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琼脂免疫扩散试验

第1页一、相关知识介绍可溶性抗原（如细菌浸出液、含菌病料浸出液、血清以及其它起源蛋白质、多糖质、类脂体等）与其对应抗体相遇后，在电解质参加下，抗原抗体结合形成白色絮状沉淀，出现白色沉淀线，此种现象称为沉淀反应。沉淀反应中抗原叫沉淀原（precipitinogen）,与沉淀原发生反应抗体称为沉淀素（precipitin）。第2页

亲水胶体转化为疏水胶体示意图亲水胶体疏水胶体转化NaCl可见反应第3页二、琼脂扩散原理1％~2%琼脂凝胶所形成构架网孔较大，空隙中是98％~99%水，允许分子量在20万以下甚至更大些大分子物质经过，绝大多数可溶性抗原和抗体分子量在20万以下，所以能够在琼脂凝胶中自由扩散，所受阻力甚小。二者在琼脂凝胶中相遇，在最适百分比处发生特异性免疫结合反应，结合物分子量普通大于20万，此结合物因颗粒较大而不扩散，故形成沉淀带。第4页三、琼脂扩散种类琼脂扩散反应依据其扩散方向可分单相（向）扩散和双相扩散，依据抗原抗体二者是一方扩散还是双方扩散，又有单扩散和双扩散之别。所以，琼脂扩散反应就有单相单扩散、单相双扩散，双相扩散、双相双扩散4种类型。第5页四、以诊疗禽流感为例讲解双相双扩散（一）材料与试剂1．标准禽流感诊疗血清，购置自生物制品所。2．标准禽流感诊疗抗原，购置自生物制品所。3．待检血清4．琼脂板5．打孔器第6页（二）操作方法（步骤）1．凝胶配制称取一定量琼脂粉，按1%左右（0.8％～1.5%）百分比加入8%盐水，水浴煮沸融化20min。2．制板将融化琼脂倒入平板上，使厚度2mm～3mm。自然冷却。第7页3．打孔依据要求（孔径即孔直径，孔距即两孔圆心之间距离，包含两孔半径）按模板打孔。也可直接用组合打孔器打孔。打成梅花形孔（共7孔）。用直径3毫米打孔器，孔间距为5毫米。第8页第9页4．挑孔挑出孔内琼脂，注意不要挑破孔缘。

第10页5．封底把溶化琼脂7uL左右加入孔中，以免加样后液体从孔底渗漏。第11页6．加样以加样器（枪）吸收样品加入孔内，注意不要产生气泡，以加满为度。加少了，影响反应程度，加多了，易溢出，也影响反应结果。第12页7

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