临床生化检验方法的性能评价-医学课件

实验二、临床生化检验方法的性能评价临床实验室所使用的检验方法或在建立新的检验方法时，应对该方法的基本性能进行评价，达到提高分析方法质量的目的。方法学评价（evaluationofmethodology）是通过实验途径测定分析方法的技术性能，并评价其是否可接受。概述概述定量实验的方法学评价指标通常包括：准确度精密度灵敏度特异性线性范围方法学评价试验：准确度的评价:回收试验、干扰试验、方法比较试验精密度的评价：重复性试验线性范围评价：线性范围评价试验概述实验目的掌握：方法学评价试验的原理、基本方法及统计分析；熟悉：线性范围评价试验和干扰实验的操作；了解：方法学评价实验与实验误差之间的关系。干扰试验1.GOD—POD法测血清葡萄糖的实验原理：干扰试验2.干扰实验的实验原理：干扰实验是测定特异性和干扰两者引起的误差，既用于检测某方法的特异性，也用于检测干扰物质对方法的干扰作用，以评价某临床检测方法的准确度。干扰物浓度一定时，产生的误差是恒定系统误差，误差的实际大小随干扰物浓度而异。本实验选用维生素C做GOD-POD法测定血糖的干扰物。干扰试验试剂与器材722分光光度计、加样枪、5ml刻度吸管等GOD-POD血糖测定试剂盒、6.7mmol/L的混合血清、250mg/L维生素C标准液、500mg/L维生素C标准液、750mg/L维生素C标准液干扰试验操作步骤1.样品制备（1）基础样品：血清0.9mL+生理盐水0.1mL（2）干扰样品1：血清0.9mL+250mg/L维C标准液0.1mL（3）干扰样品2：血清0.9mL+500mg/L维C标准液0.1mL（4）干扰样品3：血清0.9mL+750mg/L维C标准液0.1mL（5）维C样品：750mg/L维C标准液0.1mL+生理盐水0.9mL混匀各管待测。干扰试验操作步骤2.血糖浓度按下表测定：

混匀各管，37℃水浴10min，空白管调零，505nm波长处测定各管吸光度。加入物（ml）空白管标准管基础管干扰管1干扰管2干扰管3维C管蒸馏水葡萄糖标准液基础样品干扰样品1干扰样品2干扰样品3维C样品GOD-POD工作液0.04------4-0.04-----4--0.04----4---0.04---4----0.04--4-----0.04-4------0.044干扰试验结果与计算

血清葡萄糖浓度（mmol/L）=A测定管/A标准管×葡萄糖标准液浓度

干扰值（mmol/L）=干扰样品测定值-基础样品测定值

干扰率（%）=干扰值/基础值×100%干扰物加入值=干扰物溶液浓度×干扰物溶液量（ml）血清量（ml）+蒸馏水量（ml）+干扰物溶液量（ml）干扰试验结果与计算将各项计算结果填入下表中:

样品葡萄糖测定值（mmol/L）加入维C值(mg/L)干扰值(mmol/L)干扰率(%)基础样品干扰样品1干扰样品2干扰样品3干扰试验注意事项1.加入可疑干扰物的浓度应明显高于通常所见浓度的上限，最好达到病理标本的高值；2.纯标准品溶液的加入体积不得超过血清样本的10%，避免将血清样品过度稀释，产生基质效应；3.方法学评价应对造成临床影响的多种干扰物质进行干扰实验的评价。干扰试验思考题进行干扰试验时，如何分析干扰物引起的误差来源？线性范围评价试验实验原理线性范围是指系统最终输出浓度或活性与被分析物浓度或活性成比例的范围；线性评价是测定被测物质浓度（活性）的反应曲线接近直线的程度。本实验配制系列不同浓度的葡萄糖标准溶液，用GOD-POD法测定相应其吸光度，以浓度的预测值为横坐标，浓度的实测值为纵坐标，在坐标纸上作图，进行回归分析，确定方法线性范围。线性范围评价试验试剂与器材722分光光度计、加样枪、5ml刻度吸管等GOD-POD血糖测定试剂盒、40mmol/L的葡萄糖标准液

线性范围评价试验操作步骤1.将40mmol/L葡萄糖标准液与生理盐水按下表稀释，制备系列标准管：

混匀各管待测。加入物标准管12345678910葡萄糖标准液（ul）生理盐水（ul）预测浓度（mmol/L）1090420808307012406016505020604024703028802032901036100040线性范围评价试验操作步骤2.血糖浓度按下表测定：

混匀各管，37℃水浴10min，空白管调零，505nm波长处测定各管吸光度。加入物（ml）空白管标准管系列标准管1-10蒸馏水葡萄糖标准液系列标准管GOD-POD工作液0.04--4-0.04-4--0.044线性范围评价试验结果与计算

1.根据“血清葡萄糖浓度（mmol/L）=A测定管/A标准管×葡萄糖标准液浓度”计算系列标准管的实测浓度；2.以浓度的预测值为横坐标，浓度的实测值为纵坐标，在坐标纸上作图，利用Excel软件进行回归分析，计算回归方程y=a+bx和相关系数r2,进行结果分析。线性范围评价试验评价所建直线回归方程y=a+bx，要求a接近于0，b在0.97-1.03之间。若满足此条件，则可直接判定该方法是否在所要求的线性范围。若a偏大，b<0.97或>1.03认为在低浓度或高