冻干粉针剂培养基无菌灌装模拟试验验证方案

xxxxxxxx

粉针车间

冻干粉针剂培养基无菌灌装模拟试验

验证方案

粉针车间冻干粉针剂培养基无菌灌装模拟试验是对粉针车间使用F2000/12/600型灌装

机在局部百级工作环境中进行冻干粉针剂灌装过程中所采用的各种方法和各种规程防止微

生物污染的水平可以达到可接受的合格标准的能力。通过检查确认找出粉针车间进行冻干粉

针剂灌装作业过程中的控制要求，为今后对粉针车间进行冻干粉针剂灌装作业管理确定依

据。

一、该方案的实施由下述单位负责进行:

实施部门职责

制订粉针车间冻干粉针剂培养基无菌灌装模拟试验验证方案，组织方案

生产技术部

的实施。负责各类相关文件的检查及准备。负责出具验证报告。

参与方案的制订过程，参与方案的实施，负责方案中各设施、设备的检

设备部

查确认，负责出具验证报告。

质量保证部参与方案的制订过程，参与方案实施。负责关于各检查项的落实。

参与方案的制订过程，参与方案实施。负责各检查项的检查，并出具检

QC化验室

测报告。

粉针车间参与方案的实施。配合方案的落实。

二、方案实施单位责任人:

实施部门责任人签名

设备部

生产技术部

质量保证部

QC化验室

粉针车间

三、验证小组成员:

部门姓名部门姓名

设备部质量保证部

设备部质量保证部

设备部质量保证部

生产技术部生产技术部

QC化验室QC化验室

QC化验室粉针车间

粉针车间粉针车间

粉针车间粉针车间

粉针车间粉针车间

粉针车间粉针车间

冻干粉针剂培养基无菌灌装模拟试验验证方案

方案制订:制订日期:

方案批准:批准口期:

目录

1.概括..........................................................................1

1.1目的........................................................................1

1.2范围........................................................................1

1.3责任........................................................................1

2.确定可接受的合格标...........................................................2

3.培养基性能测试...............................................................2

3.1微生物生长性能试验.........................................................2

3.2培养基无菌性试验...........................................................2

4模拟分装用无菌粉末............................................................2

4.1模拟分装用无菌粉末应具有的特性.............................................2

4.2无菌性试验..................................................................3

4.3抑菌性试验..................................................................3

4.4溶解性试验..................................................................3

5模拟分装过程操作规程及操作人员控制...........................................3

6操作过程及无菌环境控制与监测.................................................4

6.1模拟分装使用西林瓶及胶塞无菌性检测.........................................4

6.2微生物控制与监测............................................................4

6.3尘埃粒子监测................................................................5

7取样计划及取样点..............................................................5

7.1取样计划....................................................................5

7.2取样点......................................................................6

8模拟分装......................................................................6

8.1无菌粉针剂模拟分装方法......................................................6

8.2液体培养基制备及进入无菌分装区方法.........................................6

8.3液体培养基分装工具的选用及处理使用方法.....................................6

8.4无菌粉针剂模拟分装试验.....................................................7

8.5液体培养基分装..............................................................7

9微生物培养....................................................................7

9.1阴性对照....................................................................7

9.2阳性对照....................................................................7

9.3试验样品培养................................................................7

10试验结果评价................................................................8

11验证制度及再验证时间安排....................................................8

12确认方案执行日期............................................................9

1、概括

冻干粉针剂培养基无菌灌装模拟试验是在其他各个系统（诸如灭菌系统、公用系统、无

菌环境保持系统、设备验证、设备清洗过程验证等）验证工作完成的基础上进行的。采用培

养基无菌灌装模拟试验方法进行。

1.1、目的

用和实际生产工艺相同的条件与操作方法（包括生产环境），向冻干制品容器（西林瓶）

内灌装经除菌过滤器过滤的培养基，然后将此模拟制品在适当条件下培养，以确认工艺过程

的可靠性。证明在冻干粉针剂灌装过程中所采用的各种方法和各种规程以防止微生物污染的

水平达到可接受的合格标准的能力，或提供保证所生产产品的无菌性的可信限度达到可接受

的合格标准的证据。

1.2、范围

此验证方案适用于粉针车间冻干粉针剂灌装过程验证。

1.3.责任

生产技术部、质量保证部、QC化验室、粉针车间、设备部负责验证方案的执行，主要

工作内容如下：

①、编订及实施验证方案；

②、实施确认并提供确认资料；

③、汇编测试资料于最终报告内；

④、协调参与验证过程的人员和部门，确保验证的各项要求；

⑤、将成功的结果及分装过程的需求规范化，并制定相关文件待核准下发。

2、确定可接受的合格标准

警戒限：可信限为95%时污染概率大于0.05%；

合格限：可信限为9涌时污染概率小于0.1机

分装量与污染控制数关系表

模拟分装数量/瓶污染控制数量/瓶模拟分装数量/瓶污染控制数量/瓶

3000〜474204743〜6294小于1

6295〜7751小于27752〜9151小于3

3、培养基性能测试

模拟分装试验采用胰豚大豆肉汤培养基，通过下述试验对培养基微生物生长性能进行确

认。首先根据标准操作规程制备培养基并灭菌后备用。

3.1微生物生长性能试验

将上述灭菌后的培养基分装于100支试管中，在一半数量的试管中接种枯草杆菌，接种

量为〈100CFU；在另一半数量的试管中接种白色念珠菌，接种量为〈100CFU。接种后盖塞、封

口，将接种有枯草杆菌的试管放于30〜35℃下培养7天，将接种有白色念珠菌的试管放于

20〜25℃下培养7天。7天内至少有50与以上接种的各试管的培养基中应出现明显的所接种

的微生物的生长。

3.2培养基无菌性试睑

将上述灭菌后的培养基分装于100支无菌试管中，盖塞、封口。其中50支试管放于30〜

35℃下培养7天，同时将另外50支试管放于20〜25℃下培养7天。7天内各试管培养基中

应无任何微生物生长。

4、模拟分装过程操作规程及操作人员控制

4.1、模拟分装试验中使用的西林瓶和胶塞的清洗、灭菌，分装设备的清洗、消毒，与产品

接触的分装设备部件的清洗、灭菌、安装过程必须遵循与实际生产操作相同的标准操作规程。

4.2、灌装机灌装速度保持与正常冻干粉针剂灌装及半压胶塞生产时的速度相同。

4.3、所有参加模拟试验的操作人员均应经过GMP,无菌操作、无菌更衣程序技术等相关知

识的培训并经考核合格。

4.4、参加模拟试验的操作人员数及人员构成应严格控制，非规定的验证小组成员严禁在模

拟试验过程中进入模拟试验现场，模拟试验现场人员数不得超过5人，人员的进入及退出应

严格执行标准操作程序，减少不必要的人员进入及退出次数。可进入模拟试验现场的人员名

单如下:

部门姓名部门姓名

设备部质量保证部

生产技术部QC化验室

QC化验室粉针车间

QC化验室粉针车间

粉针车间粉针车间

粉针车间粉针车间

5、操作过程及无菌环境控制与监测

进行模拟试验过程中，对以下各项进行监测。

5.1、模拟试验使用西林瓶及胶塞无菌性检测：

按第6条取样计划的规定要求，对模拟试验使用的西林瓶及胶塞进行取样，检测其无菌

性，合格标准为各样品不得存在无菌性不合格情况。

5.2、微生物控制与监测：

①、在模拟试验过程中，对操作人员的无菌服、手套、眼镜、胸前、前臂等部位的微生

物数量进行监测。其取样方法、取样频率、取样要求、取样点分布见第6条取样计划。

合格标准：手套全部检出菌数＜2个、霉菌＜1个；

一个操作人员双臂、前胸的3个取样点检出菌数之和＜10个。

②、对无菌区墙壁、门、设备以及操作人员可能接触的各种表面进行无菌程度检验。其

取样方法、取样点、取样频率见第6条取样计划。在进行取样时其取样面积应保持在25cn?。

合格标准：局部百级区全部检出菌数＜3个、霉菌。个；

万级区全部检出菌数＜10个、霉菌＜2个，地面检出菌数＜25个、霉菌＜3个。

③、对空气中微生物数量进行监测，具取样方法、取样点、取样频率见第6条取样计划。

合格标准：局部百级区全部检出菌数〈1个；

万级区全部检出菌数＜10个、霉菌＜3个；

④、微生物数量监测试验所采用的培养基应为经过无菌及微生物生长性能检验合格的培

养基。

⑤、污染调查、微生物鉴别方法、污染发生时应采取的措施执行相关标准操作程序。

5.3尘埃粒子监测

按第6条取样计划的规定要求，对灌装室进行空气质量监测，其监测结果应能证明关键

区域空气质量达到百级洁净区的空气质量标准。

6、取样计划及取样点

6.1取样计划:

