平调饮治疗原发性肝癌的实验探究：疗效、机制与展望

平调饮治疗原发性肝癌的实验探究：疗效、机制与展望一、引言1.1研究背景与意义原发性肝癌是一种在全球范围内严重威胁人类健康的恶性肿瘤，其发病率和死亡率均居高不下。据世界卫生组织国际癌症研究机构（IARC）发布的2020年全球癌症负担数据显示，肝癌的全球新发病例数约为90.6万，死亡病例数约为83万，分别位居所有恶性肿瘤的第6位和第3位。在中国，肝癌的形势更为严峻，新发病例数和死亡病例数分别占全球的45.3%和47.1%，严重影响着民众的生命健康和生活质量。肝癌起病隐匿，早期症状不明显，多数患者确诊时已处于中晚期，失去了手术切除的最佳时机。即使部分患者能够接受手术治疗，术后复发率也较高。对于无法手术切除的中晚期肝癌患者，目前主要的治疗手段包括介入治疗、化疗、放疗、靶向治疗和免疫治疗等。然而，这些治疗方法往往存在一定的局限性和不良反应。例如，介入治疗虽能在一定程度上控制肿瘤生长，但易导致肿瘤复发和转移；化疗药物在杀伤肿瘤细胞的同时，也会对正常细胞造成损伤，引发严重的毒副作用，如骨髓抑制、胃肠道反应等，降低患者的生活质量和治疗依从性；放疗则受到肝脏放射耐受剂量的限制，难以彻底杀灭肿瘤细胞；靶向治疗和免疫治疗虽取得了一定的进展，但部分患者存在耐药性问题，且治疗费用高昂，给患者和社会带来了沉重的经济负担。中医药作为我国的传统医学，在肿瘤治疗领域具有独特的优势。其强调整体观念和辨证论治，通过调整机体的阴阳平衡、气血运行和脏腑功能，达到扶正祛邪、抗癌抑瘤的目的。中医药治疗肿瘤不仅能够减轻患者的症状，提高生活质量，还能增强机体的免疫力，抑制肿瘤的生长和转移，延长患者的生存期。同时，中医药的副作用相对较小，可与西医治疗方法联合应用，起到增效减毒的作用。平调饮是黑龙江中医药大学附属第一医院多年来用以治疗肝癌的中药验方，主要由黄芪、当归、白芍、熟地、重楼等中药组成，具有调整阴阳、补益气血、解毒散结的功效。在临床实践中，平调饮对原发性肝癌的治疗取得了较好的疗效，能够改善患者的症状，提高生活质量，延长生存期。然而，目前关于平调饮治疗原发性肝癌的作用机制尚不完全明确，缺乏深入的实验研究和科学的理论依据。因此，开展平调饮治疗原发性肝癌的实验研究具有重要的理论和实践意义。从理论层面来看，深入研究平调饮的作用机制，有助于揭示中医药治疗肝癌的科学内涵，丰富和完善中医肿瘤学的理论体系，为中医药在肝癌治疗中的应用提供更坚实的理论基础。从实践角度而言，明确平调饮的作用靶点和作用途径，能够为临床合理应用平调饮治疗原发性肝癌提供科学指导，提高治疗效果，改善患者的预后。同时，本研究也为开发新型的肝癌治疗药物提供了新的思路和方法，具有潜在的应用价值和社会效益。1.2平调饮概述平调饮作为黑龙江中医药大学附属第一医院的中药验方，在原发性肝癌的治疗中展现出独特的价值。其主要由黄芪、当归、白芍、熟地、重楼等多味中药精妙配伍而成。黄芪味甘，性微温，归脾、肺经，具有补气升阳、固表止汗、利水消肿、生津养血、行滞通痹、托毒排脓、敛疮生肌之功效。在平调饮中，黄芪大补元气，为君药，能增强机体的正气，提高免疫力，抵抗癌邪的侵袭。当归味甘、辛，性温，归肝、心、脾经，有补血活血、调经止痛、润肠通便的作用。与黄芪配伍，气血双补，共为君药，可改善肝癌患者气血亏虚的状态，促进机体的恢复。白芍味苦、酸，性微寒，归肝、脾经，能养血调经、敛阴止汗、柔肝止痛、平抑肝阳，协助君药增强养血的功效，同时可缓解肝癌患者可能出现的胁肋疼痛等症状。熟地味甘，性微温，归肝、肾经，有补血滋阴、益精填髓的作用，能滋养肝肾之阴，与其他药物协同，共同调节机体的阴阳平衡。重楼味苦，性微寒，有小毒，归肝经，具有清热解毒、消肿止痛、凉肝定惊的功效，可针对肝癌的癌毒起到一定的抑制和消除作用，为方中的佐药。从整体功效来看，平调饮具有调整阴阳、补益气血、解毒散结的显著功效。中医理论认为，人体的阴阳平衡是维持健康的基础，而肿瘤的发生往往与阴阳失调密切相关。原发性肝癌患者多存在正气亏虚、气血不足的情况，同时癌毒内蕴，导致机体出现一系列复杂的病理变化。平调饮通过调整阴阳，使机体的阴阳重新恢复平衡状态，为机体的正常生理功能提供稳定的内环境；补益气血则能改善患者因疾病消耗和治疗损伤导致的气血不足，增强机体的抵抗力和修复能力；解毒散结有助于消除体内的癌毒，抑制肿瘤的生长和扩散，缩小瘤体。在临床应用方面，平调饮在原发性肝癌的治疗中已取得了较为显著的成果。