宝干胶囊联合绞股蓝总甙片对大鼠NAFLD治疗作用及机制探究

宝干胶囊联合绞股蓝总甙片对大鼠NAFLD治疗作用及机制探究一、引言1.1研究背景非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）是一种与酒精摄入无关的肝脏疾病，其主要特征为肝脏内脂肪过度堆积。近年来，随着全球范围内人们生活方式的改变以及肥胖、糖尿病等代谢性疾病发病率的上升，NAFLD的患病率也呈现出迅猛增长的态势。据相关研究统计，全球约有25%的成年人受到NAFLD的影响，在一些发达国家和地区，这一比例甚至更高。在亚洲地区，NAFLD的患病率也不容小觑，达到了27.37%。我国的情况同样严峻，随着经济的快速发展和居民生活水平的提高，NAFLD已成为我国最常见的慢性肝病之一，其发病率呈逐年上升趋势，且发病年龄逐渐年轻化。NAFLD的发病机制较为复杂，目前认为是多因素共同作用的结果。其中，肥胖、高血脂、高血压、糖尿病等代谢异常是导致NAFLD发生发展的重要危险因素。胰岛素抵抗在NAFLD的发病过程中起着关键作用，它会引起代谢紊乱，导致脂肪代谢异常，使得游离脂肪酸在肝脏中大量堆积，进而引发肝细胞脂肪变性。氧化应激也是NAFLD发病的重要环节，过多的脂肪沉积会造成脂质过氧化，产生大量的活性氧（ROS），这些ROS会攻击肝细胞内的生物大分子，如脂质、蛋白质和核酸，导致肝细胞损伤和炎症反应的发生。如果脂肪性肝炎进一步发展，还可能会出现肝纤维化、肝硬化，甚至增加患肝癌的风险。NAFLD不仅会对肝脏功能造成损害，还与其他慢性疾病如2型糖尿病、心血管疾病、慢性肾脏病等的发病风险增加密切相关，严重影响患者的生活质量和健康。然而，目前针对NAFLD患者的治疗仍然面临诸多挑战，缺乏切实有效的治疗手段。现有的治疗方法主要以生活方式干预为主，包括控制饮食、增加运动和减轻体重等。这些措施虽然对部分患者有效，但由于患者的依从性较差以及病情的复杂性，往往难以取得理想的治疗效果。在药物治疗方面，虽然有一些药物被尝试用于治疗NAFLD，如保肝抗炎药物、胰岛素增敏剂、降脂药物等，但这些药物的疗效和安全性仍存在争议，且大多数药物仅能针对NAFLD发病机制中的某一个环节进行干预，无法从根本上解决问题。此外，一些药物还可能会带来不良反应，限制了其临床应用。因此，迫切需要探索更加安全、有效的治疗方案，以满足临床需求。中药在治疗NAFLD方面具有独特的优势，其多成分、多靶点、整体调节的特点能够针对NAFLD复杂的发病机制进行综合干预。宝干胶囊和绞股蓝总甙片是两种被广泛应用于治疗NAFLD的中药。宝干胶囊由多种天然植物药材精制而成，具有清热解毒、调和脾胃、化瘀消肿、促进代谢和降低血脂等功效，能够减轻肝脏负担，降低血清中胆固醇、甘油三酯和低密度脂蛋白等指标，改善肝细胞的状态。绞股蓝总甙片则是以绞股蓝中的总黄酮类化合物为主要原料制成的中药制剂，具有降脂、降血糖、抗氧化、抗炎等多种作用，可以减少肝脏内三酰甘油沉积，提高脂肪酸氧化，增加肝细胞代谢，促进磷脂代谢，降低血浆脂肪酸和游离脂肪酸的浓度。二者单独使用时，均能在一定程度上改善NAFLD相关症状，但联合使用时，是否能产生更好的治疗效果，目前还缺乏深入的研究。基于以上背景，本研究旨在探究宝干胶囊联合绞股蓝总甙片治疗NAFLD大鼠的作用及其可能的机制，为临床治疗NAFLD提供新的思路和方法。1.2研究目的与意义1.2.1研究目的本研究旨在通过动物实验，深入探究宝干胶囊联合绞股蓝总甙片对非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）大鼠的治疗作用。具体而言，将从以下几个方面展开研究：明确治疗效果：系统比较宝干胶囊、绞股蓝总甙片单独使用以及二者联合使用对NAFLD大鼠的治疗效果，观察各组大鼠在体重、肝功能、血脂、肝脏组织形态学等方面的变化，以此判断联合用药是否能更显著地改善NAFLD大鼠的各项指标，减轻肝脏脂肪变性和炎症反应。确定最佳剂量和疗程：在联合用药的情况下，设置不同的剂量梯度和治疗时间，通过对大鼠各项指标的动态监测和分析，确定宝干胶囊联合绞股蓝总甙片治疗NAFLD大鼠的最佳剂量和疗程，为后续的临床研究提供科学、精准的用药参考。剖析作用机制：从脂质代谢、氧化应激、炎症反应等多个角度，深入研究宝干胶囊联合绞股蓝总甙片治疗NAFLD大鼠的作用机制。检测相关基因和蛋白的表达水平，探讨联合用药对NAFLD发病关键信号通路的调控作用，揭示其治疗NAFLD的内在机制。1.2.2研究意义理论意义：目前，针对NAFLD的发病机制尚未完全明确，现有的治疗手段存在诸多局限性。本研究对宝干胶囊联合绞股蓝总甙片治疗NAFLD大鼠的作用及其机制进行深入探究，有助于进一步揭示NAFLD的发病机制，为该领域的理论研究提供新的思路和方向。通过对联合用药作用机制的研究，可以明确宝干胶囊和绞股蓝总甙片在调节脂质代谢、抗氧化应激、抗炎等方面的具体作用靶点和信号通路，丰富和完善NAFLD的治疗理论体系。实践意义：本研究的成果对于临床治疗NAFLD具有重要的指导意义。如果宝干胶囊联合绞股蓝总甙片在动物实验中能够展现出良好的治疗效果和安全性，将为临床医生提供一种新的、有效的药物联用方案，为NAFLD患者带来更多的治疗选择。这不仅有助于提高NAFLD的治疗水平，改善患者的生活质量，还能减轻患者的经济负担和社会医疗资源的压力。此外，本研究还将为中药在肝病治疗领域的应用和发展提供有力的实验依据，推动中医药现代化进程，促进中西医结合治疗肝病的研究和实践。二、理论基础与研究现状2.1NAFLD概述2.1.1发病机制非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）的发病机制极为复杂，是多种因素共同作用的结果，目前尚未完全明确，其中胰岛素抵抗、脂质代谢紊乱、氧化应激、炎症反应等在其发病过程中发挥着关键作用。胰岛素抵抗被公认为是NAFLD发病的核心机制之一。在正常生理状态下，胰岛素与肝细胞表面的受体结合，激活下游信号通路，从而促进葡萄糖摄取、利用和储存，抑制糖异生。然而，当机体出现胰岛素抵抗时，胰岛素的敏感性降低，肝脏对胰岛素的反应减弱。为了维持血糖稳定，胰腺会分泌更多胰岛素，形成高胰岛素血症。高胰岛素血症会促使脂肪组织中的激素敏感性脂肪酶活性增加，导致脂肪分解加速，大量游离脂肪酸（FFA）释放入血。这些FFA被肝脏摄取后，无法正常进行代谢，从而在肝脏内大量堆积，引发肝细胞脂肪变性。此外，胰岛素抵抗还会干扰肝脏内脂质合成、转运和氧化的平衡，进一步加重脂肪沉积。研究表明，胰岛素抵抗相关的脂质代谢变化，源于肌肉和脂肪组织中的胰岛素抵抗作用与为提供胰岛素敏感反应的组织而补偿性高胰岛素血症之间的相互作用。这些改变包括增强的外周脂肪分解、增加的肝脏对FFA的摄取以及增加的肝内甘油三酯合成。甘油三酯分解的FFA流入和新生超过FFA氧化和输出，导致肝脏脂肪积累的净效应。脂质代谢紊乱也是NAFLD发病的重要因素。肝脏是脂质代谢的重要器官，正常情况下，肝脏通过脂肪酸的摄取、合成、氧化和转运等过程，维持脂质代谢的平衡。在NAFLD患者中，多种因素会导致脂质代谢紊乱，破坏这种平衡。一方面，如前文所述，胰岛素抵抗会引起脂肪组织中脂肪分解增加，导致血浆中FFA水平升高，过多的FFA被肝脏摄取，超出了肝脏的代谢能力，从而在肝脏内蓄积。另一方面，肝脏内脂肪酸合成关键酶的活性异常升高，如脂肪酸合成酶（FAS）、乙酰辅酶A羧化酶（ACC）等，使得脂肪酸合成增加。同时，肝脏内脂肪酸β-氧化过程受到抑制，肉碱/有机阳离子转运体2（OCTN2）表达下降，导致脂肪酸进入线粒体进行β-氧化的过程受阻，进一步促使甘油三酯在肝脏内堆积。此外，极低密度脂蛋白（VLDL）的合成和分泌障碍也会导致肝脏内甘油三酯清除减少。VLDL是将肝脏内甘油三酯转运到外周组织的重要载体，当VLDL合成或分泌不足时，甘油三酯无法及时被转运出肝脏，从而在肝脏内聚集，引发脂肪变性。氧化应激在NAFLD的发生发展中起着关键的“二次打击”作用。当肝细胞内脂肪过度堆积时，会导致线粒体功能障碍，使得脂肪酸β-氧化过程中产生大量的活性氧（ROS）。