流感核酸检测相关知识培训

汇报人:XXXX2025年12月03日流感核酸检测相关知识培训PPTCONTENTS目录01

流感流行现状与防控意义02

流感病毒与核酸检测基础03

核酸检测的适应证与高危人群04

样本采集规范与操作技术CONTENTS目录05

实验室检测技术操作规范06

结果解读与临床应用07

质量控制与安全管理08

最新指南与技术进展流感流行现状与防控意义012025年流感流行特征与趋势

01流行强度与传播态势2025年11月数据显示，全国流感活动呈显著上升阶段，门急诊病例流感病毒阳性率已达17.5%并持续攀升，流感疫情高峰预计出现在12月中下旬至次年1月初。

02优势流行毒株当前我国流感流行以甲型H3N2亚型为主，占比超过95%，同时存在少量甲型H1N1和乙型流感病毒共同流行。H3N2毒株因过去两年未广泛流行，人群普遍免疫力较低。

03重点地区与高发场所流感传播迅速，在学校、托幼机构、养老院等人群聚集场所易发生暴发疫情。我国北方省份通常呈冬季流行模式，南方省份为春夏季高峰，中纬度地区则呈现冬春季和夏秋季双周期高峰。

04高危人群感染风险儿童（尤其学龄期儿童）、≥65岁老年人、慢性基础疾病患者、肥胖者（BMI>30）及妊娠期妇女等为流感感染高危人群，易发展为重症病例，需重点防护与早期干预。流感病毒对公共卫生的威胁季节性流行与高感染率流感病毒呈季节性流行，每年可引起大规模传播。2025年监测数据显示，11月全国流感病毒门急诊病例阳性率已达17.5%，且持续攀升，甲型H3N2亚型占比超过95%。重症与高危人群风险儿童、老年人（≥65岁）及有基础疾病者（如慢性呼吸系统疾病、免疫功能抑制等）感染后易发展为重症，可引发肺炎、心肌炎等并发症，全球每年因流感导致大量住院和死亡病例。高传染性与聚集性暴发流感病毒通过飞沫和接触传播，传染性强，基本再生数（R0）约为1-2，在学校、托幼机构、养老院等人群密集场所易发生暴发疫情，2025年多地学校因流感暴发停课。病毒变异与防控挑战流感病毒易发生抗原漂移和转变，如甲型H3N2亚型变异性高，过去两年未流行导致人群免疫力普遍较低，增加了疫苗研发难度和防控复杂性，对公共卫生系统构成持续压力。核酸检测在流感防控中的核心价值

早期诊断与精准分型的“金标准”流感病毒核酸检测敏感性和特异性高，能在疾病早期，病毒载量较低时检测出病毒，是诊断流感的“金标准”，并能精准区分甲型、乙型及具体亚型，为针对性治疗提供依据。

把握48小时黄金治疗期的关键流感发病48小时内是抗病毒治疗的黄金期。核酸检测可快速明确病因，帮助临床尽早启动抗病毒治疗，减轻症状、降低并发症发生率，改善患者预后。

混合感染鉴别与病情评估的重要工具儿童、老年人和有基础疾病者易发生流感病毒与其他病原体混合感染。多重核酸检测可同时鉴别多种呼吸道病原体，有助于评估病情严重程度，指导制定精准治疗方案。

