DB2204-T 6-2022 鸡蛋粉中8种喹诺酮类药物残留的测定 液相色谱-质谱质谱法

ICS67.050CCSB042204Determinationofeightquinolonesresiduesineggpowderbyliquidchromatography-massspectrometry/massspectromeIDB2204/T6—2022本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。本文件的某些内容可能涉及专利，本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由辽源市食品质量安全检测中心提出，由辽源市农业农村局归口。本文件起草单位:辽源市食品质量安全检测中心、长春海关技术中心、长春市产品质量监督检验院。本文件主要起草人:张威、胡婷婷、秦培余、陈露、隋佳琪、王银月。本文件主要参编人:王振雷、姜珊、孙舒、宋清莲、李燕鹭、王岩、陆鸣、宫世平、张凤栋、姚心茹、姜爽。DB2204/T6—20221鸡蛋粉中8种喹诺酮类药物残留的测定液相色谱-质谱/质谱法本文件规定了鸡蛋粉中8种喹诺酮类药物残留液相色谱-质谱/质谱测定方法的原理、试剂和材料、仪器设备、试验步骤、试验数据处理、精密度。本文件适用于鸡蛋粉中恩诺沙星、环丙沙星、氧氟沙星、诺氟沙星、培氟沙星、洛美沙星、沙拉沙星、依诺沙星等8种喹诺酮药物的测定。本方法鸡蛋粉中恩诺沙星、环丙沙星、氧氟沙星、诺氟沙星、培氟沙星、洛美沙星、沙拉沙星、依诺沙星等8种喹诺酮药物的检出限为1.0μg/kg。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。凡是注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义。4检验原理试样中的喹诺酮类药物用2%甲酸-乙腈提取，经QuEChERSSPE净化管净化，液相色谱-质谱/质谱仪测定，外标法定量。5试剂和材料除另有规定，仅用分析纯试剂。5.1水，符合GB/T6682规定的一级水。5.28种喹诺酮类药物混合标准物质:恩诺沙星CAS号:93106-60-6、环丙沙星CAS号:85721-33-1、诺氟沙星CAS号:70458-96-7、培氟沙星CAS号:6159-55-3、沙拉沙星CAS号:98105-99-8、洛美沙星CAS号:98079-51-7、依诺沙星CAS号:74011-58-8、氧氟沙星CAS号:82419-36-1。（纯度≥95%）5.62%甲酸-乙腈溶液:量取2mL甲酸（5.4）和98mL乙腈（5.3），混匀备用。DB2204/T6—202225.70.1%甲酸-水溶液:量取1mL甲酸（5.4）和999mL水（5.1），混匀备用。5.80.1%甲酸-乙腈溶液:量取1mL甲酸（5.4）和999mL乙腈（5.3），混匀备用。5.90.1%甲酸-水溶液+0.1%甲酸-乙腈溶液（9+1）:量取90mL0.1%甲酸-水溶液（5.7）和10mL0.1%甲酸-乙腈溶液（5.8），混匀备用。5.10混合标准储备液:准确量取8种喹诺酮类药物混合标准品（5.2）1.0mL，用乙腈（5.3）溶解并定容于100mL棕色容量瓶中，配制成浓度为1.0µg/mL的混合标准储备液，4℃条件下可使用3个5.11混合标准工作液:将8种喹诺酮类药物混合标准储备液（5.10）用乙腈（5.3）稀释，配置适用浓度的混合标准工作液。现用现配。5.12滤膜:0.22µm，有机系。5.13QuEChERSSPE净化管。6仪器设备6.1液相色谱-质谱/质谱仪:配备电喷雾离子源（ESI）。6.2天平:感量为0.01g和0.0001g。6.3高速离心机:6000r/min。6.4超声波清洗机。6.5涡旋混合器。6.6氮吹仪。