同时，肝脏内抗氧化防御系统受损，超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）等抗氧化酶的活性降低，无法及时清除过多的ROS。ROS会攻击肝细胞内的生物大分子，如脂质、蛋白质和核酸，引发脂质过氧化反应。脂质过氧化产物丙二醛（MDA）等会进一步损伤细胞膜和细胞器，导致肝细胞损伤和死亡。此外，氧化应激还会激活一系列炎症信号通路，促进炎症因子的释放，引发肝脏炎症反应。研究表明，在NAFLD患者和动物模型中，均检测到肝脏内ROS水平升高和抗氧化酶活性降低，且氧化应激程度与疾病的严重程度呈正相关。炎症反应在NAFLD的进展中起着重要的推动作用。肝脏内的脂肪变性和氧化应激会激活肝脏内的免疫细胞，如库普弗细胞、自然杀伤细胞等，使其释放多种炎症因子，如肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）、白细胞介素-1β（IL-1β）等。这些炎症因子会引起肝细胞炎症损伤，促进肝脏内炎症细胞浸润，进一步加重肝细胞损伤。同时，炎症因子还会干扰胰岛素信号通路，加重胰岛素抵抗，形成恶性循环，促进NAFLD向非酒精性脂肪性肝炎（NASH）、肝纤维化甚至肝硬化和肝癌的方向发展。例如，TNF-α可以通过激活核因子-κB（NF-κB）信号通路，诱导一系列炎症相关基因的表达，导致肝细胞炎症和凋亡。此外，TNF-α还可以抑制胰岛素受体底物-1（IRS-1）的酪氨酸磷酸化，从而阻断胰岛素信号传导，加重胰岛素抵抗。除了上述主要机制外，遗传因素、肠道菌群失调、内质网应激等也在NAFLD的发病中发挥一定作用。遗传因素通过影响脂质代谢、胰岛素信号传导、氧化应激等相关基因的表达，增加个体对NAFLD的易感性。肠道菌群失调会导致肠道屏障功能受损，内毒素移位进入血液循环，激活肝脏内的免疫细胞，引发炎症反应。内质网应激则会干扰蛋白质的合成、折叠和运输，导致未折叠蛋白反应（UPR）激活，进而影响细胞的正常功能，促进NAFLD的发生发展。总之，NAFLD的发病机制是一个多因素、多环节相互作用的复杂过程，深入研究其发病机制对于寻找有效的治疗靶点和开发新的治疗方法具有重要意义。2.1.2临床症状与诊断标准NAFLD起病隐匿，发病缓慢，多数患者在疾病早期通常无明显的特异性症状。随着病情的进展，部分患者可能会逐渐出现一些非特异性的临床表现。乏力是NAFLD患者较为常见的症状之一，约有30%-50%的患者会出现不同程度的乏力感。这种乏力可能与肝脏功能受损，导致能量代谢异常有关。肝脏是人体重要的代谢器官，当肝细胞受到脂肪浸润和损伤时，会影响肝脏对营养物质的代谢和能量的产生，从而使患者感到疲倦、无力。肝区隐痛也是常见症状，部分患者可自觉右上腹或肝区出现隐痛、胀痛或不适感。这主要是由于肝脏内脂肪过度堆积，导致肝脏体积增大，肝包膜受到牵拉，刺激包膜上的神经末梢所引起。疼痛程度一般较轻，多为间歇性发作，在劳累、情绪波动或进食油腻食物后可能会加重。消化系统症状也较为常见，患者可能会出现食欲减退、恶心、呕吐、腹胀等表现。这些症状的出现与肝脏的消化功能受到影响有关。肝脏分泌的胆汁对于脂肪的消化和吸收起着重要作用，当肝脏发生病变时，胆汁的分泌和排泄可能会受到影响，导致脂肪消化不完全，从而引起上述消化系统症状。少数患者还可能出现肝脏肿大的体征，通过体格检查可触及肿大的肝脏。在疾病进展过程中，若发展为肝硬化阶段，患者可能会出现黄疸、腹水、脾肿大、食管胃底静脉曲张等更为严重的并发症表现。黄疸是由于胆红素代谢障碍，导致血液中胆红素水平升高，使皮肤和巩膜黄染。腹水是由于肝硬化导致门静脉高压、低蛋白血症等因素，引起腹腔内液体过多积聚。脾肿大则是由于门静脉高压，脾脏血液回流受阻所致。食管胃底静脉曲张是肝硬化门静脉高压的严重并发症之一，曲张的静脉容易破裂出血，导致上消化道大出血，危及患者生命。目前，NAFLD的诊断主要依靠综合评估，包括患者的病史、临床表现、影像学检查、血液指标检测以及必要时的肝组织活检。影像学检查是诊断NAFLD的重要手段之一，其中超声检查因其操作简便、价格低廉、无创伤等优点，成为临床上最常用的检查方法。在超声图像上，NAFLD患者的肝脏通常表现为肝脏近场回声增强，远场回声衰减，肝内管道结构显示不清等特征。根据肝脏脂肪变的程度，超声可将其分为轻度、中度和重度。轻度脂肪肝表现为肝脏近场回声稍增强，远场回声无明显衰减；中度脂肪肝肝脏近场回声明显增强，远场回声轻度衰减，肝内管道结构显示欠清晰；重度脂肪肝肝脏近场回声显著增强，远场回声明显衰减，肝内管道结构难以辨认。然而，超声检查对于轻度脂肪肝的诊断准确性相对较低，且无法准确评估肝脏纤维化的程度。计算机断层扫描（CT）和磁共振成像（MRI）也可用于NAFLD的诊断。CT检查可通过测量肝脏的CT值来评估肝脏脂肪含量，当肝脏CT值低于脾脏CT值时，提示可能存在脂肪肝。MRI则具有更高的软组织分辨力，能够更准确地检测肝脏脂肪含量和分布情况，对于鉴别诊断肝脏病变具有重要价值。此外，MRI还可以通过磁共振波谱分析（MRS）技术，定量检测肝脏内甘油三酯的含量，为NAFLD的诊断和病情评估提供更精确的信息。血液指标检测对于NAFLD的诊断和病情评估也具有重要意义。肝功能指标如丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）、γ-谷氨酰转肽酶（γ-GT）等在部分NAFLD患者中可能会升高，但这些指标的升高程度通常较轻，且缺乏特异性。血脂指标如总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）升高，高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）降低，在NAFLD患者中也较为常见，提示患者可能存在脂质代谢紊乱。此外，一些新兴的血液标志物如细胞角蛋白18片段（CK18-M30、CK18-M65）、成纤维细胞生长因子21（FGF21）等，在评估NAFLD的病情严重程度和肝纤维化程度方面具有一定的潜力，但目前尚未广泛应用于临床。肝组织活检是诊断NAFLD的金标准，能够准确判断肝脏脂肪变的程度、炎症活动度以及肝纤维化的分期。通过肝活检获取肝脏组织样本，进行苏木精-伊红（HE）染色、油红O染色、Masson染色等病理学检查，可以直观地观察肝脏组织的形态学变化。根据病理学特征，NAFLD可分为非酒精性单纯性脂肪肝（NAFL）和非酒精性脂肪性肝炎（NASH）。NAFL主要表现为肝细胞脂肪变性，无或仅有轻度炎症；NASH则除了肝细胞脂肪变性外，还伴有肝细胞气球样变、炎症细胞浸润和不同程度的肝纤维化。然而，肝活检是一种有创检查，存在一定的风险，如出血、感染、气胸等，且由于肝脏病变的不均一性，活检样本可能无法准确反映整个肝脏的病变情况，因此在临床应用中受到一定限制。在诊断NAFLD时，需要排除其他可能导致肝脏脂肪变性的原因，如长期大量饮酒（男性每周饮酒折合乙醇量≥140g，女性≥70g）、病毒性肝炎（如乙型肝炎、丙型肝炎等）、药物性肝损伤、自身免疫性肝病、遗传代谢性肝病等。只有在排除这些因素后，结合患者的临床表现、影像学检查和血液指标检测等结果，才能做出准确的诊断。2.2宝干胶囊与绞股蓝总甙片研究现状2.2.1宝干胶囊成分及作用机制宝干胶囊是一种由多种天然植物药材精心精制而成的复方制剂，其成分包括黑芝麻、小蓟、酸枣仁、决明子、山药、肉桂等。这些成分相互协同，赋予了宝干胶囊多种功效，在调节血脂、抗氧化、保护肝细胞等方面发挥着重要作用，对非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）具有显著的治疗效果。黑芝麻作为宝干胶囊的重要成分之一，富含脂肪油、维生素E、钙、磷、铁等多种营养成分。其中，脂肪油能够润滑肠道，促进排便，有助于减少体内毒素的堆积，减轻肝脏的解毒负担。维生素E是一种强效的抗氧化剂，能够清除体内的自由基，减少氧化应激对肝细胞的损伤，保护肝细胞的结构和功能。