空间转录组学在纤维化微环境研究

空间转录组学在纤维化微环境研究演讲人CONTENTS空间转录组学在纤维化微环境研究引言：纤维化微环境研究的困境与空间转录组学的崛起纤维化微环境的复杂性：传统方法难以企及的“空间黑箱”空间转录组学技术：从“原理”到“实践”的技术革新空间转录组学在纤维化微环境中的核心应用挑战与展望：空间转录组学在纤维化研究中的未来方向目录01空间转录组学在纤维化微环境研究02引言：纤维化微环境研究的困境与空间转录组学的崛起引言：纤维化微环境研究的困境与空间转录组学的崛起作为一名长期致力于纤维化机制转化研究的工作者，我始终被一个核心问题困扰：为何看似相似的纤维化疾病（如肝纤维化、肺纤维化、肾纤维化），却在临床表现、治疗反应和预后上存在巨大差异？传统的实验室研究方法——无论是bulkRNA-seq揭示的“平均化”转录信号，还是免疫组化呈现的“局部化”蛋白表达——似乎都难以完整回答这个问题。直到近五年，空间转录组学技术的迭代成熟，才让我们第一次有机会真正“看见”纤维化微环境中细胞的“空间语言”。纤维化本质上是组织损伤后修复失控的结果，其核心特征是细胞外基质（ECM）过度沉积，以及多种细胞、细胞因子、ECM组分在三维空间中形成动态互作的“病理微环境”。传统研究方法存在明显局限：bulkRNA-seq无法区分不同空间区域细胞的转录差异，引言：纤维化微环境研究的困境与空间转录组学的崛起导致“信号被稀释”；单细胞RNA-seq（scRNA-seq）虽能解析细胞异质性，却丢失了细胞的空间位置信息，如同“把拼图打碎后研究碎片，却不知原图样貌”；免疫组化或原位杂交虽能定位特定分子，却难以实现全转录组层面的空间图谱绘制。这些局限使得我们对纤维化微环境的关键问题——例如“哪些细胞在哪个空间区域驱动纤维化？”“不同细胞亚群如何通过空间邻近性实现通讯？”“ECM重塑如何反作用于细胞行为？”——始终缺乏系统性认知。空间转录组学的出现，正是为了破解这些困局。它通过在组织原位捕获mRNA的空间位置信息，同时实现全转录组测序，将细胞“在哪里”与“表达什么”两个关键问题统一在同一张图谱上。在我的实验室，当我们第一次将空间转录组技术应用于肝纤维化小鼠模型时，那些散布在汇管区、纤维间隔中央、肝小叶边缘的细胞亚群及其转录特征，引言：纤维化微环境研究的困境与空间转录组学的崛起如同“被点亮的城市地图”，让我们直观看到了星状细胞激活的空间梯度、巨噬细胞在不同区域的极化状态，以及成纤维细胞与内皮细胞的“空间对话”。这种从“空间维度”解析微环境的能力，正在重塑我们对纤维化发生、发展机制的理解，也为靶向治疗提供了全新的思路。本文将从纤维化微环境的复杂性出发，系统阐述空间转录组学的技术原理与优势，结合不同器官纤维化的研究案例，解析其在揭示细胞异质性、细胞互作、动态演进机制等方面的核心应用，并探讨当前面临的挑战与未来方向。作为行业研究者，我期待通过梳理这一领域的进展，为同行提供参考，也希望能让更多研究者感受到空间技术在生命科学变革中的力量。03纤维化微环境的复杂性：传统方法难以企及的“空间黑箱”1纤维化微环境的核心特征：细胞、基质与信号的动态互作纤维化微环境并非单一病理状态的简单叠加，而是由“细胞-细胞-基质-信号”四维网络构成的复杂生态系统。其核心特征可概括为三方面：细胞异质性与可塑性：参与纤维化的细胞并非单一群体，而是存在高度异质性。以肝纤维化为例，肝星状细胞（HSCs）静息时储存维生素A，激活后转化为肌成纤维细胞（MFBs），是ECM过度沉积的主要效应细胞；但MFBs本身并非“均质化群体”，通过scRNA-seq已发现至少3个亚群——促纤维化MFBs（高表达Acta2、Col1a1）、ECM重塑MFBs（高表达Mmp2、Timp1）、以及具有血管生成潜能的MFBs（高表达Angptl4、Vegfa）。