微生物检验质量控制原则

微生物检验质量控制原则一、微生物检验质量控制概述

微生物检验质量控制是确保检验结果准确可靠、符合标准要求的核心环节。其目的是通过系统化的方法，识别、评估和控制检验过程中的各种影响因素，以实现检验工作的规范化和标准化。质量控制贯穿于样本采集、处理、培养、鉴定及结果报告等全过程，是保障检验数据有效性和可信性的基础。

二、微生物检验质量控制的基本原则

（一）标准化管理

1.严格遵守国际或行业标准，如ISO15189、CLSI等规范，确保检验流程的统一性。

2.建立完善的操作规程（SOP），明确各环节的职责和操作要求。

3.定期更新标准文件，以适应技术发展和实际需求变化。

（二）过程控制与结果验证

1.过程控制：通过内控质控（如培养基检测、阳性对照）监控检验系统的稳定性。

(1)培养基质量检查：每月检测培养基pH值、无菌性及营养成分是否符合标准。

(2)阳性/阴性对照：每批次检验必须包含阳性对照（如ATCC标准菌株）以确认培养基活性。

2.结果验证：采用多种方法复核可疑结果，如重复接种、不同培养基培养或分子生物学验证。

（三）人员资质与培训管理

1.人员资质：检验人员需具备相应学历和技能认证，定期参加专业培训。

2.培训内容：包括操作规范、质量控制方法、生物安全及实验室管理。

3.能力评估：通过盲样测试或技能考核，确保人员持续符合岗位要求。

三、微生物检验质量控制的具体实施

（一）样本采集与处理

1.样本采集：遵循无菌操作原则，使用专用采样工具，避免污染。

(1)表面采样：使用无菌棉签擦拭目标区域，确保覆盖多个位点。

(2)液体样本：按比例稀释，防止微生物过度生长或死亡。

2.样本保存：冷藏保存（2-8℃），并记录保存时间，避免活性损失。

（二）培养基与试剂质量控制

1.培养基检测：

(1)无菌性测试：采用倾注法或平板法检测是否污染。

(2)营养成分验证：通过生化反应或生长曲线确认培养基性能。

2.试剂与耗材：定期检测pH缓冲液、染色剂等试剂的有效期和纯度。

（三）检验流程监控

1.阳性/阴性对照设置：

(1)阳性对照：确保目标微生物在规定时间内生长。

(2)阴性对照：确认无杂菌污染。

2.菌种管理：

(1)储存：使用冻干或冻存管保存，标注保存条件。

(2)定期复苏验证：每年至少复苏一次，检测菌株纯度和典型性状。

（四）结果报告与追溯

1.报告审核：检验结果需经审核人员复核，确保数据准确性。

2.异常处理：建立偏差调查流程，记录超标结果的原因及改进措施。

3.数据管理：采用电子记录系统，确保检验数据可追溯。

四、持续改进与验证

（一）内部审核

1.每季度进行内部审核，评估质量控制体系的运行效果。

2.调查检验结果的不一致性，优化流程或重新培训人员。

（二）外部验证

1.参加能力验证计划（如ISO/IEC17043认可项目），与同行数据比对。

2.定期使用商业标准物质，确认检验能力。

**一、微生物检验质量控制概述**

微生物检验质量控制是确保检验结果准确可靠、符合标准要求的核心环节。其目的是通过系统化的方法，识别、评估和控制检验过程中的各种影响因素，以实现检验工作的规范化和标准化。质量控制贯穿于样本采集、处理、培养、鉴定及结果报告等全过程，是保障检验数据有效性和可信性的基础。缺乏有效的质量控制，检验结果的可比性和价值将大打折扣，甚至可能导致错误的临床决策或产品放行。因此，建立并维护一个完善的微生物检验质量控制体系是实验室日常运作的必备条件。

**二、微生物检验质量控制的基本原则**

（一）标准化管理

1.严格遵守国际或行业标准，如ISO15189、CLSI等规范，确保检验流程的统一性。

*具体做法：实验室应选择并采用公认的微生物检验标准文件作为操作依据，例如CLSI发布的M100（临床微生物学检验操作标准与指南）、M40（微生物实验室生物安全操作标准）等。定期组织内部培训，确保所有检验人员理解并掌握相关标准的要求。