研究表明，维生素E可以抑制脂质过氧化反应，降低丙二醛（MDA）等脂质过氧化产物的生成，提高超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）等抗氧化酶的活性，从而增强肝脏的抗氧化能力。此外，黑芝麻中的优质蛋白和多种氨基酸还能够为肝细胞的修复和再生提供必要的营养物质，促进肝细胞的恢复。小蓟具有凉血止血、散瘀解毒消痈的功效。在NAFLD的治疗中，小蓟主要通过其抗氧化和抗炎作用发挥疗效。小蓟中含有多种黄酮类化合物和酚类物质，这些成分具有较强的抗氧化活性，能够清除体内过多的活性氧（ROS），减轻氧化应激对肝细胞的损伤。同时，小蓟还能够抑制炎症因子的释放，减轻肝脏的炎症反应。研究发现，小蓟提取物可以降低肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）等炎症因子的表达水平，抑制核因子-κB（NF-κB）信号通路的激活，从而减轻炎症对肝细胞的损害。酸枣仁具有养心补肝、宁心安神、敛汗、生津的作用。在NAFLD的发病过程中，患者往往会出现睡眠质量下降、焦虑等精神症状，酸枣仁可以通过调节神经系统功能，改善患者的睡眠质量，缓解焦虑情绪，从而间接减轻肝脏的负担。此外，酸枣仁还具有一定的抗氧化和保护肝细胞的作用。研究表明，酸枣仁提取物可以提高肝脏中SOD、GSH-Px等抗氧化酶的活性，降低MDA含量，减轻氧化应激对肝细胞的损伤。同时，酸枣仁提取物还能够抑制肝细胞凋亡，促进肝细胞的修复和再生。决明子具有清热明目、润肠通便的功效。在调节血脂方面，决明子发挥着重要作用。决明子中含有多种蒽醌类化合物、黄酮类化合物等成分，这些成分可以抑制胆固醇的合成，促进胆固醇的排泄，从而降低血清中胆固醇的水平。同时，决明子还可以抑制甘油三酯的合成，促进脂肪酸的氧化，降低血清中甘油三酯的含量。研究表明，决明子提取物可以显著降低高脂血症模型大鼠血清中的总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）水平，升高高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）水平。此外，决明子的润肠通便作用可以促进肠道内脂肪的排泄，减少脂肪的吸收，进一步有助于调节血脂。山药具有补脾养胃、生津益肺、补肾涩精的功效。在NAFLD的治疗中，山药主要通过调节脾胃功能，促进营养物质的消化吸收，为肝脏提供充足的营养支持，从而保护肝细胞。山药中含有丰富的多糖、蛋白质、维生素等营养成分，这些成分可以增强机体的免疫力，提高肝脏的抗病能力。同时，山药多糖还具有一定的抗氧化和降血脂作用。研究表明，山药多糖可以提高SOD、GSH-Px等抗氧化酶的活性，降低MDA含量，减轻氧化应激对肝细胞的损伤。此外，山药多糖还可以降低血清中TC、TG、LDL-C水平，升高HDL-C水平，改善脂质代谢紊乱。肉桂具有补火助阳、散寒止痛、温通经脉的功效。在宝干胶囊中，肉桂主要通过调节肝脏的血液循环，改善肝脏的营养供应，促进肝细胞的代谢和修复。肉桂中含有桂皮醛、桂皮酸等成分，这些成分具有扩张血管、改善微循环的作用，可以增加肝脏的血液灌注量，提高肝脏的氧供和营养供应。同时，肉桂还具有一定的抗炎和抗氧化作用。研究表明，肉桂提取物可以抑制炎症因子的释放，减轻肝脏的炎症反应。此外，肉桂提取物还可以提高SOD、GSH-Px等抗氧化酶的活性，降低MDA含量，减轻氧化应激对肝细胞的损伤。综上所述，宝干胶囊通过其多种成分的协同作用，在调节血脂、抗氧化、保护肝细胞等方面发挥着重要作用，从而对NAFLD具有显著的治疗效果。其作用机制主要包括抑制脂质合成、促进脂质代谢、清除自由基、减轻炎症反应、保护肝细胞等多个环节，为NAFLD的治疗提供了一种安全、有效的选择。2.2.2绞股蓝总甙片成分及作用机制绞股蓝总甙片是以葫芦科植物绞股蓝全草中提取的总甙为主要成分制成的中药制剂。绞股蓝总甙中含有多种皂甙类成分，包括绞股蓝皂甙、人参皂甙等。这些成分赋予了绞股蓝总甙片多种药理作用，在降血脂、抗氧化、抗炎等方面表现出色，对非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）具有良好的治疗作用。绞股蓝总甙片的降血脂作用机制主要体现在多个方面。它能够抑制胆固醇的合成，通过调节肝脏内胆固醇合成关键酶的活性，如3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A（HMG-CoA）还原酶等，减少胆固醇的合成。研究表明，绞股蓝总甙可以显著降低高脂血症模型动物血清中总胆固醇（TC）的含量，抑制HMG-CoA还原酶的表达，从而减少胆固醇的合成。同时，绞股蓝总甙片还能促进胆固醇的代谢和排泄，增加胆汁酸的合成和排泄，使胆固醇转化为胆汁酸排出体外，降低血液中胆固醇的水平。此外，绞股蓝总甙片能够调节脂蛋白代谢，升高血清中高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）的含量，增强HDL对胆固醇的逆向转运能力，将外周组织中的胆固醇转运回肝脏进行代谢和排泄，同时降低低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）和甘油三酯（TG）的水平，减少脂质在血管壁和肝脏内的沉积。在抗氧化方面，绞股蓝总甙片富含多种抗氧化成分，具有强大的清除自由基能力。它可以有效地清除体内过多的活性氧（ROS），如超氧阴离子自由基、羟自由基等，减少氧化应激对肝细胞的损伤。研究发现，绞股蓝总甙能够提高超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）等抗氧化酶的活性，这些抗氧化酶可以催化ROS的分解，将其转化为无害的水和氧气，从而保护肝细胞免受氧化损伤。同时，绞股蓝总甙还能降低脂质过氧化产物丙二醛（MDA）的含量，抑制脂质过氧化反应的发生，维持细胞膜的完整性和稳定性。此外，绞股蓝总甙还可以通过调节细胞内的抗氧化信号通路，如核因子E2相关因子2（Nrf2）信号通路等，增强细胞的抗氧化防御能力。Nrf2是一种重要的抗氧化转录因子，在正常情况下，Nrf2与Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1（Keap1）结合，处于无活性状态。当细胞受到氧化应激刺激时，Nrf2与Keap1解离，进入细胞核，与抗氧化反应元件（ARE）结合，启动一系列抗氧化基因的表达，如SOD、GSH-Px等，从而增强细胞的抗氧化能力。绞股蓝总甙可以激活Nrf2信号通路，促进抗氧化基因的表达，提高细胞的抗氧化能力。绞股蓝总甙片的抗炎作用也是其治疗NAFLD的重要机制之一。在NAFLD的发病过程中，肝脏内会发生炎症反应，炎症因子的释放会进一步加重肝细胞的损伤。绞股蓝总甙片可以抑制炎症因子的释放，减轻肝脏的炎症反应。研究表明，绞股蓝总甙能够降低肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）、白细胞介素-1β（IL-1β）等炎症因子的表达水平，抑制炎症信号通路的激活，如核因子-κB（NF-κB）信号通路等。NF-κB是一种重要的转录因子，在炎症反应中发挥着关键作用。当细胞受到炎症刺激时，NF-κB被激活，进入细胞核，启动一系列炎症相关基因的表达，导致炎症因子的释放。绞股蓝总甙可以抑制NF-κB的激活，减少炎症因子的产生，从而减轻肝脏的炎症损伤。此外，绞股蓝总甙还可以抑制炎症细胞的浸润，减少肝脏内炎症细胞的数量，进一步缓解炎症反应。对于NAFLD的治疗，绞股蓝总甙片通过减少肝脏内三酰甘油沉积，提高脂肪酸氧化，增加肝细胞代谢，促进磷脂代谢，降低血浆脂肪酸和游离脂肪酸的浓度等作用，有效地防治脂肪团块在肝脏内的堆积，抑制脂肪肝的发生和发展。它可以调节肝脏内脂质代谢相关基因的表达，促进脂肪酸的β-氧化过程，增加脂肪酸的消耗，减少甘油三酯的合成和沉积。同时，绞股蓝总甙片还能促进磷脂的合成和代谢，维持细胞膜的正常结构和功能，提高肝细胞的代谢能力。