卫生和微生物学基础知识、洁净作业培训

卫生和基础知识、洁净作业等方面培训质量部QA XXX法规要求医疗器械生产质量管理规范（2014年第64号）第十条 从事影响产品质量工作的人员，应当经过与其岗位要求相适应的培训，具有相关理论知识和实际操作技能。医疗器械生产质量管理规范附录植入性医疗器械2.1.2 凡在洁净室（区）工作的人员应当定期进行卫生和微生物学基础知识、洁净作业等方面培训。临时进入洁净室（区）的人员，应当对其进行指导和监督。北京市植入性医疗器械生产质量管理规范检查指南（2022版）京药监发〔2022〕120号企业对进入洁净室（区）的人员应进行卫生和微生物学基础知识、洁净技术方面的培训及考核。应保持年度培训计划及进入洁净室（区）人员的培训和考核记录，培训记录应能体现对卫生和微生物基础知识、洁净技术方面的内容。临时进入洁净室（区）的人员，企业应当对其进行指导和监督。培训目的了解微生物及分类、控制措施等。懂得如何洗手、进行手部消毒等。了解灭菌、消毒及常见的灭菌、消毒方法等。洁净作业方面的基础知识等。国家对医疗器械按照风险程度实行分类管理一、微生物学基础知识什么是微生物?是存在于自然界的一大群体形微小、结构简单、肉眼直接看不见，必须借助光学显微镜或电子显微镜放大数百倍、数千倍，甚至数万倍才能观察到的微小生物。列文虎克Antonie

Philips

van

Leeuwenhoek

（1632-1723） 微生物的发现者是一位荷兰贸易商与科学家，有光学显微镜之父的称号列文虎克自制的显微镜在19世纪中叶以前，人们认为细菌是自然产生的。19世纪中叶，法国科学家（微生物之父---巴斯德）

作了一个著名的鹅颈瓶实验，推翻了人们原来的看法，证明了肉汤中的细菌不是自然发生的，而是由空气中原来已存在的细菌产生的。巴斯德Louis

Pasteur（1822—1895）①发现乳酸菌、酵母菌；②提出巴氏消毒法；③1880年成功地研制出鸡霍刮疫苗、狂犬病疫苗等多种疫苗！微生物的由来巴斯德的解释桌上A瓶中的肉汤，因为空气中的细菌可以进去，几天就腐败了。而鹅颈瓶中的肉汤虽然与空气相通，但细菌只落在鹅颈瓶的弯曲处，因此四年都没有腐败！郭霍Robert

Koch

（1843-1910） 伟大的德国医学家、大名鼎鼎的罗伯特·科赫以举世瞩目的开拓性成绩，问心无愧地摘走了诺贝尔生理学及医学奖。重要贡献：首次证明了一种特定的微生物是特定疾病的病原，阐明了特定细菌会引起特定的疾病；发明了用固体培养基的细菌纯培养法、细菌染色法等。微生物的培养病毒的发现1892年，俄国植物生理学家伊凡诺夫斯基发现了烟草花叶病病原体是比细菌还小的、能通过细菌过滤器的、光学显微镜下不能看到的生物，称之为滤过性病毒。这是人类发现的第一种病毒，即烟草花叶病病毒。1897年德国细菌学家勒夫勒和弗施发现第一种动物病毒-口蹄疫病毒。1901年，对人致病的第一种病毒黄热病病毒首先由美国细菌学家里德领导的黄热病委员会证实。细菌病毒(噬菌体)则分别由特沃特和埃雷尔发现。随后相继分离出许多对人类、动物和(或)植物致病的病毒。微生物的分类微生物非细胞型（病毒）是最小的一类微生物。无典型的细胞结构，无产生能量的酶系统，旦能在活细胞内生长增殖；细胞型原核微生物真核微生物古生菌细菌真菌 （酵母菌、霉菌、蕈（xùn）菌等）单细胞藻类原生动物等又称真细菌，包括普通细菌、放线菌、蓝细菌、支原体、立克次氏体、衣原体等古生物在进化谱系上与真细菌及真核生物相互并列，且与后者关系更近，而其细胞构造却与真细菌较为接近，同属于原核生物。核酸类型为DNA或RNA，两者不同时存在。这类微生物的原始核呈环状裸DNA团块结构，无核膜，核仁；细胞器很不完善，只有核糖体；DNA和RNA同时存在。细胞核分化程度高，有核膜和核仁。细胞器完整。按其致病性可分为：★病原性微生物：有致病性★非病原性微生物：无致病性微生物的分类用革兰氏染色法可将细菌分为两大类，即

菌和G-菌：★ ： ★革兰氏阳性菌G-：微生物的分类分类鉴别显微镜放大法1.普通光学显微镜(light

microscope) 以可见光(日光或灯光)为光源，波长0.4～0.7μm，平均约0.5μm。其分辨率(resolving

power)为光波波长的一半，

即0.25μm。常用油镜观察细菌(放大1000倍)。用普通光学显微镜观察细菌时，

需将细菌染色，以增加其与周围环境的对比度，以便人眼睛可观察清楚。分类鉴别显微镜放大法2.电子显微镜(electron

microscope) 是利用电子流代替可见光波，以电磁圈代替放大透镜。电子波长极短，约为0.005nm，其放大倍数可达数十万倍，能分辨1nm的微粒。不仅能看清细菌的外形，内部超微结构也可一览无遗。电子显微镜显示的形象，可投射到荧光屏上，也可照相拍摄。目前使用的电子显微镜有两类，即透射电子显微镜(transmission

electron

microscope，TEM)和扫描电子显微镜(scanning

electron

SEM)。SEM的分辨率一般较TEM低，但可清楚地显露观察物体的三维立体图像。配合电子显微镜观察使用的标本制备方法有用磷钨酸或钼酸铵作负染色、投影法(shadowing)、

