GB 4789.38-2025第二法平板计数法原始记录模板

GB4789.38-2025第二法平板计数法原始记录模板##基本信息**样品名称**：__________**样品编号**：__________**检验项目**：大肠埃希氏菌计数（第二法：平板计数法）**检验依据**：GB4789.38-2025《食品安全国家标准食品微生物学检验大肠埃希氏菌计数》**检验日期**：_____年_____月_____日**环境条件**：温度_____℃，相对湿度_____%**检验人员**：__________**复核人员**：__________##一、样品处理与稀释###1.样品前处理|操作步骤|记录内容||---------|---------||称样量|称取样品_____g(mL)||稀释液|加入_____mL无菌磷酸盐缓冲液(PBS)||均质条件|均质器_____rpm，均质_____s||样品匀液总体积|_______mL|###2.系列稀释（记录至10⁻⁶）|稀释度|操作过程|混匀方式||--------|---------|---------||10⁻¹|吸取_____mL样品匀液加入_____mLPBS|涡旋_____s||10⁻²|吸取_____mL10⁻¹稀释液加入_____mLPBS|涡旋_____s||...|...|...|##二、平板接种与培养###1.培养基准备|培养基名称|规格/批号|配制日期|使用量/皿||------------|-----------|---------|-----------||VRBA-MUG|_______|_______|_______mL||灭菌条件|高压蒸汽灭菌_____℃，_____min|###2.平板接种（每个稀释度平行接种2皿）|稀释度|接种量|平板编号|接种时间|备注||--------|--------|---------|---------|------||10⁻⁴|_______mL|A₁,A₂|_______|||10⁻⁵|_______mL|B₁,B₂|_______|||10⁻⁶|_______mL|C₁,C₂|_______|||**空白对照**|_______mL(无菌PBS)|N₁,N₂|_______||**接种方式**：倾注法/涂布法###3.培养条件|参数|设定值||------|-------||培养温度|_______℃(36±1℃)||培养时间|_______h(24±2h)||培养箱编号|_______|##三、菌落计数与确证###1.菌落观察与计数（记录实际菌落数）|稀释度|平板编号|菌落数(CFU)|典型特征|荧光观察(UV366nm)||--------|---------|------------|---------|-------------------||10⁻⁴|A₁|_______|_______|_______(蓝白色荧光)|||A₂|_______|_______|_______||10⁻⁵|B₁|_______|_______|_______|||B₂|_______|_______|_______||10⁻⁶|C₁|_______|_______|_______|||C₂|_______|_______|_______||**空白对照**|N₁,N₂|_______|_______|_______|###2.典型菌落确认（若有必要）|操作|记录内容||------|---------||挑取可疑菌落数|挑取_____个典型/可疑菌落||接种培养基|接种至_______培养基||培养条件|_______℃，_______h||生化试验|_______(如IMViC)||结果判定|阳性_____个，阴性_____个|##四、结果计算###1.计算过程（选取菌落数在15-150之间的稀释度）**计算公式**：```大肠埃希氏菌数(CFU/g或CFU/mL)=(同一稀释度两平板菌落数平均值)×稀释倍数```|稀释度|平板菌落数|平均值|稀释倍数|计算结果(CFU/g或CFU/mL)||--------|------------|-------|---------|----------------------||10⁻⁵|B₁:_______,B₂:_______|_______|10⁵|_______||10⁻⁶|C₁:_______,C₂:_______|_______|10⁶|_______|###2.最终结果报告**样品中大肠埃希氏菌数为：_______CFU/g(mL)****报告方式**：按GB4789.38-2025要求，结果保留_______位有效数字##五、使用仪器设备与培养基###1.主要仪器设备|仪器名称|型号|编号|校准状态|使用前检查||---------|------|------|---------|----------||电子天平|_______|_______|_______|_______||均质器|_______|_______|_______|_______||超净工作台|_______|_______|_______|_______||恒温培养箱|_______|_______|_______|_______||高压蒸汽灭菌器|_______|_______|_______|_______||紫外灯(366nm)|_______|_______|_______|_______|###2.培养基与试剂|名称|生产厂家/批号|配制人|配制日期|使用前检查||------|--------------|-------|---------|----------||VRBA-MUG培养基|_______|_______|_______|_______||磷酸盐缓冲液(PBS)|_______|_______|_______|_______||...|...|...|...|...|##六、备注与说明1.**稀释要求**：每个稀释度更换无菌吸头，避免交叉污染2.**菌落计数原则**：-选取菌落数在15-150之间的稀释度进行计数-若所有稀释度菌落数均<15，则报告"小于最低稀释度×稀释倍数"-若所有稀释度菌落数均>150，则报告"大于最高稀释度×稀释倍数"-若仅有一个稀释度菌落数在15-150之间，直接使用该稀释度计算-若有两个连续稀释度菌落数均在15-150之间，取平均值计算3.**结果判定**：在UV灯下观察，大肠埃希氏菌菌落呈蓝白色荧光4.**检出限**：本法检出限为_______CFU/g(mL)##七、附件（可另附）1.样品原始包装照片（如有）2.菌落形态照片（如有典型特征）3.生化试验原始记录（如需确证）#填写说明##一、样品处理与稀释-称样量一般为25g(mL)，加入225mL稀释液，制成10⁻¹稀释度-均质时间一般为1-2分钟，注意均质器消毒##二、平板接种与培养-VRBA-MUG培养基倾注温度约45-50℃，避免温度过高杀死细菌-每个稀释度接种2个平板，接种量一般为1.0mL-空白对照必须做，验证培养基和操作无菌性##三、菌落计数与确证-先在自然光下计数，再在UV灯下观察荧光（366nm）-大肠埃希氏菌在VRBA-MUG上呈紫红色菌落，UV下显蓝白色荧光-可疑菌落需进一步生化确证（如IMViC试验）##四、结果计算-计算公式：大肠埃希氏菌数(CFU/g或CFU/mL)=菌落数平均值×稀释倍数-结果报告：-100以内：精确到个位（如25CFU/g）-100以上：保留两位有效数字（如2.5×10³CFU/g）-未检出：报告"未检出"，并注明检出限##注意事项1.全程无菌操作，避免污染2.所有器皿必须彻底灭菌3.稀释必须精确，吸头不能混用4.培养温度严格控制在36±1℃，时间24±2h5.结果超过标准限量时，应按标准要求进行复检#检测人员常见问题与解答##1.问：为什么选择平板计数法而非MPN法？答：GB4789.38-2025明确规定，**第二法平板计数法适用于大肠埃希氏菌含量较高的食品**，操作更简便，结果更直观，且能获得准确的CFU数值。但不适用于贝类产品。##2.问：如何判定阳性菌落？答：大肠埃希氏菌在VRBA-MUG培养基上呈**紫红色菌落**，在**366nm紫外灯下显蓝白色荧光**，这是特异性特征。必要时进行IMViC生化试验确证（典型结果：++--）。##3.问：若所有稀释度菌落数都不在15-150范围内怎么办？答：-若**均<15**：报告"小于最低稀释度×稀释倍数"（如<10CFU/g）-若**均>150**：报告"大于最高稀释度×稀释倍数"（如>10⁴CFU/g）##4.问：第二法的检出限是多少？答：本法检出限取决于样品稀释度和接种量，一般为**10CFU/g(mL)**（当接种1mL10⁻¹稀释液时）。##5.问：如何提高检