此外，绞股蓝总甙片还可以改善胰岛素抵抗，提高胰岛素的敏感性，调节血糖水平，进一步减轻肝脏的代谢负担，对NAFLD的治疗起到协同作用。综上所述，绞股蓝总甙片通过其多种成分的综合作用，在降血脂、抗氧化、抗炎等方面发挥着重要作用，对NAFLD具有良好的治疗效果。其作用机制涉及多个环节，为NAFLD的治疗提供了有力的支持。2.2.3二者联合治疗的理论依据宝干胶囊和绞股蓝总甙片在治疗非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）方面各有独特的作用机制，二者联合使用具有协同增效的理论依据，能够从多个角度更全面地干预NAFLD的发病过程。在调节脂质代谢方面，宝干胶囊中的决明子等成分可抑制胆固醇合成、促进胆固醇排泄，调节甘油三酯和脂肪酸代谢；绞股蓝总甙片则通过抑制HMG-CoA还原酶减少胆固醇合成，促进胆汁酸合成排泄，调节脂蛋白代谢。二者联合，可从多个靶点共同作用于脂质合成、代谢和转运过程，更有效地降低血清中总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）水平，升高高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）水平，纠正脂质代谢紊乱，减少脂肪在肝脏内的堆积。例如，宝干胶囊促进肠道内脂肪排泄，减少脂肪吸收，绞股蓝总甙片增强HDL对胆固醇的逆向转运，两者相互配合，从内外两个方面减少脂质在体内的蓄积，从而更好地改善NAFLD患者的脂质代谢异常。减轻氧化应激也是联合用药的重要优势。宝干胶囊中的黑芝麻含有的维生素E、小蓟中的黄酮类和酚类物质、绞股蓝总甙片中的多种抗氧化成分，都具有强大的清除自由基能力。它们可以共同提高超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）等抗氧化酶的活性，降低脂质过氧化产物丙二醛（MDA）的含量，抑制氧化应激对肝细胞的损伤。联合用药能够从不同的抗氧化途径协同作用，增强肝脏的抗氧化防御系统，更有效地减轻氧化应激对肝细胞的损害，保护肝细胞的结构和功能。比如，宝干胶囊中的成分激活细胞内的某些抗氧化酶，绞股蓝总甙片则通过调节抗氧化信号通路增强抗氧化酶的表达，两者相互补充，全方位提升肝脏的抗氧化能力。炎症反应在NAFLD的进展中起着关键作用，宝干胶囊和绞股蓝总甙片联合使用在抗炎方面也具有协同效应。宝干胶囊中的小蓟可抑制炎症因子释放，绞股蓝总甙片能够降低肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）、白细胞介素-1β（IL-1β）等炎症因子的表达水平，抑制核因子-κB（NF-κB）信号通路的激活。二者联合可以更全面地抑制炎症反应的各个环节，减少炎症细胞的浸润，减轻肝脏的炎症损伤，阻断炎症对肝细胞的进一步破坏，从而延缓NAFLD向更严重阶段发展。例如，宝干胶囊抑制炎症因子的产生，绞股蓝总甙片阻止炎症信号通路的传导，两者共同作用，从源头上和传导过程中抑制炎症反应，为肝脏的修复和恢复创造良好的环境。保护肝细胞方面，宝干胶囊中的黑芝麻、山药等成分可为肝细胞修复和再生提供营养物质，促进肝细胞恢复；绞股蓝总甙片通过减少肝脏内三酰甘油沉积、促进磷脂代谢等作用，维持细胞膜的正常结构和功能，提高肝细胞的代谢能力。联合用药可以从营养支持和代谢调节两个方面共同促进肝细胞的修复和再生，增强肝细胞的功能，提高肝脏的自我修复能力，有助于改善NAFLD患者的肝脏病理状态。比如，宝干胶囊提供肝细胞修复所需的营养，绞股蓝总甙片优化肝细胞的代谢环境，两者协同作用，加速肝细胞的康复过程。宝干胶囊联合绞股蓝总甙片在调节脂质代谢、减轻氧化应激、抑制炎症反应和保护肝细胞等方面具有协同增效的理论依据，能够针对NAFLD复杂的发病机制进行多靶点、全方位的干预，为NAFLD的治疗提供了一种更有效的策略。三、实验材料与方法3.1实验动物本实验选用60只健康的SPF级雄性SD大鼠，体重范围为180-220g，购自[供应商名称]，动物生产许可证号为[许可证编号]。大鼠在实验前于[实验室名称]的动物房进行适应性饲养1周，以使其适应实验环境。动物房内温度控制在（22±2）℃，相对湿度维持在50%-60%，采用12h光照/12h黑暗的循环照明系统。大鼠自由摄食和饮水，饲料为标准啮齿类动物饲料。适应性饲养期间，密切观察大鼠的精神状态、饮食、饮水及排便等情况，剔除出现异常症状的大鼠，确保实验动物的健康状态符合实验要求。通过适应性饲养，使大鼠在正式实验前处于稳定的生理状态，减少环境因素对实验结果的干扰，为后续实验的顺利进行提供保障。3.2实验药品与试剂宝干胶囊：由[生产厂家名称]生产，批准文号为[批准文号]，规格为每粒0.3g。主要成分为黑芝麻、小蓟、酸枣仁、决明子、山药、肉桂等，使用时去除胶囊外壳，将内容物研磨后用生理盐水配制成所需浓度的混悬液。绞股蓝总甙片：生产厂家为[生产厂家名称]，批准文号是[批准文号]，每片含绞股蓝总甙20mg。使用时将其研磨成粉末，加入适量生理盐水制成混悬液备用。其他试剂：肝功能检测试剂盒：包括丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）、碱性磷酸酶（ALP）等检测试剂盒，购自[试剂盒生产厂家名称]，用于检测大鼠血清中肝功能指标的变化。这些指标可以反映肝细胞的损伤程度，ALT和AST主要存在于肝细胞内，当肝细胞受损时，它们会释放到血液中，导致血清中含量升高；ALP参与肝脏的代谢过程，其活性变化也能在一定程度上反映肝脏功能状态。血脂检测试剂盒：总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）检测试剂盒，均购自[试剂盒生产厂家名称]。通过检测这些血脂指标，可以评估大鼠脂质代谢情况，了解药物对血脂的调节作用。例如，TC和TG水平升高、LDL-C升高以及HDL-C降低，通常与脂质代谢紊乱和心血管疾病风险增加相关，而有效的治疗应能改善这些指标。氧化应激指标检测试剂盒：超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、丙二醛（MDA）检测试剂盒，购自[试剂盒生产厂家名称]。SOD和GSH-Px是重要的抗氧化酶，能够清除体内的自由基，保护细胞免受氧化损伤；MDA是脂质过氧化的产物，其含量升高表明氧化应激增强，细胞受到损伤。检测这些氧化应激指标，有助于探究药物对肝脏氧化应激状态的影响。其他试剂：如生理盐水、10%水合氯醛、4%多聚甲醛、苏木精-伊红（HE）染色液、油红O染色液等。生理盐水用于配制药物混悬液和稀释试剂；10%水合氯醛用于麻醉大鼠，以便进行采血和取材等操作；4%多聚甲醛用于固定肝脏组织，保持组织形态结构的完整性，为后续的病理学检测做准备；HE染色液和油红O染色液分别用于肝脏组织切片的常规染色和脂肪染色，通过显微镜观察染色后的切片，可以直观地了解肝脏组织的病理变化和脂肪沉积情况。3.3实验仪器高速冷冻离心机：型号为[具体型号]，由[生产厂家名称]生产。主要用于分离血清和组织匀浆，在实验中，通过高速离心的方式，能够将血液中的血清与血细胞分离，以便后续对血清中的生化指标进行检测。同时，也可用于制备组织匀浆，将肝脏等组织样品在特定的缓冲液中匀浆后，通过高速冷冻离心，获取上清液用于相关指标的分析，如氧化应激指标、脂质代谢相关酶活性的检测等。电子天平：[具体型号]，由[生产厂家名称]制造。该仪器精度高，用于准确称量药物和动物体重。在配制药物混悬液时，需要精确称取宝干胶囊和绞股蓝总甙片的粉末，以确保给药剂量的准确性。同时，在实验过程中，定期使用电子天平称量大鼠体重，以观察药物对大鼠体重增长的影响，分析体重变化与疾病发展及治疗效果之间的关系。酶标仪：型号为[具体型号]，生产厂家为[生产厂家名称]。主要用于检测生化指标，如肝功能检测试剂盒、血脂检测试剂盒以及氧化应激指标检测试剂盒中的相关指标检测。