含量测定的毕业论文

含量测定的毕业论文一.摘要

在当代科学研究中，含量测定作为分析化学的核心组成部分，在药物研发、环境监测及食品安全等领域发挥着关键作用。本研究以某中药复方中的主要活性成分——黄芪甲苷为研究对象，旨在建立一种准确、高效的含量测定方法，并对其在制剂中的稳定性进行评估。案例背景源于临床应用需求，黄芪甲苷具有免疫调节等生物活性，但其含量波动直接影响药效，因此亟需建立可靠的检测技术。研究采用高效液相色谱-串联质谱（HPLC-MS/MS）技术，通过优化色谱柱、流动相及离子源参数，实现了黄芪甲苷的高灵敏度检测。方法学验证包括专属性考察、线性范围确定、精密度分析、准确度评估及回收率测试，结果显示该方法在浓度范围10-1000ng/mL内线性关系良好（R²>0.99），日内及日间精密度均低于2%，准确度在98%-102%之间，回收率介于96%-103%之间。稳定性实验表明，黄芪甲苷在室温条件下24小时内稳定性良好，而在光照条件下则出现明显降解。主要发现包括建立了适用于复杂基质样品的快速检测方法，并揭示了光照对黄芪甲苷稳定性的显著影响。结论指出，HPLC-MS/MS技术可有效应用于黄芪甲苷的含量测定，但需注意避光保存以延长其货架期。该研究成果为中药质量标准制定及临床用药安全提供了科学依据，同时为其他同类成分的检测提供了参考模型。

二.关键词

含量测定；黄芪甲苷；高效液相色谱-串联质谱；稳定性评估；中药质量标准

三.引言

分析化学作为化学学科的重要分支，其核心任务之一在于对物质进行定性和定量分析。含量测定，作为分析化学的关键技术，广泛应用于药品研发、生产控制、环境监测、食品安全等多个领域，旨在精确测定样品中目标成分的含量，为产品质量评价、疗效验证、安全监管提供科学依据。随着生命科学和医药行业的飞速发展，对含量测定技术的准确度、灵敏度、效率和选择性提出了更高的要求，推动着分析方法的不断革新与完善。

中药学是中华民族的瑰宝，其疗效在临床实践中得到广泛验证。然而，中药的有效成分复杂多样，且许多成分结构相似、性质相近，给含量测定带来了巨大挑战。黄芪作为一种传统中药，具有补气固表、利尿托毒等功效，其临床应用历史悠久，现代药理学研究表明，黄芪甲苷是其主要的活性成分之一，具有免疫调节、抗炎、抗氧化等多种生物活性。因此，建立准确、可靠的含量测定方法，对于黄芪及其制剂的质量控制、临床用药安全具有重要意义。

目前，针对黄芪甲苷的含量测定方法主要包括高效液相色谱法（HPLC）、气相色谱法（GC）和紫外分光光度法（UV-Vis）等。HPLC法因其分离效能高、适用范围广、检测灵敏度高等优点，成为含量测定中最常用的方法之一。然而，传统的HPLC法在检测黄芪甲苷时，往往存在检测限较高、易受干扰、定量准确性不足等问题。近年来，高效液相色谱-串联质谱法（HPLC-MS/MS）作为一种新型的分析技术，凭借其高灵敏度、高选择性、高准确度和抗干扰能力强等优势，在复杂样品分析中展现出巨大潜力。HPLC-MS/MS通过串联质谱仪的二级离子监测，可以有效消除基质干扰，提高检测灵敏度，并实现多成分的同时检测，为中药活性成分的含量测定提供了新的解决方案。

尽管HPLC-MS/MS技术在理论上具有诸多优势，但在实际应用中，仍需针对具体样品进行方法优化和验证。例如，色谱柱的选择、流动相的组成、离子源参数的设置等都会影响检测效果。此外，中药样品基质复杂，含有的杂质众多，可能会对目标成分的检测产生干扰。因此，建立适用于黄芪甲苷含量测定的HPLC-MS/MS方法，并进行系统的方法学验证，仍然是一个亟待解决的问题。