2.建立完善的操作规程（SOP），明确各环节的职责和操作要求。

*具体做法：SOP应覆盖从样本接收到报告发出的每一个关键步骤，包括样本接收与标识、处理与接种、培养、观察与计数、鉴定、药敏试验、结果报告等。SOP需明确各岗位人员的职责、所需使用的设备耗材、具体的操作方法、质量控制措施以及记录要求。SOP应定期（如每年）进行评审和修订，并确保所有相关人员都经过培训和授权后方可执行。

3.定期更新标准文件，以适应技术发展和实际需求变化。

*具体做法：实验室应指定专人负责关注国际和国内最新的标准、指南和技术进展，评估其对现有SOP和流程的影响。对于需要更新的部分，应启动修订程序，组织相关人员进行讨论、修订，并通过内部审核或评审后正式发布实施。更新后的SOP应重新进行培训。

（二）过程控制与结果验证

1.过程控制：通过内控质控（如培养基检测、阳性对照）监控检验系统的稳定性。

*具体做法：过程控制旨在实时监控检验系统的日常运行状态，及时发现潜在问题。主要包括以下方面：

(1)培养基质量检查：每月至少对常用培养基进行质量检测，确保其性能符合要求。检测项目通常包括pH值测定（使用标准pH计，确保在规定的范围内，如MHBpH7.2-7.4）、无菌性测试（采用倾注法或平板法，接种后培养应无任何菌落生长）、以及关键营养成分的检测（如蛋白含量、糖含量等，可根据需要选择）。对于特殊培养基，还需进行特定指示物的检测（如抗生素敏感性测试培养基的抗生素含量）。

(2)阳性对照：每批次或每天进行的检验项目，均应设置阳性对照。阳性对照通常使用已知活性、典型的标准菌株或参考菌株（如ATCC菌株），接种后置于合适的培养条件下，应在规定的阳性生长时间窗内（如18-48小时）呈现典型的生长现象（如可见菌落、浑浊），以确认培养基活性、接种操作无误以及整个培养系统的功能正常。

2.结果验证：采用多种方法复核可疑结果，如重复接种、不同培养基培养或分子生物学验证。

*具体做法：当检验结果出现异常（如生长可疑、药敏结果与预期不符、或为罕见/重要病原体时），必须进行复核以确保结果的准确性。验证方法的选择应根据具体情况而定：

(1)重复接种：将原始样本或培养物重新接种到新的、同批次的培养基上，观察是否重复出现相同结果。

(2)不同培养基：将样本接种到不同类型的培养基上（如从选择性培养基转接到非选择性培养基，或使用不同成分的培养基），以确认观察到的微生物是真实的，并排除培养基抑制或选择性过强的影响。

(3)分子生物学验证：对于形态学特征不典型、鉴定困难或为重要病原体，可使用分子生物学方法（如16SrRNA基因测序、PCR特异性检测）进行验证，以确认微生物的种类。

（三）人员资质与培训管理

1.人员资质：检验人员需具备相应学历和技能认证，定期参加专业培训。

*具体做法：实验室负责人应确保所有从事微生物检验工作的人员都具备必要的教育背景（如相关专业的学历）和专业技能。新员工必须经过系统的岗前培训，并考核合格后方可上岗。对于在岗人员，应制定年度培训计划，内容涵盖最新的检验技术、SOP更新、质量控制要求、生物安全知识等。培训应有记录，并定期评估培训效果。

2.培训内容：包括操作规范、质量控制方法、生物安全及实验室管理。

*具体做法：培训内容应具体化，例如：如何正确执行SOP、如何进行培养基质控、如何识别和报告失控状态、生物安全等级containmentlevels的概念与操作规程、实验室废弃物处理要求、以及电子记录系统的正确使用等。培训应结合实际操作演示和考核。

