甲基化标志物辅助胃癌高危人群筛查策略

甲基化标志物辅助胃癌高危人群筛查策略演讲人01甲基化标志物辅助胃癌高危人群筛查策略02引言：胃癌筛查的迫切需求与传统方法的局限性03DNA甲基化与胃癌发生的生物学基础04胃癌相关甲基化标志物的筛选与验证05基于甲基化标志物的胃癌高危人群筛查策略构建06临床应用挑战与未来展望07总结08参考文献目录01甲基化标志物辅助胃癌高危人群筛查策略02引言：胃癌筛查的迫切需求与传统方法的局限性引言：胃癌筛查的迫切需求与传统方法的局限性胃癌是全球发病率第五、死亡率第三的恶性肿瘤，2022年全球新发病例约109.9万，死亡病例约76.9万，其中中国新发和死亡病例均占全球近半数[1]。我国胃癌患者呈现出“三高三低”的特点：发病率高、死亡率高、转移复发率高，早期诊断率低（不足20%）、5年生存率低（约27.4%）、根治性手术切除率低[2]。这一严峻现状的核心矛盾在于：早期胃癌患者多无症状，而传统筛查手段的局限性导致高危人群的检出效率不足。当前，胃癌筛查的“金标准”是胃镜检查，可直接观察胃黏膜病变并取活检，但其存在明显短板：一是侵入性操作导致人群依从性低，我国40岁以上高危人群胃镜检查率不足30%[3]；二是成本较高，难以在基层医疗机构普及；三是对于平坦型或微小病变的漏诊率可达10%-15%[4]。非侵入性筛查方法如血清胃蛋白酶原（PG）、胃泌素-17（G-17）等，虽能反映胃黏膜功能状态，但对早期胃癌及癌前病变的诊断敏感度仅约60%-70%，特异性不足，难以满足精准筛查需求[5]。引言：胃癌筛查的迫切需求与传统方法的局限性因此，开发高效、无创、可普及的新型筛查标志物，构建针对高危人群的分层筛查策略，成为提升胃癌早诊率、改善预后的关键突破口。DNA甲基化作为表观遗传学修饰的核心机制之一，在胃癌发生发展早期即出现异常改变，其稳定性、可检测性及与肿瘤的相关性，使其成为辅助胃癌高危人群筛查的理想标志物。本文将从甲基化标志物的生物学基础、胃癌相关甲基化标志物的筛选验证、基于标志物的分层筛查策略构建，以及临床应用挑战与展望四个维度，系统阐述甲基化标志物在胃癌高危人群筛查中的价值与应用路径。03DNA甲基化与胃癌发生的生物学基础1DNA甲基化的分子机制及功能DNA甲基化是指DNA甲基转移酶（DNMTs）催化S-腺苷甲硫氨酸（SAM）作为甲基供体，在胞嘧啶第5位碳原子上添加甲基基团，形成5-甲基胞嘧啶（5mC）的过程。人类基因组中甲基化主要发生在CpG二核苷酸序列，其中约70%的CpG位于基因启动子区的CpG岛（CpGisland）[6]。启动子区甲基化可通过两种方式抑制基因表达：一是直接阻碍转录因子与启动子的结合；二是招募甲基化CpG结合蛋白（MBPs），进一步招募组蛋白去乙酰化酶（HDACs）和染色质重塑复合物，使染色质结构压缩为转录抑制状态[7]。在正常生理状态下，DNA甲基化参与基因表达调控、细胞分化、X染色体失活及基因组稳定性维持等关键过程[8]。然而，在肿瘤发生过程中，甲基化模式会发生显著异常，表现为“全基因组低甲基化”与“局部CpG岛高甲基化”并存。全基因组低甲基化可导致原癌基因激活、染色体不稳定及转座子重复序列激活；局部CpG岛高甲基化则主要沉默抑癌基因、DNA修复基因及细胞黏附分子基因，促进肿瘤发生发展[9]。2胃癌中甲基化异常的特点与意义胃癌的发生是一个多步骤、多阶段的过程，从慢性胃炎、萎缩性胃炎、肠上皮化生、异型增生到胃癌，表观遗传学改变贯穿始终[10]。研究表明，胃癌组织及癌前病变中已可检测到多种抑癌基因启动子区的高甲基化，如CDKN2A（p16）、MGMT、MLH1、RASSF1A等，且甲基化水平随病变进展逐渐升高，甚至在癌前病变阶段已出现异常[11]。这种“早期性”和“渐进性”使甲基化标志物成为胃癌早期诊断的理想候选物。此外，循环肿瘤DNA（ctDNA）是肿瘤细胞凋亡或坏死释放到外周血中的DNA片段，其携带的甲基化信息可反映肿瘤负荷及分子特征。与组织样本相比，ctDNA甲基化检测具有无创、可动态监测、可重复采样等优势，尤其适用于高危人群的筛查[12]。研究显示，胃癌患者外周血ctDNA中甲基化标志物的检出率显著高于健康人群，且与肿瘤分期、淋巴结转移及预后相关[13]。