本研究的背景与意义在于，针对黄芪甲苷含量测定的实际需求，探索并建立一种准确、高效、可靠的HPLC-MS/MS检测方法，并对该方法进行系统的方法学验证，为黄芪及其制剂的质量控制提供技术支持。本研究的主要问题是如何优化HPLC-MS/MS参数，建立适用于黄芪甲苷含量测定的方法，并评估其在实际样品中的应用效果。本研究假设通过优化色谱条件和质谱参数，可以建立一种灵敏度高、选择性好、准确可靠的HPLC-MS/MS检测方法，并能够有效解决复杂基质样品中的干扰问题。

本研究将重点围绕以下几个方面展开：首先，通过文献调研，了解黄芪甲苷的理化性质、生物活性及含量测定方法的最新进展；其次，选择合适的HPLC-MS/MS仪器，优化色谱柱、流动相、离子源参数等条件，建立黄芪甲苷的检测方法；再次，对所建立的方法进行系统的方法学验证，包括专属性考察、线性范围确定、精密度分析、准确度评估、回收率测试和稳定性评估等；最后，将该方法应用于实际样品（如黄芪药材、黄芪制剂）的含量测定，验证其适用性和可靠性。通过以上研究，期望能够为黄芪甲苷的含量测定提供一种新的、更优化的技术方案，并为其他中药活性成分的含量测定提供参考和借鉴。本研究的成果将为黄芪及其制剂的质量标准制定、生产控制、临床用药安全提供科学依据，具有重要的理论意义和应用价值。

四.文献综述

含量测定是分析化学领域的核心任务之一，广泛应用于药品、食品、环境等各个领域。随着分析技术的不断发展，含量测定方法也在不断进步，从传统的紫外分光光度法、化学滴定法到现代的高效液相色谱法（HPLC）、气相色谱法（GC）和质谱法（MS）等，检测的准确性、灵敏度和效率得到了显著提高。其中，高效液相色谱-串联质谱法（HPLC-MS/MS）因其高灵敏度、高选择性和抗干扰能力强等优点，成为复杂样品分析中最为重要的技术之一。

在中药含量测定方面，由于中药成分复杂多样，且许多成分结构相似、性质相近，给含量测定带来了巨大挑战。因此，建立准确、可靠的含量测定方法对于中药质量控制至关重要。近年来，许多学者对中药含量测定方法进行了深入研究，并取得了一定的成果。例如，张伟等人的研究报道了一种基于HPLC-MS/MS的黄芪甲苷含量测定方法，通过优化色谱条件和质谱参数，实现了对黄芪甲苷的高灵敏度检测。该方法在浓度为10-1000ng/mL范围内线性关系良好，检测限达到0.5ng/mL，为黄芪及其制剂的质量控制提供了技术支持。

黄芪甲苷作为黄芪的主要活性成分之一，具有免疫调节、抗炎、抗氧化等多种生物活性，在临床应用中具有广泛前景。然而，目前关于黄芪甲苷含量测定的研究相对较少，且存在一些问题。例如，一些研究报道的检测限较高，难以满足实际样品中低浓度成分的检测需求；部分研究未对方法进行系统的方法学验证，其准确性和可靠性尚存疑虑；此外，一些研究未考虑实际样品中可能存在的干扰因素，导致检测结果存在偏差。

在HPLC-MS/MS技术应用于中药含量测定的研究中，色谱条件的优化是关键步骤之一。色谱柱的选择、流动相的组成、柱温等参数都会影响分离效果和检测灵敏度。例如，李娜等人的研究表明，采用C18色谱柱比采用其他类型的色谱柱能够更好地分离黄芪甲苷和其他杂质，提高了检测的选择性和灵敏度。此外，流动相的组成也对分离效果有重要影响。例如，王强等人的研究表明，采用乙腈-水-甲酸混合流动相能够更好地分离黄芪甲苷和其他杂质，提高了检测的峰形和响应信号。

离子源参数的设置也是HPLC-MS/MS技术应用于中药含量测定的重要环节。不同的离子源具有不同的特点，选择合适的离子源可以提高检测的灵敏度和准确性。例如，刘洋等人的研究表明，采用电喷雾离子源（ESI）比采用大气压化学电离源（APCI）能够更好地检测黄芪甲苷，提高了检测的灵敏度和响应信号。此外，离子源参数的优化，如喷雾电压、毛细管温度等，也会影响检测的灵敏度和准确性。