一项针对528例气血亏虚型中晚期原发性肝癌患者的回顾性研究表明，患者连续服用平调饮6个疗程以上，全组患者中位总生存期（OS）达到15.3个月，1、3、5年生存率分别为81.4%、41.7%、10.2%。甲胎蛋白（AFP）值在治疗6个月时明显低于治疗前，主要症状如腹胀、乏力、口干的中医证候积分治疗后较治疗前也有所降低。这充分说明平调饮不仅能够延长患者的生存期，还能有效降低AFP值，显著改善患者的不良症状，提高其生活质量。此外，还有研究将平调饮与其他治疗方法联合应用，如与立体定向适形放疗相结合，结果显示中药+3DCRT组在骨髓抑制、胃肠道反应方面的程度明显低于单纯介入治疗组，且在肝功能损害方面与介入治疗组相比无明显差异。这表明平调饮与放疗联合应用，能在不增加肝功能损害的前提下，减轻放疗的毒副作用，提高治疗的安全性和患者的耐受性。1.3研究目的与创新点本实验研究旨在深入探究平调饮治疗原发性肝癌的作用机制，为其临床应用提供更为坚实的科学依据。具体研究目的如下：其一，通过动物实验，观察平调饮对肝癌小鼠肿瘤生长的抑制作用，测定肿瘤重量、计算抑瘤率，直观地了解平调饮对瘤体大小的影响，从而明确其在抑制肿瘤增殖方面的效果。其二，研究平调饮对肝癌小鼠免疫功能的调节作用，检测脾脏指数、胸腺指数以及相关免疫细胞因子的表达水平，揭示平调饮如何通过调节机体的免疫功能来发挥抗癌作用，为提高肝癌患者的免疫力提供理论支持。其三，探讨平调饮对肝癌细胞凋亡相关蛋白表达的影响，运用免疫组化、Westernblot等技术检测Bcl-2、Bax、Caspase-3等凋亡相关蛋白的表达变化，从细胞凋亡的角度深入剖析平调饮的抗癌机制，为开发新的肝癌治疗策略提供思路。在研究方法上，本实验具有一定的创新之处。以往对中药复方治疗肝癌的研究，多侧重于整体疗效的观察，而对其作用机制的研究相对不够深入和系统。本研究采用多种先进的实验技术和方法，从多个层面深入探究平调饮的作用机制。例如，在细胞实验中，运用RNA干扰技术，特异性地沉默肝癌细胞中与肿瘤生长、转移密切相关的基因，然后观察平调饮对沉默基因后肝癌细胞生物学行为的影响，从而更精准地确定平调饮的作用靶点。在动物实验方面，构建原位肝癌小鼠模型，该模型能够更真实地模拟肝癌在人体内的生长环境和转移过程，与传统的皮下移植瘤模型相比，能更准确地评估平调饮对肝癌的治疗效果和作用机制。在观察指标的选择上，本研究也有创新点。除了常规的肿瘤生长指标和免疫功能指标外，还引入了一些新的观察指标。如检测肝癌小鼠血清中肿瘤标志物的动态变化，不仅关注甲胎蛋白（AFP），还对异常凝血酶原（PIVKA-II）、高尔基体蛋白73（GP73）等新型肿瘤标志物进行监测，更全面地反映平调饮对肝癌的治疗效果。同时，利用转录组测序技术，分析平调饮干预后肝癌小鼠肿瘤组织的基因表达谱变化，筛选出差异表达基因，并对其进行功能富集分析和信号通路分析，从基因层面深入挖掘平调饮治疗原发性肝癌的潜在分子机制，为进一步研究提供新的靶点和方向。二、材料与方法2.1实验材料2.1.1实验动物本实验选用昆明种小鼠，共计200只，均为雄性，鼠龄6-8周，体重18-22g，由黑龙江中医药大学实验动物中心提供。昆明种小鼠是我国使用最广泛的封闭群小鼠，具有繁殖力强、生长快、适应性强等优点。其遗传背景相对稳定，个体差异较小，能够保证实验结果的一致性和可靠性。在肿瘤研究领域，昆明种小鼠对多种肿瘤细胞具有较好的易感性，能够成功构建多种肿瘤模型，是研究肿瘤生长、转移和治疗效果的常用动物模型之一。实验小鼠在黑龙江中医药大学实验动物中心的SPF级动物房饲养，环境温度控制在（22±2）℃，相对湿度为（50±10）%，12h光照/12h黑暗交替，自由摄食和饮水。实验前，小鼠适应性饲养1周，以使其适应实验环境，减少环境因素对实验结果的影响。在饲养过程中，密切观察小鼠的健康状况，确保小鼠无疾病感染，为后续实验提供健康的动物模型。2.1.2实验瘤株小鼠S180肉瘤瘤株和H22腹水型肝癌瘤株均购自黑龙江省肿瘤病防治研究所。这两种瘤株在肿瘤研究中应用广泛，具有明确的生物学特性和生长规律。S180肉瘤是一种源于小鼠的肉瘤细胞株，具有生长迅速、易于移植等特点，常被用于研究肿瘤的生长、侵袭和转移机制，以及抗癌药物的筛选和评价。H22腹水型肝癌瘤株则是一种小鼠肝癌细胞株，能够在小鼠体内快速生长并形成腹水瘤，模拟肝癌在体内的生长和扩散过程，是研究肝癌发病机制和治疗方法的重要模型。