虫草素对癌细胞的增殖和凋亡作用的研究进展

虫草素对癌细胞的增殖和凋亡作用的研究进展摘要虫草素是蛹虫草最重要的生物生理成分。传统医学认为：冬虫夏草的甜蜜节奏，入肺，两肾经典，“肺与结肠比较”。研究表明蛹虫草具有增强免疫力和抗肿瘤的作用。然而，虫草素作为冬虫夏草的主要活性成分，虽然对预防和治疗结肠癌具有相似的作用，其作用机制已引起广泛关注。各组或顺铂的血清与人W1116人结肠癌细胞系或与顺铂联合给药。探讨虫草素对癌细胞生长和运动的影响及其对肿瘤细胞凋亡的作用。关键词:结肠肿瘤;虫草素;肿瘤转移;细胞凋亡

1绪论虫草素（虫草素），也被称为3'-脱氧-P-线，活性成分蛹虫草主要原因之一。其内容是测量虫草质量的基础。临床治疗癌症，白血病，抗老化和其它效果的主要应用。的当前报告的主要来源虫草素提取菌丝体发酵液，蛹虫草和两个虫草残基。细菌产生主要虫草素虫草并从中分离。除了水果和蔬菜虫草蛹草案青霉类拟青霉菌丝蛹虫草（我的帮助MAG2008），与虫草九州（张海英等，2000），蝉Cordycepscicadae鲁等人。2虫草素抑制肺癌细胞增殖的体外研究2.1材料保存在外科部门和Cordyceptin中的A549肺癌细胞购自Sigma。MTT试剂盒和一氧化氮（NO）试剂盒来自上海碧云天生物技术有限公司。Hyclone提供的DMEM环境，胎儿血浆，双抗体，胰蛋白酶等武汉六井生物技术有限公司和96井（Thermo），细胞培养瓶和离心机（康宁）等均为一次性使用无菌包装。2.2方法2.2.1细胞培养将细胞A549在含有10％（胎儿体积）胎牛血清，100U/ml青霉素和100mg链霉素的双重抗体的DMEM培养基中培养。将细胞在37℃，5％CO2和饱和蒸气的培养箱中孵育。如果细胞覆盖瓶子壁的80％至90％用于进一步测试，请收集细胞。2.2.2药物处理和细胞增值实验在对数生长期间去除细胞，用胰蛋白酶消化并通过离心收集，在计数5×10个细胞/种子后，使用细胞计数室4接种96孔。过夜温育后，固定细胞并用无血清DMEM培养基置换培养24小时细胞周期同步化。除了最终浓度为0.20,40,70,100,1000μmol/L虫草素和共培养24小时之外，移除底物。除去药物并用PBS洗涤两次，并将完全培养基温育24小时。2.3统计学处理使用SPSS17.0软件进行统计分析，P<0.05被认为具有统计学显着性。2.4结果2.4.1虫草素对肺癌细胞增殖的调控作用用0,20,40,70,100和1000μmol/l虫草素处理的A549细胞发病率的MTT测定结果如表1所示。20μmol/L或更多的虫草素抑制增加细胞A549（P<0.01）和1000μmol/L对A549细胞增殖抑制作用最强。据认为虫草素以剂量依赖性方式抑制A549肺癌细胞的生长。表1不同浓度Cordicepine对A549细胞增殖的影响虫草素/(μmol/L)增殖率/%(1)0100.0±0.1(2)2092.4±1.3(3)4091.8±0.1(4)7084.4±2.2(5)10078.0±0.2(6)100024.7±0.8(2)vs(3):P>0.05；余两两比较均P<0.01。2.4.2虫草素对肺癌细胞中NO产生的影响在进行于对照组的分析与对比的过程中发现，虫草素抑制20μmol/L或更高浓度细胞内NO水平（P<0.05或0.01）和1000μmol/Lcordicepine的细胞内NO的形成。<0.01），详见表2。A549肺癌细胞中NO的相对丰度由cordicepine的量减少，并且减少取决于cordicepine。表2不同浓度Cordicepine对A549细胞NO含量的影响影响(±，n=3)虫草素/(μmol/L)NO相对含量/%(1)0100.0±3.5(2)2089.5±4.2(3)4092.4±2.1(4)7072.8±6.9(5)10073.4±3.9(6)100047.4±2.1(2)vs(3)、(4)vs(5)，P>0.05；(1)vs(2)、(1)vs(3)，P<0.05；余两两比较均P<0.01。