疫情监测与传播控制的科学依据核酸检测结果可为流感疫情监测提供数据支持，帮助掌握病毒流行趋势、变异情况，为公共卫生决策提供科学依据，同时有助于及时发现和隔离感染者，有效遏制流感传播。流感病毒与核酸检测基础02流感病毒的分型与生物学特性流感病毒的基本分型流感病毒全称流行性感冒病毒，人群普遍易感，分为甲、乙、丙、丁四型。目前感染人的主要是甲型和乙型流感病毒。甲型流感病毒的亚型划分甲型流感病毒根据病毒颗粒外膜植物血凝素（HA）和神经氨酸酶（NA）蛋白抗原性的不同，可分为16个H亚型（H1-H16）和9个N亚型（N1-N9）。甲型流感病毒的变异特性甲型流感病毒具有变异性高的特点，其变异包括抗原漂移（小范围基因变异，导致年度特异性）和抗原转变（大范围基因重组，可能引发大流行）。2025年监测显示，甲型H3N2亚型占比超过95%。乙型流感病毒的特点乙型流感病毒变异性相对较低，感染后症状通常较甲型轻，但儿童感染乙型流感时，恶心、呕吐、腹泻等消化道症状更为多见。核酸检测的原理与技术优势01检测原理：精准定位病毒遗传物质流感病毒核酸检测通过提取样本中病毒RNA，经逆转录为cDNA后，利用PCR技术特异性扩增病毒靶基因序列，通过荧光信号捕捉实现病毒检测。其核心是"精准定位+信号放大"，引物设计仅与流感病毒核酸结合，确保特异性；扩增可将微量病毒核酸放大至可检测水平。02技术优势一：高灵敏度，早期诊断利器核酸检测能在感染早期、病毒载量较低时检出，避免漏诊。相比抗原检测，其灵敏度更高，即使样本中病毒数量极少也能被捕捉，是诊断流感的"金标准"，尤其适用于症状不典型或抗原检测阴性但高度疑似流感的病例。03技术优势二：高特异性，精准区分病毒类型可准确区分甲型、乙型流感病毒，甚至进一步鉴别亚型（如甲型H3N2、H1N1），为临床治疗方案选择和流行病学监测提供关键依据，避免因误诊导致的治疗延误或药物滥用。核酸检测与其他检测方法的对比与抗原检测对比：灵敏度与特异性

核酸检测敏感性和特异性高，是诊断流感的“金标准”，能区分病毒类型和亚型；抗原检测快速简便（约30分钟出结果），但灵敏度较低，阴性结果不能完全排除流感感染。与抗体检测对比：检测时机与临床意义

抗体检测主要通过检测体内抗体水平，恢复期IgG抗体阳转或较急性期呈4倍及以上升高有回顾性诊断意义，不适用于早期诊断；核酸检测可在感染早期（病毒载量低时）检出，助力尽早治疗。与病毒分离培养对比：时效性与实用性

病毒分离培养是传统方法，但耗时较长，一般需数天；核酸检测一般6～12小时出结果，部分实验室可实现约3小时（白班）或70-100分钟出结果，能快速为临床诊断和治疗提供依据。核酸检测的适应证与高危人群03临床症状与流行病学史指征

典型临床症状表现流感常表现为“1烧、2痛、3乏力”的典型症状，即急起高热（体温≥38℃）、头痛与全身肌肉酸痛、明显乏力至卧床。在流行季节，符合上述症状的患者确诊率高达77%。儿童发热高于成人，乙型流感患儿多见消化道症状。

流行病学史核心要素在流感病毒流行时，发病7天内曾经到过风险地区，与感染患者有密切接触行为等，且出现相应高热、头痛、乏力等症状。

重症高危人群界定以下人群感染流感病毒，情况可能较重，应尽快进行流感病毒核酸检测及其他检查：＜5岁的儿童；≥65岁的老年人；伴有慢性呼吸系统疾病、心血管系统疾病（高血压除外）等基础疾病者；肥胖者（BMI＞30）；妊娠期妇女。重点筛查人群界定标准高危年龄组人群包括＜5岁的儿童和≥65岁的老年人，这类人群感染流感病毒后，发展为重症的风险较高，应优先进行核酸检测。伴有基础疾病患者患有慢性呼吸系统疾病、心血管系统疾病（高血压除外）、血液系统疾病、肝肾疾病、神经系统及神经肌肉疾病、恶性肿瘤、免疫功能抑制（包括应用免疫抑制剂或HIV感染等致免疫功能低下）等疾病的患者。特殊生理状态人群肥胖者（体重指数BMI＞30）以及妊娠期妇女，感染流感病毒后易出现严重并发症，需及时进行核酸检测以明确诊断。流行病学史相关人群在流感病毒流行时，发病7天内曾经到过风险地区，与感染患者有密切接触行为等，且出现相应高热、头痛、乏力等症状的人群。48小时黄金治疗期与检测时机

黄金治疗期的重要意义流感病毒感染后，发病48小时内是抗病毒治疗的黄金期。在此时间段内使用抗病毒药物，能有效抑制病毒复制，减轻炎症反应，降低并发症发生率。错过此期，病毒大量繁殖可能导致病情加重，增加疾病负担。