3.能力评估：通过盲样测试或技能考核，确保人员持续符合岗位要求。

*具体做法：定期（如每年）组织内部或参与外部组织的盲样测试（proficiencytesting,PT），检验人员对未知样本进行检测，其结果与参考值或公认结果进行比对，以评估其检验能力和准确性。也可以通过定期的技能操作考核（如模拟操作、仪器使用）来评估人员的操作熟练度和规范性。对于未能达到要求的人员，应进行针对性的再培训和复评。

**三、微生物检验质量控制的具体实施**

（一）样本采集与处理

1.样本采集：遵循无菌操作原则，使用专用采样工具，避免污染。

*具体做法：

(1)表面采样：使用无菌棉签蘸取适量无菌生理盐水（或其他指定介质），在目标表面（如物体表面、设备内壁）多点、多区域擦拭，确保覆盖代表性的区域。擦拭动作应轻柔而充分，然后将棉签在液体中充分洗脱或直接接种。

(2)液体样本：按比例稀释。避免使用含抗菌剂的原液样本，如必须使用，需在检验前进行灭活处理（如加热）。稀释液通常使用无菌生理盐水或特定缓冲液，稀释比例根据检验目的和样本类型确定（如粪便样本1:10稀释，尿液样本1:100稀释）。

2.样本保存：冷藏保存（2-8℃），并记录保存时间，避免活性损失。

*具体做法：对于需要延迟检验的样本，应立即置于2-8℃的冰箱中保存。不同类型样本的最长保存时间不同（如粪便样本一般不超过24小时，尿液样本不超过8小时），应严格遵守规定。每次取用样本时均需记录取用日期和时间。对冷藏设备应定期检查温度记录，确保持续在规定范围内。

（二）培养基与试剂质量控制

1.培养基检测：

*具体做法：

(1)无菌性测试：采用倾注法或平板法检测。倾注法适用于检测粉末培养基，称取适量粉末加入无菌水或溶剂，溶解后分装，高压蒸汽灭菌后观察是否有菌落生长。平板法适用于液体或预先配制好的培养基，分装后高压蒸汽灭菌，观察平板是否有菌落生长。所有检测均需使用已知无菌的阳性对照（接种已知无菌的液体培养基或平板），以确认灭菌效果和培养条件。

(2)营养成分验证：通过生化反应或生长曲线确认培养基性能。例如，使用已知对特定营养成分依赖的菌株进行培养，观察其生长情况；或通过检测培养基中关键成分（如蛋白、糖）的含量，确保其在有效范围内。

2.试剂与耗材：定期检测pH缓冲液、染色剂等试剂的有效期和纯度。

*具体做法：

(1)pH缓冲液：使用标准pH计定期检测常用缓冲液的pH值，确保其在标定范围内。

(2)染色剂：检查染料（如革兰染料、亚甲基蓝、复红）是否有颜色变化、沉淀或浑浊。必要时可用已知菌株进行染色效果测试。

(3)唾液酸化剂（用于分枝杆菌培养）：检查其颜色变化，确认未失效。

(4)无菌耗材：如移液管、吸头、试管等，需定期检查包装完整性，并使用生物指示剂验证包装和灭菌过程的有效性。

（三）检验流程监控

1.阳性/阴性对照设置：

*具体做法：

(1)阳性对照：确保目标微生物在规定时间内生长。例如，对于需氧菌培养，阳性对照（如金黄色葡萄球菌）应在24-48小时内形成可见菌落。

(2)阴性对照：确认无杂菌污染。例如，培养基空白平板在培养后应无菌落生长；或使用已知无菌的对照样本（如生理盐水）进行培养，确认无生长。阳性/阴性对照的设置频率根据检验项目和实验室习惯确定，但必须贯穿日常检验。

2.菌种管理：

*具体做法：

(1)储存：使用专用的菌种保藏系统，如冻干管（含保护剂）、冻存管（含甘油）或超低温冰箱（-80℃）。标签清晰，注明菌种名称、编号、来源、保藏日期和方式。建立菌种档案。