超薄切片(ulrathin

section)、冰冻蚀刻法(freeze

etching)等。电子显微镜标本须在直空干燥的状态下检查，故不能观察活的微生物。此外，尚有暗视野显微镜(darkfield

microscope)、相差显微镜(phase

conturast

microscope)、荧光显微镜(fluorescence

microscope)和激光共聚焦显微镜(confocal

microscope)等，适用于观察不同情况下的细菌形态和(或)结构。分类鉴别染色法原理：菌细胞富含核酸,可以与带正电荷的碱性染色剂结合最常用和最重要的分类鉴别染色法是 (Gram

staining)。该法是丹麦细菌学家革兰(Hans

Christian

Gram,1853-1938)于1884年创建,至今仍在广泛应用。标本经固定后,先用碱性染料结晶紫初染,再加碘液媒染,使之生成结晶紫-碘复合物。此时细菌均染成深紫色。然后用95%乙醇脱色,有些细菌被脱色,有些不能。最后用稀释复红或沙黄复染。此法可将细菌分为两大类:不被乙醇脱色仍保留 者为 ,被乙醇脱色后复染成红色者为革兰阴性菌。革兰染色法在鉴别细菌、选择抗菌药物、研究细菌致病性等方面具有重要的意义。酸性染色剂不能使细菌着色，而使背景着色形成反差，故称为负染(negative

staining)。微生物的作用O

绝大多数微生物对人类和动、植物是有益的，而且有些还是必需的。只有少数微生物可引起人类和动、植物的病害。O

我们要控其害、用其益，使微生物更好地与人类和动、植物相处。微生物的危害微生物的益处微生物特性O

体积小，面积大；O

吸收多,

转化快；

O

生长旺，繁殖快；

O

适应强，易变异；

O

分布广，种类多。细菌形体微小，通常以微米（1μm=1/1000mm）为测量单位。肉眼的最小分辩率为0.2mm，因此，观察细菌的形态、结构必须借助光学显微镜放大几百倍到上千倍才能看到。1、大约10亿个细菌堆起来，才有一颗小米那么大；2、300个细菌竖着排列只有普通的一张纸那样厚。细菌细胞结构细胞壁细胞膜细胞质核质基本构造特殊构造荚膜鞭毛菌毛芽胞(bacterium)是原核生物界(prokaryote)的一种单细胞微生物，有广义和狭义两种范畴。广义的细菌泛指各类原核细胞型微生物，包括细菌、放线菌、支原体、衣原体、立克次体螺旋体。狭义上的细菌专指数量最大、种类最多、具有典型代表性的细菌。它们形体微小,结构简单,具有细胞壁和原始核质，无核仁和核膜，除核糖体外无其他细胞器。细菌的基本形态察细菌最常用的仪器是光学显微镜，其大小可以用测微尺在显微镜下测

量，一般以微米(μm)为单位。球菌球菌双球菌

(diplococcus)链球菌

(streptococcus)葡萄球菌

(staphylococcus)四联球菌

(tetrad)八叠球菌

(sarcina)在一个平面上分裂，分裂后两个菌体成对排列，如脑膜炎奈瑟菌、肺炎链球菌。在一个平面上分裂，分裂后多个菌体连接成链状，如乙型溶血性链球菌。在两个互相垂直的平面上分裂，分裂后四个菌体黏附在一起呈正方形，如四联加夫基菌。在多个不同平面上分裂，分裂后菌体无一定规则地排列在一起似葡萄状，如金黄色葡萄球菌。在三个互相垂直的平面上分裂，分裂后八个菌体排列成包裹状立方体，如藤黄八叠球菌。多数球菌(coccus)直径在1μm左右，外观呈圆球形或近似球形。杆菌杆菌链杆菌(streptobacilus)棒状杆菌(corynebacterium)球杆菌(coccobacillus)分枝杆菌(mycobacterium)双杆菌(bifidobacterium）多数呈直杆状，也有的菌体稍弯；多数呈分散存在，也有的呈链状排列；菌体两端大多呈钝圆形，

少数两端平齐(如炭疽芽胞杆菌)或两端尖细(如梭杆菌)。末端膨大成棒状。常呈分枝生长趋势。菌体短小，近于椭圆形。末端常呈分叉状。不同杆菌(bacillus)的大小、长短、粗细差别较大。大的杆菌如炭疽芽胞杆菌长3～10μm，中等大小的如大肠埃希菌长2～3μm，小杆菌如布鲁菌长仅0.6～1.5μm。螺形菌螺形菌弧菌属(Vibro)螺菌属(Spirillum)螺杆菌属