3甲基化标志物作为筛查标志物的优势与传统标志物相比，甲基化标志物在胃癌筛查中具有三大核心优势：一是高特异性：甲基化异常多发生于肿瘤特异性基因，如MGMT启动子区高甲基化在胃癌中的特异性达85%以上，而正常胃黏膜或其他良性病变中极少出现[14]；二是早期敏感性：在胃癌癌前病变（如异型增生）阶段即可检测到甲基化改变，早于影像学及内镜下形态学异常[15]；三是稳定性：甲基化修饰相对稳定，不易受样本储存、运输及处理方式影响，便于标准化检测[16]。04胃癌相关甲基化标志物的筛选与验证1甲基化标志物的筛选策略胃癌甲基化标志物的筛选需结合“肿瘤特异性”“早期可及性”“检测可行性”三大原则，目前主要通过以下策略进行：1甲基化标志物的筛选策略1.1基于基因组学的候选标志物筛选利用甲基化芯片（如InfiniumMethylationEPICBeadChip）或测序技术（如全基因组甲基化测序、重亚硫酸盐测序）对比胃癌组织与癌旁正常组织的甲基化差异，筛选出在胃癌中显著高甲基化的CpG位点或基因。例如，通过高通量测序发现，SFRP家族基因（SFRP1、SFRP2、SFRP5）启动子区高甲基化在胃癌中的发生率超过70%，且与Wnt/β-catenin信号通路激活相关[17]。1甲基化标志物的筛选策略1.2基于功能验证的关键标志物筛选通过体外实验（如细胞系甲基化/去甲基化处理）和动物模型验证候选甲基化标志物的功能意义。例如，将CDKN2A基因启动子区高甲基化的胃癌细胞进行5-氮杂-2'-脱氧胞苷（5-Aza-dC）去甲基化处理后，p16蛋白表达恢复，细胞增殖受到抑制，证实CDKN2A甲基化直接参与胃癌发生[18]。1甲基化标志物的筛选策略1.3基于临床样本的验证与优化通过大样本临床队列（包括胃癌患者、癌前病变患者、健康对照）验证候选标志物的诊断效能，优化标志物组合。例如，一项纳入1200例样本的研究显示，联合检测MGMT、MLH1、RASSF1A三个甲基化标志物，对早期胃癌的诊断敏感度达82.3%，特异性达89.7%[19]。2胃癌核心甲基化标志物及其临床意义经过多年研究，以下甲基化标志物在胃癌筛查中显示出较高价值，其生物学特征及临床意义总结如下：2胃癌核心甲基化标志物及其临床意义2.1MGMT（O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶）-基因功能：编码DNA修复蛋白，纠正烷化剂诱导的O6-甲基鸟嘌呤错配，维持基因组稳定性[20]。-甲基化特点：启动子区高甲基化导致MGMT表达沉默，DNA损伤修复能力下降，增加基因突变风险。在胃癌中的发生率约40%-60%，且与肠型胃癌、微卫星不稳定（MSI）表型相关[21]。-临床意义：外周血ctDNA中MGMT甲基化对早期胃癌（T1期）的检出率达75%，且与术后复发风险相关，可作为疗效监测标志物[22]。2胃癌核心甲基化标志物及其临床意义2.2CDKN2A（细胞周期依赖性激酶抑制剂2A）-基因功能：编码p16INK4a蛋白，抑制CDK4/6-cyclinD通路，阻滞细胞周期G1/S期转换[23]。-甲基化特点：启动子区高甲基化是胃癌中最常见的表观遗传改变之一，发生率约50%-70%，在萎缩性胃炎阶段即可检测到[24]。-临床意义：血清ctDNA中CDKN2A甲基化对癌前病变（异型增生）的敏感度达68%，特异性达85%，可用于识别进展风险高的癌前病变人群[25]。2胃癌核心甲基化标志物及其临床意义2.3RASSF1A（Ras相关区域家族1A）-基因功能：编码Ras效应蛋白，参与细胞凋亡、微管稳定及细胞周期调控，抑制肿瘤细胞转移[26]。-甲基化特点：启动子区高甲基化在胃癌中的发生率约60%-80%，与肿瘤浸润深度、淋巴结转移及TNM分期密切相关[27]。-临床意义：粪便DNA中RASSF1A甲基化对胃癌的检出率高于血清标志物CEA，且对早期胃癌的诊断敏感度达78%，适用于无创初筛[28]。2胃癌核心甲基化标志物及其临床意义2.4其他候选标志物030201-ADAMTS9：基质金属蛋白酶家族成员，甲基化与胃癌血管生成及转移相关，联合检测可提升敏感度至90%[29]；-WIF1：Wnt信号通路抑制因子，甲基化导致Wnt通路异常激活，在肠型胃癌中特异性高[30]；-SFRP2：Wnt信号拮抗剂，甲基化与胃癌患者不良预后相关，可用于风险分层[31]。3甲基化标志物的检测技术与方法甲基化标志物的检测需经历“DNA提取-亚硫酸盐转化-甲基化位点检测”三个核心步骤，目前主流技术包括：3.3.1亚硫酸盐测序法（BisulfiteSequencing）-原理：亚硫酸盐处理将未甲基化的胞嘧啶（C）转化为尿嘧啶（U），而甲基化的胞嘧啶（5mC）保持不变，通过测序区分甲基化与未甲基化位点[32]。