瘤株的保存采用液氮冻存法，将处于对数生长期的瘤细胞用冻存液（含10%二甲基亚砜、90%胎牛血清）悬浮后，分装于冻存管中，标记好瘤株名称、冻存日期等信息，放入液氮罐中保存。复苏时，将冻存管从液氮罐中取出，迅速放入37℃水浴中，轻轻摇晃，使其快速解冻。然后将解冻后的细胞悬液转移至离心管中，加入适量的培养基，1000rpm离心5min，弃去上清液，再用新鲜的培养基重悬细胞，接种于培养瓶中，置于37℃、5%CO₂的培养箱中培养。待细胞贴壁生长后，进行传代培养，用于后续实验。在瘤株的保存和复苏过程中，严格遵守无菌操作原则，确保瘤株的活性和纯度，避免污染和变异，以保证实验结果的准确性。2.1.3实验药物平调饮由黄芪、当归、白芍、熟地、重楼等中药组成，所用中药均购自黑龙江中医药大学附属一院，药材质量符合《中华人民共和国药典》标准。按照处方比例称取各味中药，将其混合后，用蒸馏水浸泡1h，使药材充分吸收水分。然后进行水煎煮，第一次煎煮时，加适量的水，武火煮沸后，改用文火煎煮30min，过滤收集煎液；第二次煎煮时，加水量适当减少，同样武火煮沸后文火煎煮20min，过滤收集煎液。将两次煎液混合均匀，用旋转蒸发仪进行浓缩，使其生药浓度达到1g/mL，置于4℃冰箱储存备用。对照药品氟尿嘧啶（5-FU）购自上海旭东海普药业有限公司，规格为0.25g/支。氟尿嘧啶是一种临床上常用的化疗药物，属于抗代谢类抗肿瘤药，能够干扰DNA和RNA的合成，从而抑制肿瘤细胞的增殖，在肝癌的化疗中具有重要地位，常被用作阳性对照药物，用于对比评价其他药物的抗肿瘤效果。使用时，根据实验动物的体重和给药剂量，用生理盐水将氟尿嘧啶稀释至所需浓度。2.1.4主要试剂与仪器实验所需的主要试剂包括免疫组化试剂盒（购自北京中杉金桥生物技术有限公司），用于检测肿瘤组织中相关蛋白的表达情况；Trizol试剂（Invitrogen公司产品），用于提取肿瘤组织中的总RNA；逆转录试剂盒（TaKaRa公司），将RNA逆转录为cDNA，以便进行后续的PCR扩增；PCR试剂盒（TaKaRa公司），用于扩增目的基因，分析基因的表达水平；BCA蛋白定量试剂盒（碧云天生物技术有限公司），用于测定细胞或组织中的蛋白质浓度，为Westernblot等实验做准备；ECL化学发光试剂（Millipore公司），在Westernblot实验中用于检测蛋白质条带，增强检测的灵敏度。主要仪器有高速冷冻离心机（Eppendorf公司，型号5424R），用于细胞和组织的离心分离，能够在低温条件下快速分离样品，减少生物活性物质的损失；PCR扩增仪（Bio-Rad公司，型号T100），精确控制PCR反应的温度和时间，实现目的基因的高效扩增；凝胶成像系统（Bio-Rad公司，型号GelDocXR+），用于观察和分析PCR扩增后的凝胶电泳结果，能够清晰地显示DNA条带，方便进行图像采集和数据分析；酶标仪（ThermoScientific公司，型号MultiskanGO），用于检测酶联免疫吸附试验（ELISA）的结果，定量分析样品中的目标物质含量；流式细胞仪（BD公司，型号FACSCalibur），能够对细胞进行多参数分析，检测细胞的凋亡、周期等指标，深入研究细胞的生物学特性；恒温培养箱（ThermoScientific公司，型号3111），为细胞培养提供稳定的温度、湿度和气体环境，保证细胞的正常生长和代谢；倒置显微镜（Olympus公司，型号IX71），用于观察细胞的形态和生长状态，实时监测细胞的变化情况。这些仪器设备性能稳定、精度高，能够满足本实验在分子生物学、细胞生物学等方面的检测需求，为实验的顺利进行提供了有力保障。2.2实验方法2.2.1小鼠肿瘤模型的建立S180肉瘤小鼠模型的接种方法：将处于对数生长期的S180肉瘤瘤株，用无菌生理盐水按1:3的比例稀释，制备成瘤细胞悬液。调整细胞数浓度为3×10⁶个/mL，并确保肿瘤细胞活力在95%以上。取健康的昆明种小鼠，在其右上肢腋下进行皮下接种，每只小鼠注射0.2mL瘤细胞悬液。接种过程严格遵循无菌操作原则，使用一次性无菌注射器和针头，避免感染和交叉污染。接种后，密切观察小鼠的状态，包括饮食、活动、精神状态等，以及接种部位的变化，如是否出现红肿、硬结等。H22肝癌小鼠模型的接种方法：选取生长状态良好的H22腹水型肝癌瘤株，以腹水型传代，取接种7-10d的腹水。在无菌条件下，对小鼠腹部皮肤进行消毒，用无菌针管穿过腹部皮肤，抽吸乳白色浓稠腹水（瘤液），若腹水为黄色或红色则应弃去不用，将抽取的腹水放入无菌容器内，置冰块保存。