(2)定期复苏验证：每年至少选择核心菌株进行复苏，检查其典型形态特征（形态、染色）、生化反应或分子生物学特征（如16SrRNA序列），确认其纯度和典型性。如发现菌株退化或污染，应及时更新或淘汰。

（四）结果报告与追溯

1.报告审核：检验结果需经审核人员复核，确保数据准确性。

*具体做法：每份检验报告在发出前，必须由经过授权的审核人员（通常是资深检验师或实验室负责人）进行复核。审核内容包括：样本信息是否准确、检验项目是否完整、操作步骤是否符合SOP、结果判读是否正确、报告内容是否清晰完整、是否有必要的注释（如生长缓慢、药敏结果异常等）。

2.异常处理：建立偏差调查流程，记录超标结果的原因及改进措施。

*具体做法：当过程控制（如阳性对照未生长）或结果验证（重复接种结果不一致）显示检验系统出现异常时，应立即启动偏差调查程序。调查人员需分析原因（如培养基问题、操作失误、设备故障等），记录调查过程和结果，提出并实施纠正措施（如更换批次培养基、重新培训人员、维修设备），并评估纠正措施的有效性，防止问题再次发生。所有偏差和调查记录应存档。

3.数据管理：采用电子记录系统，确保检验数据可追溯。

*具体做法：使用符合GLP（良好实验室规范）或ISO15189要求的实验室信息管理系统（LIMS）或电子记录本（ELN）。所有检验相关的数据，包括样本接收、处理、接种、培养、观察、鉴定、药敏、审核、报告等所有环节的操作记录和结果，均应电子化记录。系统应具备用户权限管理、审计追踪（记录所有数据修改）、电子签名等功能，确保数据的完整性、准确性和可追溯性。

**四、持续改进与验证**

（一）内部审核

1.每季度进行内部审核，评估质量控制体系的运行效果。

*具体做法：由实验室内部指定的审核小组（通常包含质量负责人和各模块负责人），根据预定的审核计划，对微生物检验质量管理体系（包括SOP执行情况、人员能力、设备维护、数据管理、生物安全等）进行系统性检查。审核过程包括文件查阅、现场观察、人员访谈和记录抽查。审核结束后形成审核报告，指出不符合项，并要求责任部门制定纠正措施计划。

2.调查检验结果的不一致性，优化流程或重新培训人员。

*具体做法：当内部或外部能力验证、同行比对、或日常监控中发现检验结果与其他实验室或预期存在显著差异时，应组织专门调查组，分析根本原因。可能的原因包括方法学差异、人员技能不足、设备问题、耗材问题等。根据调查结果，优化检验流程、更新SOP、加强人员培训或进行设备校准维修。

（二）外部验证

1.参加能力验证计划（如ISO/IEC17043认可项目），与同行数据比对。

*具体做法：实验室应定期（通常每年）参加由权威机构组织的能力验证计划（ProficiencyTesting,PT）。通过分析盲样样本并提交检验结果，与计划组织者公布的参考值或同行结果进行比较。根据比对结果，评估自身检验能力的准确性和可比性，识别存在的系统性偏差，并采取纠正措施。

2.定期使用商业标准物质，确认检验能力。

*具体做法：除了参加官方PT计划，实验室也可以定期购买并使用商业公司提供的标准物质或质控品（controlmaterials），这些材料通常具有已知的浓度或含量范围。按照常规检验流程进行检测，并将结果与标准值进行比较，用于监控日常检验的稳定性和准确性。质控品的发放通常遵循“新鲜发放，旧品废弃”（open/closesystem）的管理策略，以模拟真实样本的稳定性变化。

一、微生物检验质量控制概述

微生物检验质量控制是确保检验结果准确可靠、符合标准要求的核心环节。其目的是通过系统化的方法，识别、评估和控制检验过程中的各种影响因素，以实现检验工作的规范化和标准化。质量控制贯穿于样本采集、处理、培养、鉴定及结果报告等全过程，是保障检验数据有效性和可信性的基础。

