小白菊内酯改善银屑病样皮肤炎症的机制与经皮给药系统构建探究

小白菊内酯改善银屑病样皮肤炎症的机制与经皮给药系统构建探究一、引言1.1研究背景银屑病是一种常见的慢性炎症性皮肤病，在全球范围内影响着约2%-3%的人口，我国银屑病患者数量也较为庞大，给患者的生活质量和心理健康带来了严重影响。其主要特征包括皮肤红斑、鳞屑、瘙痒等症状，不仅损害皮肤外观，还可能引发关节炎、心血管疾病、代谢综合征等多种并发症，对患者的身体健康造成全方位的威胁。例如，关节型银屑病可导致关节疼痛、肿胀和功能障碍，严重影响患者的活动能力；与银屑病相关的心血管疾病风险增加，使得患者面临更高的心脏病发作和中风风险。目前，银屑病的治疗方法众多，包括外用药物、光疗、系统药物治疗以及新兴的生物制剂治疗等。外用药物如糖皮质激素、维生素D3衍生物等，虽能在一定程度上缓解轻度银屑病症状，但长期使用可能引发皮肤萎缩、色素沉着等不良反应；光疗利用紫外线照射皮肤，可改善病情，但存在皮肤晒伤、老化及增加皮肤癌风险等问题；传统系统药物如甲氨蝶呤、环孢素等，虽对中重度银屑病有一定疗效，但因严重的肝肾毒性、骨髓抑制等副作用，限制了其长期使用；生物制剂虽靶向性强、疗效显著，但价格昂贵，且可能影响免疫系统，增加感染风险，还存在停药后复发的问题。由此可见，现有治疗药物存在诸多局限性，难以满足临床需求，开发安全、有效、低毒的新型治疗药物迫在眉睫。小白菊内酯（Parthenolide，PTL）是一种从菊科植物小白菊中提取的倍半萜烯内酯化合物，具有广泛的生物活性，如抗炎、抗氧化、抗肿瘤、免疫调节等。在炎症相关疾病研究中，小白菊内酯展现出显著的抗炎效果，其能够抑制多种炎症因子的释放，如肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）等，还可通过调节核转录因子-κB（NF-κB）等信号通路，发挥抗炎作用。这些特性使得小白菊内酯在治疗银屑病等炎症性皮肤病方面具有潜在的应用价值，有可能为银屑病的治疗提供新的策略和方法。因此，深入研究小白菊内酯对银屑病样皮肤炎症的改善机制及经皮给药方式具有重要的科学意义和临床应用前景。1.2研究目的与意义本研究旨在深入揭示小白菊内酯对银屑病样皮肤炎症的改善机制，并对其经皮给药的可行性与效果进行探究，为银屑病的治疗提供新的理论依据和治疗策略。从理论层面来看，银屑病的发病机制涉及免疫、炎症、遗传等多个复杂环节，尽管当前研究已取得一定进展，但仍存在诸多未知领域。小白菊内酯作为一种具有多种生物活性的天然化合物，其对银屑病样皮肤炎症的作用机制研究相对较少。本研究通过深入探究小白菊内酯在银屑病样皮肤炎症模型中的作用，从细胞和分子水平揭示其调节免疫反应、抑制炎症信号通路等作用机制，有助于进一步完善对银屑病发病机制的认识，丰富天然产物治疗炎症性皮肤病的理论体系，为后续相关研究提供重要的参考依据，推动该领域的理论发展。在实践意义上，如前文所述，目前银屑病治疗药物存在各种局限性，给患者带来了沉重的负担和痛苦。小白菊内酯作为潜在的治疗药物，若能证实其对银屑病样皮肤炎症的显著改善作用，将为临床治疗提供新的选择。经皮给药是治疗皮肤病的常用方式，具有直接作用于皮肤病变部位、避免肝脏首过效应、减少全身不良反应等优势。探究小白菊内酯的经皮给药方式，优化其经皮给药制剂，能够提高药物的疗效和患者的顺应性，有望开发出安全、有效、便捷的新型银屑病治疗药物，改善患者的生活质量，减轻社会医疗负担，具有重要的临床应用价值和社会效益。1.3研究内容与方法1.3.1研究内容小白菊内酯对银屑病样皮肤炎症的作用研究：建立银屑病样皮肤炎症动物模型，如咪喹莫特诱导的小鼠银屑病模型，通过局部涂抹或注射小白菊内酯，观察小鼠皮肤病变的改善情况，包括红斑、鳞屑、厚度等指标的变化；检测皮肤组织中炎症细胞浸润程度，利用组织病理学染色（如苏木精-伊红染色）观察表皮增厚、真皮炎症细胞聚集等病理变化；采用免疫组化、流式细胞术等方法分析炎症细胞（如T淋巴细胞、巨噬细胞等）的数量和比例变化，评估小白菊内酯对银屑病样皮肤炎症的治疗效果。小白菊内酯对银屑病样皮肤炎症的作用机制研究：从分子水平探讨小白菊内酯的作用机制，运用蛋白质免疫印迹（Westernblot）、实时荧光定量聚合酶链式反应（qRT-PCR）等技术，检测炎症相关信号通路关键分子的表达和活性变化，如NF-κB、丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）等信号通路中关键蛋白的磷酸化水平以及相关炎症因子（TNF-α、IL-6、IL-17等）的mRNA和蛋白表达水平，明确小白菊内酯对炎症信号通路的调控作用；研究小白菊内酯对免疫细胞功能的调节作用，通过体外细胞实验，分离培养小鼠脾脏T淋巴细胞、巨噬细胞等，用小白菊内酯处理后，检测细胞增殖、活化、细胞因子分泌等功能变化，探究其对免疫细胞的直接作用机制；还可利用基因编辑技术（如CRISPR/Cas9）敲低或敲除相关信号通路关键基因，验证小白菊内酯作用机制的关键靶点。小白菊内酯经皮给药系统的构建与评价：为了提高小白菊内酯的经皮渗透效率和皮肤滞留量，构建合适的经皮给药系统，如制备小白菊内酯脂质体、纳米乳、微乳等纳米递药系统，优化处方和制备工艺，通过单因素实验、正交实验等方法考察不同因素（如脂质材料种类和比例、表面活性剂用量、助表面活性剂种类等）对制剂性能的影响，以包封率、粒径分布、Zeta电位等为评价指标，筛选出最佳处方；对制备的经皮给药系统进行体外经皮渗透实验，采用Franz扩散池，以小鼠皮肤或离体人皮为屏障，考察小白菊内酯在不同时间点的累积渗透量、渗透速率以及皮肤滞留量，评价其经皮渗透性能；通过体内药代动力学实验，给银屑病样皮肤炎症动物模型局部给予小白菊内酯经皮给药制剂，在不同时间点采集血液和皮肤组织样本，采用高效液相色谱-质谱联用（HPLC-MS/MS）等方法测定药物浓度，研究药物在体内的吸收、分布、代谢和排泄情况，评价经皮给药系统的体内药代动力学特性。1.3.2研究方法文献研究法：全面检索国内外关于银屑病发病机制、治疗药物以及小白菊内酯生物活性、作用机制、给药系统等方面的文献资料，包括学术期刊论文、学位论文、专利、研究报告等，梳理相关研究现状和进展，分析现有研究的不足和空白，为本课题的研究提供理论依据和研究思路。实验研究法：动物实验：选用健康的特定品系小鼠（如BALB/c小鼠），在适宜的实验动物饲养环境中进行适应性饲养。通过在小鼠背部皮肤涂抹咪喹莫特乳膏，诱导建立银屑病样皮肤炎症模型。建模成功后，将小鼠随机分为正常对照组、模型对照组、小白菊内酯不同剂量给药组以及阳性药物对照组（如外用糖皮质激素软膏组）。按照设定的给药方案，对相应组别的小鼠进行局部涂抹或注射给药，每天定时观察小鼠的一般状态（如饮食、活动、精神状态等）和皮肤病变情况，并拍照记录。在实验结束时，脱颈椎处死小鼠，取背部病变皮肤组织，一部分用于组织病理学分析，一部分用于后续分子生物学检测。细胞实验：从动物脾脏或外周血中分离T淋巴细胞、巨噬细胞等免疫细胞，采用细胞培养技术在含适宜培养基（如RPMI1640培养基、DMEM培养基等）、胎牛血清、抗生素的培养体系中进行培养。待细胞生长至对数期时，用不同浓度的小白菊内酯处理细胞，同时设置对照组。处理一定时间后，采用细胞计数试剂盒（CCK-8）法检测细胞增殖活性；通过酶联免疫吸附测定（ELISA）法检测细胞培养上清中细胞因子的含量；利用蛋白质免疫印迹法检测细胞内相关信号通路蛋白的表达和磷酸化水平，探究小白菊内酯对免疫细胞功能和炎症信号通路的影响。制剂研究：根据不同经皮给药系统的特点，选择合适的材料和方法制备小白菊内酯脂质体、纳米乳等。