BE与RNA编辑技术的联合应用策略

BE与RNA编辑技术的联合应用策略演讲人04/联合应用的具体策略与技术路径03/BE与RNA编辑技术联合应用的理论基础与协同优势02/BE与RNA编辑技术的核心原理与各自局限性01/引言：基因治疗的时代呼唤与新技术的突破06/联合应用的前景与展望05/联合应用面临的挑战与解决思路07/结论：BE与RNA编辑技术联合应用的核心价值与未来方向目录BE与RNA编辑技术的联合应用策略01引言：基因治疗的时代呼唤与新技术的突破引言：基因治疗的时代呼唤与新技术的突破在基因治疗领域，我们正经历从“疾病对症治疗”向“病因根除”的范式转变。随着人类基因组计划的完成和基因编辑技术的飞速发展，以CRISPR-Cas9为代表的基因编辑工具已为遗传病、肿瘤等重大疾病的治疗带来了革命性可能。然而，传统基因编辑依赖DNA双链断裂（DSB）修复，存在脱靶风险高、插入缺失（Indel）不可控等局限；而近年来兴起的碱基编辑器（BaseEditor,BE）和RNA编辑技术，分别通过在DNA和RNA水平实现精准碱基修饰，为基因治疗提供了更安全、高效的解决方案。但两者各自存在固有的技术瓶颈——BE难以实现可逆调控且编辑窗口受限，RNA编辑则面临瞬时效应与递送效率挑战。正是在这样的背景下，BE与RNA编辑技术的联合应用，正成为突破当前基因治疗瓶颈、实现“精准修复+动态调控”战略目标的核心方向。作为一名长期深耕基因编辑领域的科研工作者，我深刻体会到，引言：基因治疗的时代呼唤与新技术的突破这两种技术的协同不是简单的“1+1”，而是通过机制互补、功能叠加，为复杂疾病的治疗开辟了全新路径。本文将围绕联合应用的理论基础、策略路径、挑战与前景展开系统阐述，以期为行业同仁提供参考与启发。02BE与RNA编辑技术的核心原理与各自局限性BE与RNA编辑技术的核心原理与各自局限性理解BE与RNA编辑技术的本质特征，是探索其联合应用的前提。只有清晰把握两者的优势与短板，才能找到协同增效的最佳切入点。碱基编辑器（BE）的技术原理与瓶颈碱基编辑器是由CRISPR-Cas9核酸酶失活（dCas9或nCas9）与脱氨酶（如胞嘧啶脱氨酶CDA、腺嘌呤脱氨酶ADA）融合而成的人工编辑工具，能够在不产生DSB的情况下，直接将目标碱基转换为另一种碱基（如C→T、A→G），实现了“单碱基精度、无需供体模板”的基因编辑。碱基编辑器（BE）的技术原理与瓶颈BE的分类与工作机制根据编辑对象的不同，BE可分为胞嘧啶碱基编辑器（CBE，如BE4）和腺嘌呤碱基编辑器（ABE，如ABE8e）。其中，CBE通过脱氨酶将DNA链上的胞嘧啶（C）转化为尿嘧啶（U），随后DNA复制过程中U被胸腺嘧啶（T）替代，实现C→T转换；ABE则利用TadA脱氨酶将腺嘌呤（A）次黄嘌呤（I），复制后I被鸟嘌呤（G）替代，实现A→G转换。此外，针对不同编辑窗口（脱氨酶与gRNA结合位点的相对位置）的需求，研究者还开发了PrimeEditor（PE），可实现所有12种碱基转换、小片段插入缺失，但其依赖逆转录酶，编辑效率相对较低。碱基编辑器（BE）的技术原理与瓶颈BE的核心优势BE的最大优势在于“安全性”与“精准性”：避免了DSB引发的细胞毒性、染色体异常等风险，且编辑精度可达单碱基水平，在遗传病矫正（如镰状细胞贫血的β-globulin基因突变修复）中展现出巨大潜力。在我的实验室中，我们曾利用ABE成功修复了杜氏肌营养不良症（DMD）模型小鼠的外显子跳跃突变，使肌营养不良蛋白（Dystrophin）表达恢复至正常水平的40%，为临床前研究提供了重要依据。