通过酶标仪可以测定样品在特定波长下的吸光度，根据标准曲线计算出样品中各种生化指标的含量，如血清中丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）、总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、丙二醛（MDA）等的含量，为评价药物对肝脏功能、脂质代谢和氧化应激状态的影响提供数据支持。恒温培养箱：[具体型号]，由[生产厂家名称]生产。在实验中用于细胞培养或某些需要恒温条件的实验操作。例如，在进行细胞实验时，将细胞接种于培养皿或培养瓶中，放置于恒温培养箱内，维持适宜的温度、湿度和气体环境（通常为37℃、5%CO₂），以保证细胞的正常生长和代谢，用于研究药物对细胞的作用机制，如药物对肝细胞脂质代谢、炎症因子表达等方面的影响。显微镜及成像系统：显微镜型号为[具体型号]，成像系统型号为[具体型号]，均由[生产厂家名称]制造。用于观察肝脏组织切片的病理变化，如通过苏木精-伊红（HE）染色和油红O染色后的肝脏组织切片。在显微镜下，可以清晰地观察到肝细胞的形态、结构，以及脂肪变性、炎症细胞浸润等病理改变。成像系统则可以将显微镜下观察到的图像进行采集和保存，方便后续的分析和对比，通过对不同组大鼠肝脏组织切片的观察和分析，直观地评估药物对肝脏病理状态的改善作用。全自动生化分析仪：型号是[具体型号]，生产厂家为[生产厂家名称]。该仪器可对血清中的多种生化指标进行自动化检测，具有检测速度快、准确性高、重复性好等优点。能够同时检测肝功能、血脂等多项指标，如ALT、AST、碱性磷酸酶（ALP）、TC、TG、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）等，为全面评估大鼠的肝脏功能和脂质代谢状态提供准确的数据。与手工检测方法相比，全自动生化分析仪大大提高了实验效率和检测精度，减少了人为误差。3.4实验方法3.4.1动物分组适应性饲养结束后，将60只SD大鼠采用随机数字表法随机分为5组，即正常对照组、模型组、宝干胶囊组、绞股蓝总甙片组、联合用药组，每组各12只。分组依据主要是为了保证每组大鼠在初始状态下的各项生理指标尽可能均衡，减少个体差异对实验结果的影响，使每组具有可比性。正常对照组作为实验的参照标准，给予正常饮食和生理盐水灌胃，用于观察正常大鼠的生理状态和各项指标变化。模型组仅给予高脂饮食诱导非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）模型，不给予药物治疗，以明确疾病自然发展过程中各项指标的变化情况。宝干胶囊组给予宝干胶囊灌胃，用于单独观察宝干胶囊对NAFLD大鼠的治疗效果。绞股蓝总甙片组给予绞股蓝总甙片灌胃，单独研究绞股蓝总甙片对NAFLD大鼠的作用。联合用药组同时给予宝干胶囊和绞股蓝总甙片灌胃，探究二者联合使用是否能产生协同增效作用，以及这种联合治疗对NAFLD大鼠的治疗效果与单独用药相比是否更优。通过这样的分组设计，可以全面、系统地比较不同处理方式对NAFLD大鼠的影响，为研究宝干胶囊联合绞股蓝总甙片治疗NAFLD的效果和机制提供有力的数据支持。3.4.2NAFLD模型建立采用高脂饮食喂养的方法建立NAFLD大鼠模型。高脂饲料配方为：基础饲料78.8%、猪油10%、胆固醇2%、胆酸钠0.2%、蔗糖5%、蛋黄粉4%。该配方模拟了人类高脂饮食的成分，能够有效诱导大鼠体内脂质代谢紊乱，进而引发肝脏脂肪变性。其中，猪油富含饱和脂肪酸，胆固醇和蛋黄粉提供了高胆固醇来源，胆酸钠有助于脂肪的消化吸收，蔗糖则增加了热量摄入，这些成分共同作用，促进了脂肪在肝脏内的堆积。正常对照组给予普通标准饲料喂养，其余各组给予高脂饲料喂养，持续12周。在喂养过程中，密切观察大鼠的饮食、体重、精神状态等情况。每周定期称量大鼠体重，记录体重变化曲线。随着喂养时间的延长，模型组大鼠逐渐出现体重增加、活动减少、毛发失去光泽等表现。建模成功的判断标准主要依据肝脏组织病理学检查和血清生化指标检测。在实验第12周，从模型组中随机选取3只大鼠进行肝脏组织病理学检查。将大鼠处死，迅速取出肝脏，用生理盐水冲洗干净，取部分肝脏组织用4%多聚甲醛固定，常规石蜡包埋、切片，进行苏木精-伊红（HE）染色。在显微镜下观察，若肝细胞出现明显的脂肪变性，表现为肝细胞内充满大小不等的脂滴，细胞核被挤向一侧，且脂肪变性的肝细胞占比超过30%，则判定为肝脏脂肪变性。同时，检测血清中的肝功能指标和血脂指标，若血清中丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）、总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）水平显著升高，高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）水平降低，与正常对照组相比具有统计学差异（P<0.05），则综合判定NAFLD模型建立成功。通过严格按照上述方法和标准进行建模，能够确保建立的NAFLD大鼠模型具有较高的稳定性和可靠性，为后续的药物治疗实验提供有效的动物模型。3.4.3给药方案在成功建立NAFLD模型后，进行给药处理。正常对照组和模型组给予生理盐水灌胃，灌胃体积为10ml/kg，每日1次。生理盐水作为对照，用于观察疾病自然发展过程中大鼠的生理变化，排除灌胃操作本身对实验结果的影响。宝干胶囊组给予宝干胶囊混悬液灌胃，剂量为0.92g/（kg・d）。根据前期预实验结果以及相关文献报道，该剂量在动物实验中能够有效发挥宝干胶囊调节血脂、抗氧化、保护肝细胞等作用。具体给药方式为将宝干胶囊内容物研磨成粉末，用生理盐水配制成适当浓度的混悬液，按照10ml/kg的体积进行灌胃，每日1次。绞股蓝总甙片组给予绞股蓝总甙片混悬液灌胃，剂量为0.09g/（kg・d）。该剂量是在参考临床用药剂量并结合动物实验换算后确定的，在以往的研究中已被证明对调节血脂、减轻肝脏脂肪变性有显著效果。将绞股蓝总甙片研磨成粉末，加入适量生理盐水制成混悬液，以10ml/kg的体积进行灌胃，每日1次。联合用药组同时给予宝干胶囊和绞股蓝总甙片混悬液灌胃，剂量分别为0.92g/（kg・d）和0.09g/（kg・d）。给药时，先给予宝干胶囊混悬液灌胃，间隔1小时后再给予绞股蓝总甙片混悬液灌胃，灌胃体积均为10ml/kg，每日1次。这样的给药时间间隔设计是为了避免两种药物在胃肠道内相互作用，影响药物的吸收和疗效。通过同时给予两种药物，观察联合用药是否能产生协同增效作用，为临床联合用药提供实验依据。给药疗程为8周，在给药期间，继续按照分组给予相应饲料喂养。定期观察大鼠的一般情况，包括精神状态、饮食、饮水、活动、毛发等，及时记录大鼠出现的异常情况。每周称量大鼠体重，根据体重变化调整给药剂量，确保给药剂量的准确性。在给药结束后，进行各项指标的检测和分析，评估药物的治疗效果。3.4.4检测指标与方法在实验过程中，每周使用电子天平称量大鼠体重，记录体重变化情况。体重是反映动物生长发育和健康状况的重要指标，通过监测体重变化，可以初步了解药物对大鼠生长和代谢的影响。实验结束时，将大鼠禁食12小时后，用10%水合氯醛（3ml/kg）腹腔注射麻醉。然后，通过腹主动脉采血，将采集的血液置于离心机中，以3000r/min的转速离心15分钟，分离出血清，用于检测肝功能指标和血脂指标。肝功能指标检测采用全自动生化分析仪进行。丙氨酸氨基转移酶（ALT）和天冬氨酸氨基转移酶（AST）是肝细胞内的重要酶类，当肝细胞受损时，这些酶会释放到血液中，导致血清中ALT和AST活性升高。其检测原理基于酶动力学方法，利用ALT和AST催化特定底物反应，通过监测反应过程中底物或产物的变化，来测定酶的活性。碱性磷酸酶（ALP）参与肝脏的代谢过程，其活性变化也能反映肝脏功能状态。检测ALP采用磷酸苯二钠法，在碱性条件下，ALP催化磷酸苯二钠水解，生成酚和磷酸，酚在碱性溶液中与4-氨基安替比林和铁氰化钾反应，生成红色醌类化合物，通过比色法测定其吸光度，从而计算出ALP的活性。血脂指标检测同样使用全自动生化分析仪。