于一粒分别解冻)不停摇动，待冻精融化到1/3或1/2时即从温水中取出，

轻轻摇动至完全融化，取一滴压片镜检。

3.1.3评定精子活力的显微镜载物台温度保持35～40℃，放大倍数以150～600倍为宜。

3.1.4每批冻精应随机取样两份，分别解冻检查，每个精液样品应观察三个以上的视野，并注意不同

液层内的精子运动状态，进行全面综合评定。

3.1.5检查次数，应在冷冻后的当时检查一次，合格者贮存，在长期贮存期间应定期抽样检查(一般为

一个月)。冻精发放前再抽样检查。

3.2密度检查

3.2.1检查用具：以血球计数器为基准，如用光电比色计则须用血球计数器校正。

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3.2.2每头牛采出的精液应立即进行密度检查，以确定稀释比。一毫升稀释后的精液中最少要有6亿

个活精子存在。

3.3畸形率的检查

取样精和解冻后精液样品各一小滴，分别按常规方法制成抹片，风干后用美兰或品红染色，置不低

于600倍的高倍显微镜检查。检查精子总数不得少于500个，以求出所含畸形精子百分率。

3.4解冻后精子顶体完整的检查

3.4.1定期抽样检查。

3.4.2采用姬姆萨染色法镜检，每个样品观察精子总数500个。

3.5冻精细菌检查

3.5.1定期抽样检查。

3.5.2取0.2毫升解冻后的精液样品，放入血清琼脂平面上，在37℃恒温箱中分别培养24小时或48

小时，统计出现的菌落数。

3.6精子存活时间的检查

3.6.1定期把解冻后的精液置于5～8℃、20'C环境中贮存，分别每4～8小时，2～4小时检查—次和

1B寸检查一次，直到全部失去直线前进状态，统计出存活时间及活率。

3.6.2细管冻精解冻后不再稀释。

4冷冻精液的包装、标记、贮存、运输

4.1包装

4.1.1细管冻精经过检查后严密封闭，按公牛品种、个体、牛号放入液氮容器内贮存。

4.1.2颗粒冻精用无菌纱布小袋盛装，每一袋分别以54或104粒为一个标准单位，放入液氮容器中贮

存。

4.2标记

4.2.1每头公牛、每批冻精均应分51l包装，细管和盛颗粒冻精的盛器外面均注明种牛品种、牛号、

制作日期和制作单位、数量及活力的标记。

4.2.2野牦牛：冻精容器(袋)及标签颜色为白色，代号YW。

4.2.31/2野血牦牛：冻精容器(袋)及标签颜色为红色，代号YD。

4.3贮存

4.3.1在液氮容器中贮存时，容器内液氮必须浸没冻精。

4.3.2定期检查液氮容器内的贮存状况，发现异常(如：容器表面呈水珠或结霜等)，立即将冻精按操

作规程转移到其它完好容器内。

4.3.3液氮容器在使用之前，应彻底检查和清理一次，清洗时先用中性洗涤剂擦洗，后用40～45℃温

水反复冲洗几次，在室温下倒置72小时左右再充入液氮，长期贮存精液的容器应定期清理、洗涤。

4.3.4取放冻精时提漏按号扣入定位槽内，提漏只准升到容器的颈下，严禁提到容器外，停留时间一

次不得超过10秒钟。如转移冻精时，盛装冻精的提漏离开液氮面时间不得超过秒钟。

4.3.5较大型贮精容器，应将冻精分类存放，登记清楚，以免个体问冻精混淆。

4.4运输

4.4.1移动贮精容器时，不许拖行，只能其外柄轻拿轻放，防止冲撞。

4.4.2贮精(液氮)容器均应竖立放置，装车运输时，应对容器采取保护性措施，严防冲击倾倒。

4.4.3运输冻精时，应有专人负责，办好接交手续，途中应及时检查和补充冷源。

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附录A

（标准的附录）

冻精制作程序及使用方法

A1采精。

A.1.1公牛质量标准

A.1.1.1用于制作冻精的野公牛，其体型、外貌、生产性能，均应合乎本品种牛标准的特、一级标准.