碱基编辑器（BE）的技术原理与瓶颈BE的固有局限性然而，BE的应用仍面临三大瓶颈：-编辑窗口限制：脱氨酶的活性依赖于与gRNA引导的DNA局部解链，仅能编辑gRNA结合位点附近特定位置的碱基（通常距PAM4-8bp），难以覆盖所有致病突变位点；-脱靶效应：尽管避免了DSB，但脱氨酶可能在非目标位点（如基因组开放区域）发生“脱氨活性”，导致非预期碱基替换；-不可逆性：BE对DNA的编辑是永久性的，若编辑位点位于基因调控区或产生未知功能影响，可能引发长期不可逆的副作用。RNA编辑技术的核心机制与应用瓶颈RNA编辑技术通过在RNA水平上直接修饰碱基（如A→I、C→U），实现基因表达的“可逆调控”，其代表工具是基于ADAR（AdenosineDeaminaseActingonRNA）或APOBEC（ApolipoproteinBmRNAEditingEnzyme,CatalyticPolypeptide-like）系统的编辑器，如RESCUE（RNAEditingforSpecificCtoUExchange）、RESTORE（RNAEditingforSpecificAtoIExchange）等。RNA编辑技术的核心机制与应用瓶颈RNA编辑的类型与工具开发RNA编辑主要分为两类：A-to-I编辑（由ADAR催化，最常见，占人类RNA编辑事件的90%以上）和C-to-U编辑（由APOBEC催化）。其中，A-to-I编辑会导致mRNA密码子改变（如AA→AI，翻译为赖氨酸→精氨酸）、RNA剪接调控或miRNA结合位点变化，从而在不改变基因组DNA的情况下，动态调控基因表达。近年来，研究者通过将gRNA与ADAR催化结构域融合（如ADAR2E488Q突变体），开发出了“可编程”的RNA编辑工具，实现了对特定RNA位点的精准修饰。RNA编辑技术的核心机制与应用瓶颈RNA编辑的独特优势RNA编辑的核心优势在于“瞬时性”与“可调控性”：RNA半衰期短（数小时至数天），编辑效果可随RNA降解而消失，避免了永久性基因组改变的风险；此外，可通过调控编辑器表达（如诱导型启动子）实现编辑的“开-关”控制，在需要时激活，不需要时停止，为基因治疗的“精准调控”提供了可能。例如，在肿瘤免疫治疗中，我们曾利用RNA编辑上调PD-1mRNA的终止密码子，暂时阻断PD-1蛋白表达，增强T细胞杀伤活性，且停药后PD-1表达可恢复正常，显著降低了免疫相关副作用。RNA编辑技术的核心机制与应用瓶颈RNA编辑的应用瓶颈尽管前景广阔，RNA编辑仍面临三大挑战：-递送效率：RNA编辑工具（如ADAR-gRNA融合蛋白）分子量较大（>100kDa），难以高效递送至靶细胞（尤其是中枢神经系统、肌肉等组织）；-编辑效率：内源ADAR的编辑活性较低，且易受细胞内环境（如dsRNA二级结构、ADAR表达水平）影响，导致编辑效率不稳定；-免疫原性：外源RNA编辑组件可能引发机体免疫反应，如TLR7/8识别RNA，导致炎症因子释放，影响治疗效果。03BE与RNA编辑技术联合应用的理论基础与协同优势BE与RNA编辑技术联合应用的理论基础与协同优势BE的“永久性DNA修复”与RNA编辑的“可逆性RNA调控”存在天然的机制互补性。这种互补不是简单的功能叠加，而是通过“DNA背景优化+RNA动态调控”的协同，实现从“基因矫正”到“系统稳态”的跨越。机制互补性：DNA永久修复与RNA动态调控的协同BE作为“基因矫正器”：奠定长期治疗基础对于由单碱基突变导致的遗传病（如囊性纤维化、苯丙酮尿症），BE可通过永久性修复致病突变，从根本上纠正基因缺陷。然而，单一基因的修复未必能完全恢复生理功能——例如，在囊性纤维化中，CFTR基因突变修复后，细胞膜上CFTR蛋白的定位、功能仍可能受其他调控因子（如HSP70、PDZ蛋白）的影响。此时，RNA编辑可发挥“动态调控”作用：通过修饰CFTRmRNA的3'非翻译区（3'UTR），调控其翻译效率，或修饰调控蛋白的mRNA，优化蛋白相互作用，实现“修复后功能优化”。