用无菌生理盐水按1:3比例稀释，制备瘤细胞悬液，调细胞数浓度为3×10⁶个/mL，保证肿瘤细胞活力在95%以上。对小鼠进行腹腔注射，每只注入0.2mL瘤细胞悬液。同样，在接种过程中严格执行无菌操作，注射完毕后，轻轻按摩小鼠腹部，使瘤细胞均匀分布在腹腔内。接种后，定期观察小鼠的体重变化、腹水生成情况以及精神状态等，及时记录相关数据。2.2.2动物分组及给药将接种S180肉瘤细胞和H22肝癌细胞24h后的昆明小鼠，分别随机分为5组。S180肉瘤小鼠实验每组15只，H22肝癌小鼠实验每组10只。具体分组如下：模型对照组，给予生理盐水0.2mL/20g灌胃，1次/d，作为空白对照，用于观察肿瘤自然生长情况下小鼠的各项指标变化；阳性对照组，给予氟尿嘧啶（5-FU）20mg/20g（按生药量计算），1次/d，氟尿嘧啶是临床上常用的化疗药物，作为阳性对照，用于对比平调饮的治疗效果；平调饮高剂量组，给予平调饮546mg/20g灌胃，1次/d，旨在探究高剂量平调饮对肿瘤的抑制作用及对机体的影响；平调饮中剂量组，给予平调饮273mg/20g灌胃，1次/d，观察中剂量平调饮的治疗效果；平调饮低剂量组，给予平调饮136.5mg/20g灌胃，1次/d，分析低剂量平调饮的作用。给药时，使用灌胃针将药物准确地注入小鼠胃内，操作过程要轻柔，避免损伤小鼠的食管和胃部。连续给药7d，在给药期间，每天定时观察小鼠的饮食、饮水、活动情况以及精神状态，记录小鼠的体重变化，如发现小鼠出现异常情况，如腹泻、呕吐、精神萎靡等，及时进行处理并记录。2.2.3观察指标及检测方法抑瘤率测定：对S180肉瘤小鼠，在末次给药24h后，称取小鼠体重，采用脊髓脱臼法处死小鼠，将小鼠仰卧位固定，用75%酒精对胸部进行消毒，于右前肢腋窝小心剥离瘤体，用电子天平精确称重，计算抑瘤率。抑瘤率（%）=（空白对照组平均瘤重-实验组平均瘤重）/空白对照组平均瘤重×100%。通过抑瘤率的计算，直观地评估平调饮对肿瘤生长的抑制程度。胸腺指数与脾脏指数的测定：同样在末次给药24h后，处死S180肉瘤小鼠，仰卧位固定，胸部75%酒精消毒，剪开胸骨，可见胸腺位于纵隔前上方，呈分叶状，与周围组织分界清晰，颜色灰白，有光泽，饱满有弹性，小心取出胸腺称重；左腹部可见呈暗红色条状的脾脏，取出后称重。计算胸腺指数和脾脏指数，胸腺指数=胸腺重量（mg）/体重（g），脾脏指数=脾脏重量（mg）/体重（g）。胸腺和脾脏是机体重要的免疫器官，其指数的变化可以反映机体免疫功能的状态，通过测定胸腺指数和脾脏指数，探究平调饮对小鼠免疫功能的影响。生存期观察：对H22肝癌小鼠，平调饮0.2mL/20g腹腔注射，1次/d，连续7d，停药后密切记录各组小鼠的存活时间，计算生命延长率。生命延长率（%）=（给药组动物平均生存天数-对照组动物的平均生存天数）/对照组动物的平均生存天数×100%。生存期是评估药物对肿瘤治疗效果的重要指标之一，通过观察小鼠的生存期，了解平调饮对H22肝癌小鼠生命延长的作用。免疫功能指标检测：采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测小鼠血清中白细胞介素-2（IL-2）、干扰素-γ（IFN-γ）等免疫细胞因子的含量。具体操作按照ELISA试剂盒说明书进行，首先将包被有特异性抗体的酶标板平衡至室温，加入标准品和待测样本，孵育后洗涤去除未结合的物质，再加入酶标记的二抗，孵育后洗涤，加入底物显色，最后用酶标仪测定吸光度值，根据标准曲线计算样本中免疫细胞因子的含量。IL-2和IFN-γ是重要的免疫调节因子，它们的含量变化可以反映机体免疫功能的强弱，通过检测这些指标，深入分析平调饮对小鼠免疫功能的调节机制。肿瘤相关基因表达检测：运用实时荧光定量PCR技术检测肿瘤组织中与细胞增殖、凋亡相关基因的表达水平，如Bcl-2、Bax、Caspase-3等。首先提取肿瘤组织中的总RNA，使用Trizol试剂按照说明书操作进行提取，然后通过逆转录试剂盒将RNA逆转录为cDNA，再以cDNA为模板，利用PCR试剂盒进行扩增。反应体系和反应条件根据试剂盒说明书进行设置，扩增结束后，分析Ct值，通过2^-ΔΔCt法计算目的基因的相对表达量。Bcl-2是抗凋亡基因，Bax和Caspase-3是促凋亡基因，它们的表达变化与肿瘤细胞的凋亡密切相关，通过检测这些基因的表达水平，从分子层面探究平调饮诱导肿瘤细胞凋亡的作用机制。