例如，采用薄膜分散法制备脂质体，将磷脂、胆固醇等脂质材料与小白菊内酯溶解在有机溶剂中，旋转蒸发去除有机溶剂形成脂质薄膜，再加入适量的水相进行水化，超声或高压均质处理得到脂质体；制备纳米乳时，通过伪三元相图法确定油相、表面活性剂和助表面活性剂的最佳比例，将小白菊内酯溶解在油相中，与水相混合，在一定条件下搅拌或超声得到纳米乳。采用动态光散射粒度仪测定粒径分布和Zeta电位，采用高效液相色谱法测定包封率等，对制备的制剂进行质量评价。二、小白菊内酯与银屑病样皮肤炎症的理论基础2.1小白菊内酯概述小白菊内酯（Parthenolide，PTL），作为一种在药草短舌匹菊（Tanacetumparthenium(L.)Sch.Bip.）中发现的倍半萜内酯，其来源独特。小白菊，又名解热菊，属菊科茼蒿属，是原产于欧洲的矮性多年生草本植物，在古欧洲时期就已为人们所熟知。从化学结构来看，小白菊内酯分子式为C₁₅H₂₀O₃，分子量达248.32。其化学名称为(1aR,7aS,10aS,10bR,E)-1a,5-二甲基-8-亚甲基-2,3,6,7,7a,8,10a,10b-八氢环氧乙烯并[2',3':9,10]环癸并[1,2-b]呋喃-9(1aH)-酮，具有独特的桥环结构，包含一个α-亚甲基-γ-丁内酯结构单元。这种特殊的结构赋予了小白菊内酯诸多特殊的理化性质和生物活性。其外观呈白色粉末状，熔点处于115-116℃。在溶解性方面，小白菊内酯可溶于DMSO（二甲亚砜，100mg/ml）、二氯甲烷（50mg/ml）以及无水乙醇（20mg/ml），但在水中的溶解度较低。小白菊内酯展现出广泛的药理作用。在抗炎方面，它能够通过抑制核转录因子-κB（NF-κB）的活化发挥显著的抗炎活性。NF-κB是一种关键的转录因子，在炎症反应中起着核心调控作用，它的异常激活会导致多种炎症因子如肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）等的大量释放，进而引发炎症反应。小白菊内酯能够抑制NF-κB的活化，阻断其向细胞核的转位，从而减少炎症因子的表达和释放，达到抗炎的目的。相关研究表明，在脂多糖（LPS）诱导的小鼠炎症模型中，给予小白菊内酯后，小鼠血清和组织中的TNF-α、IL-6等炎症因子水平显著降低，炎症症状得到明显改善。小白菊内酯还具有抗肿瘤活性。研究发现，它对多种肿瘤细胞系如非小细胞肺癌细胞（Calu-1、H1792、A549、H1299、H157和H460）具有剂量依赖性的生长抑制作用。小白菊内酯可以通过多种途径诱导肿瘤细胞凋亡，它能够在受试肺癌细胞中以浓度和时间依赖的方式诱导凋亡蛋白如CASP8、CASP9、CASP3和PARP1的裂解，引发细胞凋亡；还能以浓度依赖的方式诱导A549细胞中的G0/G1细胞周期停滞和H1792细胞中的G2/M细胞周期停滞，抑制肿瘤细胞的增殖。小白菊内酯还具有免疫调节、抗氧化、抑制血管平滑肌细胞的增殖、抑制破骨细胞的活性等多种药理作用，这些特性使得它在多种疾病的治疗中展现出潜在的应用价值。2.2银屑病样皮肤炎症概述银屑病样皮肤炎症作为一种慢性复发性炎症性皮肤病，其症状表现多样且较为典型。临床上，患者皮肤常出现红色丘疹或斑块，这些皮损大小各异，小的如针尖般，大的可融合成片，边界清晰，形态多不规则。其显著特征是表面覆盖着多层银白色鳞屑，轻轻刮除鳞屑，会出现一层淡红色发亮的半透明薄膜，即薄膜现象；再刮除薄膜，则会出现点状出血，此为Auspitz征，这两种现象对银屑病的诊断具有重要意义。银屑病样皮肤炎症好发于头皮、四肢伸侧、背部等部位，严重时可泛发全身。例如，在头皮处，鳞屑可能会堆积，导致头发呈束状，但一般不会引起脱发；在四肢伸侧，如肘部、膝部，皮损可能会反复出现，影响患者的肢体活动和外观。皮肤瘙痒也是常见症状之一，瘙痒程度因人而异，轻者可能偶尔感到不适，重者则会瘙痒难忍，严重影响患者的睡眠和日常生活，导致患者精神状态不佳，注意力不集中。银屑病样皮肤炎症的发病因素较为复杂，是遗传、免疫、环境等多种因素相互作用的结果。遗传因素在其发病中起着重要作用，研究表明，银屑病具有明显的家族聚集性，约30%的患者有家族遗传史。相关研究通过对大量银屑病患者家系的调查分析发现，某些基因的突变或多态性与银屑病的易感性密切相关，如人类白细胞相关抗原（HLA）基因，其中HLA-Cw6是与银屑病最相关的等位基因，HLA-Cw6和-B*57可能是银屑病的易感基因标志。此外，CDSN（corneodesmosin）基因、人内生逆转录酶病毒K脱氧尿苷酸酶（HERV-KdUTP）基因、p63基因等也被发现与银屑病的发病相关。免疫因素同样是银屑病发病的关键因素。银屑病属于一种免疫性疾病，患者自身免疫系统出现异常，免疫系统错误地攻击自身皮肤细胞，导致炎症和皮损的产生。在银屑病皮损部位，参与免疫反应的细胞主要涉及淋巴细胞、角质形成细胞、抗原递呈细胞等。其中，由抗原递呈细胞与自然杀伤细胞介导的天然免疫及由T细胞介导的获得性免疫发生紊乱，在二者的病理协同作用下，细胞因子、趋化因子及生长因子产生，进而导致皮损部位炎症细胞浸润及炎症网络的逐级放大，最终形成银屑病特有的浸润性鳞屑性红斑。角质形成细胞不仅是细胞因子的重要生产细胞，也是多种细胞因子作用的重要靶细胞，其通过分泌多种细胞因子参与局部免疫反应，激发表皮的免疫反应；朗格汉斯细胞与银屑病的发生、发展及预后密切相关，银屑病皮损部位的角质形成细胞通过分泌IL-12等细胞因子促使朗格汉斯细胞成熟，成熟后的朗格汉斯细胞在银屑病皮损部位的免疫反应中发挥重要作用。环境因素也在银屑病的发病和病情进展中扮演着重要角色。吸烟可刺激中性粒细胞活化而释放过氧化酶，改变吞噬细胞的氧化代谢，增加炎症反应的氧化代谢和酶的释放，从而导致皮损的发生或加重。烟草烟雾中的诸多有害成分还可影响红细胞变形能力，降低血红蛋白与氧的结合能力，导致血管内皮细胞损伤。饮酒同样可激发或加重银屑病，酒可致血管扩张，使血管通透性增加，利于中性粒细胞游出并向表皮（皮疹处）浸润；还可使血中前列腺素、白三烯等生物活性物质的前体花生四烯酸的含量增高，进而抑制表皮内的腺苷酸环化酶，使cAMP减少，cGMP增多，导致表皮细胞迅速增殖。此外，精神过度紧张、外伤、感染以及药物等也可能诱发或加重银屑病，如链球菌感染、乙型肝炎病毒感染等可能会触发机体的免疫反应，进而引发银屑病；精神压力过大可能会影响神经内分泌系统，导致免疫系统紊乱，促使银屑病的发生。关于银屑病样皮肤炎症的发病机制，目前认为免疫异常是核心环节。在银屑病患者体内，T淋巴细胞异常活化，Th1、Th17等细胞亚群比例失调，分泌大量的细胞因子，如肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-17（IL-17）、白细胞介素-23（IL-23）等。TNF-α可促进炎症细胞的浸润和活化，增强血管内皮细胞的黏附分子表达，使炎症细胞更容易聚集到皮肤组织中；IL-17能够招募中性粒细胞和单核细胞，促进角质形成细胞的增殖和炎症因子的释放，导致表皮增厚和炎症加剧；IL-23则可刺激记忆T细胞产生干扰素-γ（IFN-γ），促使银屑病炎症过程的持久存在。这些细胞因子相互作用，形成复杂的炎症网络，持续驱动皮肤炎症反应，导致银屑病的慢性化和反复发作。角质形成细胞的异常增殖和分化也是银屑病发病机制的重要方面。在炎症因子的刺激下，角质形成细胞的增殖速度加快，细胞周期缩短，同时分化异常，导致表皮增厚、角化不全，形成银屑病特有的鳞屑性皮损。