在目前尚未建立国家种畜后裔测定站的情况下，采精公牛必须经部或有关上级部门审批，和省级科研单

位严格把关。

A.1.1.2公牛必须体质健壮，并须经法定兽医师和正式兽医检查部门定期检查，证明无传染病才能进

站使用。如：牛肺疫、牛结核、牛副结核、牛布氏杆菌、牛白血病及传染性鼻气管炎、钩端螺旋体病、

胎儿弧菌、阴道滴虫病等。

A.1.2公牦牛的鲜精应符合下述质量标准，不具备任何一项者，均不得制作冻精。

新鲜精液呈乳白色或微黄色。

直线前进运动的精子(下限)为60%。

精子密度(下限)为6亿／毫升。

精子畸形率(上限)为12%。

A.1.3在牦牛配种季节(6～11月)，成年公牦牛基本每周采精两次，每次可连续排精2～3回，采精前按

技术操作规程进行公牛有关部位的消毒及冲洗。

A.2精液的稀释

A.2.1稀释保护剂的配制

A.2.1.1所采用的保护剂，必须使用新鲜的双重蒸馏水和卵黄，二级品以上的化学试剂。

A.2.1.2所用器具必须达到“野牦牛(含1／2)冻精标准”，保持清洁无菌。

A.2.1.3稀释保护剂的标准配方

R112%蔗糖液75毫升；

卵黄20毫升；

甘油5毫升；

青、链霉素各10万单位。

R212%脱脂奶粉82毫升；

卵黄10毫升；

甘油8毫升；

青、链霉素各10万单位。

A.2.1.4稀释保护剂要现配现用或配后放入4～5℃的冰箱中备用。

A.2.2稀释比例

必须保证每一剂量(二种剂型)中解冻后所含直线前进运动的精子数的规定。

A.3降温和平衡

稀释后的精液，要在1～1.5小时内使精液温度逐步降到4～5℃，然后置于0～5℃冰箱平衡3～4小时。

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A.4冷冻

A.4.1制备冻精的操作室应符合“青海省牦公牛站牦(野)牛颗粒冻精制作暂行规则”的要求。

A.4.2冻精的器具

A.4.2.1细管冻精，采用细管冻精生产、分装线配套的器具进行。

A.4.2.2颗粒冻精，采用，氟板(聚四氟乙稀)、铝板进行。

以上各种用具，在制作冷冻精液时均应同液氮面保持一定(1～1.5cm)的距离。

冷冻各类精液时，冻前样品均应混合：并检查冻前活力。

细管精液：不论是采用聚乙烯粉、铜珠或超声波塑料热合，都必须严密封口。

颗粒精液：滴冻时每毫升精液滴冻10±1粒，滴管应事先预冷，操作要干净、利落、准确，每冻完

一头公牛精液后，必须更换滴管、氟(铝)板等用具。

A.4.2.3不论何种剂型，在制作时必须防止精液温度回升。每冻完一批(头)将冻精浸泡在液氮中，计

数、取样抽检、包装。

A.5使用方法

A.5.1解冻(已述)。

A.5.2解冻液配制：

称取2.9克二水柠檬酸钠，溶于100毫升的双蒸馏水中充分溶解，经过滤三次，蒸煮消毒10～20

分钟，冷却后加青、链霉素各5万单位，置4～5℃冰箱中贮存备用。

A.5.3解冻后的使用时

A.5.3.1颗粒冻精(上限)2小时。

A.5.3.2细管冻精(上限)1小时。

A.5.3.3如解冻后需要外运或使用延长上述时限时，均应在解冻后轻轻放4～5℃冰箱或保温瓶中保

存，但使用时限不得超过6小时。

A.6输精

A.6.1每头发情母牛每次使用一个剂量的解冻精液(细管，颗粒)，输精前必须进行活力检查，不合标

准的，不得使用。

A.6.2输精方法以采用直肠把握输精法输精。

A.6.3输精器插入以子宫内为准，慢插，轻注、缓出、防止逆流。

A.6.4每一情期输精2次，间隔时间为8～12小时。