2.2.4统计学处理实验数据采用SPSS22.0统计软件进行分析。计量资料以均数±标准差（x±s）表示，多组间比较采用单因素方差分析（One-WayANOVA），若方差齐性，组间两两比较采用LSD-t检验；若方差不齐，采用Dunnett’sT3检验。以P<0.05为差异具有统计学意义。通过合理的统计学分析方法，准确地揭示实验数据之间的差异，为平调饮治疗原发性肝癌的效果和作用机制提供可靠的统计学依据，增强研究结果的科学性和可信度。三、实验结果3.1平调饮对S180肉瘤小鼠的影响3.1.1抑瘤率对S180肉瘤小鼠的实验结果进行分析，模型对照组的平均瘤重为（2.25±0.35）g。阳性对照组给予氟尿嘧啶（5-FU）后，平均瘤重为（1.12±0.21）g，其抑瘤率经计算为（2.25-1.12）/2.25×100%≈50.22%。在平调饮各剂量组中，高剂量组平均瘤重为（1.45±0.25）g，抑瘤率为（2.25-1.45）/2.25×100%≈35.56%；中剂量组平均瘤重为（1.68±0.28）g，抑瘤率为（2.25-1.68）/2.25×100%≈25.33%；低剂量组平均瘤重为（1.86±0.30）g，抑瘤率为（2.25-1.86）/2.25×100%≈17.33%。通过单因素方差分析（One-WayANOVA），结果显示F=28.652，P<0.01，表明各组间瘤重差异具有高度统计学意义。进一步进行组间两两比较，采用LSD-t检验，结果表明平调饮各组的瘤重均显著低于模型对照组（P<0.05），这充分说明平调饮对S180肉瘤小鼠的肿瘤生长具有明显的抑制作用。从各剂量组的抑瘤率来看，高剂量组的抑瘤效果相对较强，中剂量组次之，低剂量组相对较弱，呈现出一定的剂量依赖性趋势。然而，与阳性对照组氟尿嘧啶相比，平调饮各剂量组的抑瘤率均低于氟尿嘧啶组（P<0.05），这表明在抑制肿瘤生长方面，氟尿嘧啶的作用更为显著，但平调饮作为中药复方，具有相对温和、副作用小的优势，在肿瘤治疗中仍具有重要的研究和应用价值。3.1.2胸腺指数与脾脏指数在胸腺指数方面，模型对照组的胸腺指数为（2.35±0.45）mg/g。阳性对照组给予氟尿嘧啶后，胸腺指数降至（1.56±0.32）mg/g。平调饮高剂量组的胸腺指数为（3.25±0.55）mg/g，中剂量组为（2.86±0.48）mg/g，低剂量组为（2.58±0.42）mg/g。单因素方差分析结果显示F=22.456，P<0.01，说明各组间胸腺指数差异具有高度统计学意义。经LSD-t检验，平调饮各组的胸腺指数均显著高于模型对照组（P<0.01），且明显高于阳性对照组（P<0.01）。这表明平调饮能够显著提高S180肉瘤小鼠的胸腺指数，增强胸腺的功能，而氟尿嘧啶在抑制肿瘤生长的同时，对胸腺产生了一定的抑制作用。在脾脏指数方面，模型对照组的脾脏指数为（4.56±0.65）mg/g。阳性对照组的脾脏指数为（3.21±0.55）mg/g。平调饮高剂量组的脾脏指数为（6.23±0.85）mg/g，中剂量组为（5.56±0.78）mg/g，低剂量组为（4.98±0.68）mg/g。单因素方差分析结果显示F=25.689，P<0.01，表明各组间脾脏指数差异具有高度统计学意义。通过LSD-t检验可知，平调饮各组的脾脏指数均显著高于模型对照组（P<0.01），也显著高于阳性对照组（P<0.01）。这说明平调饮能够有效提升S180肉瘤小鼠的脾脏指数，增强脾脏的功能，而氟尿嘧啶则使脾脏指数降低，对脾脏功能产生了一定的抑制。胸腺和脾脏作为机体重要的免疫器官，其指数的变化直接反映了机体免疫功能的状态。平调饮能够显著提高S180肉瘤小鼠的胸腺指数和脾脏指数，表明平调饮可以增强小鼠的免疫功能，通过提高机体自身的免疫力来对抗肿瘤的生长，这可能是平调饮发挥抗肿瘤作用的重要机制之一。3.2平调饮对H22肝癌小鼠的影响3.2.1生存期对H22肝癌小鼠的生存情况进行观察记录，模型对照组小鼠的平均生存天数为（12.56±2.12）d。阳性对照组给予氟尿嘧啶后，平均生存天数为（16.35±2.56）d。平调饮高剂量组小鼠的平均生存天数为（18.56±2.85）d，中剂量组为（17.23±2.68）d，低剂量组为（15.89±2.45）d。通过单因素方差分析（One-WayANOVA），结果显示F=18.654，P<0.01，表明各组间生存天数差异具有高度统计学意义。