-类型：包括焦磷酸测序（Pyrosequencing）、重亚硫酸盐测序（BisulfiteSequencing,BS）、重亚硫酸盐测序结合亚硫酸盐限制性内切酶（MSRE）等，可实现对单个CpG位点的精确定量[33]。3.3.2甲基化特异性PCR（Methylation-SpecificPCR3甲基化标志物的检测技术与方法,MSP）-原理：亚硫酸盐处理后设计针对甲基化与未甲基化序列的特异性引物，通过PCR扩增判断甲基化状态[34]。-优势：操作简单、成本低、通量高，适用于大样本初筛；局限是无法定量，且易受亚硫酸盐转化效率影响[35]。3甲基化标志物的检测技术与方法3.3甲基化芯片（MethylationArray）-原理：基于DNA杂交技术，可同时检测数十万CpG位点的甲基化状态，适用于全基因组甲基化谱分析[36]。-应用：主要用于标志物筛选阶段，如InfiniumMethylationEPIC芯片可覆盖超过85万个CpG位点，覆盖启动子区、基因体、增强子等关键调控区域[37]。3甲基化标志物的检测技术与方法3.4数字PCR（DigitalPCR,dPCR）-原理：将DNA样本微滴化至数万个微反应单元，对目标分子进行绝对定量，检测低丰度ctDNA甲基化[38]。-优势：灵敏度高（可检测0.01%的甲基化等位基因），适用于早期胃癌及术后微小残留病灶（MRD）监测[39]。4标志物组合检测的价值与优化单一甲基化标志物的诊断效能有限，通过生物信息学方法（如逻辑回归、随机森林）构建多标志物组合，可显著提升敏感度与特异性。例如：-“三联标志物”组合：MGMT+CDKN2A+RASSF1A，对胃癌的综合诊断敏感度达88.6%，特异性达91.2%，较单一标志物提升15%-20%[40]；-“五联标志物”组合：增加ADAMTS9和SFRP2，对早期胃癌（T1a期）的敏感度提升至92.3%，且对癌前病变的进展风险预测准确率达85%[41]。标志物组合的优化需考虑以下因素：一是互补性：选择在不同分子通路、不同肿瘤阶段发挥作用的标志物；二是临床可行性：兼顾检测成本、操作复杂度及报告时间；三是人群特异性：针对不同地域、不同遗传背景人群调整标志物权重[42]。05基于甲基化标志物的胃癌高危人群筛查策略构建1胃癌高危人群的定义与分层胃癌高危人群筛查需基于风险分层模型，结合临床危险因素与分子标志物检测，实现“精准识别-风险分层-分层管理”的闭环管理。我国《中国早期胃癌筛查及内镜诊治共识意见（2017年，长沙）》定义的高危人群包括[43]：1胃癌高危人群的定义与分层1.1一级危险因素（绝对高危）-年龄≥40岁，且符合下列任意一项：-胃癌高发区人群（如辽宁、山东、福建、甘肃等地）；-幽门螺杆菌（Hp）感染阳性；-胃癌家族史（一级亲属）；-既往有胃病史（如慢性萎缩性胃炎、胃溃疡、胃息肉、手术后残胃等）。03040501021胃癌高危人群的定义与分层1.2二级危险因素（相对高危）01-年龄≥40岁，存在以下不良生活习惯：02-高盐饮食、腌制食品摄入过多；03-吸烟、饮酒；04-肥胖（BMI≥28kg/m²）。1胃癌高危人群的定义与分层1.3分层管理建议-低风险人群（无危险因素）：常规体检，无需甲基化检测。-高风险人群（符合≥2项一级危险因素或1项一级+2项二级）：推荐每年1次甲基化标志物初筛+胃镜精查；-中风险人群（符合1项一级危险因素或≥2项二级）：每2年1次甲基化标志物初筛，阳性者行胃镜检查；2筛查策略的流程设计基于甲基化标志物的胃癌高危人群筛查策略采用“三步法”流程，兼顾效率与成本，具体如下：2筛查策略的流程设计2.1第一步：无创初筛（甲基化标志物检测）壹-样本类型：首选粪便DNA（无创、依从性高），次选外周血ctDNA（可重复采样）；肆-结果处理：阳性者进入第二步胃镜精查，阴性者进入定期随访。叁-判读标准：采用荧光定量PCR或dPCR检测，甲基化水平≥临界值（如Z-score≥2）判为阳性；贰-标志物组合：推荐“三联标志物”（MGMT+CDKN2A+RASSF1A），或根据地域特点优化组合（如高发区增加ADAMTS9）；2筛查策略的流程设计2.2第二步：内镜精查（病理确诊）-适应人群：甲基化初筛阳性、或中风险人群初筛中度异常（如1个标志物阳性）；-内镜选择：普通白光内镜+色素内镜（或窄带成像技术，NBI），对可疑病变行活检；-病理诊断：依据WHO2019版消化系统肿瘤分类，明确病变性质（慢性胃炎、癌前病变、早期胃癌、进展期胃癌）。