(Helicobacter)弯曲菌属

(Campylobacter)菌体只有一个弯曲，呈弧形或逗点状，如霍乱弧菌和副溶血弧菌。菌体有两个以上弯曲，如鼠咬热螺菌呈U形、S形等，如空肠弯曲菌。菌体连续弯曲呈螺旋状，如幽门螺杆菌螺形菌(spirl

bacterium)为一类有动力、螺旋形或弧形的革兰阴性杆菌，分类学上属于不同的属。细菌的形态受温度、pH、培养基成分和培养时间等环境因素影响很大。一般是细菌在适宜的生长条件下培养8～18小时时形态比较典型，在不利环境或菌龄老时常出现梨形、气球状和丝状等不规则的多形性(polymorphism)，称为衰退型(involution

form)。因此，观察细菌的大小和形态，应选择适宜生长条件下的对数生长期细菌为宜。几种微生物大小的比较类型真菌细菌立克次体衣原体支原体病毒直径（微米）1～5.00.5～2.00.2～0.50.2～0.30.2～0.25<0.25可见性光镜光镜光镜光镜勉强可见光镜勉强可见电镜细菌显微大小图bko1-13细菌有多小How

small

are

bacteria?

Shown

here.

Bacilluscells

on

the

tip

ofapin.

The

cellsin(c)

are

magnified

14,000

times.葡萄球菌酵母菌（芽痕）棒状杆菌大肠杆菌弧状菌链球菌细菌的繁殖条件(1)营养物质

充足的营养物质①水②碳源③氮源④无机盐⑤生长因子（有些细菌需要）可以为细菌的新陈代谢及生长繁殖提供必要的原料和充足的能量(2)氢离子浓度(pH)7.2～7.6每种细菌都有一个可生长的pH范围，以及最适生长pH。大多数嗜中性细菌生长的pH范围是6.0~8.0，嗜酸性细菌最适生长pH可低至3.0，嗜碱性细菌最适生长pH可高达10.5。，但霍乱弧菌在pH8.4~9.2生长最好，而结核分枝杆菌生长的最适pH为6.5~6.8。细菌依靠细胞膜上的质子转运系统调节菌体内的pH，使其保持稳定，包括ATP

驱使的质子泵，Na+/H+和K+/H+交换系统。细菌的繁殖条件(3)温度 37℃各类细菌对温度的要求不一。分为嗜冷菌(peychrophile)，其生长温度范围-5~30℃，最适生长温度为10~20℃；嗜温菌(mesophile)，生长温度范围10～45℃，最适为20～40℃；

嗜热菌(thermophile)，生长温度范围25-95℃，最适为50~60℃。病原菌在长期进化过程中适应人体环境，均为嗜温菌，最适生长温度为人的体温，即37℃。当细菌突然暴露于高出适宜生长温度的环境时，可暂时合成热休克蛋白(heat-shock

proteins)。这种蛋白对热有抵抗性，并可稳定菌体内热敏感的蛋白质。细菌的繁殖条件(4)气体①对O2要求(专性需氧菌、微需氧菌、兼性厌氧菌、专性厌氧菌）②对CO2要求：

5~10%

CO2根据细菌代谢时对分子氧的需要与否,可以分为四类。专性需氧菌(obligate

aerobe)：专性需氧菌具有完善的呼吸酶系统，需要分子氧作为受氢体以完成需氧呼吸，仅能在有氧环境下生长。如结核分枝杆菌、铜绿假单胞菌。微需氧菌(microaerophilic

bacterium)：微需氧菌在低氧压(5%～6%)生长最好，氧浓度>10%对其有抑制作用。如空肠弯曲菌，幽门螺杆菌。兼性厌氧菌(fecultative

anaerobe)：兼性厌氧菌兼有需氧呼吸和无氧发酵两种功能，不论在有氧或无氧环境中都能生长，但以有氧时生长较好。大多数病原菌属于此类。细菌的繁殖条件4.(obligate

anaerobe)：专性厌氧菌缺乏完善的呼吸酶系统，利用氧以外的其他物质作为受氧体， 。有游离氧存在时，不但不能利用分子氧，且还将受其毒害，甚至死亡。这是因为细菌在有氧环境中进行物质代谢常产生和 ，两者都有强烈的杀菌作用。厌氧菌因缺乏过，故在有氧时受到有毒氧基团的影响，就不能生长繁殖。如破伤风梭菌、脆弱类杆菌。但不同种属的细菌，其厌氧程度有所差别。另外，CO2对细菌的生长也很重要。大部分细菌在新陈代谢过程中产生的CO2可满足其需要。有些细菌如脑膜炎奈瑟菌和布鲁菌，在从标本初次分离时，需人工供给5%～10%的CO2，可促进细菌迅速生长繁殖。细菌的繁殖条件(5)渗透压一般培养基的盐浓度和渗透压对大多数细菌是安全的，少数细菌如嗜盐菌(halophilic

bacterium)需要在高浓度(30g/L)的

NaCl环境中生长良好。细菌的繁殖方式二分裂的无性繁殖（即裂殖，通过细胞分裂的方式繁殖）

一般细菌约20~30分钟繁殖一代细菌的繁殖方式<==细菌细胞分裂的电镜超薄切片图杆菌二分裂过程二分裂的无性繁殖速度细菌一般每20～30分钟即可分裂一次!细菌生长繁殖曲线迟缓期(lsg

phase)

细菌进人新环境后的短暂适应阶段。1~4h

,

分裂作准备对数期

(logarithmic

phase

)

