非淀粉多糖水解酶活力测定

1非淀粉多糖水解酶活力测定本标准适用于酶制剂原料（包括发酵液、粗提液、纯化液、成品）中的纤维素酶、α-半乳糖苷酶、木聚糖酶、β-葡聚糖酶、甘露聚糖酶和果胶酶的GB1886.174食品安全国家标准食品添加剂食品工业用酶制剂GB/T6682分析实验室用水规格和试验GB/T27025检测和校准实验室能力的GB/T36861饲料添加剂β-甘露聚糖酶活力的测定NY/T912饲料添加剂纤维素酶活力的测定分光光度计法NY/T4361饲料添加剂α-半乳糖苷酶活力的测定分光光度计法3.1非淀粉多糖non-starchpoly3.23.33.423.53.63.73.84实验室基本要求a)样品制备区：用于底物溶解、酶液稀释，配备超纯水系统和无菌操作台；b)反应控制区：放置恒温设备，避免振动和光照干扰；c)分析检测区：独立分光光度计操作台，避免灰尘污染光路；4.3实验室应配备应急处理设施，包括洗眼器、急救箱及防毒面具。5.1实验耗材、试剂应从经过资质机构认可的厂家货供应商采购，必要时对供应商6.1.2应使用无菌、洁净的专用取样器具，器具所用材质不应对酶活力产6.1.3样品采集后应立即处理或测6.1.4样品应及时加贴唯一的标签，标签内容应包括样品编号、样品名称、取样时间与人员，以及其他任何必要的信息。标签应防潮，书写的内容应不可6.2取样点所取样品应具有代表性，取样点包括但不限于发酵过程中规定的取样点、发酵终点、离心/过滤终36.3取样频率6.5取样量应满足检测所需量的至少3倍，一份用于检测，一份用于备检，一份用7.3木聚糖酶7,4β-葡聚糖酶7.6果胶酶8.2实验人员应遵守化学试剂的储存、使用及废弃物处理规范。9记录与测试报告9.1应记录实验的具体操作程序和结果，出具测试报告。——实验样品的全部信息；1A.1试剂和材料A.1.3乙酸钠溶液：浓度为0.1mo称取三水乙酸钠1.36g，加水溶解，定容称取三水乙酸钠23.14g，加入冰乙酸1.70mL果pH偏离5.50，再用乙酸溶液（A.1.2）或乙酸钠溶液（A.1A.1.5氢氧化钠溶液：浓度为200g称取氢氧化钠20.0g，加水溶解，定容至A.1.6木糖溶液：浓度为10.0mg称取无水木糖1g（精确至0.0001g加磷酸氢二钠-柠A.1.7木聚糖溶液：浓度为10.0m定其pH。如果pH为5.50，用乙酸-乙酸钠缓冲溶液（A.1.4）定容至100mL。如果pH偏离5.50，再用乙酸溶液（A.1.2）或乙酸钠溶液（A.1.3）调节至5.50，然后再用乙酸使用前适当摇匀。4℃避光保存，有效期为12h。化钠溶液（A.1.5同时不断搅拌，直到溶液清澈透。注意：在加入氢氧化钠过程中，溶液温度不应警示——处理酸碱和配制DNS试剂时，应在通风橱或通风良好的房间进行，戴上保护眼镜和乳胶手1)上海源叶S25874是适合的市售产品的实例。给出这一信息是为了方便本文件的使用者，并不表示对这一产品的认可。如2A.2仪器设备A.2.1分光光度计：波长540nm。A.2.2分析天平：感量0.001g和0.0001A.2.3离心机：转速不低于3000A.2.4pH计：精确值0.01。A.2.6磁力搅拌器：附加热功能。A.2.7恒温水浴锅：温度控制范围在30~80℃之间，精度为0.1℃。A.2.8涡旋混合器：转速不低于300rpA.2.10计时器：精度1s。A.3绘制标准曲线分别用乙酸-乙酸钠缓冲溶液（A.1.4）定容至100mL，配制成浓度为0.10mg/mL、0.20mgA.3.3分别吸取上述浓度系列的木糖标准溶液各2.00mL（做光度OD值。以木糖浓度为Y轴、吸光度A值为X轴，绘制标A.4反应用酶液制备A.4.1固体样品的反应用酶液制备再用乙酸-乙酸钠缓冲溶液定容至100mL,在4℃条件下避光保存1~2h。用离心机1000g离心3~5min，A.4.2液体样品的反应用酶液制备活力宜控制在0.04~0.10U/mL之间）。如果稀释后酶液的pH偏离5.50，需用乙酸溶液（A.1.2）或乙酸钠溶液（A.1.3）调节至5.50，然后再用乙酸-乙酸钠缓冲溶液做适当稀A.5测定步骤A.5.1吸取10.0mL木聚糖溶液（A.1.737℃水浴保温平衡A.5.2吸取10.0mL经过适当稀释的酶液，37℃水浴保温平衡10min。3A.5.3吸取2.0mL经过已经过37℃平衡的适当稀释酶液，加入到刻度为空白对照，在540nm处测定吸光度A.5.4吸取2.00mL经过已经过37℃平衡的适当稀释的酶液，加入到刻度试管中，再加入已经过37℃电磁振荡3s，以终止酶解反应。沸水浴加热5min，用自来水冷至室温，加水定容至25mL，电磁振荡3s。以标准空白样（A.3.1）为空白对照，在540nm测定吸光度AE。A.6结果计算XDXD——样品的木聚糖酶活力，单位为