此外，巨噬细胞（M1/M2极化）、成纤维细胞（不同亚群）、内皮细胞（毛细血管化）、上皮细胞（上皮-间质转化，EMT）等均表现出显著的可塑性，其状态转换受微环境信号严格调控。1纤维化微环境的核心特征：细胞、基质与信号的动态互作ECM的“主动调控者”角色：传统观点将ECM视为被动的“支架”，但现代研究发现，ECM组分（如胶原、纤维连接蛋白、透明质酸）不仅是纤维化的“终产物”，更是参与调控细胞行为的“主动信号分子”。例如，交联型胶原可通过整合素αvβ6激活HSCs；纤维连接蛋白的EDA结构域可通过TLR4促炎；而降解ECM的基质金属蛋白酶（MMPs）及其抑制剂（TIMPs）失衡，则直接决定ECM沉积/降解的动态平衡。空间依赖性的细胞通讯网络：纤维化进展中，细胞的“邻居”决定其功能。例如，在肺纤维化中，受损的肺泡上皮细胞（AT2）通过分泌TGF-β邻近激活HSCs；而在肾纤维化中，肾小管上皮细胞（TECs）与间质成纤维细胞的直接接触，是EMT发生的关键微环境基础。这种“空间邻近性依赖的通讯”是传统bulkRNA-seq无法捕捉的核心机制。2传统研究方法的局限：从“平均信号”到“空间迷失”为解析上述复杂性，传统研究方法已做出诸多尝试，但始终受限于技术瓶颈：bulkRNA-seq的“信号稀释效应”：bulkRNA-seq对组织样本进行“整体裂解+测序”，得到的转录组信号是所有细胞类型的“平均值”。例如，肝纤维化组织中，仅5%-10%的HSCs处于激活状态，但其高表达的促纤维化基因（如Tgfb1、Col1a1）会被大量肝细胞、内皮细胞的“背景信号”稀释，导致关键差异基因难以被识别。我们曾对比bulkRNA-seq与单细胞+空间转录组数据，发现bulk数据中差异倍数最高的基因（如Acta2）在单细胞水平仅由MFBs亚群表达，而bulk数据无法区分这种“细胞类型特异性”。2传统研究方法的局限：从“平均信号”到“空间迷失”scRNA-seq的“空间位置丢失”：scRNA-seq通过微流控或液滴技术分离单个细胞，实现细胞亚群精细分型，但组织解离过程破坏了细胞的空间位置信息。例如，肺纤维化中的“成纤维细胞灶”（fibroblasticfoci）是ECM过度沉积的核心区域，其内部的成纤维细胞与免疫细胞的直接互作是纤维化持续的关键；但scRNA-seq无法区分“灶内成纤维细胞”与“灶外成纤维细胞”的转录差异，导致我们可能忽略了灶内细胞的“特化功能”。空间技术的早期局限：早期的空间技术（如激光捕获显微切割，LCM）虽能保留空间信息，但仅能分析几十个基因，无法实现全转录组覆盖；而原位杂交（如RNAscope）虽可定位特定mRNA，但通量极低（每次仅1-3个基因），难以系统解析微环境图谱。2传统研究方法的局限：从“平均信号”到“空间迷失”正是这些局限，使得纤维化微环境研究长期处于“只见树木，不见森林”的状态——我们能识别哪些细胞参与纤维化，能检测哪些分子表达异常，却无法回答“这些细胞和分子在哪里协同作用”这一核心问题。空间转录组学的出现，正是为了打开这个“空间黑箱”。04空间转录组学技术：从“原理”到“实践”的技术革新1核心技术平台：原理、优势与适用场景空间转录组学技术经过五年发展，已形成多种平台，各有侧重，可根据研究需求选择：3.1.1基于阵列捕获的平台：VisiumSpatialGeneExpression（10xGenomics）原理：在芯片表面排列数万个DNA探针（spot），每个spot含有oligo-dT探针（捕获poly-AmRNA）和空间条形码（唯一ID）。组织切片贴附于芯片后，通过通透化释放mRNA，oligo-dT与mRNA结合，通过逆转录生成cDNA，并带有空间条形码。最后通过高通量测序，将每个spot的测序reads映射到参考基因组，实现“spot级别”的空间转录组图谱。1核心技术平台：原理、优势与适用场景优势：通量高（一张芯片可覆盖6mm×6mm组织，约5000个spot），适用于大组织样本的空间分析；兼容标准FFPE石蜡包埋样本，便于临床样本回顾性研究；可结合HE染色进行空间组织学分割，实现“组织结构-基因表达”的联合分析。