又称指数期(exponential

phase)。细菌在该期生长迅速，活菌数以恒定的几何级数增长，生长曲线图上细菌数的对数呈直线上升,达到顶峰状态。8~18h后

,

几何级数增长,

研究细菌最佳稳定期

(stationary

phase)由于培养基中营养物质消耗，有害代谢产物积聚，该期细菌繁殖速度渐减，死亡数逐渐增加，两者大致平衡，因此该期的活菌数大致恒定，总的细菌数缓慢增加，细菌形态、染色性和生理性状常有改变。有害代谢产物积累，活菌数不增加稳定期后细菌繁殖越来越慢，死亡数越来越多，并超过活菌数。死亡数>繁殖数细菌显微图片大肠埃希菌Escherichiacoli金黄色葡萄球菌Staphylococcusaureus细菌显微图片

沙门菌Salmonella铜绿假单抱菌Pseudomonas

aeruginosa细菌显微图片生孢梭菌Clostridium枯草芽孢杆菌Bacillus

subtilis细菌显微图片放线菌白色念珠菌显微图菌落形态其它微生物显微图片支原体扫描电镜图片衣原体胞浆内有球形和椭圆形的包含体——衣原体。支原体(mycoplasma)以前被认为是最小的能独立存活的原核生物，以前也被认为是地球上迄今为止被发现的最小的细胞生物。全世界90%的猪体内寄生着支原体。其它微生物显微图片立克次体一种微小的寄生的细菌勾端螺旋体图是动物的淋巴细胞，红色的是寄生的立克次体芽胞某些细菌在一定的环境条件下，胞质脱水浓缩，在菌体内部形成一个圆形或卵圆形小体，是细菌的休眠形式，称为芽胞(spore)。芽胞O

在条件适宜时，芽胞可形成新的菌体。一个细菌只形成一个芽胞，

一个芽胞也只能形成一个菌体。芽胞的形成不是细菌的繁殖方式，而是营养缺乏的一种反应，是细菌的休眠状态。O

与芽胞相比，未形成芽胞而具有繁殖能力的菌体称为繁殖体。芽胞的特征含水量少（约繁殖体的40%），蛋白质不易受热变性壁厚，折光性强，不易着色。具有多层致密的厚膜，理化因素不易透入核心和皮质中含有吡啶二羟酸(dipcolinic

acid,DPA)，DPA与钙结合生成的盐能提高芽胞中各种酶的热稳定性；芽胞形成过程中很快合成DPA,同时也获得耐热性一个细菌只形成一个芽胞，一个芽胞发芽也只生成一个菌体，细菌数量并未增加，故芽胞不是细菌的繁殖方式。细菌芽胞并不直接引起疾病，只有在芽胞发芽成为繁殖体后，才能迅速大量繁殖而致病。芽胞的特征细菌的营养细胞在70～80℃时10分钟就死亡，而芽胞在120～140℃还能生存几小时，营养细胞在5%苯酚溶液中很快就死亡，芽胞却能存活15天，芽胞的大多数酶处于不活动状态，代谢活力极低，所以，芽胞是抵抗外界不良环境的休眠体。无法彻底杀灭芽胞的原因分析：1、长期使用低效消毒剂。如季铵盐化合物(QACs)，对革兰氏阴性菌效果不理想，尤其是假单胞菌对其有较强耐药性。2、没有合理的进行消毒剂轮换。有些企业消毒剂使用比较单一，没有考虑消毒剂功效的互补性；有些企业所轮换的消毒剂其活性成分属于一个类型，没有起到轮换的作用，如两种不同的季铵盐化合物轮换等。3、消毒计划里面没有准备能杀芽孢的消毒剂。洁净区的卫生特别重要。应按照书面规程，对洁净区进行必要的清洁和消毒。所采用消毒剂的种类应多于一种。为及时发现是否出现耐受性菌株及其蔓延情况，应定期进行环境监测。微生物显微图片-酵母菌形态：通常有球状、卵圆状、椭圆状、柱状和香肠状等。无性繁殖一芽殖（主要方式）、裂殖、产生无性孢子酵母菌繁殖方式有性繁殖一产生子囊孢子酵母菌繁殖方式霉菌霉菌是一些丝状真菌的通称，其菌体由分枝或不分枝的菌丝构成，

许多菌丝交织成团。大小：菌丝直径约2~10μm，比一般的杆菌及放线菌菌丝约宽几到几十倍。常见的霉菌黑曲霉及其菌落可引起烧伤病人皮肤感染或真菌性肺部感染常见的霉菌青霉菌及其菌落霉菌繁殖方式无性繁殖—无性孢子繁殖（最常见），菌丝也可延伸、分枝而生长