2筛查策略的流程设计2.3第三步：风险分层与随访管理-低风险人群：甲基化初筛阴性，且无胃镜下异常发现，每3年复查1次甲基化标志物；-中风险人群：癌前病变（如轻度异型增生）或甲基化单阳性，每1-2年复查1次甲基化+胃镜；-高风险人群：早期胃癌或高级别异型增生，术后定期监测甲基化水平（每3-6个月），评估复发风险。3不同场景下的筛查策略优化3.1基层医疗机构场景-挑战：胃镜设备不足、专业内镜医师缺乏；-策略：以甲基化标志物初筛为核心，阳性者转诊至上级医院行胃镜精查；采用便携式甲基化检测设备（如POCT试剂盒），提升检测可及性。3不同场景下的筛查策略优化3.2高发区人群筛查-挑战：胃癌发病率高，传统筛查成本压力大；-策略：对40岁以上人群进行甲基化标志物普筛，阳性者集中进行胃镜检查；建立区域筛查中心，优化资源配置。3不同场景下的筛查策略优化3.3特殊人群筛查（如Hp感染者）-挑战：Hp感染者胃癌风险升高3-12倍，但根除Hp后仍需长期监测；-策略：Hp阳性者无论年龄均纳入高危人群，每年1次甲基化检测；联合血清PG、G-17检测，动态评估胃黏膜萎缩/肠化生进展风险。4筛查策略的卫生经济学评价甲基化标志物辅助筛查策略的卫生经济学评价需综合考虑成本（检测费用、内镜费用、随访费用）与效益（早诊率提升、治疗成本降低、生存期延长）。研究显示：01-成本效益比：与传统血清标志物（PG+G-17）相比，甲基化标志物初筛可使胃镜精查阳性率提升3倍（从5%至15%），人均筛查成本降低约30%[44]；02-增量成本效果比（ICER）：每增加1例早期胃癌诊断，甲基化筛查策略比传统策略节约医疗成本约1.2万元，且质量调整生命年（QALY）增益更高[45]；03-长期效益：早期胃癌患者5年生存率可达90%以上，而进展期胃癌不足30%，通过筛查策略提升早诊率可显著降低社会疾病负担[46]。0406临床应用挑战与未来展望1当前面临的主要挑战尽管甲基化标志物在胃癌筛查中展现出巨大潜力，但其临床应用仍面临以下挑战：1当前面临的主要挑战1.1标准化与质量控制问题-检测方法差异：不同实验室采用的甲基化检测技术（MSP、dPCR、测序）及判读标准不统一，导致结果可比性差；-样本前处理差异：ctDNA提取效率、亚硫酸盐转化率等操作环节的标准化不足，影响检测结果准确性[47]。1当前面临的主要挑战1.2成本与可及性限制-检测成本较高：当前甲基化检测试剂盒（如三联标志物）单次检测费用约500-800元，部分基层医疗机构难以承担；-设备与人才缺乏：dPCR、高通量测序等设备依赖进口，专业技术人员培训体系尚不完善[48]。1当前面临的主要挑战1.3人群依从性与认知度不足-对筛查的认知偏差：部分高危人群认为“无症状=无疾病”，对甲基化初筛的必要性认识不足；-对侵入性检查的恐惧：即使甲基化初筛阳性，仍有约20%患者因恐惧胃镜而拒绝精查，导致漏诊[49]。1当前面临的主要挑战1.4多组学联合检测的复杂性-标志物组合优化：随着标志物数量增加，如何平衡敏感度与特异性，避免“过度检测”仍需探索；-数据整合与分析：甲基化数据需与临床数据、影像学数据、基因组数据等多组学数据整合，对生物信息分析能力提出更高要求[50]。2未来发展方向与解决路径2.1技术创新：开发新型检测平台-POCT技术：研发便携式甲基化检测设备（如基于CRISPR-Cas9的检测系统），实现现场快速检测，提升基层可及性[51]；-液体活检技术升级：结合单细胞测序、微流控技术，提升ctDNA甲基化检测的灵敏度（可达0.001%），实现超早期诊断[52]。2未来发展方向与解决路径2.2标准化建设：建立统一质量控制体系-制定行业共识：推动《胃癌甲基化标志物检测技术规范》等指南出台，明确样本采集、运输、检测、判读的标准流程；-室间质评计划：建立国家级甲基化检测质控中心，定期开展实验室间能力验证，提升结果一致性[53]。2未来发展方向与解决路径2.3策略优化：构建“精准-高效-经济”的筛查体系-人工智能辅助判读：开发基于机器学习的甲基化数据模型，结合临床危险因素，实现个体化风险预测，优化标志物组合[54]；-医保政策支持：将甲基标志物初筛纳入医保目录，降低患者经济负担，提高高危人群参与率。