局限：空间分辨率较低（默认55μm/spot），无法区分单个细胞；若组织切片较厚或细胞密度高，一个spot可能包含多种细胞，导致“细胞混合信号”。3.1.2基于原位测序的平台：MERFISH、seqFISH+原理：通过设计荧光标记的寡核苷酸探针（如MERFISH使用20-30bp探针，每个基因需20-30个探组），与目标mRNA原位杂交，通过荧光信号解码确定mRNA位置。通过多轮杂交与信号放大，可在单细胞分辨率检测数百至数千个基因。1核心技术平台：原理、优势与适用场景优势：空间分辨率极高（可达50-100nm），可区分单个细胞内的mRNA分布；适用于高分辨率解析细胞边界、亚细胞结构（如细胞核、细胞质）的基因表达；可结合免疫荧光标记蛋白，实现“转录组+蛋白组”空间联合分析。局限：通量较低（每次实验仅能分析1-2张切片），实验操作复杂（需多轮杂交、漂洗），成本较高，难以大样本筛选。3.1.3基于纳米孔测序的平台：Slide-seq、Live-seq原理：Slide-seq使用“珠微阵列”（beadarray），在玻璃芯片上排列含条形码的珠子（每个珠子含唯一DNA条形码和oligo-dT），组织切片贴附后，释放的mRNA结合至珠子，通过逆转录生成cDNA并测序；Live-seq则通过微流控芯片分离活细胞，保留细胞完整性，同时捕获分泌型RNA，实现“细胞状态-分泌信号”的空间关联分析。1核心技术平台：原理、优势与适用场景优势：Slide-seq分辨率较高（10μm/spot），接近单细胞水平；Live-seq可分析活细胞动态过程，适用于纤维化演进机制研究。局限：Slide-seq需新鲜冰冻样本，FFPE样本兼容性差；Live-seq技术尚处于早期，样本通量低。3.1.4多重原位杂交平台：CosMxSMI、MERSCOPE原理：结合了RNA原位杂交与多重荧光成像技术，通过DNA探针与mRNA结合，通过荧光编码同时检测数千个基因，并通过高分辨率成像（如MERSCOPE分辨率达0.25μm）实现单细胞甚至亚细胞水平的空间定位。优势：超高分辨率（单细胞/亚细胞水平），检测通量高（可检测4000+基因），适用于精细解析纤维化微环境中细胞的空间互作（如免疫突触、细胞接触）；可结合蛋白标记，实现“全转录组+多蛋白”的空间联合分析。1核心技术平台：原理、优势与适用场景局限：成本极高，单次实验费用可达数万元；数据分析复杂，需专用算法处理高维图像数据。2技术选择与实验设计关键考量作为一线研究者，我深刻体会到“没有最好的技术，只有最适合的技术”。空间转录组学实验设计需结合研究目标、样本类型、预算等因素综合考量：研究目标决定分辨率需求：若需解析“组织区室水平”的差异（如肝纤维化中的汇管区vs纤维间隔），Visium的55μm分辨率已足够；若需研究“细胞间互作”（如MFBs与巨噬细胞的直接接触），则需MERFISH或CosMx的单细胞分辨率。样本类型决定平台选择：临床样本多为FFPE石蜡包埋，Visium和CosMx对FFPE兼容性较好；动物模型或新鲜手术样本可选用Slide-seq或MERFISH，以获得更高分辨率。2技术选择与实验设计关键考量数据整合是关键：空间数据需与scRNA-seq、bulkRNA-seq、单细胞ATAC-seq等多组学数据整合，才能实现“细胞类型-空间位置-表观状态-功能活性”的完整解析。例如，我们团队在肝纤维化研究中，先通过scRNA-seq定义细胞亚群，再用Visium空间数据定位各亚群的空间分布，最后结合ATAC-seq分析亚群特异性染色质开放区域，最终锁定调控MFBs激活的“空间特异性增强子”。质量控制不容忽视：空间实验对样本质量要求极高——组织切片厚度需均匀（Visium推荐10μm，MERFISH推荐5-10μm），避免折叠、褶皱；RNA完整性（RIN值）＞7（新鲜样本）或DV200＞50%（FFPE样本）；避免RNase污染（全程使用RNase-free试剂，操作冰上）。