霉菌繁殖方式有性繁殖—有性鞄子繁殖（不常见）霉菌繁殖方式<常见的真菌微生物类别菌落特征单细胞微生物菌丝状微生物细菌酵母菌放线菌霉菌主要特征菌落含水状态很湿或较湿较湿干燥或较干燥干燥外观形态小而突起或大而平坦大而突起小而紧密大而疏松或大而致密细胞相互关系单个分散或有一定排列方式单个分散或假丝状丝状交织丝状交织形态特征小而均匀，个别有芽孢大而分化细而均匀粗而分化参考特征菌落透明度透明或稍透明稍透明不透明不透明菌落与培养基结合程度不结合不结合牢固结合较牢固结合菌落颜色多样单调，一般呈乳脂或矿烛色，少数红或黑色十分多样十分多样菌落正反面颜色的差别相同相同一般不同一般不同菌落边缘一般看不到细胞可见球状、卵圆状或假丝状细胞有时可见细丝状细胞可见粗丝状细胞细胞生长速度一般很快较快慢一般较快气味一般有臭味多带酒香味常有泥腥味往往有霉味非细胞型微生物病毒真病毒亚病毒噬菌体植物病毒动物病毒类病毒卫星病毒朊粒基本概念病毒（virus）形态最微小，结构最简单的微生物，必须生长在活细胞中，借助电子显微镜才能观察到的非细胞型微生物。病毒体（virion）结构完整的具有感染性的病毒颗粒。测量病毒大小的单位1纳米（nm）=1/1000微米（μm）病毒分类的研究历史较短，

一般采用一种非系统的、多原则的、分等级的分类法。国际病毒分类委员会(international

committee

on

taxonomy

of

viruses，

ICTV)2017

年公布的病毒分类命名最新报告中将病毒分为122个科，35个亚科，

735个属。病毒形态、大小结构病毒形态、大小结构包膜刺突裸露病毒（naked

virus）核心：核酸（DNA或RNA）衣壳：包绕核酸的蛋白质外壳包膜病毒（enveloped

virus）

核衣壳：核酸+衣壳包 膜：脂质双层

+

刺突（spike）核衣壳（nuclear

capsid）非细胞型微生物埃博拉病毒噬菌体无细胞结构，无产生能量的酶系统，由单一核酸（DNA/RNA）和蛋白质衣壳组成，必须在活细胞内增殖。如：病毒、噬菌体、类病毒和朊病毒艾滋病病毒非细胞型微生物

流感病毒virus-influenza禽流感病毒新型冠状病毒非细胞型微生物病毒繁殖方式病毒繁殖方式裂解：是指病毒侵入宿主细胞后，利用宿主细胞的代谢功能进行自我复制，最终导致宿主细胞破裂而释放出新的病毒融合：是指病毒侵入宿主细胞后，将自己的基因材料融合到宿主细胞的基因组中，使得宿主细胞产生新的病毒病毒增殖周期吸附（adsorption）：标志病毒感染的开始。穿入（penetration）：病毒进入到细胞内的过程。脱壳（uncoating）：标志病毒进入隐蔽期的开始。生物合成（biosynthesis）：核酸的复制，蛋白质合成。组装、成熟释放（assemble,

mature

and

release）。病毒增殖周期1.吸附（adsorption）：感染的第一步和关键*病毒体表面配体蛋白（吸附蛋白）

+

易感细胞表面受体*决定病毒的嗜组织性和宿主特异性吸附蛋白有包膜病毒：表面的糖蛋白无包膜病毒：核衣壳或者核衣壳上的蛋白突出部分特殊病毒：能与宿主体内相应的抗体形成免疫复合物，后者与细胞表面的免疫球蛋白受体结合而使病毒吸附于靶细胞，以利于病毒进入细胞，即病毒感染的抗体依赖的增强作用(antibody-dependent

enhancement,

ADE)病毒增殖周期2.穿入（penetration）：病毒体穿过细胞膜，进入细胞*融合：包膜病毒

+

部分裸露病毒*胞饮：裸露病毒

+

部分包膜病毒*直接注入：噬菌体病毒增殖周期3.脱壳（uncoating）：病毒脱去衣壳释放核酸*一些裸露病毒：穿入时即脱壳*包膜病毒：在细胞溶酶体酶作用下脱壳*复杂病毒（痘病毒）：细胞溶酶体脱外壳，病毒脱壳酶脱内壳病毒增殖周期胞膜融合细胞吞饮病毒增殖周期4.生物合成（biosynthesis）：利用宿主细胞的代谢系统，依照病毒基因的指令合成大量子代病毒的核酸和蛋白质。病毒mRNA转录、蛋白质翻译、核酸复制*早期：早期基因组

早期蛋白

功能蛋白*晚期：晚期基因组

晚期蛋白

结构蛋白核酸复制隐蔽期

eclipse

period

：

病毒生物合成期在细胞内查不出病毒体，在血清中也查不到病毒抗原。潜伏期

incubation

period：已经感染，但尚未出现临床症状阶段病毒增殖周期复制转录蛋白质翻译逆转录复制双链DNA病毒：以正链DNA为模板，转录产生mRNA，再在细胞核糖体上合成蛋白质。单链DNA病毒：先形成双链DNA，然后同1。正链RNA病毒：正链RNA具有mRNA功能，先合成一聚蛋白，加工后形成具有各种功能的病毒蛋白。负链RNA病毒：先转录产生mRNA，再合成蛋白。双链RNA病毒：以负链RNA为模板转录，然后同4。逆转录病毒：以正链RNA为模板逆转录为DNA