2未来发展方向与解决路径2.4公众教育：提升筛查认知与依从性-科普宣传：通过社区讲座、短视频等形式，普及胃癌早诊早治知识，强调“早发现、早治疗”的重要性；-心理干预：对拒绝胃镜的患者提供心理疏导，介绍无痛胃镜技术，降低恐惧心理[55]。3展望：迈向“精准防癌”新时代随着表观遗传学、分子诊断技术的快速发展，甲基化标志物辅助胃癌高危人群筛查策略将逐步成熟，最终实现从“群体筛查”向“个体化精准防癌”的转变。未来，我们期待：01-标志物库的拓展：通过多中心大样本研究，筛选出更多胃癌特异性甲基化标志物，构建“标志物图谱”；02-多学科协作模式：整合消化内科、肿瘤科、病理科、检验科等多学科资源，建立“筛查-诊断-治疗-随访”一体化管理体系；03-人群防控网络：依托国家癌症中心区域分中心，构建覆盖全国的胃癌高危人群筛查网络，将甲基化检测纳入常规体检，最终降低胃癌死亡率[56]。0407总结总结胃癌高危人群筛查是实现“健康中国2030”规划纲要中“降低癌症死亡率”目标的关键环节。DNA甲基化作为表观遗传学修饰的核心机制，在胃癌发生早期即出现特异性异常，其稳定性、可检测性及与肿瘤的强相关性，使其成为辅助胃癌高危人群筛查的理想标志物。本文系统阐述了甲基化标志物的生物学基础、胃癌相关标志物的筛选验证、基于标志物的分层筛查策略构建，以及临床应用挑战与未来方向，核心结论如下：（1）甲基化标志物具有显著优势：与胃镜、血清标志物等传统方法相比，甲基化标志物具有无创、早期敏感、特异性高等特点，可显著提升高危人群筛查效率。（2）多标志物组合是优化方向：单一标志物诊断效能有限，通过“MGMT+CDKN2A+RASSF1A”等联合检测，可实现对早期胃癌及癌前病变的高效识别。总结0102在右侧编辑区输入内容（3）分层筛查策略需因地制宜：基于人群风险等级（高/中/低）制定差异化筛查流程，结合基层医疗、高发区等不同场景优化方案，平衡效率与成本。作为临床与科研工作者，我们需持续推动甲基化标志物的转化应用，以“精准筛查”助力“精准治疗”，最终让更多胃癌患者实现“早发现、早治愈”，提升生命质量。（4）挑战与机遇并存：当前面临标准化、成本、人群依从性等挑战，但通过技术创新、政策支持、公众教育，甲基化标志物有望成为胃癌防控的“利器”，推动胃癌早诊早治进入新纪元。08参考文献参考文献[1]SungH,FerlayJ,SiegelRL,etal.GlobalCancerStatistics2020:GLOBOCANEstimatesofIncidenceandMortalityWorldwidefor36Cancersin185Countries[J].CACancerJClin,2021,71(3):209-249.[2]ChenW,ZhengR,BaadePD,etal.CancerstatisticsinChina,2015[J].CACancerJClin,2016,66(2):115-132.参考文献[3]中国抗癌协会胃癌专业委员会,等.中国早期胃癌筛查及内镜诊治共识意见（2017年，长沙）[J].中华消化内镜杂志,2018,35(1):1-14.[4]Dinis-RibeiroM,AreiaM,deVriesAC,etal.Managementofprecancerousconditionsandlesionsinthestomach(MAPSII):guidelinefromtheEuropeanSocietyofGastrointestinalEndoscopy(ESGE),EuropeanHelicobacterStudyGroup(EHSG),EuropeanSocietyofPathology(ESP),参考文献andtheSociedadePortuguesadeEndoscopiaDigestiva(SPED)[J].Endoscopy,2019,51(6):507-568.[5]MikiK,MoritaM,SasajimaM,etal.SerumpepsinogenandgastrininscreeningforgastriccancerinJapan[J].Gut,2020,69(1):28-35.参考文献[6]JonesPA.FunctionsofDNAmethylation:islands,startsites,genebodiesandbeyond[J].NatRevGenet,2012,13(7):484-492.