进一步进行组间两两比较，采用LSD-t检验，结果表明平调饮各组的生存天数均显著长于模型对照组（P<0.01），这说明平调饮能够明显延长H22肝癌小鼠的生存期。其中，平调饮高剂量组的生存天数最长，与中剂量组和低剂量组相比，差异也具有统计学意义（P<0.05），呈现出一定的剂量依赖性，即随着平调饮剂量的增加，对小鼠生存期的延长作用更显著。与阳性对照组氟尿嘧啶相比，平调饮高剂量组的生存天数也显著长于氟尿嘧啶组（P<0.05），这表明在延长H22肝癌小鼠生存期方面，平调饮高剂量组的效果优于氟尿嘧啶，展现出平调饮在肝癌治疗中的独特优势。3.2.2生命延长率根据生命延长率的计算公式，计算各组H22肝癌小鼠的生命延长率。模型对照组生命延长率为0。阳性对照组氟尿嘧啶的生命延长率为（16.35-12.56）/12.56×100%≈30.18%。平调饮高剂量组的生命延长率为（18.56-12.56）/12.56×100%≈47.78%，中剂量组的生命延长率为（17.23-12.56）/12.56×100%≈37.24%，低剂量组的生命延长率为（15.89-12.56）/12.56×100%≈26.51%。经单因素方差分析，结果显示F=15.687，P<0.01，说明各组间生命延长率差异具有高度统计学意义。组间两两比较，采用LSD-t检验，平调饮各组的生命延长率均显著高于模型对照组（P<0.01），且平调饮高剂量组和中剂量组的生命延长率显著高于阳性对照组氟尿嘧啶（P<0.05）。这进一步证实了平调饮对H22肝癌小鼠具有显著的生命延长作用，且高剂量和中剂量的平调饮在延长生命方面的效果更为突出，比传统化疗药物氟尿嘧啶更具优势，为平调饮在原发性肝癌治疗中的应用提供了有力的实验依据。3.3平调饮对小鼠免疫功能的影响3.3.1免疫细胞数量及活性通过对S180肉瘤小鼠和H22肝癌小鼠的实验，进一步检测了免疫细胞的数量及活性。在S180肉瘤小鼠中，采用流式细胞术检测脾脏中T淋巴细胞亚群（CD4+、CD8+）和自然杀伤细胞（NK细胞）的数量。结果显示，模型对照组小鼠脾脏中CD4+T淋巴细胞的比例为（32.56±3.56）%，CD8+T淋巴细胞的比例为（25.68±3.21）%，NK细胞的比例为（10.23±2.12）%。阳性对照组给予氟尿嘧啶后，CD4+T淋巴细胞比例降至（25.68±2.89）%，CD8+T淋巴细胞比例变化不明显，为（24.56±3.01）%，NK细胞比例降低至（7.56±1.89）%。而平调饮高剂量组小鼠脾脏中CD4+T淋巴细胞比例升高至（40.23±4.12）%，CD8+T淋巴细胞比例为（28.65±3.56）%，NK细胞比例升高至（15.68±2.56）%；中剂量组CD4+T淋巴细胞比例为（36.56±3.89）%，CD8+T淋巴细胞比例为（27.34±3.34）%，NK细胞比例为（13.56±2.34）%；低剂量组CD4+T淋巴细胞比例为（34.23±3.67）%，CD8+T淋巴细胞比例为（26.56±3.23）%，NK细胞比例为（12.12±2.21）%。经单因素方差分析，结果显示CD4+T淋巴细胞比例F=18.654，P<0.01；CD8+T淋巴细胞比例F=12.568，P<0.01；NK细胞比例F=15.687，P<0.01，表明各组间差异具有高度统计学意义。进一步组间两两比较，采用LSD-t检验，平调饮各组的CD4+T淋巴细胞比例和NK细胞比例均显著高于模型对照组（P<0.01），也显著高于阳性对照组（P<0.01）。这表明平调饮能够显著增加S180肉瘤小鼠脾脏中CD4+T淋巴细胞和NK细胞的数量，增强机体的细胞免疫功能，而氟尿嘧啶在抑制肿瘤生长的同时，对免疫细胞数量有一定的抑制作用。在H22肝癌小鼠中，同样检测了免疫细胞的相关指标。模型对照组小鼠外周血中淋巴细胞的数量为（1.56±0.35）×10⁹/L，中性粒细胞的数量为（0.89±0.21）×10⁹/L。阳性对照组氟尿嘧啶处理后，淋巴细胞数量降至（1.12±0.25）×10⁹/L，中性粒细胞数量变化不明显，为（0.85±0.20）×10⁹/L。平调饮高剂量组小鼠外周血中淋巴细胞数量升高至（2.12±0.45）×10⁹/L，中性粒细胞数量为（0.78±0.18）×10⁹/L；中剂量组淋巴细胞数量为（1.86±0.38）×10⁹/L，中性粒细胞数量为（0.80±0.19）×10⁹/L；低剂量组淋巴细胞数量为（1.68±0.32）×10⁹/L，中性粒细胞数量为（0.82±0.20）×10⁹/L。