二、微生物检验质量控制的基本原则

（一）标准化管理

1.严格遵守国际或行业标准，如ISO15189、CLSI等规范，确保检验流程的统一性。

2.建立完善的操作规程（SOP），明确各环节的职责和操作要求。

3.定期更新标准文件，以适应技术发展和实际需求变化。

（二）过程控制与结果验证

1.过程控制：通过内控质控（如培养基检测、阳性对照）监控检验系统的稳定性。

(1)培养基质量检查：每月检测培养基pH值、无菌性及营养成分是否符合标准。

(2)阳性/阴性对照：每批次检验必须包含阳性对照（如ATCC标准菌株）以确认培养基活性。

2.结果验证：采用多种方法复核可疑结果，如重复接种、不同培养基培养或分子生物学验证。

（三）人员资质与培训管理

1.人员资质：检验人员需具备相应学历和技能认证，定期参加专业培训。

2.培训内容：包括操作规范、质量控制方法、生物安全及实验室管理。

3.能力评估：通过盲样测试或技能考核，确保人员持续符合岗位要求。

三、微生物检验质量控制的具体实施

（一）样本采集与处理

1.样本采集：遵循无菌操作原则，使用专用采样工具，避免污染。

(1)表面采样：使用无菌棉签擦拭目标区域，确保覆盖多个位点。

(2)液体样本：按比例稀释，防止微生物过度生长或死亡。

2.样本保存：冷藏保存（2-8℃），并记录保存时间，避免活性损失。

（二）培养基与试剂质量控制

1.培养基检测：

(1)无菌性测试：采用倾注法或平板法检测是否污染。

(2)营养成分验证：通过生化反应或生长曲线确认培养基性能。

2.试剂与耗材：定期检测pH缓冲液、染色剂等试剂的有效期和纯度。

（三）检验流程监控

1.阳性/阴性对照设置：

(1)阳性对照：确保目标微生物在规定时间内生长。

(2)阴性对照：确认无杂菌污染。

2.菌种管理：

(1)储存：使用冻干或冻存管保存，标注保存条件。

(2)定期复苏验证：每年至少复苏一次，检测菌株纯度和典型性状。

（四）结果报告与追溯

1.报告审核：检验结果需经审核人员复核，确保数据准确性。

2.异常处理：建立偏差调查流程，记录超标结果的原因及改进措施。

3.数据管理：采用电子记录系统，确保检验数据可追溯。

四、持续改进与验证

（一）内部审核

1.每季度进行内部审核，评估质量控制体系的运行效果。

2.调查检验结果的不一致性，优化流程或重新培训人员。

（二）外部验证

1.参加能力验证计划（如ISO/IEC17043认可项目），与同行数据比对。

2.定期使用商业标准物质，确认检验能力。

**一、微生物检验质量控制概述**

微生物检验质量控制是确保检验结果准确可靠、符合标准要求的核心环节。其目的是通过系统化的方法，识别、评估和控制检验过程中的各种影响因素，以实现检验工作的规范化和标准化。质量控制贯穿于样本采集、处理、培养、鉴定及结果报告等全过程，是保障检验数据有效性和可信性的基础。缺乏有效的质量控制，检验结果的可比性和价值将大打折扣，甚至可能导致错误的临床决策或产品放行。因此，建立并维护一个完善的微生物检验质量控制体系是实验室日常运作的必备条件。

**二、微生物检验质量控制的基本原则**

（一）标准化管理

1.严格遵守国际或行业标准，如ISO15189、CLSI等规范，确保检验流程的统一性。

*具体做法：实验室应选择并采用公认的微生物检验标准文件作为操作依据，例如CLSI发布的M100（临床微生物学检验操作标准与指南）、M40（微生物实验室生物安全操作标准）等。定期组织内部培训，确保所有检验人员理解并掌握相关标准的要求。

2.建立完善的操作规程（SOP），明确各环节的职责和操作要求。

*具体做法：SOP应覆盖从样本接收到报告发出的每一个关键步骤，包括样本接收与标识、处理与接种、培养、观察与计数、鉴定、药敏试验、结果报告等。SOP需明确各岗位人员的职责、所需使用的设备耗材、具体的操作方法、质量控制措施以及记录要求。SOP应定期（如每年）进行评审和修订，并确保所有相关人员都经过培训和授权后方可执行。