3虫草素对结肠癌细胞体外增殖和诱导细胞凋亡的作用3.1实验动物与细胞株深褐色大鼠BALB/c重约20克，由中国科学院上海生物学和细胞生物学研究所提供，在上部家畜研究所保持标准SPF条件下复旦大学海。SW1116结肠癌细胞系由上海消化肠胃病研究所保存。3.2实验分组与处理1，在SW1116肿瘤细胞在对数生长期采取随机分为四组：虫草素，化疗，化疗组和虫草素社区对照组。2，细胞生长的CCK-8抑制检测：CCK-8套与四唑鎓盐作为新的表面，通过细胞的代谢以产生产物的水溶性甲可以直接使用板读数器在450nm和630nm的吸光度值（OD值），对应于活细胞的OD值进行检测。在对数生长期进行SW1116肿瘤细胞，用0.25％胰蛋白酶和0.02％乙二胺四乙酸（EDTA）消化计数，以100μL/损失（5,000个细胞）在96孔板中的颗粒各组添加以下过程元素：（1）组虫草素：吃10份虫草素裸鼠血清采取的1/200（0.119μl）混合物加入到该细胞块后U，（2）化疗组：混合10份1/200空白血清加入到肿瘤细胞中的顺铂后0.001毫克+量（0.1微升），（3）虫草素+化疗组：吃10份小鼠血清的混合物的拍摄裸虫草素1体积/200（0.119μl）之后+0.001毫克顺铂加入到肿瘤细胞;（4）空白对照组：混合10份对照血清（0.1微升）加入到肿瘤细胞后1/200体积。加入上述基团后，将96孔板置于CO2培养箱烘箱。中培养0小时，24个小时，48个小时，72个小时，96小时，120个小时后，CCK-8，以抑制细胞增殖测定。3.3统计学处理两组间差异采用单因素方差分析，统计分析采用SPSS11.5统计软件包进行。<0.05显示统计学显着差异。3.4结果3.4.1CCK-8细胞增殖实验结果治疗后4组的OD值和生长曲线如图1，表1所示。治疗24小时后，cordyielin组的OD值低于对照组空白（P=0.01），化疗组OD值低于盲对照组（P=0.01），Cordyielin+化疗组OD值低于其他三组（Cordyielin组）。比较化疗组P=0.01，P=0.03，与盲对照组相比P<0.01。表431各组细胞经不同处理后0-120hOD值(±s)级别0h24h48h72h96h120h虫草素组0.69±0.060.87±0.071.21±0.131.43±0.111.48±0.111.66±0.10化疗组0.68±0.030.84±0.050.87±0.040.97±0.131.12±0.131.10±0.08虫草素+化疗组0.69±0.030.71±0.100.74±0.060.84±0.090.91±0.020.83±0.05空白对照组0.66±0.081.00±0.011.48±0.251.83±0.112.03±0.082.15±0.1848小时和72小时后，Cordyielin+化疗组和化疗组的OD值均低于其他两组，但两组之间无显着差异（48h：P=0.30,72h：P=0.14），cordyielin组的OD值小于空白对照组的值。治疗96小时后，Cordyielin+化疗组的OD值低于其他三组（与化疗组相比P=0.02，与Cordyielin组和盲对照组相比P<0.01）。），化疗组的OD值。低于Cordyielin组;肟基团的OD值低于空白对照组。以上差异具有统计学意义。治疗120小时后，Cordyielin+化疗组的OD值低于其他三组（与化疗组相比P=0.02，与Cordyielin组和盲对照组相比P<0.01）。化疗组的OD值。低于Cordyielin组;肟基团的OD值低于空白对照组。以上差异具有统计学意义。3.4.2SW1116细胞体外迁移实验结果处理后四个细胞组中的细胞数（在不同视野中×200）如图2-5所示。迁移实验的统计分析结果（表2）：在cordyielin+化疗组中移动的细胞数量为（38.17±4.41），少于其他三组，细胞数量化疗组运动量（66.58±6.43），低于Cordyielin组细胞数，盲法对照组（116.83±6.74），低于对照组空。以上差异有统计学意义（F=91.04，P<0.01）。表4各实验组发生迁移细胞数统计结果(个,±s)组别细胞数虫草素组116.38±6.74化疗组66.58±6.43虫草素+化疗组38.17±4.41a空白对照组238.00±11.78注:与其他三组比较,aP<0.053.4.3细胞凋亡实验结果1，Hoechst33258检测细胞凋亡的荧光染色：荧光染料Hoechst33258可以区分正常细胞和凋亡细胞。在荧光显微镜下（图6-9），观察到典型的凋亡细胞变化。细胞呈浅绿色，具有早期收缩，新月形核心和末端核碎裂。实验结果表明，除空对照组外，其余3组均观察到大量淡绿色凋亡细胞。其中，cordyielin+化疗组比其他三组表现出更多的凋亡细胞。2.细胞凋亡的细胞学流动试验结果（表3，图10）：用4个细胞组处理后，结果显示了cordyielin+化疗组的凋亡率[（28.10±4.21％）高于其他人。三组的凋亡频率为（cordyielin组：（16.19±5.65）％，化疗组：（14.90±3.56）％，对照组为空：（6.83±1，65）％]，差异有统计学意义（P<0.05），其他三组之间差异无统计学意义。表5各组细胞凋亡率比较(%,±s)组别细胞凋亡率虫草素组16.19±5.65化疗组14.90±3.56虫草素+化疗组28.10±4.21a空白对照组6.83±1.65注:与其他三组比较,aP<0.05

结论Cordyeemin具有许多生理功能，如抗炎，抗菌，抗氧化，自由基，并保护肝肾功能。此外，cordyeemin可以干扰细胞中RNA和DNA的合成，修复细胞DNA损伤，减少基因突变导致的肿瘤基因并充当乳腺细胞。肿瘤细胞的细胞分裂。Cordyeemin还可以用作保健产品，以增强个人免疫力，还可以起到降低血压和降低血压的作用。然而，cordyielin的相关性尚不清楚。在本研究中，我们研究了Cordyielin对A549体外培养的肺癌细胞的作用，研究了cordyielin在肿瘤预防和cordy