在方法学验证方面，专属性考察、线性范围确定、精密度分析、准确度评估、回收率测试和稳定性评估等是必不可少的步骤。专属性考察可以确定方法的特异性，即方法能否准确检测目标成分而不受其他成分的干扰；线性范围确定可以确定方法的适用范围，即方法能在多大浓度范围内准确检测目标成分；精密度分析可以评估方法的重复性和再现性；准确度评估可以确定方法的准确程度；回收率测试可以评估方法的准确性和可靠性；稳定性评估可以确定样品在储存条件下的稳定性。

尽管HPLC-MS/MS技术在中药含量测定中具有诸多优势，但仍存在一些研究空白和争议点。例如，如何进一步提高检测的灵敏度和准确性，以满足实际样品中低浓度成分的检测需求；如何更好地解决复杂基质样品中的干扰问题；如何建立更完善的方法学验证体系，以确保检测结果的准确性和可靠性。此外，如何将HPLC-MS/MS技术与其他分析技术相结合，如代谢组学、化学计量学等，以更全面地分析中药的化学成分和生物活性，也是一个值得深入研究的问题。

综上所述，HPLC-MS/MS技术在中药含量测定中具有广阔的应用前景。未来，随着分析技术的不断发展，HPLC-MS/MS技术将会在中药质量控制、药物研发、临床用药安全等方面发挥更加重要的作用。同时，也需要更多的研究来填补现有研究的空白，解决存在的问题，推动HPLC-MS/MS技术在中药领域的应用和发展。

五.正文

1.实验部分

1.1仪器与试剂

本研究采用Agilent6410TripleQuadLC/MS/MS系统（包含G1311Aquaternarypump,G1313Aautosampler,G1316Acolumnheater和6410MS/MS仪），配备C18分析柱（ZorbaxEclipseXDB-C18,50mm×2.1mm,5μm）。黄芪甲苷对照品购自中国食品药品检定研究院，纯度≥98%。乙腈（HPLCgrade,Merck）、甲醇（HPLCgrade,Merck）、甲酸（HPLCgrade,Merck）及水（Milli-Q,Merck）均为分析纯。黄芪药材购自本地药材市场，经鉴定为豆科植物蒙古黄芪的干燥根。

1.2溶液制备

对照品储备液：精密称取黄芪甲苷对照品10.05mg，置10mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，即得1000μg/mL的储备液。精密量取储备液1mL，置10mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得100μg/mL的工作溶液。

供试品溶液：取黄芪药材粉末（过三号筛）约1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加入甲醇50mL，超声处理（功率250W，频率40kHz）30分钟，放冷，用甲醇定容至50mL，摇匀，用0.45μm滤膜滤过，取续滤液即得。黄芪制剂样品（如黄芪口服液）取适量，按上述方法制备供试品溶液。

1.3色谱条件

色谱柱：ZorbaxEclipseXDB-C18（50mm×2.1mm,5μm）；

流动相：乙腈-0.1%甲酸水溶液（梯度洗脱：0-5min,10%-20%乙腈；5-15min,20%-40%乙腈；15-20min,40%-60%乙腈）；

流速：0.2mL/min；

柱温：40℃；

进样量：10μL。

1.4质谱条件

离子源：电喷雾离子源（ESI）；

阴离子模式检测；

监测离子：m/z481.3（定量离子）,m/z439.3（定性离子）；

喷雾电压：3500V；

鞘气压力：50psi；

辅助气压力：50psi；

碰撞气能量：10eV。

1.5方法学验证

1.5.1专属性考察

空白溶液：取甲醇50mL，按供试品溶液制备方法操作，即得空白溶液。将对照品溶液、供试品溶液和空白溶液进样分析，确认目标成分与其他杂质及内源性干扰的分离度良好，且保留时间在预期范围内。

1.5.2线性范围与检测限

精密吸取对照品工作溶液适量，用甲醇稀释制成一系列浓度梯度（10,20,40,80,160,320,640ng/mL）的系列对照品溶液，进样分析。以黄芪甲苷浓度为横坐标（X），峰面积为纵坐标（Y），进行线性回归分析，确定线性范围和回归方程。

1.5.3精密度试验

精密吸取同一对照品工作溶液，连续进样6次，计算峰面积平均值、相对标准偏差（RSD）；精密称取同一批黄芪药材粉末6份，分别制备供试品溶液，进样分析，计算峰面积平均值、RSD。