3.定期更新标准文件，以适应技术发展和实际需求变化。

*具体做法：实验室应指定专人负责关注国际和国内最新的标准、指南和技术进展，评估其对现有SOP和流程的影响。对于需要更新的部分，应启动修订程序，组织相关人员进行讨论、修订，并通过内部审核或评审后正式发布实施。更新后的SOP应重新进行培训。

（二）过程控制与结果验证

1.过程控制：通过内控质控（如培养基检测、阳性对照）监控检验系统的稳定性。

*具体做法：过程控制旨在实时监控检验系统的日常运行状态，及时发现潜在问题。主要包括以下方面：

(1)培养基质量检查：每月至少对常用培养基进行质量检测，确保其性能符合要求。检测项目通常包括pH值测定（使用标准pH计，确保在规定的范围内，如MHBpH7.2-7.4）、无菌性测试（采用倾注法或平板法，接种后培养应无任何菌落生长）、以及关键营养成分的检测（如蛋白含量、糖含量等，可根据需要选择）。对于特殊培养基，还需进行特定指示物的检测（如抗生素敏感性测试培养基的抗生素含量）。

(2)阳性对照：每批次或每天进行的检验项目，均应设置阳性对照。阳性对照通常使用已知活性、典型的标准菌株或参考菌株（如ATCC菌株），接种后置于合适的培养条件下，应在规定的阳性生长时间窗内（如18-48小时）呈现典型的生长现象（如可见菌落、浑浊），以确认培养基活性、接种操作无误以及整个培养系统的功能正常。

2.结果验证：采用多种方法复核可疑结果，如重复接种、不同培养基培养或分子生物学验证。

*具体做法：当检验结果出现异常（如生长可疑、药敏结果与预期不符、或为罕见/重要病原体时），必须进行复核以确保结果的准确性。验证方法的选择应根据具体情况而定：

(1)重复接种：将原始样本或培养物重新接种到新的、同批次的培养基上，观察是否重复出现相同结果。

(2)不同培养基：将样本接种到不同类型的培养基上（如从选择性培养基转接到非选择性培养基，或使用不同成分的培养基），以确认观察到的微生物是真实的，并排除培养基抑制或选择性过强的影响。

(3)分子生物学验证：对于形态学特征不典型、鉴定困难或为重要病原体，可使用分子生物学方法（如16SrRNA基因测序、PCR特异性检测）进行验证，以确认微生物的种类。

（三）人员资质与培训管理

1.人员资质：检验人员需具备相应学历和技能认证，定期参加专业培训。

*具体做法：实验室负责人应确保所有从事微生物检验工作的人员都具备必要的教育背景（如相关专业的学历）和专业技能。新员工必须经过系统的岗前培训，并考核合格后方可上岗。对于在岗人员，应制定年度培训计划，内容涵盖最新的检验技术、SOP更新、质量控制要求、生物安全知识等。培训应有记录，并定期评估培训效果。

2.培训内容：包括操作规范、质量控制方法、生物安全及实验室管理。

*具体做法：培训内容应具体化，例如：如何正确执行SOP、如何进行培养基质控、如何识别和报告失控状态、生物安全等级containmentlevels的概念与操作规程、实验室废弃物处理要求、以及电子记录系统的正确使用等。培训应结合实际操作演示和考核。

3.能力评估：通过盲样测试或技能考核，确保人员持续符合岗位要求。

*具体做法：定期（如每年）组织内部或参与外部组织的盲样测试（proficiencytesting,PT），检验人员对未知样本进行检测，其结果与参考值或公认结果进行比对，以评估其检验能力和准确性。也可以通过定期的技能操作考核（如模拟操作、仪器使用）来评估人员的操作熟练度和规范性。对于未能达到要求的人员，应进行针对性的再培训和复评。