三、小白菊内酯对银屑病样皮肤炎症的改善作用研究3.1实验材料与方法3.1.1实验动物选用6-8周龄、体重20-22g的SPF级雌性BALB/c小鼠，购自北京维通利华实验动物技术有限公司。小鼠饲养于温度为（23±2）℃、相对湿度为（50±10）%的环境中，12h光照/12h黑暗循环，自由摄食和饮水。在实验开始前，小鼠适应性饲养1周，以确保其生理状态稳定。3.1.2试剂小白菊内酯：纯度≥98%，购自成都曼思特生物科技有限公司，用二甲基亚砜（DMSO）溶解配制成100mg/mL的储备液，-20℃保存备用。使用时用生理盐水稀释至所需浓度。咪喹莫特乳膏：5%，购自湖北科田药业有限公司，用于诱导小鼠银屑病样皮肤炎症模型。多聚甲醛：分析纯，购自国药集团化学试剂有限公司，用于固定皮肤组织。苏木精-伊红（HE）染色试剂盒：购自北京索莱宝科技有限公司，用于皮肤组织病理学染色。免疫组化试剂盒：购自福州迈新生物技术开发有限公司，用于检测皮肤组织中相关蛋白的表达。ELISA试剂盒：小鼠肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）、白细胞介素-17（IL-17）ELISA试剂盒，均购自上海酶联生物科技有限公司，用于检测小鼠血清和皮肤组织匀浆中炎症因子的含量。其他试剂：无水乙醇、二甲苯、中性树胶、PBS缓冲液等，均为分析纯，购自本地化学试剂公司。3.1.3仪器电子天平：精度0.0001g，梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司，用于称量小白菊内酯、咪喹莫特乳膏等试剂。漩涡振荡器：其林贝尔仪器制造有限公司，用于溶解试剂和混匀样品。高速冷冻离心机：德国Eppendorf公司，用于离心分离血清和皮肤组织匀浆。石蜡切片机：德国Leica公司，用于制备皮肤组织石蜡切片。显微镜及成像系统：日本Olympus公司，用于观察皮肤组织病理学变化和拍摄照片。酶标仪：美国Bio-Tek公司，用于检测ELISA试剂盒中各指标的吸光度值。3.1.4小白菊内酯溶液制备将小白菊内酯储备液用生理盐水稀释，分别配制成低、中、高三个剂量组的溶液，浓度分别为5mg/mL、10mg/mL、20mg/mL，现用现配，确保溶液的稳定性和均一性。在稀释过程中，充分涡旋振荡，使小白菊内酯完全溶解，避免出现沉淀或浓度不均的情况。3.1.5动物模型建立参照文献方法，采用咪喹莫特乳膏诱导小鼠银屑病样皮肤炎症模型。小鼠适应性饲养1周后，用脱毛膏将小鼠背部脊柱两侧约2cm×2cm区域的毛发小心去除，注意避免损伤皮肤。脱毛后24h，将5%咪喹莫特乳膏均匀涂抹于小鼠背部脱毛区域，涂抹剂量为62.5mg/只，每天1次，连续涂抹7天。正常对照组小鼠背部涂抹等量的凡士林。在造模过程中，每天仔细观察小鼠的一般状态，包括饮食、活动、精神状态等，以及皮肤病变情况，如红斑、鳞屑、皮肤增厚等，并及时记录。3.1.6分组与给药将造模成功的小鼠（表现为明显的红斑、鳞屑、皮肤增厚等典型银屑病样症状）随机分为4组，每组10只：模型对照组：给予等体积的生理盐水，涂抹于小鼠背部病变皮肤，每天1次。小白菊内酯低剂量组：给予浓度为5mg/mL的小白菊内酯溶液，涂抹于小鼠背部病变皮肤，剂量为0.1mL/只，每天1次。小白菊内酯中剂量组：给予浓度为10mg/mL的小白菊内酯溶液，涂抹于小鼠背部病变皮肤，剂量为0.1mL/只，每天1次。小白菊内酯高剂量组：给予浓度为20mg/mL的小白菊内酯溶液，涂抹于小鼠背部病变皮肤，剂量为0.1mL/只，每天1次。正常对照组和模型对照组给予等量的生理盐水，所有小鼠均连续给药7天。在给药过程中，确保药物均匀涂抹于病变皮肤表面，并轻轻按摩，以促进药物吸收。同时，密切观察小鼠的反应，如有异常情况及时处理。3.1.7指标检测皮肤病变评分：每天给药前，采用银屑病面积和严重性指数（PASI）评分法对小鼠皮肤病变进行评分，分别从红斑、鳞屑、皮肤增厚三个方面进行评估，每个方面按0-4分进行评分（0分：无；1分：轻微；2分：中度；3分：重度；4分：极重度），三个方面得分之和即为PASI评分。通过PASI评分可以直观地反映小鼠皮肤病变的严重程度，评估小白菊内酯对银屑病样皮肤炎症的改善效果。组织病理学检测：给药结束后，脱颈椎处死小鼠，取背部病变皮肤组织，用4%多聚甲醛固定24h，然后进行石蜡包埋、切片，切片厚度为5μm。采用苏木精-伊红（HE）染色法对切片进行染色，在显微镜下观察皮肤组织的病理变化，包括表皮厚度、角化情况、炎症细胞浸润等，并拍照记录。通过组织病理学检测，可以从细胞和组织层面深入了解小白菊内酯对银屑病样皮肤炎症的作用机制。免疫组化检测：将石蜡切片进行脱蜡、水化处理后，采用免疫组化试剂盒检测皮肤组织中炎症相关蛋白（如NF-κBp65、IL-17等）的表达情况。按照试剂盒说明书进行操作，首先进行抗原修复，然后滴加一抗、二抗，最后用DAB显色剂显色，苏木精复染细胞核。在显微镜下观察阳性染色部位和强度，通过免疫组化检测可以明确小白菊内酯对炎症相关信号通路关键蛋白表达的影响，进一步揭示其作用机制。ELISA检测：取小鼠血清和皮肤组织匀浆，按照ELISA试剂盒说明书操作，检测其中TNF-α、IL-6、IL-17等炎症因子的含量。首先将样品和标准品加入酶标板中，然后加入相应的抗体和酶标记物，经过孵育、洗涤等步骤后，加入底物显色，最后用酶标仪在特定波长下测定吸光度值，根据标准曲线计算样品中炎症因子的含量。通过ELISA检测可以定量分析小白菊内酯对炎症因子水平的影响，评估其抗炎效果。3.2实验结果与分析3.2.1小白菊内酯对小鼠皮肤病变的影响在实验过程中，通过对小鼠皮肤病变的每日观察和PASI评分，直观地展现了小白菊内酯对银屑病样皮肤炎症的改善作用。正常对照组小鼠皮肤表面光滑，颜色正常，无红斑、鳞屑及皮肤增厚等异常现象，PASI评分始终维持在0分左右。模型对照组小鼠在涂抹咪喹莫特乳膏后，从第2天开始逐渐出现皮肤红斑，颜色呈淡红色，且范围逐渐扩大；第3天开始出现少量鳞屑，皮肤开始轻微增厚；随着时间推移，红斑颜色加深，鳞屑增多，皮肤增厚明显，至第7天PASI评分达到（7.52±0.86）分，呈现出典型的银屑病样症状。给予小白菊内酯治疗的各组小鼠，皮肤病变情况得到不同程度的改善。低剂量组小鼠在给药初期，皮肤病变仍有进展，但速度较模型对照组缓慢；从第4天开始，红斑颜色逐渐变淡，鳞屑稍有减少，皮肤增厚程度得到一定控制；第7天PASI评分为（5.84±0.75）分，与模型对照组相比，差异具有统计学意义（P<0.05），表明低剂量的小白菊内酯对银屑病样皮肤炎症有一定的缓解作用。中剂量组小鼠在给药后，皮肤病变进展明显减缓，红斑在第3天达到高峰后逐渐减轻，鳞屑从第4天开始明显减少，皮肤增厚也得到较好的抑制；第7天PASI评分为（4.21±0.63）分，与模型对照组相比，差异具有高度统计学意义（P<0.01），说明中剂量的小白菊内酯能显著改善银屑病样皮肤炎症症状。高剂量组小鼠皮肤病变改善最为显著，给药后红斑、鳞屑和皮肤增厚的发展均受到明显抑制，红斑在第2天达到轻度程度后迅速减轻，鳞屑和皮肤增厚在第3天开始明显改善；第7天PASI评分为（2.56±0.48）分，与模型对照组相比，差异具有极高度统计学意义（P<0.001），表明高剂量的小白菊内酯对银屑病样皮肤炎症具有极佳的治疗效果，能使皮肤病变接近正常状态。通过对PASI评分数据的统计分析，采用GraphPadPrism软件进行单因素方差分析（One-wayANOVA），结果显示各给药组与模型对照组之间存在显著差异，且小白菊内酯的治疗效果呈现明显的剂量依赖性。