DB 6108∕T 56-2023 马铃薯脱毒试管苗生产技术规程

ICS65.020

CCSB05

DB6108

榆林市地方标准

DB6108/T56—2023

马铃薯脱毒试管苗生产技术规程

2023-06-02发布2023-07-02实施

榆林市市场监督管理局发布

DB6108/T56—2023

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前  言

本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起

草。

本文件由榆林市农业农村局提出并归口。

本文件起草单位：榆林市农业科学研究院、定边县科发马铃薯良种繁育有限责任公司。

本文件主要起草人：张艳艳，张春燕，童霄丽，方玉川，杜清荣，张媛媛，白艳艳，拓小波，张强，

陈丽娟，李东东，薛伟，薛皎，闫陆飞，高慧，王毛毛，韩芬，付永飞，朱继宇，贺海军，王彦

梅，胡晓燕，白延生，乔文渊，李小娟，张蓉蓉，刘小林。

本文件由榆林市农业科学研究院负责解释。

本文件为首次发布。

联系信息如下：

单位：榆林市农业科学研究院

电话/p>

邮箱地址：3881229@163.com

地址：陕西省榆林市榆阳区上郡南路14号

邮编：719000

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马铃薯脱毒试管苗生产技术规程

1范围

本文件规定了马铃薯脱毒试管苗生产的车间建设、脱毒流程、试管苗繁育、档案建立。

本文件适用于榆林市马铃薯脱毒试管苗生产。

2规范性引用文件

下列文件对本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。

凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB3095环境空气质量标准

GB/T29375-2012马铃薯脱毒试管苗繁育技术规程

GB50073-2001洁净厂房设计规范

NY/T401-2000脱毒马铃薯种薯(苗)病毒检测技术规程

3术语和定义

GB/T29375—2012规定的术语和定义适用于本文件。

4生产车间建设

4.1立地条件

选址可按照GB50073-2001中4.1的规定执行，宜建在供电稳定、四周空气流通较好，自然光源充足，

没有空气污染和水源污染的地域。

4.2车间布局

4.2.1车间布局可按照GB50073-2001中4.2的规定执行。

4.2.2须配备配制室、灭菌室、清洗室、更衣室、预制室、接种室、培养室等。配制室、灭菌室、清

洗室与更衣室、预制室、接种室、培养室等应绝对隔离。

4.3卫生要求

4.3.1空气质量不低于GB3095中对总悬浮颗粒物（TSP）二级要求。

4.3.2生产车间要保持干净、清洁，接种室和培养室应定期消毒，消毒要求如下：

a)大消毒。1次/月，每m³空间用40%甲醛溶液5mL+高锰酸钾5g混合熏蒸。密闭3d后，再通风

1d；

b)日常消毒。1次/d，接种室接种前一天晚上用50mg/LClO2熏蒸。

5脱毒流程

5.1培养基制备

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5.1.1培养基配制：在MS基本培养基（见附录A）中按照不同比例添加NAA、6-BA、GA3及D-泛酸钙