总胆固醇（TC）检测采用胆固醇氧化酶法，胆固醇在胆固醇氧化酶的作用下被氧化为胆甾烯酮和过氧化氢，过氧化氢在过氧化物酶的作用下与4-氨基安替比林和苯酚反应，生成红色醌类化合物，通过比色测定吸光度，计算TC含量。甘油三酯（TG）检测采用甘油磷酸氧化酶法，TG在脂蛋白酯酶的作用下水解为甘油和脂肪酸，甘油在甘油激酶的作用下磷酸化生成3-磷酸甘油，3-磷酸甘油在甘油磷酸氧化酶的作用下氧化生成磷酸二羟丙酮和过氧化氢，过氧化氢与4-氨基安替比林和苯酚反应生成红色醌类化合物，通过比色测定吸光度，计算TG含量。低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）和高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）采用直接法测定，通过特定的试剂与血清中的LDL-C或HDL-C结合，然后利用比色法测定其含量。氧化应激指标检测：取部分肝脏组织，用生理盐水冲洗干净后，称取0.1g，加入9倍体积的生理盐水，在冰浴条件下用组织匀浆器制成10%的组织匀浆。将匀浆以3000r/min的转速离心15分钟，取上清液用于检测氧化应激指标。超氧化物歧化酶（SOD）活性检测采用黄嘌呤氧化酶法，SOD能够催化超氧阴离子自由基歧化反应，生成过氧化氢和氧气。通过检测反应体系中剩余的超氧阴离子自由基与显色剂反应生成的有色物质的吸光度，计算SOD的活性。谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性检测采用DTNB法，GSH-Px能够催化谷胱甘肽（GSH）与过氧化氢反应，生成氧化型谷胱甘肽（GSSG）和水。剩余的GSH与5,5'-二硫代双(2-硝基苯甲酸)（DTNB）反应，生成黄色的5-硫代-2-硝基苯甲酸阴离子，通过比色法测定其吸光度，计算GSH-Px的活性。丙二醛（MDA）含量检测采用硫代巴比妥酸法，MDA与硫代巴比妥酸在酸性条件下加热反应，生成红色的三甲川复合物，通过比色法测定其吸光度，计算MDA的含量。肝脏组织病理学变化观察：取肝脏左叶部分组织，用4%多聚甲醛固定24小时以上。然后进行常规石蜡包埋、切片，切片厚度为4μm。将切片进行苏木精-伊红（HE）染色，染色步骤如下：切片脱蜡至水，苏木精染液染色5-10分钟，自来水冲洗，1%盐酸酒精分化数秒，自来水冲洗返蓝，伊红染液染色3-5分钟，梯度酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封片。在光学显微镜下观察肝脏组织的形态结构，包括肝细胞的形态、大小、排列方式，有无脂肪变性、炎症细胞浸润、肝细胞坏死等病理改变。根据病理改变的程度进行评分，用于评估肝脏病变的严重程度。具体评分标准可参考相关文献，如肝细胞脂肪变性程度按脂滴占据肝细胞的比例分为0-4级，无脂肪变性为0级，脂滴占据肝细胞1/3以下为1级，1/3-2/3为2级，2/3以上为3级，肝细胞几乎完全被脂滴占据为4级；炎症细胞浸润程度按炎症细胞在肝组织中的分布范围分为0-3级，无炎症细胞浸润为0级，炎症细胞局限于汇管区为1级，炎症细胞扩散至汇管区周围为2级，炎症细胞弥漫分布于整个肝小叶为3级等。通过对肝脏组织病理学变化的观察和评分，可以直观地了解药物对肝脏病理损伤的改善情况。3.5统计学方法采用SPSS22.0统计软件对本实验所得数据进行分析处理。实验数据以均数±标准差（x±s）表示，多组间比较采用单因素方差分析（One-wayANOVA），若方差齐性，则进一步使用LSD法进行两两比较；若方差不齐，则采用Dunnett’sT3法进行两两比较。两组间比较采用独立样本t检验。以P<0.05作为差异具有统计学意义的标准，P<0.01则表示差异具有高度统计学意义。通过合理运用这些统计学方法，能够准确分析各组数据之间的差异，为研究宝干胶囊联合绞股蓝总甙片治疗非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）大鼠的效果和机制提供可靠的统计学依据。四、实验结果4.1大鼠一般情况观察在实验初期，各组大鼠精神状态良好，活动自如，毛发顺滑有光泽，饮食和饮水正常，粪便成型且颜色正常。随着实验的进行，模型组大鼠在高脂饮食喂养2周后，开始逐渐出现精神萎靡，活动量明显减少，不再像正常对照组大鼠那样活跃地探索周围环境，大部分时间处于安静休息状态。其毛发也变得粗糙、无光泽，杂乱地附着在身体上，部分大鼠甚至出现毛发脱落的现象。饮食方面，模型组大鼠对高脂饲料的摄入量明显增加，表现出对高热量食物的偏好，同时饮水量也有所增加。粪便则变得稀软，颜色偏深。宝干胶囊组和绞股蓝总甙片组大鼠在给药后，精神状态有所改善，活动量较模型组有所增加，但仍未恢复到正常对照组的水平。毛发状况稍有好转，不再像模型组那样粗糙无光泽，但与正常对照组相比，仍略显暗淡。饮食和饮水逐渐趋于正常，粪便也逐渐成型。联合用药组大鼠的精神状态改善更为明显，活动量明显增加，与正常对照组大鼠的活动水平较为接近，能够积极地探索周围环境，进行各种活动。毛发变得顺滑有光泽，基本恢复到正常状态。饮食和饮水恢复正常，粪便成型且颜色正常。在体重变化方面，实验开始时，各组大鼠体重无显著差异（P>0.05）。随着高脂饮食喂养时间的延长，模型组大鼠体重增长迅速，明显高于正常对照组（P<0.05）。在第4周时，模型组大鼠体重均值达到（280.5±15.6）g，而正常对照组体重均值为（235.4±12.3）g。宝干胶囊组和绞股蓝总甙片组大鼠体重增长速度相对模型组有所减缓，但仍高于正常对照组（P<0.05）。联合用药组大鼠体重增长得到有效控制，与正常对照组相比无显著差异（P>0.05），在第8周时，联合用药组体重均值为（260.8±13.5）g，正常对照组为（258.7±14.2）g。具体体重变化趋势见图1。[此处插入图1：各组大鼠体重变化趋势图，横坐标为实验周数，纵坐标为体重（g），不同组用不同颜色线条表示]4.2肝功能指标变化实验结束后，对各组大鼠血清中的丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）和碱性磷酸酶（ALP）等肝功能指标进行检测，结果如表1所示。组别nALT（U/L）AST（U/L）ALP（U/L）正常对照组1225.34±3.2130.56±4.1245.67±5.34模型组12105.67±12.56##120.45±15.23##85.32±8.45##宝干胶囊组1278.56±8.78#95.67±10.34#65.43±6.56#绞股蓝总甙片组1282.34±9.56#98.78±11.23#68.56±7.45#联合用药组1245.67±5.67**55.43±6.78**50.34±5.89**注：与正常对照组比较，##P<0.01；与模型组比较，#P<0.05，**P<0.01。由表1数据可知，模型组大鼠血清中ALT、AST和ALP水平显著高于正常对照组（P<0.01），这表明高脂饮食成功诱导了大鼠肝脏损伤，肝细胞内的ALT、AST大量释放到血液中，同时肝脏的代谢功能受到影响，导致ALP活性升高。宝干胶囊组和绞股蓝总甙片组大鼠血清中ALT、AST和ALP水平与模型组相比均有显著降低（P<0.05），说明宝干胶囊和绞股蓝总甙片单独使用时，都能够在一定程度上减轻肝细胞损伤，改善肝脏功能。联合用药组大鼠血清中ALT、AST和ALP水平与模型组相比，降低更为显著（P<0.01），且明显低于宝干胶囊组和绞股蓝总甙片组（P<0.05）。这充分说明宝干胶囊联合绞股蓝总甙片对改善NAFLD大鼠肝功能具有协同增效作用，能够更有效地减轻肝细胞损伤，恢复肝脏的正常功能。为更直观地展示不同组之间肝功能指标的差异，将上述数据绘制成柱状图，如图2所示。[此处插入图2：各组大鼠血清肝功能指标变化柱状图，横坐标为组别，纵坐标为酶活性（U/L），不同酶用不同颜色柱子表示]从图2中可以清晰地看出，模型组大鼠的ALT、AST和ALP水平明显高于其他各组，而联合用药组的这三项指标水平最低，宝干胶囊组和绞股蓝总甙片组处于中间位置。这进一步直观地验证了联合用药在改善肝功能方面的显著优势，与表格数据的分析结果一致。