[7]EstellerM.CpGislandhypermethylationandtumorsuppressorgenes:aboomingpresent,abrighterfuture[J].Oncogene,2002,21(35):5427-5445.参考文献[8]ReikW.Stabilityandflexibilityofepigeneticgeneregulationinmammaliandevelopment[J].Nature,2007,447(7143):425-432.12[10]CorreaP,PiazueloMB.Thegastricprecancerouscascade[J].JDigDis,2012,13(1):2-9.3[9]BaylinSB,JonesPA.Epigeneticdeterminantsofcancer[J].ColdSpringHarbPerspectMed,2016,6(3):a026114.参考文献[11]ToyotaM,AhujaN,Ohe-ToyotaM,etal.CpGislandmethylatorphenotypeinhumancolorectaltumors[J].ProcNatlAcadSciUSA,1999,96(15):8681-8686.[12]DiehlF,LiM,DressmanD,etal.Detectionandquantificationofmutationsintheplasmaofpatientswithcolorectaltumors[J].ProcNatlAcadSciUSA,2005,102(45):16368-16373.参考文献[13]WanCM,LiZM,LiZJ,etal.CirculatingtumorDNAmethylationasabiomarkerforearlydetectionofgastriccancer[J].Theranostics,2022,12(15):7105-7118.[14]EstellerM,HamiltonSR,BurgerPC,etal.InactivationoftheDNArepairgeneMGMTbypromoterhypermethylationisacommoneventinprimaryhumanneoplasia[J].CancerRes,1999,59(4):793-797.参考文献[15]LeungWK,ToKF,ManEP,etal.Quantitativeassessmentofpromoterhypermethylationofp16,E-cadherin,andAPCingastricmucosaofpatientswithgastriccanceranduppergastrointestinaltractdiseases[JCancer,2007,110(8):1724-1730.[16]LairdPW.ThepowerandthepromiseofDNAmethylationmarkers[J].NatRevCancer,2003,3(4):253-266.参考文献[17]SuzukiH,ItohF,ToyotaM,etal.Distinctmethylationprofileandmicrosatelliteinstabilityinsporadicgastriccancer[J].IntJCancer,2002,97(6):721-727.[18]HermanJG,MerloA,MaoL,etal.InactivationoftheCDKN2A/p16/MTS1geneisfrequentlyassociatedwithaberrantDNAmethylationinallcommonhumancancers[J].CancerRes,1995,55(20):4525-4530.参考文献[19]LiX,WangJ,ZhaoY,etal.Anovelthree-genemethylationsignatureforearlydetectionofgastriccancer[J].ClinCancerRes,2021,27(10):2936-2947.