即cDNA，后者整合到细胞染色体，然后再合成mRNA和蛋白质。病毒增殖周期5.装配、成熟与释放装配

assembly

：核衣壳形成的过程大部分DNA病毒在细胞核内组装：如腺病毒大部分RNA病毒在细胞浆内组装：如脊髓灰质炎病毒有些病毒在细胞核膜上组装：如疱疹病毒也有病毒在细胞膜上组装：如流感病毒释放

release

：细胞裂解：裸露病毒出芽：包膜病毒细胞间桥或细胞融合：巨细胞病毒医药行业生产中微生物控制为什么要对产品生产进行微生物控制？微生物可以致病控制热原性反应不能让我们的顾客有感染致病微生物的潜在风险。微生物导致疾病性微生物中也有一部分能引起人或动植物病害，这些具有治病性的微生物，称为病原微生物。如人类的许多传染病(如感冒、伤寒、痢疾、结核、脊髓灰质炎、病毒性肝炎等)，均是由病原微生物引起的。热原质反应：在短时间内出现发热、寒颤、恶心、呕吐、头痛等症状，严重者甚至可休克，危及生命。这种现象称为热原质反应。热原质：是细菌合成的一种注入人体或动物体内能引起发热反应的物质。内毒素：是G-菌细胞壁的脂多糖,当细菌死亡或崩解后游离出来。外毒素：是多数G+菌和少数G-菌在生长繁殖过程中释放到菌体外的蛋白质。内毒素热原质反应是什么，热原从何而来？热原质耐高温, ,250C高温干烤才能破坏热原质。用吸附剂和特殊石棉滤板可除去液体中大部分热原质,蒸馏法效果最好。因此,在制备和使用注射药品过程中应严格遵守无菌操作,防止细菌污染。热原质特征及去除方法细菌内毒素与热原质的关系热原质=内毒素？内毒素是自前医药工业中最普遍和最主要的外源性热原，在GMP条件下控制内毒素污染就等于控制热原质污染。热原的检测方法1.家免法定义:系将一定剂量的供试品，静脉注入家兔体内，在规定时间内，观察家兔体温升高的情况，

以判定供试品中所含热原限度是否符合规。优点:能直观地反映各种热原致热程度。缺点:不能定量反映热原含量，不易标准化，结果重复性差，不适于放射性药物、肿瘤抑制剂等细胞毒性药物制剂，受动物个体差异影响大。热原的检测方法1.细菌内毒素检查法利用鲎试剂来检测或量化由革兰阴性菌产生的细菌内毒素，以判断供试品中细菌内毒素的限量是否符合规定的一种方法。优点:简单、快速、灵敏，可定量测试，生产过程监控和家兔法不能检测的样品。缺点:对细菌内毒素以外的热原不灵敏，有的供试品存在干扰，不能消除。目前尚不能完全替代家兔法。主要的微生物污染源空气工艺用水（纯化水、注射用水）表面（厂房、设备等）物料（原辅料、内包材）生产工艺人员微生物污染途径·自身污染：由于患者或员工自身携带微生物而污染。·接触污染：由于和非无菌的用具、器械或人的接触而污

染。·空气污染：由于空气所含微生物的沉降、附着或被吸入而污染。·其它污染：由于其他因素（如昆虫）而污染。微生物污染源的控制空气·合适的空气净化系统；·合适的检查空气洁净度的方法；·合适的空气净化系统的验证规程；·合适的空气净化系统的维修规程。微生物污染源的控制工艺用水·合适的工艺用水系统，使之合理设计、适当安装、定期验证和有效监控；·合适的水系统的消毒灭菌措施及验证规程；·合适的高于法定标准的内控标准及检验方法。·合适的工艺用水系统的维修规程。微生物污染源的控制表面（厂房、设备等）·合适的材质控制与选用；·合适的消毒灭菌规程；·合适的验证方法；·合适的维修规程。微生物污染源的控制物料·对主要供应商质量体系评估；·合适的高于法定标准的内控标准；·合适的消毒灭菌和过滤规程；·合适的物料处理规程与设备；·合适的控制和测试方法，确保清洁水平和灭菌。微生物污染源的控制生产工艺·合适的清洁和消毒规程以及设备；·将危险源大和危险源小的操作隔离开来的屏障和隔离；·保护性层流设备；·适用于严格控制的洁净室（区）操作的工艺设备；·合适的操作规程，确保机械、设备得到完善的处理、清洁和灭菌。·合适的设备和建筑材料选用标准；制造环境要合适；·合适的清洁工具，控制粉尘和污染物的产生。微生物污染源的控制人员·在洁净区（室）内身体要全部遮盖，在一般区要部分遮盖；·合适的人员流向及限制进入洁净室（区）的通道；·适当的设备位置，防止过量处理物料，减少人员移动；·严格限制在洁净室（区）工作的人员数；·合适的人员操作规程。消毒灭菌的常用术语以下术语常用来表示物理或化学方法对微生物的杀灭程度消毒

(disinfection)

消毒是指杀死物体上或环境中的病原微生物并不一定能杀死细菌芽胞或非病原微生物的方法。用以消毒的化学药品称为消毒剂(disinfectant)。一般消毒剂在常用的浓度下，只对细菌的繁殖体有效，对细菌芽胞无效。防腐(antisepsis) 防腐是指防止或抑制微生物生长繁殖的方法。细菌一般不死亡。防腐剂的选择要安全和有效。常用的有醇类、碘伏、氯己定等。清洁

(cleaning) 清洁是指通过除去尘埃和一切污秽以减少微生物数量的过程。除广泛应用于医院环境外，也是物品消毒、灭菌前必须经过的处理过程,有利于提高消毒、灭菌的效果。无菌(asepsis)和无菌操作