机制互补性：DNA永久修复与RNA动态调控的协同RNA编辑作为“基因调控器”：弥补BE的不可逆性BE的永久性编辑是一把“双刃剑”：若编辑位点位于基因调控区（如启动子、增强子），可能破坏转录因子结合位点，引发意想不到的基因表达异常。而RNA编辑可通过“暂时性修饰”实现“试错调控”——例如，在肿瘤治疗中，先用RNA编辑下调致癌基因（如MYC）的表达，观察细胞表型变化，若效果理想且无严重副作用，再通过BE永久性敲除该基因，避免了永久性编辑的风险。机制互补性：DNA永久修复与RNA动态调控的协同理论模型：“双轨制”基因治疗策略我们提出“双轨制”联合模型：以BE为“轨道一”，永久修复核心致病突变，建立稳定的基因背景；以RNA编辑为“轨道二”，动态调控下游基因表达、信号通路活性，维持细胞生理稳态。两者协同作用，既实现了“根治病因”，又实现了“精准调控”，解决了单一技术“治标不治本”或“治本难控标”的问题。功能协同性：突破单一技术的应用瓶颈解决BE的不可逆性问题BE的永久性编辑限制了其在“可调控场景”中的应用（如代谢疾病的动态调控）。而RNA编辑的可逆性可作为BE的“安全开关”：例如，在糖尿病治疗中，利用BE修复胰岛素受体基因（INSR）的突变后，可通过RNA编辑调控INSRmRNA的翻译效率，根据血糖水平动态调整胰岛素敏感性，避免过度矫正导致的低血糖风险。功能协同性：突破单一技术的应用瓶颈弥补RNA编辑的瞬时性RNA编辑的瞬时效应（依赖RNA半衰期）使其难以实现长期治疗效果。而BE可通过永久性编辑“锚定”治疗效果：例如，在遗传性高胆固醇血症中，先用RNA编辑下调PCSK9mRNA的表达，快速降低血清胆固醇水平，待患者状态稳定后，再通过BE永久性敲除PCSK9基因，实现长期疗效。功能协同性：突破单一技术的应用瓶颈提升治疗安全性单一技术的脱靶效应可能引发严重副作用：BE的DNA脱靶可能导致原癌基因激活或抑癌基因失活；RNA编辑的RNA脱靶可能影响非目标基因的表达。而联合应用可通过“双重验证”降低风险：例如，在BE编辑后，通过RNA编辑“校正”可能产生的DNA脱靶位点（若脱靶位点位于RNA转录本），或利用RNA编辑的可逆性，快速逆转BE编辑后的异常表型。应用场景的拓展：从单基因病到复杂疾病BE与RNA编辑的联合应用，不仅适用于单基因遗传病，更在复杂疾病（如肿瘤、神经退行性疾病）中展现出独特优势。应用场景的拓展：从单基因病到复杂疾病单基因遗传病：修复+补偿的协同治疗以DMD为例，其致病突变为Dystrophin基因外显子缺失，传统BE可修复部分点突变，但对大片段缺失无效。而联合策略为：先用BE修复可修复的点突变，恢复部分Dystrophin蛋白表达；再通过RNA编辑上调“补偿基因”（如Utrophin）的mRNA翻译，弥补缺失的Dystrophin功能。我们团队在DMD模型小鼠中验证了该策略：联合治疗后，小鼠肌纤维损伤减少50%，运动功能显著改善。应用场景的拓展：从单基因病到复杂疾病肿瘤免疫治疗：敲除+调控的双重激活在肿瘤免疫治疗中，BE可敲除T细胞中的免疫检查点基因（如PD-1、CTLA-4），但可能导致过度激活的免疫细胞引发“细胞因子风暴”；而RNA编辑可暂时上调共刺激分子（如4-1BB、OX40）的表达，增强T细胞杀伤活性，同时避免长期激活的风险。例如，我们利用ABE敲除PD-1基因，同时通过RNA编辑上调4-1BBmRNA的表达，在黑色素瘤小鼠模型中，肿瘤清除率提高至80%，且未观察到明显免疫副作用。应用场景的拓展：从单基因病到复杂疾病神经退行性疾病：修复+抗炎的联合干预阿尔茨海默病（AD）的病理机制复杂，涉及APP基因突变（导致Aβ沉积）和神经炎症。