**三、微生物检验质量控制的具体实施**

（一）样本采集与处理

1.样本采集：遵循无菌操作原则，使用专用采样工具，避免污染。

*具体做法：

(1)表面采样：使用无菌棉签蘸取适量无菌生理盐水（或其他指定介质），在目标表面（如物体表面、设备内壁）多点、多区域擦拭，确保覆盖代表性的区域。擦拭动作应轻柔而充分，然后将棉签在液体中充分洗脱或直接接种。

(2)液体样本：按比例稀释。避免使用含抗菌剂的原液样本，如必须使用，需在检验前进行灭活处理（如加热）。稀释液通常使用无菌生理盐水或特定缓冲液，稀释比例根据检验目的和样本类型确定（如粪便样本1:10稀释，尿液样本1:100稀释）。

2.样本保存：冷藏保存（2-8℃），并记录保存时间，避免活性损失。

*具体做法：对于需要延迟检验的样本，应立即置于2-8℃的冰箱中保存。不同类型样本的最长保存时间不同（如粪便样本一般不超过24小时，尿液样本不超过8小时），应严格遵守规定。每次取用样本时均需记录取用日期和时间。对冷藏设备应定期检查温度记录，确保持续在规定范围内。

（二）培养基与试剂质量控制

1.培养基检测：

*具体做法：

(1)无菌性测试：采用倾注法或平板法检测。倾注法适用于检测粉末培养基，称取适量粉末加入无菌水或溶剂，溶解后分装，高压蒸汽灭菌后观察是否有菌落生长。平板法适用于液体或预先配制好的培养基，分装后高压蒸汽灭菌，观察平板是否有菌落生长。所有检测均需使用已知无菌的阳性对照（接种已知无菌的液体培养基或平板），以确认灭菌效果和培养条件。

(2)营养成分验证：通过生化反应或生长曲线确认培养基性能。例如，使用已知对特定营养成分依赖的菌株进行培养，观察其生长情况；或通过检测培养基中关键成分（如蛋白、糖）的含量，确保其在有效范围内。

2.试剂与耗材：定期检测pH缓冲液、染色剂等试剂的有效期和纯度。

*具体做法：

(1)pH缓冲液：使用标准pH计定期检测常用缓冲液的pH值，确保其在标定范围内。

(2)染色剂：检查染料（如革兰染料、亚甲基蓝、复红）是否有颜色变化、沉淀或浑浊。必要时可用已知菌株进行染色效果测试。

(3)唾液酸化剂（用于分枝杆菌培养）：检查其颜色变化，确认未失效。

(4)无菌耗材：如移液管、吸头、试管等，需定期检查包装完整性，并使用生物指示剂验证包装和灭菌过程的有效性。

（三）检验流程监控

1.阳性/阴性对照设置：

*具体做法：

(1)阳性对照：确保目标微生物在规定时间内生长。例如，对于需氧菌培养，阳性对照（如金黄色葡萄球菌）应在24-48小时内形成可见菌落。

(2)阴性对照：确认无杂菌污染。例如，培养基空白平板在培养后应无菌落生长；或使用已知无菌的对照样本（如生理盐水）进行培养，确认无生长。阳性/阴性对照的设置频率根据检验项目和实验室习惯确定，但必须贯穿日常检验。

2.菌种管理：

*具体做法：

(1)储存：使用专用的菌种保藏系统，如冻干管（含保护剂）、冻存管（含甘油）或超低温冰箱（-80℃）。标签清晰，注明菌种名称、编号、来源、保藏日期和方式。建立菌种档案。

(2)定期复苏验证：每年至少选择核心菌株进行复苏，检查其典型形态特征（形态、染色）、生化反应或分子生物学特征（如16SrRNA序列），确认其纯度和典型性。如发现菌株退化或污染，应及时更新或淘汰。

（四）结果报告与追溯

1.报告审核：检验结果需经审核人员复核，确保数据准确性。

*具体做法：每份检验报告在发出前，必须由经过授权的审核人员（通常是资深检验师或实验室负责人）进行复核。审核内容包括：样本信息是否准确、检验项目是否完整、操作步骤是否符合SOP、结果判读是否正确、报告内容