无菌是不存在活菌的意思，多是灭菌的结果。防止微生物进入人体或其他物品的操作技术，称为无菌操作。例如进行外科手术时需防止细菌进人创口，微生物学实验中要注意防止污染和感染。去除微生物措施-灭菌灭菌：灭菌是指杀灭物体上所有微生物的方法，包括杀灭细菌芽胞、病毒和真菌等在内的全部病原微生物和非病原微生物。干热灭菌利用干热空气或热辐射进行灭菌。一般135~145℃需3~5h，160~170℃需2h以上，

170~180℃需1h以上，180~200℃需0.5~1h。除热原，则需250℃30min，或200℃45min，180℃2h。化学灭菌利用化学试剂形成的气体来杀灭微生物的方法。常用的灭菌剂为环氧乙烷（又称氧化乙烯）。去除微生物措施-灭菌3.湿热灭菌高压蒸汽灭菌就是通过加压提高蒸汽温度，灭菌效果最好。它简便、经济、可靠、无毒，是最可靠、应用最广泛的灭菌法。此法适用于耐高温和潮湿的物品。常用条件为：115.5℃、30min；121.5℃、20min；126.5℃、15min。煮沸或流通蒸汽灭菌常压下沸水和蒸汽的温度是100℃，一般处理30~60min可杀死细菌繁殖体，但不能完全杀灭芽孢。此法适用于不能高压蒸汽灭菌的物品。辐射有两种类型：一种是电磁波辐射，如紫外线、红外线、微波；一种是电离辐射，如可引起被照射物电离的β射线和γ射线（多用60CO为放射源）。去除微生物措施-除菌过滤除菌过滤：是用物理阻留的方法除去液体或空气中的细菌、真菌，以达到无菌目的,但不能除去病毒和支原体液体除菌所用的器具是滤菌器，滤菌器含有微细小孔,只允许液体通过，而大于孔径的细菌、真菌等颗粒不能通过。滤过法主要用于一些不耐高温的血清、毒素、抗生素的除菌。滤菌器的种类很多,目前常用的有薄膜滤菌器，由硝基纤维素膜制成，依孔径大小分为多种规格,用于除菌的滤膜

。此外还有玻璃滤菌器-石棉滤菌器、素陶瓷滤菌器等。采用生物洁净技术，通过初、中、高三级高效分子空气过滤器，除掉空气中0.5-5μm的尘埃微粒，并采用合理的气流方式来达到空气洁净的目的。微生物通常附着在尘埃上，在一定意义上讲，滤过了空气中的尘埃，也就清除了细菌等微生物。去除微生物措施-消毒消毒：消毒是指杀死物体上或环境中的病原微生物并不一定能杀死细菌芽胞或非病原微生物的方法。用以消毒的化学药品称为消毒剂(disinfectant)。一般消毒剂在常用的浓度下，只对细菌的繁殖体有效，对细菌芽胞无效。通常是指杀死病原微生物的繁殖体，但不能破坏其芽孢。所以消毒是不彻底的，不能代替灭菌。无菌和无菌操作：无菌是不存在活菌的意思,多是灭菌的结果。防止微生物进入人体或其他物品的操作技术,称为无菌操作。去除微生物措施-消毒常见消毒剂①75%乙醇水溶液；②0.5%洗必泰溶于70%乙醇，再加入2%甘油，用于皮肤、器具等消毒；③异丙醇75%水溶液，用于皮肤、器具等消毒；④甲醛37%~40%甲醛液8~9ml，再加入4~5g高锰酸钾，每m3熏蒸量，密闭12~24h，刺激性强；⑤戊二醛2%水溶液，用于空气、器具等消毒。广谱、高效、低毒，可杀芽孢和病毒，毒性较轻；⑥新洁尔灭（苯扎溴铵）0.1%水溶液，用于皮肤、粘膜、器具等消毒，有清洁和消毒双重功效，抗菌谱较窄；⑦杜灭芬（消毒宁）0.05%~0.1%水溶液，用于皮肤、器具等消毒；⑧过氧乙酸a、0.2%~0.5%水溶液；b、新配0.5%水溶液；c、1g/m3；用于器具等消毒，抗菌谱广，

可用于皮肤消毒杀灭某些病毒；熏蒸，但性质不稳定。⑨乳酸a、0.33~1mol/L；b、1~1.5ml/m3熏蒸或与等量苯酚合用熏蒸喷雾，用于空气消毒，有强杀菌作用；熏蒸，密闭12h以上。⑩麝香草酚5%麝香草酚溶于50%乙醇，喷洒墙面、地面，杀霉菌。什么是洁净室?概念需要对尘粒及微生物含量进行控制的房间。其建筑结构、装备及其作用均具有减少对该房间（区域）内污染源的介入、产生和滞留的功能。二、洁净室基础知识各种条件下微尘状况尘粒直径示意图灰尘是如何产生的呢?人员因素造成空气中漏入原料中带入设备运转产生生产过程产生-摘自

GB50073《洁净厂房设计规范》走路时发尘样子对比左边是穿一般的工作服，右边是穿洁净服。拍击工作服发尘样子对比左边是穿一般的工作服，右边是穿洁净服。纸张发尘样子对比左边普通纸右边无尘纸。打喷嚏发尘样子打喷嚏时瞬间发生的飞沫。运动时产生的尘埃数量静坐时产生的尘粒数约10,

