T-CITS 256-2025 分子检测实验室核酸去污染技术规范

ICS11.100CCSC05CITS中国检验检测学会发布T/CITS256—2025前言 12规范性引用文件 13术语和定义 14基本要求 14.1管理制度 14.2实验室环境 14.3实验设备 24.4实验人员防护 24.5去污染频率 25操作方法 25.1概述 25.2空气核酸污染去除 25.3样品核酸污染去除 25.4设备核酸去污染 35.5核酸产物去污染 36污染监测评估6.1监测范围 36.2评估方法 37记录 47.1建立记录制度 47.2信息追溯 4参考文献 5T/CITS256—2025本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由北京市朝阳区疾病预防控制中心和国军标（北京）标准化技术研究院提出。本文件由中国检验检测学会归口。本文件起草单位：北京市朝阳区疾病预防控制中心、国军标（北京）标准化技术研究院、北京实安科技有限公司、中日友好医院、北京大学人民医院、解放军总医院第一医学中心、北京博奥医学检验所有限公司、北京医学检验学会、北京中检体外诊断工程技术研究中心、上海健康医学院附属周浦医院、上海市徐汇区疾病预防控制中心、熠创鼎惠（上海）生物科技有限公司、右江民族医学院附属医院、中国科学院宁波材料技术与工程研究所、通标伟业（北京）标准化技术研究院。本文件主要起草人：刘洁、李娜、刘万阳、戴其全、马亮、华文浩、段晋燕、陈刚、朱卉、卢双燕、穆红、张凤华、刘志勇、陈春雨、王春芳、胡仁统、柴富、郑建萍、王燕。T/CITS256—20251本文件规定了分子检测实验室核酸去污染的基本要求、去污染技术要求及管理和维护的要求。本文件适用于各类分子检测实验室的核酸去污染。2规范性引用文件本文件没有规范性引用文件。3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1核酸nucleicacid由核苷酸或脱氧核苷酸通过3',5'-磷酸二酯键连接而成的一类生物大分子，具有非常重要的生物功能，主要是贮存遗产信息和传递遗传信息，包括核糖核酸和脱氧核糖核酸两类。[来源：GB/T40974—2021，3.2]3.2含氯消毒剂disinfectantswithchlorine溶于水中能产生次氯酸的消毒剂。[来源：GB/T36758—2018，3.1]3.3去污染decontamination将微小生物体或毒物去除或减少至感染性或其他有害性达到一定安全水平的过程。[来源：GB19781—2005，3.7]]4基本要求4.1管理制度实验室应建立完善的核酸去污染制度和规范，根据实验需求和规范定期进行核酸去污染工作：a)实验室人员应严格按照核酸去污染技术流程进行操作并记录；b)应定期检查实验室核酸去污染记录，贯穿于实验室活动的整个过程；c)应定期对实验室内的核酸去污染工作进行定期监督和审核，发现问题及时整改。4.2实验室环境实验室环境包括但不限于：a)实验室工作区的设置应在风险评估的基础上，根据具体工作的需要而增减；各工作区在物理空间上应相互完全独立分隔，不应直接相通；不应采用套间或嵌套形式；T/CITS256—20252b)应定期进行实验室的核酸去污染处理，特别是核心工作区域；c)样品和分析相关材料的任何转移应是单向的（从污染程度较低到污染程度最高），并保持在最低限度；d)宜保持实验室空气的通风流通，降低实验区域内核酸片段的浓度。4.3实验设备实验设备要求包括：a)不同工作区域内的设备、物品不应混用；b)对于关键设备，如PCR仪、离心机等，应设置在独立的实验区域内，并采取有效的隔离措施；c)应制定详细的设备操作规程，明确操作步骤和注意事项；d)应制定设备维护计划，定期用核酸去污染剂对设备进行清洁、检查和保养；e)使用PCR工作站实验前后用核酸去污染剂清洁工作站，定期更换工作站内的空气过滤器。4.4实验人员防护实验人员防护包括但不限于：a)应建立高度的预防核酸污染意识，如严格的手部消毒、实验器材清洗、实验室内空气消毒和去污染处理等；b)应按照生物安全水平使用个体防护装备，特定区域宜使用专用的实验服（如颜色标记实验服各操作人员宜专用，进入或离开每个区域时宜更换，宜定期更换，并考虑特定的清洁要求；c)在每个单独的区域之间更换手套，或根据情况另外更换手套；d)如有需要，宜考虑在不同的房间使用套鞋或可洗的实验室鞋。4.5去污染频率4.5.1实验人员应在每次实验前、实验中和实验后进行核酸去污染工作，并定期对实验室设备、空气和物表进行清洁和去污染处理。4.5.2对于高风险实验，宜增加核酸去污染的频率。