核酸检测指导黄金期用药最新《流行性感冒诊疗方案（2025年版）》推荐，流感流行季，有重症高危因素的流感样病例，应尽早进行抗病毒治疗，发病48小时内治疗获益最大。基于多病原流行现状，启动抗病毒治疗前建议及时进行核酸检测等病原学检查以指导精准治疗。

把握最佳检测时机在流感流行季节，出现急性高热、全身疼痛、乏力等症状时，应尽快进行核酸检测。尤其对于<5岁儿童、≥65岁老年人、妊娠期妇女及有基础疾病等重症高危人群，发病后应尽早检测，以便及时在黄金治疗期内采取干预措施。样本采集规范与操作技术04上呼吸道标本采集流程

鼻咽拭子采集步骤患者配合医务人员抬头或端坐，将合成纤维拭子轻轻插入鼻腔约3-5厘米，到达鼻咽部后停留数秒并旋转采集分泌物，过程中尽量避免打喷嚏以保证采样质量。

咽拭子采集要点患者张口发"啊"音，暴露咽后壁，用合成纤维拭子在两侧扁桃体及咽后壁轻柔擦拭，避免触碰牙齿、舌头等部位，确保采集到足够的上皮细胞及分泌物。

鼻咽抽取物采集方式医生使用与负压泵相连的收集器从患者鼻咽部抽取粘液，此方法需在专业操作下进行，适用于需要更高效获取样本的情况，采集后同样需注意样本的妥善保存与送检。

采样后即时处理规范采样完成后，将拭子立即放入含有病毒保存液的无菌采样管中，折断拭子杆使拭子头完全浸入保存液，旋紧管盖。患者需尽快佩戴好口罩，防止交叉感染风险。下呼吸道标本采集技术痰液标本采集患者清晨起床后用清水漱口，用力从深部咳出第一口浓痰，置于指定无菌容器中。此方法无创，但需患者配合，适用于有咳痰能力的患者。气管抽取物采集医生通过与负压泵相连的收集器从气管抽取呼吸道分泌物，属于有创操作，主要针对症状严重、无法有效咳痰的患者，以提高检测准确性。支气管肺泡灌洗液采集在支气管镜室进行，局麻下行电子支气管镜术，向支气管肺泡内注入生理盐水后回抽获取灌洗液。患者可能有咽部异物感，需配合医生，不适时及时告知。采集注意事项下呼吸道标本采集通常为有创或需特殊设备，主要用于重症患者。采集后标本应尽快送检，若不能及时送检，需用冰袋保存或置于4℃冰箱内，避免核酸降解。特殊人群采样注意事项儿童人群采样要点针对婴幼儿采用短小拭子以减少不适感，需两名操作者配合固定头部并快速完成采集。采样过程中动作轻柔，避免引起儿童剧烈哭闹影响样本质量。老年人群采样要点老年人可能存在吞咽困难或反应迟缓，采集鼻咽拭子时需耐心指导配合。若患有基础呼吸道疾病，操作前需评估耐受情况，必要时选择刺激性较小的采样方式。妊娠期妇女采样要点采样时应采取舒适体位，避免长时间仰卧。操作动作轻柔，减少咽部刺激引发恶心呕吐。若出现不适，立即暂停操作并评估状况后再决定是否继续。免疫功能低下人群采样要点该类人群感染后病毒载量可能较低，建议优先选择鼻咽拭子以提高检出率。采样后样本需立即置于病毒保存液中并尽快送检，避免核酸降解影响检测结果。样本保存与运输标准

样本保存条件与时限鼻咽拭子样本需在4℃冷藏环境下保存不超过72小时，若延迟检测需立即置于-70℃超低温冰箱避免RNA降解。采集后样本应置于含有病毒保存液的病毒采样管内，并及时送检。

样本运输生物安全要求流感样本属于《人间传染的病原微生物目录》中B类感染性物质，其包装应符合国际民用航空组织的《危险品航空安全运输技术细则》的PI650分类包装要求，使用三层包装系统（主容器+吸水材料+外包装），标注UN3373生物危害标识，冷链运输全程温度监控并记录。

特殊样本处理要求采集后2小时内完成血浆分离，离心条件为3000rpm、15分钟，避免反复冻融导致病毒灭活。痰样本需患者清晨起床用清水漱口后，用力从深部咳出第一口浓痰，放在指定的无菌容器中。实验室检测技术操作规范05生物安全防护要求