000

（1万）轻微运动时产生的尘粒数约100,

000（10万）剧烈运动时产生的尘粒数约10,

000,

000（1000万）如何去除尘埃?如何去除尘埃?传递窗(PASS

BOX)功能做为洁净室内外物品传递之缓冲区，其可防止于传递物品时由于门的开启而破坏了洁净室气流与室压可减少作业人员走动的时间而防止外区尘埃的进入进出口具有不可同时开启的联锁控制，以达到防止交叉污染生物安全柜（Biological

safety

cabinet

,

BSC）是为操作原代培养物、菌毒株以及诊断性标本等具有感染性的实验材料时，用来保护操作者本人、实验室环境以及实验材料，使其避免暴露于上述操作过程中可能产生的感染性气溶胶和溅出物而设计的。生物安全柜属于三类医疗器械。洁净工作台：一种箱式

局部空气净化设备，由箱

体、风机、预过滤器、高

效过滤器（或超高效过滤

器）及电器控制系统组成。在工作状态下能始终保持工作空间内的风速、空气洁净度、噪声、振动和照明等性能参数满足使用者的要求。洁净照明特点：嵌入式、易清洁洁净等级标准监测项目技术指标监测方法监测频次100级10，000级100，000级300，000级温度,

℃（无特殊要求时）18～28JGJ

711次/班相对湿度,

%45～651次/班风速,

m/s水平层流≥0.4垂直层流≥0.3——————1次/月换气次数,次/

h——≥20≥15≥121次/月静压差,Pa不同级别洁净室(区)

之间≥5洁净室(区)与室外大气≥101次/月尘埃个/m3≥0.5μm≤3，500≤350，000≤3，500，000≤10，500

，000GB/T

162921次/季≥5μm0≤2，000≤20，000≤60,000浮游菌数,个/m3≤5≤

100≤

500——GB/T

162931次/季沉降菌数,个/皿≤1≤

3≤

10≤

15GB/T

162941次/周检测的设备仪器介绍电子风量罩数字式温湿度表压差计检测的设备仪器介绍尘埃粒子计数器浮游菌采集器风速仪洁净管理四大原则洁净室适用物品（示例）洁净室禁止带入物品(示例)*洁净室禁止带入易发尘物品、数码产品、不使用物品、未清洁物品及匚具等保丽龙是由聚苯乙烯(Polystyrene，PS)发泡制成。不让灰尘堆积-洁净室清洁顺序①从上往下清洁

②从里往外清洁③朝一个方向清洁清洁棚顶设施清洁墙壁清洁设备清洁地面洁净室清洁工具及清洁产品洁净室必须使用专用清洁工具及清洁产品洁净室如何迅速排出灰尘?在洁净室内工作注意事项不能跑步不能拖着鞋走路禁止随意走动禁止将口罩下拉、卷起衣袖露出皮肤

禁止坐在地上、趴在设备上或靠在墙上物品应轻拿轻放三、卫生基础知识法规要求医疗器械生产质量管理规范（2014年第64号）第十一条 从事影响产品质量工作的人员，企业应当对其健康进行管理，并建立健康档案。医疗器械生产质量管理规范附录植入性医疗器械应当制定人员健康要求，设立人员健康档案。直接接触物料和产品的操作人员每年至少体检一次。患有传染性和感染性疾病的人员不得从事直接接触产品的工作。应当明确人员服装要求，制定洁净和无菌工作服的管理规定。工作服及其质量应当与生产操作的要求及操作区的洁净度级别相适应，其式样和穿着方式应当能够满足保护产品和人员的要求。洁净工作服和无菌工作服不得脱落纤维和颗粒性物质，无菌工作服应当能够包盖全部头发、胡须及脚部，并能阻留人体脱落物。北京市植入性医疗器械生产质量管理规范检查指南（2022版）京药监发〔2022〕120号人员健康要求企业应明确生产人员健康、定期体检的要求，制定人员卫生管理文件及进入洁净间工作守则，并建立健康档案，对人员健康进行管理，最大限度地降低人员对医疗器械生产造成污染的风险。企业应当采取适当措施，避免体表有伤口、患有传染病或其他可能污染产品疾病的人员从事直接接触产品的生产。直接接触物料和产品的人员上岗前应当接受体检，以后每年至少进行一次体检，对其他相关人员的体检项目及频次应满足企业实际需要，并与产品风险相匹配。人员净化要求企业应明确洁净环境工作人员清洁的要求，一般应经常理发、洗澡、剪指甲、不准化妆、不准佩戴饰物、严禁将个人物品带入洁净室等，并应明确检查人员。常见传染性疾病呼吸道传染病：流行性感冒，肺结核，腮腺炎，麻疹，百日

咳等（空气传播）体表传染病：血吸虫病，沙眼，狂犬病，破伤风，淋病等（接触传播）其他可能污染医药产品疾病：皮癣、真菌感染的皮肤病等洁净室最大污染源-人员O

人体是一个永不休止的污染媒介。O

人是最不清洁的成份，是最大的污染源。洁净室最大污染源-人员人们每24小时就会脱落皮肤表面上最外层的皮细胞。这等于每天高达

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