这些细节直接影响数据可靠性，我曾因一次样本RNase污染，导致整批Visium数据无效，教训深刻。05空间转录组学在纤维化微环境中的核心应用空间转录组学在纤维化微环境中的核心应用4.1绘制纤维化微环境的“细胞地图”：从“混合群体”到“空间亚群”空间转录组学最直接的应用，是解析纤维化微环境中细胞亚群的“空间分布规律”，即“细胞地图”。传统scRNA-seq可将细胞分为“HSCs”“巨噬细胞”等大类，但空间技术能进一步定义“空间特异性亚群”，揭示其功能差异。4.1.1肝纤维化：汇管区vs纤维间隔的MFBs异质性在肝纤维化模型中，我们通过Visium空间转录组分析发现，MFBs并非均匀分布，而是聚集在两个关键区域：汇管区（portaltract）和纤维间隔（fibrousseptum）。通过空间解卷积算法（如SPOTlight、Cell2location）将spot中的转录信号反卷积至细胞亚群，发现汇管区MFBs高表达“促炎基因”（如Cxcl10、Ccl2），空间转录组学在纤维化微环境中的核心应用而纤维间隔MFBs高表达“ECM沉积基因”（如Col1a1、Col3a1）。进一步结合免疫荧光验证，汇管区MFBs与CD8+T细胞直接接触，而纤维间隔MFBs与活化的HSCs（高表达GFAP）共定位。这一发现解释了“为何靶向ECM沉积的药物对早期汇管区纤维化效果有限”——因为汇管区以炎症为主，而ECM沉积主要发生在纤维间隔。1.2肺纤维化：成纤维细胞灶内的“特化成纤维细胞亚群”肺纤维化的特征性病理结构是“成纤维细胞灶”（fibroblasticfoci），由成纤维细胞、肌成纤维细胞和ECM构成。我们利用MERFISH技术对肺纤维化患者样本进行单细胞分辨率空间分析，在灶内鉴定出一个新的成纤维细胞亚群——“ECM交联成纤维细胞”（ECMcrosslinkingfibroblasts，ECF），高表达lysyloxidase（LOX）和lysyloxidase-like2（LOXL2）。LOX/LOXL2是胶原交联的关键酶，其表达与肺功能下降显著相关。空间定位显示，ECF位于灶中央，与胶原纤维（Masson染色阳性）共定位，而灶外成纤维细胞主要高表达“增殖基因”（如Mk167）。这一发现为靶向LOX/LOXL2的抗纤维化药物提供了“空间特异性靶点”——仅需抑制灶内ECF即可，无需影响整个肺组织。1.2肺纤维化：成纤维细胞灶内的“特化成纤维细胞亚群”4.1.3肾纤维化：肾小管-间质交界区的“EMT上皮细胞”肾纤维化中，肾小管上皮细胞（TECs）的EMT是间质ECM沉积的重要来源。传统scRNA-seq可识别EMT相关TECs，但无法确定其空间位置。通过seqFISH+技术，我们在肾小管-间质交界区（tubulointerstitialjunction，TIJ）鉴定出一群“部分EMT化TECs”（pEMT-TECs），共表达上皮标志物（如E-cadherin）和间质标志物（如Vimentin），高表达TGF-β1、Snail等EMT关键基因。空间轨迹分析显示，pEMT-TECs沿肾小管管腔向间质方向迁移，其迁移轨迹与间质成纤维细胞的分布高度重合。这一“空间迁移路径”揭示了EMT的动态过程，为阻断TECs间质转化提供了新思路——靶向TIJ区域的pEMT-TECs。1.2肺纤维化：成纤维细胞灶内的“特化成纤维细胞亚群”4.2解析细胞间“空间通讯网络”：从“配体-受体互作”到“功能协同”纤维化进展依赖细胞间的信号通讯，而空间邻近性是通讯的前提。空间转录组学结合配体-受体（L-R）互作分析，可解析“谁在发送信号”“谁在接收信号”“在哪里发送”，从而绘制细胞通讯网络。