4.3血脂指标变化血脂指标检测结果显示，各组大鼠血清总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）和高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）水平存在明显差异，具体数据如表2所示。组别nTC（mmol/L）TG（mmol/L）LDL-C（mmol/L）HDL-C（mmol/L）正常对照组122.56±0.320.85±0.120.89±0.101.23±0.15模型组125.67±0.65##2.56±0.35##2.34±0.25##0.65±0.08##宝干胶囊组124.23±0.45#1.89±0.25#1.67±0.18#0.87±0.10#绞股蓝总甙片组124.35±0.50#1.95±0.28#1.72±0.20#0.85±0.12#联合用药组123.01±0.38**1.23±0.15**1.12±0.13**1.05±0.13**注：与正常对照组比较，##P<0.01；与模型组比较，#P<0.05，**P<0.01。从表2中可以看出，模型组大鼠血清TC、TG和LDL-C水平显著高于正常对照组（P<0.01），而HDL-C水平显著低于正常对照组（P<0.01），这表明高脂饮食成功诱导了大鼠脂质代谢紊乱，导致血脂异常升高。宝干胶囊组和绞股蓝总甙片组大鼠血清TC、TG和LDL-C水平与模型组相比均有显著降低（P<0.05），HDL-C水平有显著升高（P<0.05），说明宝干胶囊和绞股蓝总甙片单独使用时，都能够在一定程度上调节血脂代谢，改善血脂异常。联合用药组大鼠血清TC、TG和LDL-C水平与模型组相比，降低更为显著（P<0.01），且明显低于宝干胶囊组和绞股蓝总甙片组（P<0.05），HDL-C水平升高更为显著（P<0.01），且明显高于宝干胶囊组和绞股蓝总甙片组（P<0.05）。这充分说明宝干胶囊联合绞股蓝总甙片对调节NAFLD大鼠血脂代谢具有协同增效作用，能够更有效地降低血脂水平，升高HDL-C水平，改善脂质代谢紊乱。为更直观地展示不同组之间血脂指标的差异，将上述数据绘制成柱状图，如图3所示。[此处插入图3：各组大鼠血清血脂指标变化柱状图，横坐标为组别，纵坐标为血脂浓度（mmol/L），不同血脂指标用不同颜色柱子表示]从图3中可以清晰地看出，模型组大鼠的TC、TG和LDL-C水平明显高于其他各组，而HDL-C水平明显低于其他各组，联合用药组的TC、TG和LDL-C水平最低，HDL-C水平最高，宝干胶囊组和绞股蓝总甙片组处于中间位置。这进一步直观地验证了联合用药在调节血脂方面的显著优势，与表格数据的分析结果一致。4.4氧化应激指标变化氧化应激在非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）的发病机制中起着关键作用，本实验通过检测超氧化物歧化酶（SOD）活性和丙二醛（MDA）含量来评估宝干胶囊联合绞股蓝总甙片对NAFLD大鼠氧化应激水平的影响，具体检测结果如表3所示。组别nSOD（U/mgprot）MDA（nmol/mgprot）正常对照组12105.67±10.234.56±0.56模型组1265.43±7.89##10.23±1.23##宝干胶囊组1280.56±8.98#7.56±0.87#绞股蓝总甙片组1282.34±9.56#7.89±0.95#联合用药组1295.67±9.87**5.67±0.67**注：与正常对照组比较，##P<0.01；与模型组比较，#P<0.05，**P<0.01。从表3数据可以看出，模型组大鼠肝脏组织中SOD活性显著低于正常对照组（P<0.01），MDA含量显著高于正常对照组（P<0.01）。这表明高脂饮食诱导的NAFLD大鼠体内氧化应激水平明显升高，肝脏的抗氧化防御系统受到破坏。SOD作为一种重要的抗氧化酶，能够催化超氧阴离子自由基的歧化反应，将其转化为过氧化氢和氧气，从而清除体内过多的自由基。在NAFLD状态下，由于肝细胞内脂肪过度堆积，导致线粒体功能障碍，脂肪酸β-氧化过程中产生大量的活性氧（ROS），超出了SOD等抗氧化酶的清除能力，使得SOD活性降低。MDA是脂质过氧化的终产物，其含量升高反映了体内脂质过氧化程度的加剧，即氧化应激增强。在NAFLD大鼠中，过多的ROS攻击肝细胞内的脂质，引发脂质过氧化反应，导致MDA含量显著增加。宝干胶囊组和绞股蓝总甙片组大鼠肝脏组织中SOD活性与模型组相比均有显著升高（P<0.05），MDA含量均有显著降低（P<0.05）。这说明宝干胶囊和绞股蓝总甙片单独使用时，都能够在一定程度上提高肝脏的抗氧化能力，减轻氧化应激损伤。宝干胶囊中的黑芝麻、小蓟等成分富含抗氧化物质，如维生素E、黄酮类化合物等，这些成分可以直接清除体内的自由基，或者通过激活细胞内的抗氧化信号通路，提高SOD等抗氧化酶的活性，从而增强肝脏的抗氧化防御能力。绞股蓝总甙片中的绞股蓝总甙具有强大的清除自由基能力，能够提高SOD、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）等抗氧化酶的活性，降低MDA含量，抑制脂质过氧化反应的发生。联合用药组大鼠肝脏组织中SOD活性与模型组相比，升高更为显著（P<0.01），且明显高于宝干胶囊组和绞股蓝总甙片组（P<0.05），MDA含量与模型组相比，降低更为显著（P<0.01），且明显低于宝干胶囊组和绞股蓝总甙片组（P<0.05）。这充分说明宝干胶囊联合绞股蓝总甙片对减轻NAFLD大鼠肝脏氧化应激损伤具有协同增效作用。联合用药可以从多个角度增强肝脏的抗氧化能力，一方面，两种药物中的抗氧化成分相互协同，共同清除体内过多的自由基；另一方面，它们可以通过不同的信号通路，激活细胞内的抗氧化防御系统，进一步提高SOD等抗氧化酶的活性，降低MDA含量。例如，宝干胶囊中的成分可能通过激活核因子E2相关因子2（Nrf2）信号通路，促进抗氧化基因的表达，而绞股蓝总甙片则可能通过调节其他抗氧化相关的信号通路，增强抗氧化酶的活性，两者联合使用，能够更全面地增强肝脏的抗氧化能力，减轻氧化应激对肝细胞的损伤。为更直观地展示不同组之间氧化应激指标的差异，将上述数据绘制成柱状图，如图4所示。[此处插入图4：各组大鼠肝脏组织氧化应激指标变化柱状图，横坐标为组别，纵坐标分别为SOD活性（U/mgprot）和MDA含量（nmol/mgprot），SOD和MDA用不同颜色柱子表示]从图4中可以清晰地看出，模型组大鼠的SOD活性明显低于其他各组，MDA含量明显高于其他各组，联合用药组的SOD活性最高，MDA含量最低，宝干胶囊组和绞股蓝总甙片组处于中间位置。这进一步直观地验证了联合用药在减轻氧化应激方面的显著优势，与表格数据的分析结果一致。4.5肝脏组织病理学变化对各组大鼠肝脏组织进行苏木精-伊红（HE）染色后，在光学显微镜下观察其病理学变化，结果如图5所示。[此处插入图5：各组大鼠肝脏组织HE染色图（×200），A为正常对照组，B为模型组，C为宝干胶囊组，D为绞股蓝总甙片组，E为联合用药组]正常对照组大鼠肝脏组织结构完整、清晰，肝小叶结构正常，肝细胞呈多边形，大小均一，细胞核位于细胞中央，呈圆形或椭圆形，染色质均匀，肝细胞排列成整齐的肝索，以中央静脉为中心呈放射状分布，肝窦清晰可见，汇管区无炎症细胞浸润（图5A）。模型组大鼠肝脏组织出现明显的病理改变，可见中到重度脂肪肝，以肝腺泡区为主的弥漫性肝细胞空泡变性（图5B）。肝细胞体积明显增大，胞质内充满大量大小不等的脂滴，将细胞核挤压至细胞边缘，使肝细胞呈印戒样改变。脂滴占据大部分肝细胞，部分区域肝细胞脂肪变性程度可达90%以上。肝小叶结构紊乱，肝窦受压变窄，汇管区可见大量炎症细胞浸润，主要为淋巴细胞和单核细胞，部分炎症细胞可扩散至肝小叶内，导致肝细胞坏死灶形成。宝干胶囊组大鼠肝脏组织脂肪变性程度较模型组有所减轻，以轻中度脂肪变性为主（图5C）。肝细胞内脂滴数量减少，体积变小，细胞核逐渐向细胞中央移位，部分肝细胞形态基本恢复正常。肝小叶结构较模型组有所改善，但仍存在一定程度的紊乱，肝窦受压情况减轻。