4.5.3基于实验室风险评估结果，核酸去污染频率包括但不限于：a)可每天进行1次核酸去污染工作，包括对实验室内的空气、物表和实验器材进行消毒和清洁；b)可每两周进行1次全面的核酸去污染工作，包括对实验室内的所有物表、器具和设备进行深度清洁和去污染处理；c)可每月进行1次核酸质量检测和评估，包括对实验室内的核酸提取和检测过程进行评估和验证。5操作方法5.1概述如实验室核酸污染，应停止实验操作并寻找污染源，清除污染源后，应再次验证实验室是否恢复正常。不同污染情况应采取不同的去污染方法，必要时，可采取多种方法去除核酸污染。5.2空气核酸去污染5.2.1实验室应开启通风设备，如通风扇、空气净化设备等，定时开窗换气，或在合适的时间段进行室内空气循环。5.2.2应根据实验室环境和需求使用合适的空气过滤器，并定期检查和维护。高风险区域应进行区域隔离和控制，宜使用高级别的空气过滤器。工作中应开启实验室高效空气过滤器的定向气流通风系统持续通风。5.2.3可用固定和/或可移动紫外灯照射2h以上，或臭氧消毒器消毒。必要时，可用过氧乙酸加热熏蒸消毒，或用气溶胶喷雾去除污染。5.3样品核酸去污染5.3.1样品溢洒至操作台造成局部污染，应立即用吸水纸覆盖，并使用500mg/L含氯消毒剂进行喷洒T/CITS256—20253消毒。5.3.2样品倾覆造成实验室污染，应保持实验室空间密闭，用一次性吸水纸覆盖污染区，用500mg/L含氯消毒剂饱和喷洒。5.3.3手套沾染阳性质控品造成操作台污染，应立即手消并更换手套，宜使用核酸去污染剂喷洒台面，作用一定时间后，用清水洗去残留的核酸去污染剂。5.3.4阳性质控品残留在核酸提取仪造成污染，应暂停使用该仪器，用75%酒精擦拭干净，关闭舱门，开启紫外线消杀去除污染。5.4试剂核酸去污染5.4.1应建立严格的试剂储存管理制度。商品化试剂盒拆封使用前，应将试剂盒内的阳性对照和预混液分区放置，密封完好，使用前应对试剂进行检查。5.4.2若试剂质量存在问题，应立即更换质量可靠的试剂品牌或生产厂家。若试剂使用不当或储存不当导致污染，应重新配制试剂。5.5设备核酸去污染5.5.1应根据设备情况选择适用的消毒剂和核酸去污染剂，对设备整体消毒清洁和维护。必要时，可联系设备售后人员上门维护。5.5.2使用设备前应对其进行检查，无异常情况方可使用。5.5.3污染的设备去除污染后应对污染部位涂抹采样，进行核酸检测，确认阴性后重新启用。5.6核酸产物去污染5.6.1应关闭实验室门窗，用核酸去污染剂喷洒实验室，达到作用时间后，开窗通风。可使用500mg/L含氯消毒剂擦拭台面，75%酒精擦拭物表，再用清水洗去消毒液。去污染操作完成后，反复进行核酸沉降试验与涂抹试验，直至结果为阴性。5.6.2检查反应过程。必要时，应重新调整反应条件以减少产物污染。5.6.3在不具备通风条件的实验室，可更换不同品牌的扩增试剂。6污染监测评估6.1监测范围实验过程中应时刻注意监测实验室的污染情况，采取有效措施，防止和去除污染：a)实验环境监测；b)实验过程监测。6.2评估方法6.2.1采样6.2.1.1空气沉降法每个监测点放置1个样品管，每管装有0.5mL生理盐水，打开管盖暴露放置6h～12h后取样进行核酸检测。6.2.1.2物表擦拭法用拭子蘸取生理盐水采集物体表面样品，按照5cm×5cm横竖均匀涂擦整个区域（如物体表面小于5cm×5cm，则采集整个物体表面），对拭子浸泡液进行核酸检测。6.2.2测试过程T/CITS256—20254开展核酸实验时宜增加2个阴性样品参与核酸提取、扩增环节，保证实验从样品处理、核酸提取和扩增3个步骤的全过程监控。6.2.3检测方法采用核酸扩增的方法对采集的样品进行核酸检测。6.2.4结果判定核酸检测结果为阴性，可判定实验室无核酸污染，污染源清除。核酸检测结果为阳性，可判定实验室有污染，污染未完全清除。7记录7.1建立记录制度应为每个实验区域设定独立的记录本，记录核酸污染处理过程。包括但不限于：b)时间；c)污染区域；d)污染物质；e)处理方法；f)处理结果。7.2信息追溯宜建立信息管理系统，溯源核酸去污染的相关信息，追溯信息应保存完好，并可供随时查阅。包括但不限于：a)核酸污染的来源；b)核酸去污染的处理过程；c)异常结果处理记录。T/CITS256—20255参考文献[1]GB19489—2008实验室生物安全通用要求[2]GB19781—2005医学实验室安全要求[3]GB27948—2020空气消毒剂通用要求[4]GB/T36758—2018含氯消毒剂卫生要求[5]GB/T40974—2021核酸样本质量评价方法[6]GB50346—2011生物安全实验室建筑技术规范[7]医疗机构临床基因扩增检验实验室管理办法.卫办医政发〔2010〕194号[8]医疗废物管理条例.中华人民共和国国务院令第380号[9]病原微生物实验室生物安全管理条例.中华人民共和国国务院令第424号[10]李敏，许友强，刘静，贾全胜.第三方核酸检测实验室核酸污染防控策略概述[A].医技与临床，20