实验室生物安全级别季节性流感病毒操作需在生物安全二级（BSL-2）实验室进行；疑似高致病禽流感病例标本操作需在BSL-2级实验室采取BSL-3级防护措施。

关键区域防护规范核酸提取及加RNA模板操作应在BSL-2级实验室生物安全柜内进行；PCR反应体系配制在专用体系配制区；PCR产物检测在独立电泳区操作，严格分区防污染。

人员防护装备要求检测人员需配备防护服、口罩、手套等防护物资；处理疑似高风险标本时，应加强个人防护，确保符合相应生物安全级别防护标准。

样本操作安全规范样本采集、处理及检测全过程需严格遵守无菌操作原则；样本运输应符合《人间传染的病原微生物目录》中B类感染性物质包装要求，标注生物危害标识并冷链运输。试剂与设备准备要点

01主要试剂选择与质量控制选用经国家监管部门批准的试剂盒，检查试剂有效期、储存条件（如避光、低温保存），并提前进行试剂性能验证实验。实验检测所需核酸提取试剂和一步法RT-PCR检测试剂不同批号之间需进行灵敏度的检测，至少半年一次。

02核心设备配置与校准配备BSL-2生物安全柜、可调转速最大至14000rmp的离心机、涡旋混合器、多量程移液器、PCR仪、电泳槽和电泳仪、凝胶成像系统等。确保PCR仪、离心机等关键设备经过定期校准和性能验证，并保留完整的维护记录。

03耗材与防护物资储备配备足量无菌采样管、移液器吸头、防护服、口罩及消毒液。采样拭子应选择头部为合成纤维的拭子（例如聚酯纤维），不推荐棉拭子。避免检测过程中因物资短缺导致操作中断或交叉污染风险。核酸提取与扩增流程

样本前处理与核酸提取采集后的样本（如鼻咽拭子）需置于含病毒保存液的采样管内，及时送检。若不能及时送检，需4℃冷藏或冰袋保存。核酸提取在生物安全柜内进行，采用磁珠法等商品化试剂盒，从样本中分离纯化病毒RNA，去除杂质，为后续扩增做准备。

RT-PCR反应体系配制在体系配制区，严格按照试剂说明书，将提取的RNA模板、One-stepRT-PCR试剂盒（含酶、缓冲液）、特异性引物（针对流感病毒HA或NA基因）、RNase抑制剂等按比例混合。配制过程需使用无菌耗材，避免交叉污染。

核酸扩增与产物检测将反应体系置于PCR仪中，设置逆转录及扩增程序。通过荧光探针法实时监测扩增过程，根据荧光信号强度判断结果。扩增产物检测在电泳区操作（若为ConventionalRT-PCR），使用凝胶成像系统观察条带。整个过程需设置阳性对照（Ct值30以内）和阴性对照（Ct值0）进行质量控制。多重病原体检测应用

混合感染风险与危害儿童、老年人和有基础疾病者是流感病毒感染高发人群，也更易出现多种病原体混合感染，常见如呼吸道合胞病毒、肺炎支原体等。混合感染会加重病情，增加治疗难度和疾病负担。

多重核酸检测的临床价值早期采用多重核酸检测可快速明确流感病毒及其他病原体，帮助评估病情严重程度，指导针对性治疗与护理方案，同时利于医院感染防控，防止病毒在住院患者中传播。

常见多重检测组合方案可组合甲型/乙型流感病毒/呼吸道合胞病毒核酸检测，以及肺炎支原体/衣原体/腺病毒、人副流感病毒、人偏肺病毒等核酸检测试剂盒，实现与多种常见呼吸道病原体混合感染的鉴别诊断。

检测技术特点与优势采用磁珠法提取和荧光PCR扩增，结果精准可靠。可搭载全自动核酸提纯与实时荧光PCR分析系统，随到随检，灵活组合检测1-10种病原体，TAT时间短，约70/100分钟出结果，配备急诊模块可优先处理紧急样本。结果解读与临床应用06阳性结果的临床意义明确流感病毒感染诊断流感病毒核酸检测结果阳性是流感病毒感染的主要确诊依据之一，提示患者当前存在流感病毒感染。指导临床隔离与治疗结果阳性患者需尽早隔离，避免病毒传播。应尽快使用抗病毒药物（如奥司他韦、玛巴洛沙韦等）进行治疗，发病48小时内是抗病毒治疗的黄金期，可有效减轻症状、降低并发症发生率。特殊人群需警惕重症风险对于妊娠中晚期（3个月以上）妇女、情况严重者，以及儿童、老年人、有基础疾病等高危人群，核酸检测阳性后需密切关注病情变化，必要时需住院治疗，以防发展为重症。阴性结果的影响因素分析