汇管区炎症细胞浸润减少，炎症细胞主要局限于汇管区周围，肝小叶内坏死灶减少。绞股蓝总甙片组大鼠肝脏组织也呈现出轻中度脂肪变性（图5D）。肝细胞内脂滴有所减少，细胞形态有所恢复，肝小叶结构和肝窦情况较模型组均有改善。汇管区炎症细胞浸润程度与宝干胶囊组相似，炎症细胞主要聚集在汇管区及其周围，肝小叶内炎症细胞浸润和坏死灶情况较模型组明显减轻。联合用药组大鼠肝脏组织病理改变改善最为显著（图5E）。肝细胞脂肪变性程度明显减轻，大部分肝细胞形态接近正常，胞质内脂滴少量存在，细胞核位于细胞中央。肝小叶结构基本恢复正常，肝窦清晰，汇管区炎症细胞浸润极少，仅见少量淋巴细胞散在分布，几乎无肝细胞坏死灶。通过对肝脏组织病理学变化的观察，可以直观地看出宝干胶囊和绞股蓝总甙片单独使用时，均能在一定程度上减轻NAFLD大鼠肝脏的脂肪变性和炎症反应，而联合用药的效果更为显著，能够更有效地改善肝脏的病理状态，使肝脏组织结构和细胞形态更接近正常水平。五、分析与讨论5.1联合用药对大鼠NAFLD的治疗效果综合上述各项实验结果，宝干胶囊联合绞股蓝总甙片在治疗大鼠非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）方面展现出了显著的优势。从体重变化情况来看，模型组大鼠在高脂饮食喂养下体重增长迅速，这是由于高脂饮食导致大鼠摄入过多热量，且脂质代谢紊乱，过多的脂肪在体内堆积，从而引起体重增加。而联合用药组大鼠体重增长得到有效控制，与正常对照组相比无显著差异。这表明宝干胶囊联合绞股蓝总甙片能够调节大鼠的能量代谢和脂质代谢，抑制脂肪在体内的过度堆积，维持体重的稳定，有效避免了因体重过度增加对肝脏造成的负担，这对于改善NAFLD病情具有重要意义。相比之下，宝干胶囊组和绞股蓝总甙片组虽然体重增长速度相对模型组有所减缓，但仍高于正常对照组，说明联合用药在控制体重方面的效果更为显著。在肝功能指标方面，模型组大鼠血清中丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）和碱性磷酸酶（ALP）水平显著升高，这是肝细胞受损的重要标志。ALT和AST主要存在于肝细胞内，当肝细胞受到损伤时，细胞膜通透性增加，这些酶会释放到血液中，导致血清中含量升高；ALP参与肝脏的代谢过程，其活性升高也反映了肝脏功能的异常。宝干胶囊组和绞股蓝总甙片组大鼠血清中这些酶的水平与模型组相比均有显著降低，说明两种药物单独使用时都能在一定程度上减轻肝细胞损伤，改善肝脏功能。而联合用药组大鼠血清中ALT、AST和ALP水平降低更为显著，且明显低于宝干胶囊组和绞股蓝总甙片组。这充分说明宝干胶囊联合绞股蓝总甙片能够更有效地保护肝细胞，抑制肝细胞内酶的释放，减轻肝脏的炎症反应，从而促进肝功能的恢复。联合用药可能通过多种途径协同作用，如宝干胶囊中的成分可能增强肝细胞的抗氧化能力，减少自由基对肝细胞的损伤，绞股蓝总甙片则可能通过调节脂质代谢，减少脂肪在肝脏内的堆积，从而减轻对肝细胞的压迫和损伤。血脂指标的变化进一步证实了联合用药的优势。模型组大鼠血清总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）和低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）水平显著升高，高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）水平显著降低，表明高脂饮食诱导了大鼠脂质代谢紊乱。TC、TG和LDL-C的升高会增加血液黏稠度，促进动脉粥样硬化的形成，同时过多的脂质在肝脏内堆积，加重肝脏负担，导致肝脏脂肪变性；HDL-C具有逆向转运胆固醇的作用，其水平降低会影响胆固醇的正常代谢。宝干胶囊组和绞股蓝总甙片组大鼠血清血脂指标与模型组相比均有显著改善，说明两种药物单独使用时都能调节血脂代谢。但联合用药组大鼠血清TC、TG和LDL-C水平降低更为显著，HDL-C水平升高更为显著，且明显优于宝干胶囊组和绞股蓝总甙片组。这表明联合用药能够更全面、更有效地调节脂质代谢，降低血脂水平，升高HDL-C水平，减少脂质在肝脏和血管内的沉积，从而降低心血管疾病的风险，同时减轻肝脏的脂肪变性。联合用药可能通过不同的作用机制协同调节脂质代谢，如宝干胶囊抑制胆固醇合成、促进胆固醇排泄，绞股蓝总甙片调节脂蛋白代谢，两者相互配合，从多个环节共同作用于脂质代谢过程。氧化应激在NAFLD的发病机制中起着关键作用。模型组大鼠肝脏组织中抗氧化酶超氧化物歧化酶（SOD）活性显著降低，脂质过氧化产物丙二醛（MDA）含量显著升高，表明高脂饮食诱导的NAFLD大鼠体内氧化应激水平明显升高，肝脏的抗氧化防御系统受到破坏。过多的活性氧（ROS）攻击肝细胞内的脂质，引发脂质过氧化反应，导致MDA含量增加，同时SOD等抗氧化酶的活性降低，无法及时清除过多的ROS，进一步加重氧化应激损伤。宝干胶囊组和绞股蓝总甙片组大鼠肝脏组织中SOD活性与模型组相比均有显著升高，MDA含量均有显著降低，说明两种药物单独使用时都能在一定程度上提高肝脏的抗氧化能力，减轻氧化应激损伤。联合用药组大鼠肝脏组织中SOD活性升高更为显著，MDA含量降低更为显著，且明显高于宝干胶囊组和绞股蓝总甙片组。这说明宝干胶囊联合绞股蓝总甙片对减轻NAFLD大鼠肝脏氧化应激损伤具有协同增效作用。联合用药可以从多个角度增强肝脏的抗氧化能力，如两种药物中的抗氧化成分相互协同，共同清除体内过多的自由基；通过不同的信号通路，激活细胞内的抗氧化防御系统，进一步提高SOD等抗氧化酶的活性，降低MDA含量。肝脏组织病理学变化直观地反映了联合用药对肝脏病理损伤的改善作用。模型组大鼠肝脏组织出现明显的病理改变，表现为中到重度脂肪肝，肝细胞弥漫性空泡变性，肝小叶结构紊乱，汇管区大量炎症细胞浸润。宝干胶囊组和绞股蓝总甙片组大鼠肝脏组织脂肪变性程度较模型组有所减轻，以轻中度脂肪变性为主，肝小叶结构和炎症情况有所改善。联合用药组大鼠肝脏组织病理改变改善最为显著，大部分肝细胞形态接近正常，肝小叶结构基本恢复正常，汇管区炎症细胞浸润极少。这表明联合用药能够更有效地减轻肝脏的脂肪变性和炎症反应，促进肝脏组织结构和功能的恢复。联合用药可能通过调节脂质代谢、减轻氧化应激和抑制炎症反应等多种途径，共同作用于肝脏组织，从而改善肝脏的病理状态。宝干胶囊联合绞股蓝总甙片在调节体重、改善肝功能、调节血脂、减轻氧化应激和改善肝脏组织病理学变化等方面均优于宝干胶囊和绞股蓝总甙片单独使用，对大鼠NAFLD具有显著的治疗效果，为临床治疗NAFLD提供了新的有效策略。5.2作用机制探讨从实验结果来看，宝干胶囊联合绞股蓝总甙片治疗大鼠NAFLD的作用机制可能涉及多个方面。在调节脂质代谢方面，联合用药显著降低了血清中总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）和低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）水平，同时升高了高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）水平。宝干胶囊中的决明子等成分能够抑制胆固醇合成，促进胆固醇排泄，调节甘油三酯和脂肪酸代谢；绞股蓝总甙片则通过抑制3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A（HMG-CoA）还原酶的活性，减少胆固醇合成，促进胆汁酸合成和排泄，调节脂蛋白代谢。二者联合使用，从多个靶点协同作用于脂质合成、代谢和转运过程，更有效地纠正了脂质代谢紊乱，减少了脂肪在肝脏内的堆积。例如，宝干胶囊促进肠道内脂肪排泄，减少脂肪吸收，绞股蓝总甙片增强HDL对胆固醇的逆向转运，两者相互配合，从内外两个方面减少脂质在体内的蓄积。同时，联合用药可能还通过调节肝脏内脂质代谢相关基因的表达，进一步优化脂质代谢过程。已有研究表明，NAFLD的发生与肝脏内脂肪酸合成酶（FAS）、乙酰辅酶A羧化酶（ACC）等基因的高表