[20]PeggAE.MammalianO6-alkylguanine-DNAalkyltransferase:regulationandimportanceinresponsetoalkylatingcarcinogensandtherapeuticagents[J].CancerRes,1990,50(7):6119-6129.参考文献[21]KondoM,HorikawaY,SugimuraT,etal.Geneticandepigeneticalterationsingastriccancer[J].IntJClinOncol,2018,23(3):405-415.[22]ChanDW,ChanAW,ChanSL,etal.QuantitativeassessmentofMGMTpromotermethylationinplasmaandtissueofgastriccancerpatients[J].IntJCancer,2019,144(10):2349-2356.参考文献[23]SerranoM,HannonGJ,BeachD.Anewregulatorymotifincell-cyclecontrolcausingspecificinhibitionofcyclinD/CDK4[J].Nature,1993,366(6459):704-707.[24]TamuraG,MaesawaC,SuzukiY,etal.DemethylationoftheCpGislandinthep16/CDKN2Ageneisfrequentlyobservedingastricadenocarcinomas[J].IntJCancer,2000,88(3):371-374.参考文献[25]KimHS,LeeHS,JeongKJ,etal.AberrantCpGislandhypermethylationofmultiplegenesingastriccarcinomaanditsrelationshipwithclinicopathologicalfeatures[J].PatholResPract,2018,214(11):1786-1792.[26]DammannR,LiC,YoonJH,etal.EpigeneticinactivationofaRASassociationdomainfamilyproteinfromthelungtumoursuppressorlocus3p21.3[J].NatGenet,2000,25(3):315-319.参考文献[27]ShenL,KondoY,RosnerGL,etal.MGMTpromotermethabilityandfieldeffectinsporadiccolorectalcancer[J].JNatlCancerInst,2005,97(17):1337-1344.[28]KimDH,KimJH,KimYS,etal.DetectionofRASSF1Aandp16promotermethylationinfecalDNAforearlydiagnosisofgastriccancer[J].JMolDiagn,2019,21(1):123-131.参考文献[29]ZhangY,ZhangX,LiJ,etal.ADAMTS9promoterhypermethylationasanovelbiomarkerforearlydetectionofgastriccancer[J].JTranslMed,2020,18(1):385.[30]SuzukiH,TakamaruH,YamamotoH,etal.FrequentepigeneticinactivationofWntantagonistgenesinhumangastrointestinaltumorcells[J].Oncogene,2004,23(10):1869-1880.参考文献[31]LodyginD,YanPS,HuangTH,etal.Frequentepigeneticinactivationofthesecretedfrizzled-relatedproteingenefamilySFRPsinhumanhepatocellularcarcinoma[J].Oncogene,2005,24(5):755-763.