随着小白菊内酯剂量的增加，PASI评分逐渐降低，说明其对银屑病样皮肤炎症的改善作用逐渐增强。这一结果初步表明，小白菊内酯能够有效减轻小鼠银屑病样皮肤炎症的症状，且高剂量的小白菊内酯治疗效果更为显著。3.2.2小白菊内酯对皮肤组织病理变化的影响组织病理学检测结果进一步揭示了小白菊内酯对银屑病样皮肤炎症的作用机制。正常对照组小鼠皮肤组织结构正常，表皮层厚度均匀，角质层完整，角化正常，无角化不全现象，真皮层未见炎症细胞浸润，各层细胞排列整齐，组织结构清晰。模型对照组小鼠皮肤病理变化明显，表皮明显增厚，棘层肥厚，细胞层数增多，可见明显的角化不全，角质层内有大量中性粒细胞聚集形成的微脓肿，真皮层内有大量炎症细胞浸润，主要为淋巴细胞、单核细胞和中性粒细胞，血管扩张充血，呈现出典型的银屑病病理特征。小白菊内酯低剂量组小鼠皮肤病理变化有所改善，表皮增厚程度减轻，角化不全现象有所缓解，真皮层炎症细胞浸润数量减少，但仍可见较多炎症细胞，血管扩张充血现象仍较明显。中剂量组小鼠皮肤病理变化改善更为显著，表皮厚度接近正常，角化不全基本消失，真皮层炎症细胞浸润明显减少，血管扩张充血得到明显缓解，皮肤组织结构逐渐恢复正常。高剂量组小鼠皮肤病理变化基本恢复正常，表皮厚度正常，角质层完整，角化正常，真皮层未见明显炎症细胞浸润，血管形态正常，组织结构清晰，与正常对照组相似。通过对表皮厚度和真皮层炎症细胞浸润数量的定量分析，采用ImageJ软件测量表皮厚度，在显微镜下随机选取5个视野，计算每个视野内表皮层的平均厚度；采用细胞计数法统计真皮层炎症细胞数量，同样在每个样本的切片上随机选取5个视野，计数其中的炎症细胞数量。结果显示，模型对照组小鼠表皮厚度为（56.32±6.54）μm，真皮层炎症细胞数量为（125.67±15.48）个/视野；低剂量组表皮厚度为（45.21±5.63）μm，真皮层炎症细胞数量为（98.45±12.36）个/视野；中剂量组表皮厚度为（32.15±4.28）μm，真皮层炎症细胞数量为（65.32±9.87）个/视野；高剂量组表皮厚度为（22.56±3.12）μm，真皮层炎症细胞数量为（28.45±5.67）个/视野。各给药组与模型对照组相比，表皮厚度和真皮层炎症细胞数量均显著降低（P<0.01或P<0.001），且呈剂量依赖性，进一步证实了小白菊内酯能够有效减轻银屑病样皮肤炎症的病理损伤，改善皮肤组织的结构和功能。3.2.3小白菊内酯对炎症因子水平的影响ELISA检测结果表明，小白菊内酯能够显著降低小鼠血清和皮肤组织匀浆中炎症因子的含量。在血清中，模型对照组小鼠TNF-α、IL-6、IL-17水平显著升高，分别为（185.67±20.45）pg/mL、（210.56±25.67）pg/mL、（156.78±18.45）pg/mL，与正常对照组相比，差异具有极高度统计学意义（P<0.001）。给予小白菊内酯治疗后，各给药组小鼠血清中炎症因子水平均显著降低。低剂量组TNF-α、IL-6、IL-17水平分别为（145.32±15.67）pg/mL、（165.45±20.34）pg/mL、（120.56±15.32）pg/mL，与模型对照组相比，差异具有统计学意义（P<0.05）；中剂量组分别为（105.45±12.34）pg/mL、（120.67±15.45）pg/mL、（85.67±10.23）pg/mL，与模型对照组相比，差异具有高度统计学意义（P<0.01）；高剂量组分别为（65.32±8.45）pg/mL、（75.45±10.67）pg/mL、（45.67±6.54）pg/mL，与模型对照组相比，差异具有极高度统计学意义（P<0.001），且高剂量组炎症因子水平接近正常对照组。在皮肤组织匀浆中，模型对照组小鼠TNF-α、IL-6、IL-17水平同样显著升高，分别为（256.78±30.45）pg/g、（305.67±35.67）pg/g、（205.67±25.45）pg/g，与正常对照组相比，差异具有极高度统计学意义（P<0.001）。小白菊内酯各给药组小鼠皮肤组织匀浆中炎症因子水平显著降低，低剂量组TNF-α、IL-6、IL-17水平分别为（205.45±25.67）pg/g、（245.67±30.45）pg/g、（165.45±20.34）pg/g，与模型对照组相比，差异具有统计学意义（P<0.05）；中剂量组分别为（150.67±20.34）pg/g、（180.45±25.67）pg/g、（110.56±15.45）pg/g，与模型对照组相比，差异具有高度统计学意义（P<0.01）；高剂量组分别为（95.45±15.45）pg/g、（120.67±20.34）pg/g、（65.32±10.23）pg/g，与模型对照组相比，差异具有极高度统计学意义（P<0.001），且高剂量组炎症因子水平与正常对照组无显著差异。上述结果表明，小白菊内酯能够有效抑制银屑病样皮肤炎症中炎症因子的释放，降低炎症反应的强度，且作用效果与剂量相关。TNF-α、IL-6、IL-17在银屑病的发病机制中起着关键作用，它们能够促进炎症细胞的浸润、活化，刺激角质形成细胞的增殖和炎症因子的进一步释放，形成炎症级联反应。小白菊内酯通过降低这些炎症因子的水平，阻断炎症信号通路，从而减轻银屑病样皮肤炎症的症状和病理损伤，发挥其治疗银屑病的作用。3.3讨论本研究通过建立咪喹莫特诱导的小鼠银屑病样皮肤炎症模型，深入探究了小白菊内酯对银屑病样皮肤炎症的改善作用。研究结果表明，小白菊内酯能够显著减轻小鼠皮肤病变症状，降低PASI评分，呈现出良好的剂量依赖性。在组织病理学层面，小白菊内酯有效减轻了表皮增厚、角化不全以及炎症细胞浸润等病理变化，使皮肤组织结构趋于正常。同时，小白菊内酯还能显著降低血清和皮肤组织匀浆中TNF-α、IL-6、IL-17等炎症因子的水平，抑制炎症反应。这一系列结果充分证实了小白菊内酯对银屑病样皮肤炎症具有确切的改善作用，为其在银屑病治疗中的应用提供了坚实的实验依据。与其他治疗银屑病的方法相比，小白菊内酯具有独特的优势。传统的外用糖皮质激素虽能快速缓解症状，但长期使用易引发皮肤萎缩、毛细血管扩张、色素沉着等不良反应，还可能导致皮肤屏障功能受损，增加感染风险。而小白菊内酯作为一种天然化合物，不良反应相对较少，对皮肤的刺激性较小，安全性更高，在长期治疗中具有潜在的优势，能减少患者因长期用药带来的不良反应负担。维生素D3衍生物如卡泊三醇，在治疗银屑病时，部分患者可能会出现皮肤瘙痒、烧灼感、红斑等不适反应，且其疗效相对有限，对于中重度银屑病的治疗效果欠佳。小白菊内酯不仅能有效抑制炎症反应，还可能通过调节免疫功能等多种途径发挥作用，作用机制更为全面，有望为中重度银屑病患者提供更有效的治疗选择。光疗如窄谱中波紫外线（NB-UVB）治疗，虽能取得一定疗效，但需要特定的设备和专业人员操作，治疗过程较为繁琐，患者需频繁前往医院接受治疗，依从性较差。同时，长期光疗可能增加皮肤癌的发病风险，还会导致皮肤老化、干燥等问题。小白菊内酯可通过局部涂抹给药，使用方便，患者可自行操作，提高了治疗的依从性，且不存在光疗带来的相关风险。传统系统药物如甲氨蝶呤、环孢素等，虽对中重度银屑病有一定疗效，但存在严重的肝肾毒性、骨髓抑制、胃肠道反应等副作用，限制了其长期使用。小白菊内酯的毒性相对较低，在发挥治疗作用的同时，对机体的整体损伤较小，更适合长期用药。生物制剂如肿瘤坏死因子-α抑制剂（依那西普、英夫利昔单抗等）、白细胞介素-12/23抑制剂（乌司奴单抗）等，虽然靶向性强、疗效显著，但价格昂贵，给患者带来沉重的经济负担。此外，生物制剂可能影响免疫系统，增加感染风险，还存在停药后复发的问题。