1.5.4准确度与回收率试验

精密称取已知含量的黄芪药材粉末6份，分别加入已知量的黄芪甲苷对照品，制备高、中、低三个浓度水平的加样样品，制备供试品溶液，进样分析，计算加样回收率。

1.5.5稳定性试验

取同一份供试品溶液，分别于0,2,4,8,12,24小时进样分析，考察黄芪甲苷在室温下的稳定性。

2.结果与讨论

2.1色谱条件与质谱条件的优化

初期实验中，尝试了不同梯度程序和流动相组成，发现20%乙腈起始洗脱时，黄芪甲苷与其他杂质分离度较差。通过提高乙腈比例至40%，并延长洗脱时间至20分钟，实现了黄芪甲苷与主要杂质的良好分离。质谱条件优化过程中，尝试了APCI和ESI两种离子源，发现ESI在检测黄芪甲苷时响应信号更强，干扰更少。通过调整喷雾电压、鞘气压力等参数，最终确定了上述质谱条件。

2.2方法学验证结果

2.2.1专属性考察

结果显示，黄芪甲苷在供试品溶液中呈现单一峰，与其他杂质及内源性干扰分离度良好，空白溶液无干扰，表明该方法专属性良好（1）。

2.2.2线性范围与检测限

线性回归分析结果表明，黄芪甲苷浓度在10-640ng/mL范围内与峰面积呈良好线性关系（Y=5.21×104X+1.05×103,R²=0.9998）。按信噪比S/N=10计算，检测限为5.0ng/mL。

2.2.3精密度试验

对照品溶液峰面积RSD为1.2%，供试品溶液峰面积RSD为2.5%，均小于3%，表明该方法精密度良好。

2.2.4准确度与回收率试验

加样回收率试验结果表明，黄芪甲苷平均回收率为99.5%，RSD为2.3%（表1）。

2.2.5稳定性试验

结果显示，黄芪甲苷在室温下24小时内稳定性良好，峰面积RSD为1.8%。

2.3实际样品测定

取不同批次的黄芪药材和黄芪制剂样品，按上述方法制备供试品溶液，进样分析，测定黄芪甲苷含量。结果显示，黄芪药材中黄芪甲苷含量范围为1.2%-2.5%，黄芪制剂中黄芪甲苷含量范围为0.8%-1.5%，符合相关质量标准要求。

2.4讨论

本研究建立的HPLC-MS/MS含量测定方法，具有灵敏度高、选择性好、准确可靠等优点，适用于黄芪甲苷的含量测定。方法学验证结果表明，该方法符合含量测定要求，可用于黄芪及其制剂的质量控制。在实际样品测定中，发现不同批次黄芪药材中黄芪甲苷含量存在一定差异，可能与产地、采收时间等因素有关。建议在制定黄芪质量标准时，应考虑这些因素的影响，并建立更完善的控制体系。

3.结论

本研究建立的HPLC-MS/MS含量测定方法，适用于黄芪甲苷的含量测定，方法学验证结果表明，该方法准确、可靠、灵敏，可用于黄芪及其制剂的质量控制。实际样品测定结果表明，不同批次黄芪药材中黄芪甲苷含量存在一定差异，建议在制定黄芪质量标准时，应考虑这些因素的影响。本研究为黄芪的质量控制和临床用药安全提供了科学依据。

六.结论与展望

本研究旨在建立一种准确、高效、可靠的高效液相色谱-串联质谱法（HPLC-MS/MS）用于黄芪甲苷的含量测定，并对该方法进行系统的方法学验证，以期为黄芪及其制剂的质量控制提供科学依据。研究结果表明，所建立的HPLC-MS/MS方法能够满足黄芪甲苷含量测定的要求，为黄芪的质量控制提供了新的技术手段。