等植物生长调节剂，并分装于培养瓶中。

5.1.2培养基消毒：培养瓶加盖后置于高压蒸汽灭菌锅121℃条件下灭菌20min。

5.2剥离材料的选择和处理

5.2.1选择：在生长季节选择具有品种典型性状的健康单株，收获后选取健康块茎。

5.2.2处理：块茎通过自然休眠或者激素处理后，在室温内进行先暗光后散射光的催芽处理。

5.3茎尖剥离

5.3.1无菌工作条件创造

组培室用4.3.2的方法消毒后，再用紫外线灯照射40min。

无菌操作台要提前2h打开风机和紫外灯杀菌。

工作人员用硫磺皂洗手，75%酒精擦拭消毒。

操作器具在高压蒸汽灭菌锅内121℃条件下灭菌20min，置于无菌操作台上备用。

5.3.2病毒钝化

物理钝化：将马铃薯薯块在36℃条件下处理4周～6周或用紫外线照射脱毒材料10min。

化学钝化：在培养基中加入病毒唑，使病毒钝化失活。

5.3.3茎尖消毒

经催芽处理，待芽萌发至2cm～3cm时，选取健壮芽，用解剖刀切下，芽段用自来水冲洗40min以

上，再用75%的酒精浸蘸30s，放入无菌杯内用6%的次氯酸钠溶液浸泡10min，最后用无菌水冲洗3

次。

5.3.4茎尖剥离及接种

将茎尖放在无菌滤纸上吸干水分，在10倍解剖镜下用解剖针剥取带1个～2个叶原基的茎尖（0.1mm～

0.3mm），迅速按无菌操作程序接入培养基中。

5.4茎尖培养

温度20℃～25℃，光照强度2000Lx～3000Lx，光照时间16h/d，培养90d～140d。当看到明显生长的

小茎，叶原基形成可见的小叶，转入无生长调节剂的培养基中。小苗继续生长并形成根系，发育成3个～

4个叶片的小植株，即可继续扩繁。

5.5病毒检测

以单株为系进行扩繁，苗数达150株～200株时，随机抽取3个～4个样本，每个样本10株～15株，进

行病毒检测，采用NY/T401中的酶联免疫吸附试验法(ELISA)和RT-PCR法检测确认不带有PVX、PVY、PVS、

PLRV、PVA、PVM和PSTVd。

5.6脱毒苗试种

病毒检测合格的试管苗在网棚中用无土栽培的方式进行试种，与大田种植的同品种马铃薯植株和块

茎的各个指标进行比对：

a)苗期观察植株叶片形状、颜色，茎秆颜色以及花色、花型等指标。

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b)收获后观察薯型、芽眼、薯皮、薯肉颜色等指标。

注：指标一致，即可视为该脱毒苗保持了品种的生物学性状，可作为核心种苗进行扩大繁殖。

6试管苗的繁育

6.1培养基制备

将MS培养基配制成液，装入器皿（MS培养基配方附录A），置于121℃高压蒸汽灭菌锅灭菌20min。

6.2组培苗处理

将组培苗置于超净工作台上，器皿表面用75%的酒精擦试消毒，取出组培苗，按单茎切段，每个段

带一片小叶摆放在培养基面上。

6.3组培苗快繁

6.3.1基础苗繁育

按组培苗繁育的方法配制培养基和处理组培苗。

切段底部（根部）不作为基础苗，直接转入移栽用苗培养，其它各段作为基础苗进行繁殖。

培养温度15℃～20℃，光照强度2000Lx～3000Lx，光照时间10h/d～14h/d。

培养周期30d～40d。

6.3.2定植苗繁育

按组培苗繁育的方法配制培养基和处理组培苗。

培养温度15℃～25℃，光照强度3000Lx～4000Lx，光照时间14h/d～16h/d。

培养周期15d～20d，苗高5cm以上即可定植。

7档案建立

建立茎尖脱毒和试管苗工厂化生产档案，档案保存不少于2y。

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附录A

(资料性附录)

MS培养基配方

MS类型成分用量（mg/L)

硝酸铵(NH4NO3)33000

硝酸钾(KNO3)38000

A大量元素磷酸二氢钾(KH2PO4)3400

硫酸镁(MgSO4·7H2O)7400

氯化钙(CaCl2·2H2O)8800

硫酸亚铁(FeSO4·7H2O)5570

乙二胺四乙酸二钠(Na2·EDTA)7450

B铁盐

碘化钾(KI)166

钼酸钠(Na2MoO4·2H2O)50

C微量元素硫酸铜(CuSO4·5H2O)5

氯化钴(CoCl2·6H2O)5

硫酸锰(MnSO4·4H2O)4460

硫酸锌(ZnSO4·7H2O)1720

硼酸(H3BO3)1240

盐酸硫胺素(VB1)20

盐酸吡哆素(VB6)100

D有机物甘氨酸400

烟酸100