样本采集相关因素采样部位不准确或深度不足，如鼻咽拭子未达鼻咽部，可能导致未采集到含病毒分泌物。采样时间过短或未充分旋转，也会影响样本质量。

样本处理与运输因素样本采集后未及时送检，核酸易降解；未使用含病毒保存液的采样管或保存温度不当（如未4℃冷藏或冰袋保存），也会导致病毒核酸破坏。

检测时机与病毒载量因素感染早期病毒尚未大量复制，样本中病毒核酸量极低，可能低于检测下限；发病超过7天后采样，病毒载量下降，也可能出现假阴性。

实验室操作与技术因素试剂质量不合格、核酸提取效率低或PCR扩增过程中出现抑制物，可能导致检测失败。实验室交叉污染或操作不规范也可能影响结果准确性。混合感染的鉴别诊断

混合感染的高危人群与常见病原体儿童、老年人及有基础疾病者是流感病毒混合感染的高发人群。常见混合感染病原体包括呼吸道合胞病毒、肺炎支原体、人偏肺病毒、腺病毒、副流感病毒等。

混合感染的临床危害混合感染会加重患者病情，增加并发症风险，影响治疗效果，给患者造成更严重的疾病负担，同时也增加了临床诊断和治疗的复杂性。

多重核酸检测的临床价值感染早期采用多重核酸检测可快速明确流感病毒及其他病原体，有助于评估病情严重程度，指导制定针对性治疗和护理方案，同时利于医院感染防控，防止病毒传播。

核酸检测组合方案示例可组合甲型/乙型流感病毒/呼吸道合胞病毒核酸检测试剂盒，及肺炎支原体/衣原体/腺病毒、人副流感病毒、人偏肺病毒等核酸检测试剂盒，实现多种呼吸道病原体混合感染的鉴别诊断。质量控制与安全管理07室内质控与室间质评要求

室内质控：检测前的质量保证确保PCR仪、离心机、生物安全柜等关键设备定期校准和性能验证，并保留完整维护记录。选用经国家监管部门批准的试剂盒，检查有效期、储存条件，提前进行试剂性能验证实验。

室内质控：检测中的质量监控每批次检测需同步加入阴性对照和弱阳性对照，监控提取效率及交叉污染风险。阳性对照核酸事先应稀释分装，经Real-timePCR检测Ct值在30以内；阴性对照为DEPC处理水，Real-timePCR检测Ct值为0。

室间质评：实验室能力的外部验证定期参加国家级或国际级实验室能力验证计划，确保检测结果与其他实验室具有可比性。引入独立第三方提供的质控品进行盲样测试，评估实验室检测能力的客观性。

质量控制：持续改进与记录详细记录质控数据，由专人定期审核，及时发现潜在问题并采取改进措施。实验检测所需核酸提取试剂和一步法RT-PCR检测试剂不同批号之间需进行灵敏度的检测，至少半年一次。常见问题处理与应急预案

检测结果异常情况处理若出现假阳性结果，应立即核查实验室操作是否存在样本交叉污染或试剂污染，通过阴性对照验证，并对可疑样本进行复测。出现假阴性结果时，需考虑采样规范性、样本保存运输条件及检测时机，建议重新采集高质量样本或采用其他检测方法复核。

样本采集与处理问题应对采样过程中若患者出现剧烈不适或抗拒，应暂停操作，安抚患者情绪，必要时由两名操作者配合完成。样本溶血或不合格时，需重新采集，并严格按照规范操作，确保样本质量。对于采集后无法及时送检的样本，应立即置于4℃冰箱或冰袋保存，避免核酸降解。

设备故障应急处理措施当PCR仪、离心机等关键设备发生故障时，应立即启用备用设备，保障检测工作连续性。若生物安全柜出现异常，需停止操作，对柜内样本进行妥善处理，评估生物安全风险，并联系专业人员维修，维修期间检测工作可在