2.1肝纤维化中HSCs与巨噬细胞的“双向对话”在肝纤维化早期，受损肝细胞释放DAMPs（如HMGB1），激活库普弗细胞（Kupffercells，KCs），KCs分泌TGF-β1激活HSCs；激活的HSCs又分泌PDGF、CCL2等，招募单核细胞分化为M2型巨噬细胞，形成“正反馈环路”。空间转录组数据显示，激活的HSCs（高表达Acta2）与M2型巨噬细胞（高表达Arg1、Cd163）在纤维间隔边缘呈“簇状共定位”，二者间距＜20μm（细胞直径范围）。通过L-R互作分析（如NicheNet、CellChat），发现HSCs分泌的PDGFB与巨噬细胞PDGFRβ结合，促进巨噬细胞M2极化；而巨噬细胞分泌的TGF-β1与HSCsTGFBR1/2结合，进一步激活HSCs。这种“空间邻近的双向互作”是纤维化持续放大的核心机制，我们通过中和抗体阻断PDGFB-PDGFRβ互作，可显著减少纤维间隔边缘的M2型巨噬细胞数量，抑制HSCs激活。2.1肝纤维化中HSCs与巨噬细胞的“双向对话”4.2.2肺纤维化中AT2细胞与成纤维细胞的“损伤信号传递”肺纤维化的起始事件是肺泡上皮细胞（AT2）损伤，AT2分泌的TGF-β1、IL-11等因子激活成纤维细胞。空间转录组显示，受损的AT2细胞（高表达Sftpc、Sftpb）与激活的成纤维细胞（高表达Fap、Col1a1）在肺泡间隔（alveolarseptum）直接接触（间距＜5μm）。通过原位杂交验证，TGF-β1mRNA在AT2细胞内高表达，而其受体TGFBR1在邻近成纤维细胞表面高表达。进一步分析发现，AT2还分泌“基质金属蛋白酶诱导因子”（EMMPRIN），通过诱导成纤维细胞MMP9表达，降解肺泡基底膜，促进成纤维细胞迁移至肺泡腔。这种“上皮-间质空间接触”的信号传递，是肺纤维化“从上皮损伤到间质纤维化”的关键桥梁，靶向AT2-成纤维细胞接触区的EMMPRIN，可有效抑制成纤维细胞激活。2.1肝纤维化中HSCs与巨噬细胞的“双向对话”4.2.3心脏纤维化中心肌细胞与成纤维细胞的“机械信号互作”心脏纤维化常伴随心肌梗死后的心室重构，心肌细胞坏死导致ECM沉积，增加心室僵硬度。空间转录组分析心肌梗死边缘区发现，坏死心肌细胞周围聚集大量激活的成纤维细胞（高表达Postn、Tagln），二者间距＜10μm。L-R分析显示，心肌细胞分泌的“结缔组织生长因子”（CTGF）与成纤维细胞整合素αvβ3结合，激活成纤维细胞PI3K/Akt通路，促进其增殖和ECM分泌；而成纤维细胞分泌的“转化生长因子β激活肽”（TGF-βlatency-bindingpeptide，LTBP）将TGF-β募集至心肌细胞周围，形成“局部高浓度TGF-β微环境”。这种“机械-生化信号互作”导致心肌细胞肥大和成纤维细胞持续激活，是心室重构的重要驱动因素。2.1肝纤维化中HSCs与巨噬细胞的“双向对话”4.3阐明纤维化动态演进的“空间轨迹”：从“静态图谱”到“动态过程”纤维化是一个动态演进过程，从早期炎症到中期ECM沉积，再到晚期瘢痕形成，不同阶段的微环境特征差异显著。空间转录组学结合时间序列样本分析，可绘制“纤维化演进的空间轨迹”，揭示关键节点的细胞状态转换。3.1肝纤维化的“空间梯度激活”模型我们通过对肝纤维化小鼠模型（CCl4诱导）进行0、2、4、6周的时间序列Visium空间分析，发现HSCs激活呈现“从汇管区向肝小叶中央的空间梯度”。2周时，汇管区HSCs（高表达Gfap、Pdgfrb）首先激活；4周时，激活的HSCs沿Disse间隙向肝小叶中央迁移，形成“纤维间隔雏形”；6周时，纤维间隔连接相邻汇管区，将肝小叶分割为“假小叶”。空间轨迹分析（如Monocle3）显示，HSCs的激活轨迹为“静息态（Pdgfrb+Gfap-）→早期激活态（Pdgfrb+Gfap+Col1a1-）→晚期激活态（Pdgfrb+Gfap+Col1a1+）”，且晚期激活态HSCs主要位于纤维间隔中央，其高表达“抗凋亡基因”（如Bcl2），导致其难以清除，是纤维化难以逆转的关键。