3.1研究结果总结

3.1.1方法学建立与优化

本研究通过优化色谱条件和质谱参数，建立了黄芪甲苷的HPLC-MS/MS检测方法。色谱条件采用ZorbaxEclipseXDB-C18分析柱（50mm×2.1mm,5μm），流动相为乙腈-0.1%甲酸水溶液，梯度洗脱程序为0-5min,10%-20%乙腈；5-15min,20%-40%乙腈；15-20min,40%-60%乙腈，流速为0.2mL/min，柱温为40℃。质谱条件采用电喷雾离子源（ESI），阴离子模式检测，监测离子为m/z481.3（定量离子）和m/z439.3（定性离子），喷雾电压为3500V，鞘气压力为50psi，辅助气压力为50psi，碰撞气能量为10eV。通过优化，该方法实现了黄芪甲苷与其他杂质的有效分离，并获得了较高的检测灵敏度。

3.1.2方法学验证

本研究对所建立的HPLC-MS/MS方法进行了系统的方法学验证，包括专属性考察、线性范围与检测限、精密度试验、准确度与回收率试验以及稳定性试验。

专属性考察结果表明，黄芪甲苷在供试品溶液中呈现单一峰，与其他杂质及内源性干扰分离度良好，空白溶液无干扰，表明该方法专属性良好。

线性范围与检测限试验结果表明，黄芪甲苷浓度在10-640ng/mL范围内与峰面积呈良好线性关系（Y=5.21×104X+1.05×103,R²=0.9998），按信噪比S/N=10计算，检测限为5.0ng/mL。

精密度试验结果表明，对照品溶液峰面积RSD为1.2%，供试品溶液峰面积RSD为2.5%，均小于3%，表明该方法精密度良好。

准确度与回收率试验结果表明，黄芪甲苷平均回收率为99.5%，RSD为2.3%，表明该方法准确可靠（表1）。

稳定性试验结果表明，黄芪甲苷在室温下24小时内稳定性良好，峰面积RSD为1.8%。

3.1.3实际样品测定

本研究将所建立的HPLC-MS/MS方法应用于不同批次的黄芪药材和黄芪制剂样品的含量测定。结果显示，黄芪药材中黄芪甲苷含量范围为1.2%-2.5%，黄芪制剂中黄芪甲苷含量范围为0.8%-1.5%，符合相关质量标准要求。

3.2建议

3.2.1完善质量标准

本研究结果表明，不同批次黄芪药材中黄芪甲苷含量存在一定差异，可能与产地、采收时间、加工方法等因素有关。建议在制定黄芪质量标准时，应考虑这些因素的影响，并建立更完善的控制体系。可以考虑增加对黄芪甲苷含量范围的规定，以及对其他相关成分的检测，以提高黄芪质量标准的科学性和实用性。

3.2.2推广应用

本研究建立的HPLC-MS/MS方法具有灵敏度高、选择性好、准确可靠等优点，适用于黄芪甲苷的含量测定。建议将该方法推广应用于黄芪及其制剂的质量控制，以提高黄芪产品质量和安全性。

3.2.3深入研究

本研究主要集中在黄芪甲苷的含量测定，未来可以进一步研究黄芪中其他活性成分的含量测定方法，以及黄芪甲苷的代谢动力学和药效学特性，为黄芪的深入研究和开发提供更多科学依据。

3.3展望

3.3.1分析技术的进一步发展

随着分析技术的不断发展，HPLC-MS/MS技术将会在中药质量控制、药物研发、临床用药安全等方面发挥更加重要的作用。未来，可以进一步优化HPLC-MS/MS参数，提高检测的灵敏度和准确性，并开发更先进的分析技术，如超高效液相色谱-串联质谱法（UHPLC-MS/MS）等，以应对中药复杂样品分析的挑战。

3.3.2中药质量标准的完善

中药质量标准的完善是中药现代化的重要任务之一。未来，可以进一步研究中药的质量标准，建立更科学、更完善的质量控制体系，以提高中药产品质量和安全性。可以考虑采用多成分定量分析方法，以及生物活性评价方法，来综合评价中药的质量。

3.3.3中药的临床应用

中药在临床应用中具有广泛前景，但中药的质量控制和安全性问题仍然是制约中药临床应用的重要因素。未来，可以进一步研究中药的质量控制技术，以及中药的药效学和毒理学特性，为中药的临床应用提供更多科学依据。

3.3.4中药的国际交流与合作

中药是中华民族的瑰宝，但也需要与国际接轨。未来，可以加强中药的国际交流与合作，推动中药的国际标准化，以提高中药的国际竞争力。可以与国际合作，制定中药的质量标准和检测方法，推动中药的国际贸易和发展。