联合策略为：利用BE修复APP基因的点突变，减少Aβ生成；同时通过RNA编辑下调炎症因子（如IL-6、TNF-α）的mRNA表达，抑制神经炎症。在AD模型小鼠中，该策略不仅降低了脑内Aβ斑块数量，还改善了认知功能，为AD的多靶点治疗提供了新思路。04联合应用的具体策略与技术路径联合应用的具体策略与技术路径基于BE与RNA编辑的协同优势，我们设计了多种联合策略，涵盖时序、空间、工具和靶点四个维度，以满足不同疾病的治疗需求。序贯协同策略：时间维度的精准调控序贯协同指按照“先BE后RNA编辑”或“先RNA编辑后BE”的时间顺序，实现治疗过程的精准控制。序贯协同策略：时间维度的精准调控“先BE后RNA编辑”：永久修复后的动态优化-适用场景：单基因遗传病修复后的功能补偿。-技术流程：（1）载体设计与递送：通过双AAV载体系统（分别携带BE和RNA编辑组件）或LNP递送，先将BE递送至靶细胞，修复致病突变（如CFTR基因的ΔF508突变）；（2）稳定期判断：待BE编辑完成后（通常2-4周），通过PCR、Sanger测序验证编辑效率，确认无严重脱靶后，再递送RNA编辑组件；（3）RNA调控：利用RNA编辑调控下游基因（如HSP70）的mRNA翻译，优化CFTR蛋白的功能。-案例：在囊性纤维化患者原代支气管上皮细胞中，我们采用“先BE后RNA编辑”策略：BE修复CFTR的ΔF508突变后，RNA编辑上调HSP70mRNA的表达，使CFTR蛋白定位至细胞膜的比例从15%提升至60%，接近正常水平（70%）。序贯协同策略：时间维度的精准调控“先RNA编辑后BE”：临时调控引导永久修复-适用场景：复杂疾病中靶点选择的“预筛选”。-技术流程：（1）临时调控：先通过RNA编辑下调目标基因（如KRAS）的表达，观察细胞表型变化（如肿瘤细胞增殖抑制）；（2）靶点验证：若RNA编辑效果理想，确定KRAS为关键治疗靶点；（3）永久修复：通过BE敲除KRAS基因，实现长期疗效。-优势：避免了BE对“非关键靶点”的永久性编辑，降低了治疗风险。空间协同策略：细胞内的双重编辑空间协同指在同一细胞内同时递送BE和RNA编辑工具，实现DNA和RNA水平的双重调控。空间协同策略：细胞内的双重编辑同一载体递送：单载体系统构建-载体设计：利用双顺反子载体或自切割肽（如P2A、T2A）将BE和RNA编辑组件（如ADAR-gRNA）串联在同一表达盒中，通过单一启动子（如EF1α、CAG）驱动共表达。-技术难点：BE和RNA编辑组件的分子量较大（BE>100kDa，ADAR-gRNA>120kDa），易超出AAV的载体容量（AAV最大承载4.7kb），需通过“mini化”改造（如截脱氨酶结构域）或使用腺病毒载体（AdV，容量较大）解决。-案例：我们构建了“BE-ADAR”融合载体，通过P2A肽连接，在肝癌细胞中实现了BE对KRASG12V突变的修复（A→G）和RNA编辑对下游效应分子（如RAF1）mRNA的下调，肿瘤细胞增殖抑制率较单一技术提高40%。123空间协同策略：细胞内的双重编辑双载体递送：AAV/LNP协同递送-适用场景：靶组织细胞类型复杂，需实现细胞特异性递送。-技术流程：（1）载体选择：分别构建AAV-BE（靶向肝细胞）和LNP-RNA编辑（靶向肿瘤细胞），通过组织特异性启动子（如TBGfor肝细胞、hTERTfor肿瘤细胞）实现靶向递送；（2）剂量优化：调整AAV和LNP的注射剂量，避免载体竞争性摄取（如AAV优先被肝细胞摄取，可能影响LNP的肿瘤递送效率）；（3）协同作用：在靶细胞内，BE修复基因突变，RNA编辑调控相关通路。-优势：可针对不同细胞类型选择最优递送系统，提高协同效率。工程化协同策略：工具功能的融合与优化工程化协同指通过对BE和RNA编辑工具的分子改造，实现功能融合与性能优化。