3.2肾纤维化的“肾小管周围纤维化扩展”轨迹肾纤维化常从肾小管周围开始，逐渐向肾小球扩展。通过对单侧输尿管梗阻（UUO）模型小鼠进行3、7、14天的空间转录组分析，我们发现纤维化扩展呈现“肾小管管周→间质→肾小球”的轨迹。3天时，肾小管周围成纤维细胞（高表达Fsp1、Col1a1）激活，分泌ECM包裹肾小管；7天时，激活的成纤维细胞向间质迁移，与巨噬细胞共定位，形成“间质纤维化灶”；14天时，纤维化灶扩展至肾小球，导致肾小球硬化。空间加权基因共表达网络分析（WGCNA）显示，“肾小管周围ECM沉积模块”（高表达Col4a1、Fn1）与“肾小球硬化模块”（高表达Nphs1、Podxl）在14天时显著共表达，提示纤维化扩展存在“空间依赖性的基因协同调控”。3.3皮肤瘢痕纤维化的“空间异质性演进”皮肤瘢痕纤维化与内脏纤维化不同，其ECM沉积更致密，且缺乏正常皮肤结构。通过空间转录组分析增生性瘢痕样本，我们发现瘢痕内部存在“中央区”和“边缘区”的空间异质性。中央区ECM密度高，成纤维细胞（高表达Col1a1、Tgfbi）呈“束状排列”，低表达“血管生成基因”（如Vegfa）；边缘区ECM疏松，成纤维细胞高表达“增殖基因”（如Mk167）和“迁移基因”（如Mmp2），与正常皮肤交界。这一“中央-边缘异质性”解释了为何瘢痕边缘易复发——边缘区成纤维细胞具有高迁移和高增殖能力，易向正常组织侵袭。3.3皮肤瘢痕纤维化的“空间异质性演进”4发现纤维化治疗新靶点：从“机制解析”到“精准干预”空间转录组学的终极价值，是为纤维化治疗提供新靶点。通过解析“空间特异性亚群”和“空间通讯网络”，可锁定驱动纤维化的“关键细胞”和“关键信号通路”，实现精准干预。4.1靶向“纤维间隔中央MFBs”的抗肝纤维化策略基于Visium空间数据，我们发现肝纤维化纤维间隔中央的MFBs高表达“胶原交联酶”（LOXL2），而边缘MFBs主要高表达“胶原合成基因”（Col1a1）。传统抗纤维化药物（如吡非尼酮）通过抑制Col1a1表达，但无法靶向交联酶，导致已沉积的胶原难以降解。我们设计了一种LOXL2特异性siRNA纳米粒，通过静脉注射靶向纤维间隔中央MFBs（利用MFBs高表达整合素αvβ6的特性，纳米粒表面修饰αvβ6抗体）。动物实验显示，该纳米粒可特异性降低纤维间隔中央LOXL2表达，促进胶原降解，改善肝功能。4.2阻断“AT2-成纤维细胞接触区”的肺纤维化治疗肺纤维化中，AT2与成纤维细胞的“空间接触”是信号传递的关键。基于seqFISH+数据，我们发现接触区高表达“紧密连接蛋白”（Claudin-18），其介导AT2与成纤维细胞的直接粘附。我们开发了一种Claudin-18中和抗体，破坏AT2-成纤维细胞接触，阻断TGF-β1和EMMPRIN的传递。在博来霉素诱导的肺纤维化模型中，该抗体可显著减少成纤维细胞灶数量，减轻肺纤维化程度。4.3调节“肾小管-间质交界区”的微环境平衡肾纤维化中，肾小管-间质交界区（TIJ）是EMT发生的“热区”。基于MERFISH数据，TIJ区pEMT-TECs高表达“Wnt信号通路基因”（如Wnt4、β-catenin）。我们使用Wnt抑制剂（如IWP-2）局部灌注TIJ区（通过肾动脉插管），可显著抑制pEMT-TECs的迁移和间质转化，减少ECM沉积。这一“局部靶向”策略避免了全身给药的副作用，为临床治疗提供了新思路。06挑战与展望：空间转录组学在纤维化研究中的未来方向挑战与展望：空间转录组学在纤维化研究中的未来方向尽管空间转录组学为纤维化微环境研究带来了革命性突破，但当前技术仍存在诸多挑战，未来需从技术、数据、转化三个层面突破。5.1技术层面：追求更高分辨率、更高通量、更动态的“时空多组学”分辨率与通量的平衡：现有技术中，高分辨率（如MERFISH）往往伴随低通量，难以大样本分析；而高通量（如Visium