监测项目取样方法取样频率取样要求

模拟试验西林

随机取样每灌装500瓶取样一次每次取样10支

瓶无菌检查

模拟试验使用

随机取样每灌装500瓶取样一次每次取样10枚

胶塞无菌检杳

取样时，被取样的操作人员应离开

模拟试验开始前，试验分装机，在灌装室的一角将双臂平

操作人员无菌进行一半时间，试验结伸，静止不动，取样人员按棉签擦

棉签擦拭法

性检查束后，分别对操作人员拭取样法在最短时间内取样。每次

进行取样监测对同一操作人员进行取样监测时.，

其取样点应不相同

模拟试验开始前，试验

根据取样点要求取样，取样面积固

进行一半时间，试验结

无菌灌装区无定，每次取样面积为25cn?。每次应

棉签擦拭法束后，分别根据取样点

菌性检查选择不同位置取样，其重点为操作

要求对无菌区进行取样

者可能接触的各种表面。

监测

根据取样点分布图布置培养皿，各

取样点每小时更换取样皿进行检

测。灌装机附近设置四个以上的取

空气微生物数沉降平皿法每小时取样一次

样平皿连续暴露取样。另有一个平

量监测

皿应放置于微生物监测室情况最差

的部位。

浮游菌采样每30分钟监测一次取样操作时应由专人进行

尘埃粒子监测粒子计数器每30分钟监测一次监测应由专人按标准操作程序进行

6.2取样点：

①、操作人员无菌性检查取样点：操作人员的无菌服、手套、眼镜、胸前、前臂等部位。

②、无菌灌装区无菌性检查取样点：其取样重点为无菌灌装区内墙壁、门、设备表面以

及操作人员可能接触的各种表面。每次取样应包括：一侧内墙壁，无菌灌装区内门把手，胶

塞清洗机开门螺旋，灌装机上塞料斗，西林瓶灭菌烘干隧道出口处理瓶转盘，灌装机控制面

板，物料周转桶、周转托盘等处。

③、空气微生物数量监测沉降平皿法取样点：取样点见附件《冻干粉针剂培养基无菌灌

装模拟试验空气微生物监测沉降平皿取样点分布图》。

④、空气微生物数量监测浮游菌测试取样点：按无菌灌装区面积等分进行取样，每个测

试点距离1米，测试点距内墙面0.5米，另外在分装面、胶塞清洗机胶塞出口处、西林瓶灭

菌烘干隧道出口处分别增加一个测试点。

⑤、尘埃粒子监测取样点：按无菌灌装区面积等分进行取样，每个测试点距离1米，测

试点距内墙面0.5米，另外在分装面、胶塞清洗机胶塞出口处、西林瓶灭菌烘干隧道出口处

分别增加一个测试点。

7、模拟灌装

7.1冻干粉针剂模拟灌装方法：

冻干粉针剂模拟灌装方法采用将一定量的无菌液体培养基通过灌装机灌装于西林瓶中

并进行半压胶塞，然后在冻干机内进行冻干试验并进行全压胶塞，压铝盖密封。模拟试验量

为5000瓶。

7.2液体无菌培养基制备方法：

将经过第3项检测合格的培养基在配制室内按每30g加1L注射用水的比例配制50L液

体培养基备用。

7.3无菌粉针剂模拟灌装试验：

7.3.1模拟灌装试验用西林瓶数量：按生产工艺要求准备7000支无菌西林瓶。

7.3.2模拟灌装试验用胶塞数量：按生产工艺要求准备7000枚无菌胶塞。

7.3.3模拟灌装试验用铝盖数量：按生产工艺要求准备7000枚铝盖。

7.3.4模拟灌装试验用周转盘数量：按生产工艺对周转盘进行清洁消毒，以每只周转盘装量

290支计算，准备25只洁净周转盘备用。

7.3.5模拟灌装试验灌装量：每支西林瓶灌装7ml液体培养基。

7.3.6液体培养基的除菌过滤：对在配制间配制好的液体培养基按正常生产工艺要求进行除

菌过滤并存放于无菌储罐内。

7.3.7灌装机灌装速度：灌装机灌装及半压胶塞速度为260瓶/分。

7.3.8模拟灌装试验操作流程：按冻干粉针剂生产工艺流程进行。

7.3.9模拟灌装试验灌装过程要求：在进行模拟灌装试验时，当灌装进行至一半时，使设备

空转一小时以上再继续进行模拟灌装试验，完成剩余的试验制品的灌装。

7.3.10根据5.1项及6预要求，在每台灌装机分装完成500瓶时，随机抽取未分装的西林

瓶及胶塞10枚供检测使用。

7.3.11冻干模拟试验：培养基灌装半压胶塞以后，将半压胶塞的样品瓶转移到冻干机内，

进行冻干的模拟试验。试验中，冷冻温度不得低于3℃。冻干时间设定为24小时，抽真空、

全压塞后按生产工艺要求进行铝盖密封作业。至此供试品已全部制备完成。

7.3.12取样原则：由于培养基灌装试验分为两个阶段进行，因此将全部样品分为四个不同

时间段进行样品标示，即第一阶段灌装试验开始时、第一阶段灌装试验结束时、第二阶段灌

装试验开始时、第二阶段灌装试验结束时四个时间。其标记法为“17”、“27”、

“2-2”。标记点为周转盘。

8、微生物培养

8.1阴性对照：

在模拟灌装过程中，使用20支洁净试管灌装7ml培养基，密封后进行现场用培养基无

菌性试验。其20瓶阴性对照品应均不得长菌。

8.2阳性对照：

为确认无菌灌装容器中培养基的促菌生产能力，取低浓度菌接种于进行挑战性阳性试验

用的4支对照试管中，2瓶接种浓度＜100个微生物/0.1ml的枯草杆菌芽抱；另2瓶接种浓

度＜100个微生物/0.1川1的白色念珠菌。接种后将接种枯草杆菌芽泡的西林瓶放于30〜35℃

下培养7天，将接种有白色念珠菌的西林瓶放于20〜25℃下培养7天。7天内至少需有1支

容器被证实有菌生产。如2个容渊内均没有菌增殖，则应在确认试验操作有误后，重复试验

1次，此次试验应在2个容器内均有菌生产的情况。

8.3试