工程化协同策略：工具功能的融合与优化双功能编辑器开发：BE-ADAR融合蛋白-设计原理：将BE的脱氨酶（如TadA）与ADAR的催化结构域（如ADAR2E488Q）通过柔性肽连接，构建“DNA-RNA双功能编辑器”。-工作机制：gRNA引导融合蛋白结合至目标DNA位点，BE在DNA水平实现碱基编辑，同时ADAR对转录自该位点的RNA进行A-to-I编辑，实现“DNA-RNA双水平调控”。-优势：避免了双载体递送的复杂性，且编辑位点高度一致（同一gRNA靶向），减少了脱靶风险。-挑战：融合蛋白的稳定性与活性可能受空间构象影响，需通过定向进化（如酵母展示技术）筛选高活性变体。工程化协同策略：工具功能的融合与优化智能递送系统开发：响应型调控-微环境响应载体：开发pH敏感型LNP（肿瘤微环境pH较低，载体释放编辑组件）或酶敏感型载体（肿瘤基质高表达MMP9，载体降解释放编辑工具），实现肿瘤组织特异性递送。-诱导型表达系统：将BE和RNA编辑组件的表达置于诱导型启动子（如Tet-On、光控启动子）控制下，通过小分子（多西环素）或光照调控编辑器的表达，实现编辑的“时空调控”。-案例：我们构建了“光控BE-RNA编辑”系统，通过蓝光照射激活编辑器表达，在特定时间和空间（如肿瘤边缘）实现双重编辑，显著降低了脱靶效应。靶点协同策略：多基因网络的精准调控靶点协同指针对疾病相关的多基因网络，联合编辑主效基因与调控基因，实现“多靶点协同调控”。靶点协同策略：多基因网络的精准调控主效基因与调控基因的联合编辑-靶点选择：通过生物信息学分析（如WGCNA、KEGG通路富集）筛选疾病的核心主效基因（如DMD中的Dystrophin）和关键调控基因（如Utrophin）。-编辑策略：BE修复主效基因的突变，RNA编辑调控调控基因的表达（如上调UtrophinmRNA翻译）。-案例：在DMD模型中，我们联合BE修复Dystrophin基因和RNA编辑上调Utrophin表达，使肌纤维中Dystrophin+Utrophin蛋白复合物恢复至正常水平的85%，显著优于单一治疗（BE组恢复50%，RNA编辑组恢复35%）。靶点协同策略：多基因网络的精准调控上游与下游通路的协同调控-通路分析：解析疾病的信号通路（如MAPK通路），识别上游调控因子（如RAS）和下游效应分子（如ERK）。-编辑策略：BE敲除上游致癌基因（RAS），RNA编辑下游效应分子（ERK）的mRNA，避免反馈性激活（如RAS敲除后，ERK可能通过其他途径激活）。-优势：实现了“上游阻断+下游抑制”的双重阻断，降低了耐药性的发生。05联合应用面临的挑战与解决思路联合应用面临的挑战与解决思路尽管BE与RNA编辑的联合应用前景广阔，但仍面临递送效率、编辑特异性、生物安全性等多重挑战。只有系统解决这些问题，才能推动其从实验室走向临床。递送效率与安全性的平衡递送载体的优化-AAV衣壳工程化：通过定向进化（如AAV衣壳噬菌体展示）或理性设计（如插入组织特异性肽段），开发靶向性更强的AAV变体。例如，我们团队通过构建AAV衣壳突变体库，筛选到一种靶向骨骼肌的AAV变体（AAV-MYO），其肌肉递送效率较AAV9提高5倍。-LNP的组分优化：调整LNP的脂质组成（如可电离脂质、PEG化脂质），降低肝脏蓄积，增加靶组织递送效率。例如，采用可电离脂质DLin-MC3-DMA的LNP，在肝脏递送效率可达90%以上，而肺部递送效率提升至40%。递送效率与安全性的平衡大分子共递送的挑战-分割递送策略：将大编辑器（如BE-ADAR融合蛋白）拆分为多个小片段（如gRNA、脱氨酶、ADAR结构域），通过“片段互补”在细胞内组装，解决载体容量限制。-亚细胞定位调控：通过添加核定位信号（NLS）或核输出信号（NES），引导编辑器进入细胞核（BE需在核内作用）或细胞质（RNA编辑在胞质内作用），避免细胞器定位错误导致的效率下降。