蔬菜水果中多菌灵的快速检测 胶体金免疫层析法

蔬菜水果中多菌灵的快速检测胶体金免疫层析法国家市场监督管理总局发布1本方法规定了蔬菜水果中多菌灵的胶体金免疫层析快速检测方法。橙等蔬菜水果(不适用于豌豆、腌制小黄瓜)中多菌灵残留的快速定性测定。本方法采用竞争抑制免疫层析法原理。试样中的多菌灵残留经提取后与胶体金标记的多菌灵特异性抗体结合，抑制抗体和检测线(T线)上抗原的结合，从而导致T线颜色深浅的变化。通过T线与控制线(C线)颜色深浅比较，对试样中多菌灵进行定性判定。3试剂和材料除另有规定外，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的二级水。3.1.2氯化钠(NaCl)。多菌灵参考物质的中文名称、英文名称、CAS号、分子式、相对分子质量见表1,纯度≥99%。中文名称CAS号多菌灵样品提取液(PBS缓冲液，含5%体积分数甲醇):准确称取8.50g氯化钠(3.1.2)、5.54g十二水合磷酸氢二钠(3.1.3)、0.26g二水合磷酸二氢钠(3.1.4),用水溶解后转移至1000mL容量瓶中，再准确加入50mL甲醇(3.1.1),用水定容至1000mL。23.4.1多菌灵标准储备液(50mg/L):精密称取多菌灵参考物质(3.2)5.0mg(精确至0.01mg),置于成浓度为50mg/L的多菌灵标准储备液。-20℃冷冻避光保存，有效期6个月。环境温度10℃~37℃。取具有代表性的蔬菜水果试样不少于100g,取样部位参考GB2763—2021《食品安全国家标准标记。留样置于-20℃下避光保存。准确称取6.1中混匀的试样1.0g(精确至0.01g)于15mL离心管，加入3mL提取液(3.3),涡旋振荡1min,静置3min,将上清液按照表2的方案用提取液(3.3)进行限量/(mg/kg)提取液(μL)叶芥菜120(3.4.1)3表2不同基质稀释比例和加标质控样品配制方法(续)限量/(mg/kg)提取液(μL)240(3.4.1)360(3.4.1)5注：表中数据为推荐的稀释比例，实际操作中可按照试剂盒说明书操(6.2)于金标微孔中，用移液器上下抽吸5次～10次至微孔试剂混合均匀，室温下孵育3min。将试纸(6.2)于检测卡的加样孔中，室温下反应5mi称取空白试样，按照6.2和6.3的步骤操作。进行对应浓度添加，作为加标质控试样(见表2),按照6.2和6.3的步骤同法操作。采用目视法，通过对比控制线(C线)和检测线(T线)的颜色深浅进行结果判定。目视结果示意图控制线(C线)显色，检测线(T线)颜色比控制线(C线)颜色深或者检测线(T线)颜色与控制线4(C线)颜色相当，表示试样中多菌灵含量低于方法检出限，视为阴性。无效阴性阳性图1目视结果示意图7.4质控试验要求空白试验测定结果应为阴性，加标质控试验测定结果应为阳性。当测定结果为阳性时，应采用参比方法对对结果进行确证。9性能指标9.1检出限西瓜为2mg/kg,番茄、梨为3mg/kg,结球莴苣、橙为5mg/kg。灵敏度≥98%。9.3交叉反应率与苯菌灵和丙硫多菌灵交叉反应率为100%。假阴性率≤2%。9.5假阳性率假阳性率≤5%。5本方法所述试剂、试剂盒信息及操作步骤是为给方法使用者提供方便，在使用本方法时不做限定。方法使用者在使用替代试剂、试剂盒或操作步骤前，应对其进行考察，以满足本方法规定的各项性能本方法参比标准为GB/T20769—2008《水果和蔬菜中450种农药及相关化学品残留量的测定液相色谱-串联质谱法》、GB23200.121—2021《食品安全国家标准植物源性食品中331种农药及其代谢物残留量的测定液相色谱-质谱联用法》。6(规范性)定性方法性能指标计算表定性方法各个性能指标计算方法见表A.1。表A.1定性方法性能指标计算表阳性阴性阳性阴性显著性差异(X²)自由度(df)=1灵敏度(p+)/%pf-=N₁₂/N1.×100=100一灵敏度注：N为任何特定单元的结果数，第一个下标指行，第二个下标指列。例如，N表示第一行，第有的第一行，N.₂表示所有的第二列；N₁₂表示第一行，第二列。由参比方法检验得到的结果或者试样中实际的公议值结果。由待确认方法检验得到的结果。灵敏度的计算使用确认后的结为方法的检测结果相对准确性的结果，与一致性分析和浓度检测趋势情况综合评价。本方法起草单位：中国检验