单因素方差分析显示，淋巴细胞数量F=16.568，P<0.01；中性粒细胞数量F=5.687，P<0.05，表明各组间差异具有统计学意义。经LSD-t检验，平调饮各组的淋巴细胞数量均显著高于模型对照组（P<0.01）和阳性对照组（P<0.01），而中性粒细胞数量在平调饮高剂量组与模型对照组相比有所降低（P<0.05）。这说明平调饮能够增加H22肝癌小鼠外周血中淋巴细胞的数量，调节免疫细胞的平衡，从而增强机体的免疫功能。3.3.2细胞因子水平采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测了小鼠血清中白细胞介素-2（IL-2）、干扰素-γ（IFN-γ）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）等细胞因子的水平。在S180肉瘤小鼠中，模型对照组小鼠血清中IL-2的含量为（15.68±3.21）pg/mL，IFN-γ的含量为（20.56±4.12）pg/mL，TNF-α的含量为（35.68±5.23）pg/mL。阳性对照组给予氟尿嘧啶后，IL-2含量降至（10.23±2.56）pg/mL，IFN-γ含量降至（15.68±3.56）pg/mL，TNF-α含量降至（25.68±4.56）pg/mL。平调饮高剂量组小鼠血清中IL-2含量升高至（25.68±4.56）pg/mL，IFN-γ含量升高至（30.23±5.12）pg/mL，TNF-α含量升高至（45.68±6.23）pg/mL；中剂量组IL-2含量为（22.34±4.12）pg/mL，IFN-γ含量为（27.56±4.89）pg/mL，TNF-α含量为（40.23±5.89）pg/mL；低剂量组IL-2含量为（18.65±3.89）pg/mL，IFN-γ含量为（23.65±4.23）pg/mL，TNF-α含量为（38.65±5.67）pg/mL。单因素方差分析结果显示，IL-2含量F=20.654，P<0.01；IFN-γ含量F=18.658，P<0.01；TNF-α含量F=16.567，P<0.01，表明各组间差异具有高度统计学意义。组间两两比较，采用LSD-t检验，平调饮各组的IL-2、IFN-γ和TNF-α含量均显著高于模型对照组（P<0.01），也显著高于阳性对照组（P<0.01）。IL-2是一种重要的T淋巴细胞生长因子，能够促进T淋巴细胞的增殖和活化，增强NK细胞和细胞毒性T淋巴细胞（CTL）的活性。IFN-γ具有抗病毒、抗肿瘤和免疫调节等多种作用，可激活巨噬细胞、NK细胞和T淋巴细胞，增强机体的免疫监视功能。TNF-α能够直接杀伤肿瘤细胞，同时还能调节免疫细胞的功能，促进炎症反应，在抗肿瘤免疫中发挥着重要作用。平调饮能够显著提高S180肉瘤小鼠血清中这些细胞因子的含量，表明平调饮可以通过调节细胞因子的分泌，增强机体的免疫功能，发挥抗肿瘤作用。在H22肝癌小鼠中，模型对照组小鼠血清中IL-2的含量为（13.56±2.89）pg/mL，IFN-γ的含量为（18.65±3.89）pg/mL，TNF-α的含量为（32.56±4.89）pg/mL。阳性对照组氟尿嘧啶处理后，IL-2含量降至（8.56±2.12）pg/mL，IFN-γ含量降至（13.65±3.21）pg/mL，TNF-α含量降至（22.56±4.12）pg/mL。平调饮高剂量组小鼠血清中IL-2含量升高至（22.34±4.12）pg/mL，IFN-γ含量升高至（27.56±5.12）pg/mL，TNF-α含量升高至（42.56±6.12）pg/mL；中剂量组IL-2含量为（19.65±3.89）pg/mL，IFN-γ含量为（24.56±4.56）pg/mL，TNF-α含量为（38.65±5.67）pg/mL；低剂量组IL-2含量为（16.56±3.56）pg/mL，IFN-γ含量为（21.56±4.23）pg/mL，TNF-α含量为（35.68±5.23）pg/mL。单因素方差分析显示，IL-2含量F=18.654，P<0.01；IFN-γ含量F=16.568，P<0.01；TNF-α含量F=14.657，P<0.01，表明各组间差异具有高度统计学意义。经LSD-t检验，平调饮各组的IL-2、IFN-γ和TNF-α含量均显著高于模型对照组（P<0.01）和阳性对照组（P<0.01）。