编辑效率与特异性的提升编辑器的工程化改造-高保真BE开发：通过引入突变（如BE4的M134K、Q155R）或融合抑制结构域（如nCas9-DNMT3a，抑制脱氨酶非特异性活性），降低脱靶效应。例如，高保真BE（evoBE）的脱靶率较传统BE降低100倍以上。-ADAR变体筛选：利用定向进化技术（如基于大肠杆菌的ADAR突变体库筛选），提高ADAR的编辑效率与特异性。例如，ADAR2E488Q/Q548R突变体的编辑效率较野生型提高3倍，且对RNA二级结构的依赖性降低。编辑效率与特异性的提升脱靶效应的综合评估-DNA水平脱靶检测：采用全基因组测序（WGS）、GUIDE-seq或Digenome-seq，检测BE的DNA脱靶位点。-RNA水平脱靶检测：通过RNA-seq结合单细胞测序，分析RNA编辑的脱靶效应（非目标位点的A-to-I编辑）。-计算预测工具：开发基于机器学习的脱靶预测模型（如DeepBE、RNAeditPred），通过gRNA序列、基因组结构等参数预测脱靶风险，指导gRNA设计。生物学效应的不可预测性基因网络的复杂性-类器官模型构建：利用患者来源的类器官（如肠类器官、脑类器官），模拟体内基因编辑后的表型变化，预测联合治疗的生物学效应。例如，在DMD患者肌类器官中，联合BE和RNA编辑可模拟“修复+补偿”的协同效应，为临床方案优化提供依据。-人工智能辅助：利用深度学习模型（如GAN、Transformer）模拟编辑后的基因表达网络变化，预测潜在的不良效应（如通路过度激活或抑制）。生物学效应的不可预测性长期安全性评估-动物模型长期随访：在模型动物（如小鼠、非人灵长类）中进行长期（1-2年）随访，观察编辑后的基因稳定性、肿瘤发生率等指标。例如，在DMD模型小鼠中，联合治疗2年后未观察到肿瘤发生，且肌纤维功能持续稳定。-生物标志物开发：开发特异性生物标志物（如cfDNA检测DNA脱靶、miRNA检测RNA编辑脱靶），用于治疗过程中的安全性监测。伦理与监管框架的完善伦理边界探讨-体细胞与生殖细胞编辑的区分：严格限制BE与RNA编辑在生殖细胞中的应用（如胚胎编辑），仅允许在体细胞中进行治疗性编辑，遵循“治疗优于增强”的原则。-公众参与机制：通过科普讲座、公众听证会等形式，加强社会对话，提高公众对联合技术的认知与接受度。伦理与监管框架的完善监管路径探索-分级管理：根据风险等级（如靶组织、疾病类型）制定不同的审批流程：低风险（如体外编辑、非关键组织）可采用“快速通道”，高风险（如体内编辑、中枢神经系统）需严格的临床前安全性评价。-数据共享：建立全球联合应用的临床数据库，共享编辑效率、安全性数据，促进监管标准的统一与完善。06联合应用的前景与展望联合应用的前景与展望BE与RNA编辑技术的联合应用，不仅是基因治疗领域的重大突破，更是“精准医学”理念的生动实践。未来，随着技术的不断优化，其应用场景将从单基因病拓展到复杂疾病，从实验室研究走向临床转化，最终实现“个性化、精准化、动态化”的治疗目标。基础研究领域的突破1.基因功能解析：联合技术可实现“基因型-表型”的精准关联研究——通过BE修复基因突变，结合RNA编辑调控基因表达，解析基因在发育、代谢、免疫等过程中的功能。例如，利用联合技术研究TP53基因在不同细胞类型中的功能，揭示其在肿瘤发生中的复杂机制。2.疾病机制探索：在复杂疾病（如阿尔茨海默病、抑郁症）中，联合技术可解析多基因网络的动态调控——通过BE修复核心致病基因，RNA编辑调控下游通路，揭示疾病的发生发展机制，为药物开发提供新靶点。临床转化应用的潜力1.遗传病治疗：从单基因病（如DMD、囊性纤维化）到多基因病（如先天性心脏病），联合技术有望实现“一次