7试验步骤7.1提取称取2g（精确至0.01g）鸡蛋粉样品于50mL具塞离心管中，加入10mL2%甲酸-乙腈溶液（5.6）涡旋30s，超声提取10min后，于6000r/min离心10min，上清液待净化。7.2净化取上清液2mL于QuEChERSSPE净化管（5.13）中，涡旋30s，于6000r/min离心5min，取上清液1mL，于40℃水浴氮气吹至近干，加入1mL0.1%甲酸-水溶液+0.1%甲酸-乙腈溶液（9+1）（5.9）定容，超声波震荡5min,过0.22µm微孔滤膜，供HPLC-MS/MS测定。7.3空白试验除不加样品外，采用完全相同的测定步骤进行平行操作。7.4测定7.4.1色谱参考条件色谱参考条件如下：a)色谱柱:C18色谱柱，100mm×2.1mm，2μm;b)流动相:A:0.1%甲酸-水溶液；B：0.1%甲酸-乙腈；梯度洗脱条件参见表1;c)流速:0.1mL/min;d)进样量:20μL;DB2204/T6—20223e)柱温:40℃。表1梯度洗脱条件时间（min）A%B%0.1240457.4.2质谱参考条件本标准所使用的质谱参考条件如下:a)电离方式:电喷雾离子源（ESI）;b)扫描方式:正离子扫描，多反应监测（MRM）;d)离子源温度:550℃;e)气帘气压力（CUR）:10psi;f)雾化气压力:50psi;g)辅助气压力:50psi;h)定性离子、定量离子、去簇电压、碰撞能量、保留时间见表2。表28种喹诺酮类药物定性离子、定量离子、去簇电压、碰撞能量、保留时间化合物分子式分子量母离子m/z子离子m/z碰撞能量V去簇电压V保留时间min恩诺沙星C19H22FN3O3359.35360.0316.1*20.04245.1环丙沙星C17H18FN3O3331.34332.1245.1*288.1氧氟沙星C18H20FN3O4361.37362.3318.3*261.348诺氟沙星C16H18FN3O3319.33320.2302.3*48276.3培氟沙星C17H20FN3O3333.36334.3290.4*233.2洛美沙星C17H19F2N3O3351.35352.3265.2*308.2沙拉沙星C20H17F2N3O3385.36386.4342.3*22.91299.2依诺沙星C15H17FN4O3320.32321.4303.3*234.1*:定量离子注：对不同质谱仪器，仪器参数可能存在差异DB2204/T6—202247.4.3标准工作曲线的制备将混合标准储备液（5.10）用初始流动相逐级稀释成浓度为2.5µg/L～100.0µg/L的标准系列工作溶液，参考色谱和质谱条件测定。分别以8种喹诺酮类药物质量浓度为横坐标，相应的峰面积响应值为纵坐标，进行线性回归分析。7.4.4定性分析在同一色谱-质谱/质谱条件下进行标准溶液和样品溶液的测定，如果样品溶液中检出的色谱峰的保留时间与标准物质色谱峰的保留时间一致，所选择的两对子离子的质荷比也一致，而且样品定性离子的相对丰度与浓度相当标准工作溶液的定性离子的相对丰度相比较，相对偏差不超过表3规定的范围，则可判定样品中存在该物质。表3定性时相对离子丰度的最大允许偏差相对离子丰度>50%>20%-50%>10%-20%≤10%允许的相对误差±20%±25%±30%±50%7.4.5定量测定混合标准工作液和样液中被测组分的响应值均应在仪器线性响应范围内。外标法定量。8试验数据处理按公式（1）计算样品中8种喹诺酮类药物残留含量，计算结果需扣除空白值。式中：X-样品中被测组分含量，单位为微克每千克(µg/kg）;c-被测组分溶液浓度，单位为微克每升(µg/L）;V-样液最终定容体积，单位为毫升（mL）;m-样液所代表的最终样品的质量，单位为克（g）;计算结果保留三位有效数字。9精密度9.1重复性在同一实验室，由同一操作者使用相同设备，按相同的测试方法，并在短时间内对同一被测对象相互独立进行测试获得的两