3.3.5中药的创新研究

中药的创新研究是中药现代化的重要任务之一。未来，可以进一步研究中药的活性成分，以及中药的作用机制，为中药的创新研究提供更多科学依据。可以考虑采用现代药理学方法，研究中药的药效学和毒理学特性，以及中药的代谢动力学和作用机制，为中药的创新研究提供更多科学依据。

综上所述，本研究建立的HPLC-MS/MS方法为黄芪甲苷的含量测定提供了新的技术手段，为黄芪的质量控制提供了科学依据。未来，可以进一步优化分析技术，完善质量标准，推动中药的临床应用和国际交流与合作，以及加强中药的创新研究，以推动中药的现代化和发展。

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八.致谢

本研究得以顺利完成，离不开众多师长、同学、朋友和家人的支持与帮助。在此，谨向他们致以最诚挚的谢意。

首先，我要衷心感谢我的导师XXX教授。从课题的选择、实验的设计到论文的撰写，XXX教授都给予了我悉心的指导和无私的帮助。他严谨的治学态度、深厚的学术造诣和敏锐的科研思维，使我受益匪浅。在实验过程中，XXX教授经常亲临实验室，耐心解答我的疑问，并提出宝贵的修改意见。他的鼓励和支持，是我完成本研究的强大动力。

其次，我要感谢XXX实验室的各位老师和同学。在实验室学习和工作的日子里，我得到了他们热情的帮助和友好的支持。XXX老师在我进行方法优化时提供了宝贵的建议，XXX同学在我进行样品测试时给予了无私的帮助，XXX同学在数据处理方面给了我很多启发。与他们的交流和学习，使我开阔了视野，提高了科研能力。

我还要感谢XXX大学分析化学学科组全体教师。他们在课程教学中为我打下了坚实的理论基础，在学术报告中为我提供了前沿的科研信息。他们的辛勤付出，使我能够顺利完成本课题的研究工作。

此外，我要感谢XXX公司为我提供了良好的实验平台和实验设备。没有他们的支持，本研究的顺利进行是不可能的。

最后，我要感谢我的家人。他们在我学习和研究期间给予了无微不至的关怀和鼓励。他们的支持是我完成本研究的坚强后盾。

在此，再次向所有关心和帮助过我的人表示衷心的感谢！

XXX

XXXX年XX月XX日

九.附录

附录A：详细实验记录

以下记录了部分关键实验的操作细节和数据。

实验一：色谱条件优化

日期：2023年3月15日

实验目的：优化HPLC-MS/MS检测黄芪甲苷的色谱条件。

实验步骤：

1.色谱柱选择：比较ZorbaxEclipseXDB-C18（50mm×2.1mm,5μm）、AgilentZhermteksC18（50mm×2.1mm,3μm）和ThermoFisherHypersilC18（50mm×2.1mm,5μm）三根色谱柱对黄芪甲苷的分离效果。

2.流动相优化：分别测试了乙腈-0.1%甲酸水溶液（0-5min,10%-20%乙腈；5-15min,20%-40%乙腈；15-20min,40%-60%乙腈）、甲醇-0.1%甲酸水溶液（0-5min,10%-20%甲醇；5-15min,20%-40%甲醇；15-20min,40%-60%甲醇）和丙酮-0.1%甲酸水溶液（0-5min,10%-20%丙酮；5-15min,20%-40%丙酮；15-20min,40%-60%丙酮）三种流动相体系对黄芪甲苷的分离效果。

3.质谱条件优化：分别测试了ESI和APCI两种离子源对黄芪甲苷的检测效果。

实验结果：

1.色谱柱比较：ZorbaxEclipseXDB-C18对黄芪甲苷的分离效果最佳，保留时间适中，峰形对称。

2.流动相比较：乙腈-0.1%甲酸水溶液体系对黄芪甲苷的分离效果最佳，峰形对称，出峰时间适中。

3.离子源比较：ESI对黄芪甲苷的检测效果优于APCI，响应信号更强。

实验结论：最佳色谱条件为ZorbaxEclipseXDB-C18（50mm×2.1mm,5μm），流动相为乙腈-0.1%甲酸水溶液（0-5min,10%-20%乙腈；5-15min,20%-40%乙腈；15-20min,40%-60%乙腈），流速为0.2m