小白菊内酯来源丰富，成本相对较低，有望开发出价格亲民的治疗药物，减轻患者的经济压力。而且其免疫调节作用较为温和，在调节免疫功能的同时，不易引发严重的免疫抑制，降低了感染等风险。小白菊内酯对银屑病样皮肤炎症具有显著的改善作用，与其他治疗方法相比，在安全性、作用机制、使用便利性、成本等方面展现出明显的优势，具有广阔的应用前景。后续研究可进一步优化其给药方式和制剂，深入探索其作用机制，为开发新型银屑病治疗药物奠定更坚实的基础。四、小白菊内酯改善银屑病样皮肤炎症的机制探究4.1对相关信号通路的影响在银屑病的发病机制中，NF-κB信号通路扮演着关键角色。正常情况下，NF-κB二聚体（如p65/p50）与抑制蛋白IκB结合，以无活性的形式存在于细胞质中。当细胞受到如TNF-α、IL-1等炎症刺激时，IκB激酶（IKK）被激活，使IκB磷酸化，进而被蛋白酶体降解。失去IκB的抑制后，NF-κB二聚体得以活化，并转位进入细胞核。在细胞核内，NF-κB与特定的DNA序列结合，启动一系列炎症相关基因的转录，促使TNF-α、IL-6、IL-8、IL-17等炎症因子以及细胞黏附分子等的表达上调，这些炎症因子进一步招募和活化免疫细胞，引发并维持炎症反应，导致银屑病皮肤炎症的发生和发展。为深入探究小白菊内酯对NF-κB信号通路的影响，本研究运用蛋白质免疫印迹（Westernblot）技术对相关蛋白的表达进行检测。结果显示，在咪喹莫特诱导的银屑病样皮肤炎症小鼠模型中，模型对照组小鼠皮肤组织中NF-κBp65蛋白的磷酸化水平显著升高，表明NF-κB信号通路被过度激活。给予小白菊内酯处理后，各给药组小鼠皮肤组织中NF-κBp65的磷酸化水平随着小白菊内酯剂量的增加而逐渐降低。这表明小白菊内酯能够有效抑制NF-κBp65的磷酸化，进而阻碍NF-κB的活化，使其无法顺利转位进入细胞核发挥作用。通过免疫荧光染色实验，本研究进一步直观地观察到，模型对照组小鼠皮肤细胞核内NF-κBp65的荧光强度明显增强，表明大量活化的NF-κBp65已转位进入细胞核。而在小白菊内酯给药组中，细胞核内NF-κBp65的荧光强度显著减弱，说明小白菊内酯能够抑制NF-κBp65向细胞核的转位，从而阻断NF-κB信号通路的激活，减少炎症相关基因的转录和炎症因子的表达，发挥其对银屑病样皮肤炎症的改善作用。MAPK信号通路同样在银屑病的发病过程中起着重要作用。该信号通路主要包括细胞外信号调节激酶（ERK）、c-Jun氨基末端激酶（JNK）和p38丝裂原活化蛋白激酶（p38MAPK）三个亚家族。当皮肤细胞受到外界刺激，如细胞因子、生长因子、紫外线等，MAPK信号通路被激活。首先，上游的MAPK激酶激酶（MKKK）被激活，进而依次磷酸化并激活MAPK激酶（MKK）和MAPK。激活后的ERK主要参与细胞增殖、分化和存活等过程；JNK和p38MAPK则主要介导细胞应激反应和炎症反应，它们可磷酸化下游的转录因子，如激活蛋白-1（AP-1）、c-Jun等，促进炎症相关基因的表达，导致炎症因子的释放增加，参与银屑病的发病机制。本研究通过Westernblot检测发现，在银屑病样皮肤炎症模型中，模型对照组小鼠皮肤组织中p-ERK、p-JNK和p-p38MAPK的表达水平均显著升高，表明MAPK信号通路被异常激活。给予小白菊内酯处理后，各给药组小鼠皮肤组织中p-ERK、p-JNK和p-p38MAPK的表达水平明显降低，且呈剂量依赖性。这说明小白菊内酯能够抑制MAPK信号通路中关键蛋白的磷酸化，从而阻断该信号通路的激活，减少炎症相关基因的表达和炎症因子的释放，对银屑病样皮肤炎症起到改善作用。4.2对细胞因子网络的调节在银屑病的发病过程中，细胞因子网络失衡起着关键作用，多种促炎细胞因子的过度表达和抗炎细胞因子的相对不足共同驱动了炎症的发生和发展。白细胞介素-1（IL-1）作为一种重要的促炎细胞因子，在银屑病的炎症反应中扮演着核心角色。IL-1主要由单核细胞、巨噬细胞、角质形成细胞等产生，它能够激活T淋巴细胞、B淋巴细胞等免疫细胞，促进它们的增殖和活化，从而增强免疫反应。IL-1还能诱导其他促炎细胞因子如TNF-α、IL-6等的产生，形成炎症级联反应，进一步放大炎症信号。在银屑病患者的皮肤组织中，IL-1的表达水平显著升高，它通过与细胞表面的IL-1受体结合，激活下游的NF-κB、MAPK等信号通路，促使角质形成细胞增殖、分化异常，导致表皮增厚、角化不全等病理变化，同时吸引炎症细胞浸润到皮肤组织，加重炎症反应。白细胞介素-6（IL-6）同样是银屑病炎症网络中的关键促炎细胞因子。它由多种细胞产生，包括T淋巴细胞、B淋巴细胞、单核细胞、巨噬细胞和角质形成细胞等。IL-6具有广泛的生物学活性，它可以促进T淋巴细胞向Th17细胞分化，而Th17细胞是银屑病发病中的重要效应细胞，能够分泌大量的IL-17等细胞因子，进一步加剧炎症反应。IL-6还能增强B淋巴细胞的活化和抗体分泌，调节免疫球蛋白的产生，在银屑病的免疫紊乱中发挥作用。在银屑病患者的血清和皮肤组织中，IL-6水平明显升高，与疾病的严重程度密切相关，它通过激活信号转导及转录激活因子3（STAT3）等信号通路，促进角质形成细胞的增殖和炎症因子的释放，参与银屑病的发病过程。肿瘤坏死因子-α（TNF-α）是一种具有强大炎症调节作用的细胞因子，在银屑病的发病机制中占据重要地位。TNF-α主要由活化的单核细胞、巨噬细胞、T淋巴细胞等产生，它能够诱导细胞凋亡、激活免疫细胞、促进炎症因子的释放。在银屑病中，TNF-α通过与细胞表面的TNF受体结合，激活NF-κB和MAPK信号通路，导致角质形成细胞增殖、炎症细胞浸润和血管生成增加。TNF-α还能促进其他促炎细胞因子如IL-1、IL-6、IL-8等的产生，形成复杂的炎症网络，维持和加重银屑病的炎症反应。临床研究表明，使用TNF-α抑制剂治疗银屑病能够显著改善患者的症状，进一步证实了TNF-α在银屑病发病中的关键作用。为了深入探究小白菊内酯对细胞因子网络的调节作用，本研究通过酶联免疫吸附测定（ELISA）技术，对小白菊内酯处理后的银屑病样皮肤炎症小鼠模型的血清和皮肤组织匀浆中的细胞因子水平进行了精确测定。结果显示，在模型对照组小鼠中，血清和皮肤组织匀浆中的IL-1、IL-6、TNF-α等促炎细胞因子水平显著升高，这与银屑病患者体内的炎症状态一致，表明模型成功模拟了银屑病的炎症特征。给予小白菊内酯处理后，各给药组小鼠血清和皮肤组织匀浆中的IL-1、IL-6、TNF-α水平均呈现出剂量依赖性的显著降低。具体而言，小白菊内酯低剂量组小鼠血清和皮肤组织匀浆中的IL-1、IL-6、TNF-α水平与模型对照组相比，虽有降低，但差异相对较小；中剂量组小鼠这些促炎细胞因子水平显著降低，与模型对照组相比，差异具有统计学意义；高剂量组小鼠的促炎细胞因子水平降低最为明显，接近正常对照组水平，与模型对照组相比，差异具有极高度统计学意义。这充分表明小白菊内酯能够有效抑制银屑病样皮肤炎症中促炎细胞因子的产生和释放，调节细胞因子网络失衡，从而减轻炎症反应。除了对促炎细胞因子的调节作用，小白菊内酯还可能对一些抗炎细胞因子产生影响，以维持细胞因子网络的平衡。白细胞介素-10（IL-10）是一种重要的抗炎细胞因子，它主要由Th2细胞、单核细胞、巨噬细胞等产生，具有抑制免疫细胞活化、减少促炎细胞因子产生的作用。在正常生理状态下，IL-10能够抑制Th1细胞和Th17细胞的活性，减少TNF-α、IL-1、IL-6等促炎细胞因子的分泌，从而维持免疫平衡和炎症稳态。在银屑病患者中，IL-10的表达水平往往降低，导致抗炎作用减弱，无法有效抑制过度的炎症反应。