非洲猪瘟快速检测技术操作流程

非洲猪瘟（ASF）是由非洲猪瘟病毒引起的急性烈性传染病，对生猪产业危害巨大。快速、准确的现场检测是疫情早发现、早处置的核心环节。本文结合行业标准与实践经验，梳理非洲猪瘟病毒抗原快速检测（以胶体金免疫层析法为例）的标准化操作流程，为基层防疫、养殖场自检等场景提供实用指引。一、检测前准备（一）试剂与器材准备1.检测试剂盒：选用经农业农村部批准的非洲猪瘟病毒抗原快速检测试剂盒（胶体金法或免疫层析法），确认试剂盒在有效期内、内包装无破损霉变。试剂盒通常包含检测卡、样本稀释液（或保存液）、滴管等组件，部分需额外配套采样工具。2.采样工具：组织样本：灭菌手术刀、镊子、含保存液的采样管（容量5-10mL，保存液多为磷酸盐缓冲液或专用病毒保存液）。拭子样本：无菌鼻咽拭子、肛拭子（独立包装）、含保存液的采样管。3.防护与消毒用品：一次性医用橡胶手套、防护服、N95口罩、护目镜；75%医用酒精、含氯消毒剂（如500mg/L次氯酸钠溶液）、医用纱布。4.辅助器材：生物安全柜（或洁净操作台）、计时器、记号笔、样本登记本。（二）环境与人员准备1.环境要求：选择通风良好、光线充足的室内区域，温度20-25℃、湿度40%-60%。若处理样本（如研磨组织），需在生物安全柜内操作，提前用75%酒精擦拭柜内表面，开启紫外灯照射30分钟（操作前关闭）。2.人员要求：检测人员需熟悉非洲猪瘟防控知识，穿戴好防护装备，操作前用肥皂或手消液清洁双手，避免化妆品、食物残渣污染样本。二、样本采集（一）组织样本采集（适用于濒死/死亡猪只）1.样本选择：优先采集脾脏、颌下淋巴结、扁桃体等组织（病毒载量高）；猪只死亡后24小时内采样，超过48小时建议改用拭子或全血样本。2.操作步骤：碘伏消毒采样部位皮肤，灭菌手术刀切开皮肤，无菌镊子夹取约2g组织块（如脾脏边缘或淋巴结完整组织）。迅速将组织块放入含5mL保存液的采样管中，旋紧管盖，用研磨棒充分研磨（或振荡10-15次），静置10分钟待病毒释放。（二）拭子样本采集（适用于活体猪只）1.鼻咽拭子：将无菌拭子深入猪只鼻腔3-5cm（约拭子杆1/3长度），旋转3-5圈后取出，立即插入含保存液的采样管中，折断拭子杆（保留浸入保存液部分），旋紧管盖，振荡5-10次。2.肛拭子：将拭子深入肛门2-3cm，旋转3-5圈后取出，后续操作同鼻咽拭子。*注意*：每只猪使用独立拭子，避免交叉污染；猪只极度应激时，可暂缓采样或改用其他样本类型。三、检测操作流程（一）样本处理组织匀浆样本：静置后，用滴管吸取上层清亮液体（避免底部组织残渣），作为待检样本。拭子样本：振荡后，直接吸取采样管内液体（无需离心或过滤）。（二）加样与孵育1.检测卡准备：取出检测卡，平放在水平台面上，确认检测卡无受潮、破损，观察质控线（C线）和检测线（T线）区域是否干净。2.加样操作：用一次性滴管吸取待检样本，在检测卡的加样孔（标注“S”或“Sample”）中滴加3-4滴（约80-100μL，以试剂盒说明书为准），同时启动计时器。3.孵育过程：将检测卡置于室温（20-30℃）环境下，避免阳光直射或风扇直吹，静置15-20分钟（不同试剂盒孵育时间可能为10-25分钟，需严格遵循说明书）。四、结果判读与处置（一）结果判定阴性：仅质控线（C线）出现一条清晰的紫红色条带，检测线（T线）无条带，表明样本中未检出非洲猪瘟病毒抗原。阳性：质控线（C线）和检测线（T线）均出现紫红色条带（T线颜色可深可浅，只要清晰可见），提示样本中存在病毒抗原。无效：质控线（C线）无条带，无论检测线是否显色，均判定检测无效，需重新采样并更换检测卡复检。（二）后续处置1.阳性样本：立即向当地农业农村部门报告，同步封存样本及检测卡，待官方机构复核；对采样工具、检测卡等按医疗废物处理（高压灭菌或焚烧），污染区域用1000mg/L含氯消毒剂消毒30分钟。2.阴性样本：若为活体猪只检测，采样工具、检测卡装入医疗废物袋规范处置；若为死亡猪只组织样本，剩余组织需无害化处理（焚烧或深埋）。五、注意事项（一）试剂管理试剂盒需2-8℃冷藏保存，避免冷冻（冷冻会破坏胶体金结构）或高温（>30℃易导致试剂失活）。使用前需将试剂盒平衡至室温（放置15-30分钟），避免温度差异影响检测灵敏度。（二）操作细节全程佩戴手套，避免手指接触检测卡加样孔或样本滴头，防止污染。加样时滴管需垂直悬空，避免触碰检测卡，滴加体积需准确（过多易导致液体溢出，过少可能检测失败）。不同样本的检测卡不可混用，一份样本对应一张检测卡，避免交叉污染。（三）生物安全所有接触过样本的器材（采样管、拭子、检测卡等）均视为感染性废物，需经高压灭菌（121℃，30分钟）或焚烧处理，严禁随意丢弃。若样本泄漏，立即用含氯消毒剂（1000mg/L）覆盖污染区域，作用30分钟后清理，同时更换污染的防护装备。（四）结果验证若检测结果存疑（如T线显色极浅、背景色干扰明显），可重新采集样本，换用不同品牌试剂盒复检；必要时送县级以上动物