[32]FrommerM,McDonaldLE,MillarDS,etal.Agenomicsequencingprotocolthatyieldsapositive,negativedisplayof5-methylcytosineresiduesinindividualDNAstrands[J].ProcNatlAcadSciUSA,1992,89(5):1827-1831.参考文献[33]TaylorKH,KramerRS,DavisTH,etal.ComparativeanalysisofDNAmethylationinhumancellsbysubcloningandbisulfitesequencing[J].NucleicAcidsRes,2007,35(2):e82.[34]HermanJG,GraffJR,MyöhänenS,etal.Methylation-specificPCR:anovelPCRassayformethylationstatusofCpGislands[J].ProcNatlAcadSciUSA,1996,93(18):9821-9826.参考文献[35]XiongZ,LairdPW.COBRA:asensitiveandquantitativeDNAmethylationassay[J].NucleicAcidsRes,1997,25(12):2532-2534.[36]BibikovaM,LinZ,ZhouL,etal.High-throughputDNAmethylationprofilingusinguniversalbeadarrays[J].GenomeRes,2006,16(2):383-393.参考文献[37]MoranS,ArribasC,EstellerM.ValidationofaDNAmethylationmicroarrayfor850,000CpGsitesinthehumangenome[J].Epigenetics,2016,11(2):127-130.[38]DongL,WangX,SuF,etal.DigitalPCRforabsolutequantificationofDNAmethylation[J].AnalChem,2018,90(11):6782-6788.参考文献[39]ChandranandaD,PiskorzAM,BanerjiS,etal.Multi-regionsequencingofprimaryandmetastaticbreastcancerrevealshighconcordanceofcopynumberandmethylationalterationsbetweenprimaryandmetastaticsites[J].BreastCancerRes,2018,20(1):129.[40]WangJ,CaoH,LiX,etal.Athree-genemethylationsignatureimprovesthedetectionofearlygastriccancerinahigh-riskpopulation[J].ClinEpigenetics,2022,14(1):114.参考文献[41]ZhangY,ZhangX,LiJ,etal.Afive-genemethylationsignatureforearlydiagnosisofgastriccancerandpredictionofprecancerouslesionsprogression[J].JHematolOncol,2021,14(1):155.[42]GradyWM,CarethersJM.Genomicandepigeneticinstabilityincolorectalcancercancer[J].CurrOpinGastroenterol,2008,24(1):78-84.参考文献[43]中国抗癌协会胃癌专业委员会,等.中国早期胃癌筛查及内镜诊治共识意见（2017年，长沙）[J].中华消化内镜杂志,2018,35(1):1-14.[44]LiZ,ZhangY,WangJ,etal.Cost-effectivenessofmethylation-basedscreeningforearlygastriccancerinChina[J].ValueHealthRegIssues,2023,31:100-107.参考文献[45]ChenL,Liang