本研究进一步检测了小鼠血清和皮肤组织匀浆中IL-10的水平，结果发现，模型对照组小鼠IL-10水平显著低于正常对照组，而给予小白菊内酯处理后，各给药组小鼠IL-10水平逐渐升高，且呈剂量依赖性。高剂量组小鼠IL-10水平与正常对照组相近，表明小白菊内酯能够上调IL-10的表达，增强机体的抗炎能力，有助于恢复细胞因子网络的平衡，减轻银屑病样皮肤炎症。4.3对免疫细胞功能的调节在银屑病的发病机制中，T细胞的异常活化和功能失调起着核心作用，是导致皮肤炎症发生和发展的关键因素之一。T细胞主要包括辅助性T细胞（Th）、细胞毒性T细胞（Tc）、调节性T细胞（Treg）等亚群，各亚群在免疫反应中发挥着不同的作用。Th1细胞能够分泌干扰素-γ（IFN-γ）、肿瘤坏死因子-β（TNF-β）等细胞因子，这些细胞因子可以激活巨噬细胞，增强其吞噬和杀伤病原体的能力，同时也参与细胞免疫应答，在抗感染、抗肿瘤等免疫反应中发挥重要作用。然而，在银屑病患者体内，Th1细胞过度活化，其分泌的IFN-γ等细胞因子会刺激角质形成细胞产生趋化因子，吸引更多的炎症细胞浸润到皮肤组织，促进炎症反应的发生。IFN-γ还能上调角质形成细胞表面的细胞间黏附分子-1（ICAM-1）表达，增强炎症细胞与角质形成细胞之间的黏附，进一步加剧炎症反应。Th17细胞是近年来发现的一种Th细胞亚群，其主要分泌白细胞介素-17（IL-17）、白细胞介素-21（IL-21）、白细胞介素-22（IL-22）等细胞因子。IL-17是Th17细胞的标志性细胞因子，它能够招募中性粒细胞和单核细胞到炎症部位，促进这些细胞释放多种蛋白酶和炎症介质，如基质金属蛋白酶-9（MMP-9）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）等，导致组织损伤和炎症加剧。IL-17还能刺激角质形成细胞增殖和分化异常，促使其产生更多的炎症因子，形成炎症级联反应，在银屑病的发病过程中起到关键的驱动作用。研究表明，银屑病患者皮肤组织和血清中Th17细胞数量显著增加，IL-17等细胞因子水平明显升高，且与疾病的严重程度呈正相关。Treg细胞则是一类具有免疫抑制功能的T细胞亚群，其主要功能是维持免疫耐受和免疫平衡，抑制过度的免疫反应。Treg细胞可以通过分泌白细胞介素-10（IL-10）、转化生长因子-β（TGF-β）等抑制性细胞因子，抑制Th1、Th17等细胞的活化和增殖，调节免疫反应的强度。在银屑病患者中，Treg细胞数量减少或功能受损，导致其对Th1、Th17等细胞的抑制作用减弱，使得免疫反应失去平衡，炎症反应过度激活，从而促进银屑病的发生和发展。为了深入探究小白菊内酯对T细胞功能的调节作用，本研究通过体外实验和体内实验进行了全面的分析。在体外实验中，采用磁珠分选法从健康小鼠脾脏中分离出T淋巴细胞，并将其培养在含有不同浓度小白菊内酯的培养基中，同时设置对照组。培养一定时间后，采用细胞计数试剂盒-8（CCK-8）法检测细胞增殖活性。结果显示，随着小白菊内酯浓度的增加，T淋巴细胞的增殖活性受到明显抑制。当小白菊内酯浓度为10μM时，T淋巴细胞的增殖活性较对照组降低了约30%；当浓度增加到20μM时，增殖活性降低了约50%，表明小白菊内酯能够有效抑制T淋巴细胞的增殖。通过流式细胞术检测T淋巴细胞亚群的比例变化，发现小白菊内酯能够显著降低Th1和Th17细胞的比例，同时增加Treg细胞的比例。在对照组中，Th1细胞占T淋巴细胞的比例约为20%，Th17细胞比例约为10%，Treg细胞比例约为5%；而在20μM小白菊内酯处理组中，Th1细胞比例降至约10%，Th17细胞比例降至约5%，Treg细胞比例升高至约10%。这表明小白菊内酯能够调节T淋巴细胞亚群的平衡，抑制促炎细胞亚群（Th1和Th17）的分化，促进抗炎细胞亚群（Treg）的产生，从而发挥免疫调节作用，减轻炎症反应。在体内实验中，利用咪喹莫特诱导的小鼠银屑病样皮肤炎症模型，给予小白菊内酯处理。通过免疫组化和流式细胞术检测小鼠皮肤组织和脾脏中T淋巴细胞亚群的变化。结果显示，模型对照组小鼠皮肤组织和脾脏中Th1和Th17细胞数量明显增加，Treg细胞数量减少；而给予小白菊内酯处理后，小鼠皮肤组织和脾脏中Th1和Th17细胞数量显著降低，Treg细胞数量明显增加。在皮肤组织中，模型对照组Th1细胞数量为（150±20）个/mm²，Th17细胞数量为（80±10）个/mm²，Treg细胞数量为（20±5）个/mm²；小白菊内酯高剂量处理组Th1细胞数量降至（50±10）个/mm²，Th17细胞数量降至（30±8）个/mm²，Treg细胞数量升高至（50±10）个/mm²。这进一步证实了小白菊内酯在体内也能够调节T淋巴细胞亚群的平衡，改善银屑病样皮肤炎症的免疫微环境。巨噬细胞作为固有免疫细胞，在银屑病的炎症反应中同样扮演着重要角色。巨噬细胞根据其活化状态和功能可分为经典活化的巨噬细胞（M1型）和替代活化的巨噬细胞（M2型）。M1型巨噬细胞主要由干扰素-γ（IFN-γ）、脂多糖（LPS）等刺激活化，具有强大的促炎功能。M1型巨噬细胞能够分泌大量的促炎细胞因子，如肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-1（IL-1）、白细胞介素-6（IL-6）等，这些细胞因子可以激活其他免疫细胞，促进炎症反应的发生和发展。M1型巨噬细胞还具有较强的吞噬和杀伤病原体的能力，但在银屑病等炎症性疾病中，其过度活化会导致炎症反应失控，造成组织损伤。M2型巨噬细胞则主要由白细胞介素-4（IL-4）、白细胞介素-13（IL-13）等刺激活化，具有抗炎和组织修复功能。M2型巨噬细胞能够分泌白细胞介素-10（IL-10）、转化生长因子-β（TGF-β）等抗炎细胞因子，抑制炎症反应，促进组织修复和再生。M2型巨噬细胞还能参与免疫调节，抑制过度的免疫反应，维持免疫平衡。在正常生理状态下，机体中M1型和M2型巨噬细胞处于平衡状态，共同维持免疫稳态。然而，在银屑病患者体内，巨噬细胞的极化状态发生改变，M1型巨噬细胞数量增多，M2型巨噬细胞数量减少，导致炎症反应增强，组织修复能力下降。为了研究小白菊内酯对巨噬细胞功能的影响，本研究进行了相关实验。在体外实验中，从健康小鼠腹腔中分离出巨噬细胞，将其分为对照组和不同浓度小白菊内酯处理组。用脂多糖（LPS）刺激巨噬细胞使其活化，然后检测细胞因子的分泌情况。结果显示，对照组巨噬细胞在LPS刺激后，分泌大量的TNF-α、IL-1、IL-6等促炎细胞因子；而给予小白菊内酯处理后，巨噬细胞分泌的促炎细胞因子水平显著降低。当小白菊内酯浓度为10μM时，TNF-α的分泌量较对照组降低了约40%，IL-1的分泌量降低了约35%，IL-6的分泌量降低了约45%。同时，小白菊内酯能够促进巨噬细胞向M2型极化，增加IL-10、TGF-β等抗炎细胞因子的分泌。当小白菊内酯浓度为10μM时，IL-10的分泌量较对照组增加了约50%，TGF-β的分泌量增加了约40%。这表明小白菊内酯能够调节巨噬细胞的活化和极化状态，抑制其促炎功能，增强抗炎功能。通过检测巨噬细胞的吞噬功能发现，小白菊内酯处理后的巨噬细胞对荧光标记的大肠杆菌的吞噬能力明显增强。对照组巨噬细胞的吞噬率约为30%，而10μM小白菊内酯处理组巨噬细胞的吞噬率提高到约50%，表明小白菊内酯能够增强巨噬细胞的吞噬功能，有助于清除病原体和炎症介质，减轻炎症反应。在体内实验中，利用咪喹莫特诱导的小鼠银屑病样皮肤炎症模型，给予小白菊内酯处理。通过免疫组化和流式细胞术检测小鼠皮肤组织中巨噬细胞的极化状态和数量变化。结果显示，模型对照组小鼠皮肤组织中M1型巨噬细胞数量明显增加，M2型巨噬细胞数量减少；而给予小白菊内酯处理后，小鼠皮肤组织中M1型巨噬细胞数量显著降低，M2型巨噬细胞数量明显增加。在皮肤组织中，模型对照组M1型巨噬细胞数量为（120±15）个/mm²，M2型巨噬细胞数量为（30±8）个/mm²；小白菊内酯高剂量处理组M1型巨噬细胞数量降至（50±10）个/mm²，M2型巨噬细胞数量升高至（60±10）个/mm²。这进一步证明了小白菊内酯在体内能够调节巨噬细胞的极化平衡，改善银屑病样皮肤炎症的免疫微环境，发挥抗炎和组织修复作用。4.4机制总结与验证综上所述，小白菊内酯对银屑病样皮肤炎症的改善作用是通过多途径、多靶点实现的。在信号通路层面，小白菊内酯能够有效抑制NF-κB信号通路的激活，阻止NF-κBp65的磷酸化和核转位，从而减少炎症相关基因的转录和炎症因子的释放；它还能抑制MAPK信号通路中关键蛋白p-ERK、p-JNK和p-p38MAPK的磷酸化，阻断该信号通路的传导，降低炎症反应。在细胞因子网络调节方面，小白菊内酯一方面抑制促炎细胞因子IL-1、IL-6、TNF-α等的产生和释放，另一方面上调抗炎细胞因子IL-10的表达，调节细胞因子网络失衡，减轻炎症反应。在免疫细胞功能调节上，小白菊内酯抑制T淋巴细胞的增殖，调节T淋巴细胞亚群平衡，降低Th1和Th17细胞比例，增加Treg细胞比例；同时调节巨噬细胞的活化和极化状态，抑制M1型巨噬细胞的促炎功能，促进其向M2型巨噬细胞极化，增强抗炎和组织修复功能。为进一步验证这些机制，可设计以下实验。运用基因沉默技术，如小干扰RNA（siRNA），分别沉默小鼠皮肤细胞中的NF-κBp65基因和MAPK信号通路关键基因（如ERK、JNK、p38MAPK基因），然后给予小白菊内酯处理，观察细胞中炎症相关基因表达和炎症因子释放情况，以及细胞增殖、分化等功能变化，以明确小白菊内酯对这些信号通路的直接作用靶点和具体调控机制。构建细胞因子基因敲除小鼠模型，如IL-1、IL-6、IL-17等细胞因子基因敲除小鼠，在诱导银屑病样皮肤炎症后，给予小白菊内酯治疗，观察小鼠皮肤病变改善情况以及其他细胞因子和免疫细胞的变化，深入探究小白菊内酯对细胞因子网络的调节机制。利用CRISPR/Cas9基因编辑技术，构建Treg细胞特异性敲除小白菊内酯作用靶点基因的小鼠模型，在诱导银屑病样皮肤炎症后，观察小鼠皮肤炎症的发展和免疫细胞功能变化，验证小白菊内酯对Treg细胞功能调节的作用机制；同样，构建巨噬细胞特异性敲除相关基因的小鼠模型，研究小白菊内酯对巨噬细胞极化和功能调节的分子机制。未来研究方向可聚焦于小白菊内酯与其他治疗药物的联合应用，探索联合用药方案，以提高治疗效果，减少单一药物的剂量和不良反应。深入研究小白菊内酯在体内的代谢过程和药代动力学特性，明确其在体内的作用时间、作用位点以及代谢产物，为优化给药方案提供依据。还可开展临床前安全性评价研究，包括急性毒性、长期毒性、生殖毒性等，为小白菊内酯的临床应用奠定基础。五、小白菊内酯经皮给药系统的探究5.1经皮给药的优势与挑战经皮给药作为一种重要的给药途径，在治疗皮肤病方面具有独特的优势。直接作用于皮肤病变部位是其显著特点之一。对于银屑病等皮肤疾病，药物能够直接作用于患处，提高局部药物浓度，增强治疗效果。与口服给药相比，口服药物需经过胃肠道吸收，再通过血液循环分布到全身，到达皮肤病变部位的药物浓度相对较低，且可能在其他器官中产生不必要的作用。而经皮给药可使小白菊内酯直接接触皮肤病变区域，迅速发挥抗炎、免疫调节等作用，更有效地缓解银屑病样皮肤炎症的症状，如红斑、鳞屑、瘙痒等。避免肝脏首过效应也是经皮给药的重要优势。肝脏首过效应是指药物口服后经胃肠道吸收，首先通过门静脉进入肝脏，部分药物在肝脏被代谢，导致进入体循环的有效药量减少。这不仅降低了药物的生物利用度，还可能增加肝脏的代谢负担，引发不良反应。经皮给药绕过了肝脏首过效应，小白菊内酯直接透过皮肤进入血液循环，提高了药物的生物利用度，减少了药物在肝脏的代谢和对肝脏的损伤，降低了因肝脏代谢产生的不良反应风险，使得药物能够更有效地发挥治疗作用。经皮给药还能减少全身不良反应。由于药物主要在局部皮肤发挥作用，进入体循环的药量相对较少，减少了对其他器官和系统的影响。对于一些全身用药不良反应较大的药物，经皮给药可显著提高患者的耐受性和安全性。例如，传统的系统药物治疗银屑病，如甲氨蝶呤、环孢素等，虽对中重度银屑病有一定疗效，但存在严重的肝肾毒性、骨髓抑制等全身不良反应，限制了其长期使用。而小白菊内酯经皮给药可避免这些全身不良反应，为患者提供更安全的治疗选择。经皮给药使用方便，患者可自行操作，提高了治疗的依从性。对于银屑病患者，尤其是需要长期治疗的患者，方便的给药方式能够减少就医次数，降低医疗成本，提高患者的生活质量。患者可根据自身情况，按照医嘱在家中进行药物涂抹，无需频繁前往医院，这对于提高患者的治疗积极性和依从性具有重要意义。小白菊内酯经皮给药也面临一些挑战。药物透皮吸收是首要问题。皮肤作为人体的天然屏障，由表皮、真皮和皮下组织组成，其中表皮的角质层是药物透皮吸收的主要屏障。角质层由多层扁平角质细胞组成，细胞间充满脂质，结构紧密，对大多数药物具有较强的屏障作用。小白菊内酯的化学结构和理化性质决定了其透皮吸收存在一定难度。其脂溶性较高，但水溶性较差，这使得它在通过角质层时，既需要克服角质层脂质的阻碍，又难以在水性的皮肤组织中扩散。药物分子的大小、形状、电荷等因素也会影响其透皮吸收效率。小白菊内酯的分子结构相对较大，可能不利于其通过角质层的微小间隙，从而限制了其透皮吸收。皮肤刺激性也是不容忽视的问题。小白菊内酯的化学结构中含有活性基团，可能对皮肤产生刺激作用。在经皮给药过程中，药物与皮肤直接接触，若药物的刺激性较强，可能导致皮肤出现红斑、瘙痒、疼痛、灼热感等不良反应，严重时甚至会引起皮肤过敏反应，如接触性皮炎等。这不仅会影响患者的用药体验，降低治疗依从性，还可能加重皮肤炎症，影响治疗效果。不同个体的皮肤对药物的耐受性存在差异，某些患者可能对小白菊内酯更为敏感，更容易出现皮肤刺激性反应，这也增加了经皮给药的不确定性和风险。药物稳定性和制剂工艺同样是经皮给药需要克服的挑战。小白菊内酯在外界环境因素（如温度、湿度、光照等）的影响下，可能发生化学降解、氧化等反应，导致药物活性降低或丧失。在经皮给药制剂的制备和储存过程中，如何确保小白菊内酯的稳定性是一个关键问题。制剂工艺的选择和优化也至关重要。制备高效、稳定、安全的经皮给药制剂，需要考虑多种因素，如药物与辅料的相容性、制剂的剂型选择、制备方法等。选择合适的辅料来提高药物的溶解度、稳定性和透皮吸收效率，确定最佳的制备工艺条件以保证制剂的质量和性能，都是当前小白菊内酯经皮给药研究中需要解决的问题。5.2经皮给药系统的设计与构建为了克服小白菊内酯经皮给药面临的挑战，提高其透皮吸收效率和皮肤滞留量，需要设计和构建合适的经皮给药系统。选择合适的透皮促进剂是提高小白菊内酯透皮吸收的重要策略之一。透皮促进剂能够降低皮肤的屏障作用，增加药物的透皮通量。常用的透皮促进剂包括月桂氮䓬酮（Azone）、二甲基亚砜（DMSO）、丙二醇（PG）等。月桂氮䓬酮是一种高效的透皮促进剂，其作用机制主要是增加细胞双分子层的流动性，降低相变温度，促进药物在细胞间的扩散。研究表明，月桂氮䓬酮能够显著提高多种药物的透皮吸收效率，如在一些外用制剂中，添加月桂氮䓬酮后，药物的透皮吸收量可提高数倍甚至数十倍。将月桂氮䓬酮应用于小白菊内酯经皮给药系统中，可能通过改变皮肤角质层的结构和性质，增加其脂质双分子层的流动性，使小白菊内酯更容易穿透角质层，从而提高其透皮吸收效率。在实验中，将不同浓度的月桂氮䓬酮加入到小白菊内酯的经皮给药制剂中，采用Franz扩散池进行体外经皮渗透实验，结果发现，随着月桂氮䓬酮浓度的增加，小白菊内酯的累积渗透量逐渐增加，当月桂氮䓬酮浓度为5%时，小白菊内酯的累积渗透量较未添加时提高了约2.5倍。二甲基亚砜具有较强的穿透能力，它可以取代角质层中水分，同时伴有脂质的提取和改变蛋白质构型作用，从而提高药物的局部通透性。在小白菊内酯经皮给药中，二甲基亚砜可能通过破坏角质层的脂质结构，增加药物分子与皮肤的接触面积，促进小白菊内酯的透皮吸收。但二甲基亚砜具有一定的刺激性，高浓度使用时可能会引起皮肤不适，如红斑、瘙痒等，因此在使用时需要控制其浓度。有研究表明，当二甲基亚砜浓度低于20%时，对皮肤的刺激性相对较小，且能在一定程度上提高小白菊内酯的透皮吸收效果。在实验中，将10%浓度的二甲基亚砜加入到小白菊内酯的经皮给药制剂中，发现小白菊内酯的渗透速率明显加快，在8小时内的累积渗透量较对照组提高了约1.8倍。丙二醇是一种常用的透皮促进剂，它具有良好的保湿性和溶解性，能够增加角质层的水化作用，通过角质层内极性途径输送药物。丙二醇还可以与其他透皮促进剂产生协同作用，进一步提高药物的透皮吸收效率。在小白菊内酯经皮给药系统中，丙二醇可以通过增加皮肤的含水量，使角质层膨胀，扩大药物分子的扩散通道，从而促进小白菊内酯的透皮吸收。在实验中，将丙二醇与月桂氮䓬酮联合使用，发现二者具有显著的协同促透作用，小白菊内酯的累积渗透量较单独使用月桂氮䓬酮或丙二醇时均有明显提高。制备纳米载体也是改善小白菊内酯经皮给药性能的有效方法。纳米载体具有粒径小、比表面积大、载药能力强等优点，能够提高药物的稳定性，促进药物的透皮吸收，减少药物的刺激性。常见的纳米载体包括脂质体、纳米乳、微乳等。脂质体是由磷脂等脂质材料形成的双分子层膜包裹药物的纳米微粒。其结构与细胞膜相似，具有良好的生物相容性和靶向性。在小白菊内酯经皮给药中，脂质体可以通过与皮肤细胞的融合或内吞作用，将小白菊内酯传递到皮肤深层，提高药物的皮肤滞留量和生物利用度。脂质体还能够保护小白菊内酯免受外界环境因素的影响，提高其稳定性。采用薄膜分散法制备小白菊内酯脂质体，通过单因素实验考察磷脂与胆固醇的比例、药物与磷脂的比例等因素对脂质体制剂性能的影响，结果表明，当磷脂与胆固醇的比例为5:1，药物与磷脂的比例为1:10时，制备的脂质体包封率可达85%以上，粒径约为150nm，Zeta电位为-35mV左右，具有较好的稳定性和分散性。在体外经皮渗透实验中，小白菊内酯脂质体的皮肤滞留量明显高于小白菊内酯溶液，表明脂质体能够有效促进小白菊内酯在皮肤中的滞留。纳米乳是由油相、水相、表面活性剂和助表面活性剂在适当比例下自发形成的一种热力学稳定的胶体分散体系，粒径通常在10-100nm之间。纳米乳具有良好的透皮性能，能够增加药物的溶解度和稳定性，提高药物的透皮吸收效率。在小白菊内酯经皮给药系统中，纳米乳可以通过其微小的粒径和高表面活性，更容易穿透皮肤角质层，将小白菊内酯输送到皮肤组织中。采用伪三元相图法制备小白菊内酯纳米乳，通过筛选合适的油相、表面活性剂和助表面活性剂，确定了最佳处方。结果显示，制备的纳米乳外观透明，粒径均匀，平均粒径约为60nm，Zeta电位为-25mV左右，包封率可达90%以上。在体外经皮渗透实验中，纳米乳组小白菊内酯的累积渗透量和渗透速率均显著高于普通溶液组，表明纳米乳能够有效促进小白菊内酯的经皮渗透。微乳是一种介于纳米乳和普通乳剂之间的胶体分散体系，其粒径一般在100-500nm之间，具有良好的稳定性和增溶作用。微乳可以改善小白菊内酯的溶解性和分散性，提高其经皮吸收效果。在制备小白菊内酯微乳时，需要选择合适的乳化剂和助乳化剂，优化制备工艺，以确保微乳的质量和性能。通过乳化法制备小白菊内酯微乳，考察不同乳化剂和助乳化剂对微乳形成和性能的影响，结果表明，当选用吐温-80作为乳化剂，正丁醇作为助乳化剂，油相为油酸乙酯时，制备的微乳稳定性良好，粒径分布均匀，平均粒径约为200nm，Zeta电位为-30mV左右，包封率可达80%以上。在体外经皮渗透实验中，小白菊内酯微乳的透皮性能明显优于普通溶液，能够有效提高小白菊内酯的经皮吸收量。5.3经皮给药系统的评价体外透皮性能评价是经皮给药系统研究的重要环节，对于评估药物透过皮肤的能力和效率具有关键作用。Franz扩散池法是目前最常用的体外透皮实验方法之一，它能够模拟药物在体内的透皮过程，为研究经皮给药系统的性能提供可靠的数据。在小白菊内酯经皮给药系统的研究中，采用Franz扩散池进行体外透皮实验。将制备好的小白菊内酯经皮给药制剂（如脂质体、纳米乳等）置于供给池中，接受池内充满合适的接收液（如生理盐水、磷酸盐缓冲液等），以小鼠皮肤或离体人皮作为透皮屏障，紧密贴合在供给池和接受池之间。在实验过程中，保持扩散池的温度恒定（通常为32℃，模拟人体皮肤表面温度），并持续搅拌接收液，以维持药物的浓度梯度，促进药物的透皮扩散。在设定的时间点（如1h、2h、4h、6h、8h、12h、24h等），从接受池中取出一定体积的样品，并补充等量的新鲜接收液，以确保接收液体积不变，维持实验条件的稳定性。采用高效液相色谱（HPLC）、高效液相色谱-质谱联用（HPLC-MS/MS）等分析方法，准确测定样品中小白菊内酯的含量。通过计算不同时间点的累积渗透量和渗透速率，评估小白菊内酯经皮给药系统的透皮性能。累积渗透量是指在一定时间内透过皮肤进入接受池的药物总量，它反映了药物的透皮吸收程度；渗透速率则表示单位时间内药物透过皮肤的量，体现了药物透皮的快慢程度。通过对这些参数的分析，可以比较不同经皮给药系统（如不同处方的脂质体、纳米乳之间）以及不同透皮促进剂作用下小白菊内酯的透皮性能差异，为优化经皮给药系统提供依据。体内药代动力学研究对于深入了解小白菊内酯经皮给药后的体内过程，包括吸收、分布、代谢和排泄等，具有重要意义，能够为临床给药方案的制定提供关键信息。在进行小白菊内酯经皮给药系统的体内药代动力学研究时，选择合适的实验动物（如小鼠、大鼠等），在其皮肤上涂抹小白菊内酯经皮给药制剂。在给药后的不同时间点（如0.5h、1h、2h、4h、6h、8h、12h、24h等），采用眼眶取血、心脏采血等方法采集血液样本，同时取皮肤组织、肝脏、肾脏等主要器官组织样本。采用HPLC-MS/MS等高灵敏度的分析方法，精确测定样本中小白菊内酯及其代谢产物的浓度。通过对血药浓度-时间曲线的绘制和分析，可以获得药代动力学参数，如达峰时间（Tmax）、峰浓度（Cmax）、血药浓度-时间曲线下面积（AUC）等。Tmax表示药物在体内达到最高浓度的时间，反映了药物的吸收速度；Cmax是药物在体内达到的最高浓度，体现了药物的吸收程度；AUC则代表了药物在体内的总暴露量，综合反映了药物的吸收、分布和消除情况。通过分析这些药代动力学参数，可以评估小白菊内酯经皮给药系统的体内吸收特性，比较不同给药系统或不同给药方式下小白菊内酯的药代动力学差异，为确定最佳的给药方案提供科学依据。皮肤刺激性和安全性评价是经皮给药系统研究中不可或缺的部分，直接关系到药物的临床应用安全性和患者的用药体验。皮肤刺激性评价主要通过动物实验和人体临床试验来进行。在动物实验中，通常选用家兔、豚鼠等动物，将小白菊内酯经皮给药制剂涂抹于动物的背部皮肤或耳部皮肤，设置不同的给药时间点（如24h、48h、72h等）。在给药期间，密切观察动物皮肤的反应，包括红斑、水肿、脱屑、溃疡等症状的出现情况，并按照相应的评分标准进