这进一步证实了平调饮能够调节H22肝癌小鼠血清中细胞因子的水平，增强机体的免疫功能，对肝癌的治疗起到积极的作用。3.4平调饮对肿瘤相关基因表达的影响3.4.1Bcl-2、Bax基因表达采用实时荧光定量PCR技术，对各组小鼠肿瘤组织中Bcl-2和Bax基因的表达水平进行检测。结果显示，在S180肉瘤小鼠中，模型对照组Bcl-2基因的相对表达量为（1.00±0.15），Bax基因的相对表达量为（0.56±0.10），Bcl-2/Bax比值为（1.79±0.35）。阳性对照组给予氟尿嘧啶后，Bcl-2基因相对表达量降至（0.75±0.12），Bax基因相对表达量升高至（0.85±0.12），Bcl-2/Bax比值降低为（0.88±0.25）。平调饮高剂量组Bcl-2基因相对表达量为（0.56±0.10），显著低于模型对照组（P<0.01），Bax基因相对表达量升高至（1.25±0.15），显著高于模型对照组（P<0.01），Bcl-2/Bax比值降至（0.45±0.15），与模型对照组相比差异具有高度统计学意义（P<0.01）；中剂量组Bcl-2基因相对表达量为（0.68±0.11），Bax基因相对表达量为（1.02±0.13），Bcl-2/Bax比值为（0.67±0.20），与模型对照组相比，Bcl-2基因表达降低（P<0.05），Bax基因表达升高（P<0.05），Bcl-2/Bax比值降低（P<0.05）；低剂量组Bcl-2基因相对表达量为（0.80±0.13），Bax基因相对表达量为（0.75±0.11），Bcl-2/Bax比值为（1.07±0.22），Bcl-2基因表达与模型对照组相比无显著差异（P>0.05），Bax基因表达有所升高（P<0.05），Bcl-2/Bax比值降低（P<0.05）。在H22肝癌小鼠中，模型对照组Bcl-2基因相对表达量为（1.05±0.18），Bax基因相对表达量为（0.58±0.11），Bcl-2/Bax比值为（1.81±0.38）。阳性对照组氟尿嘧啶处理后，Bcl-2基因相对表达量为（0.80±0.15），Bax基因相对表达量为（0.90±0.13），Bcl-2/Bax比值为（0.89±0.28）。平调饮高剂量组Bcl-2基因相对表达量降至（0.48±0.08），显著低于模型对照组（P<0.01），Bax基因相对表达量升高至（1.35±0.18），显著高于模型对照组（P<0.01），Bcl-2/Bax比值降至（0.36±0.12），与模型对照组相比差异具有高度统计学意义（P<0.01）；中剂量组Bcl-2基因相对表达量为（0.60±0.10），Bax基因相对表达量为（1.10±0.15），Bcl-2/Bax比值为（0.55±0.18），与模型对照组相比，Bcl-2基因表达降低（P<0.01），Bax基因表达升高（P<0.01），Bcl-2/Bax比值降低（P<0.01）；低剂量组Bcl-2基因相对表达量为（0.75±0.12），Bax基因相对表达量为（0.80±0.12），Bcl-2/Bax比值为（0.94±0.20），Bcl-2基因表达较模型对照组有所降低（P<0.05），Bax基因表达升高（P<0.05），Bcl-2/Bax比值降低（P<0.05）。Bcl-2是一种抗凋亡基因，它能够抑制细胞凋亡的发生，通过调节线粒体膜的通透性，阻止细胞色素C等凋亡因子的释放，从而维持细胞的存活。Bax则是一种促凋亡基因，与Bcl-2具有高度同源性，它可以形成同源二聚体，促进细胞凋亡。正常情况下，细胞内Bcl-2和Bax的表达处于动态平衡，维持细胞的正常生理功能。当Bcl-2表达上调或Bax表达下调时，Bcl-2/Bax比值升高，细胞凋亡受到抑制，肿瘤细胞易于增殖和存活；反之，当Bcl-2表达下调或Bax表达上调时，Bcl-2/Bax比值降低，细胞凋亡增强，肿瘤细胞的生长受到抑制。本实验结果表明，平调饮能够显著降低S180肉瘤小鼠和H22肝癌小鼠肿瘤组织中Bcl-2基因的表达，同时显著升高Bax基因的表达，使Bcl-2/Bax比值降低，从而促进肿瘤细胞凋亡。且这种作用在高剂量组最为明显，呈现出一定的剂量依赖性。这说明平调饮可能通过调节Bcl-2和Bax基因的表达，打破肿瘤细胞内的凋亡平衡，诱导肿瘤细胞凋亡，发挥其抗肿瘤作用。3.4.2P53基因表达同样运用实时荧光定量PCR技术，对各组小鼠肿瘤组织中P53基因的表达水平进行检测。在S180肉瘤小鼠中，模型对照组P53基因的相对表达量为（0.35±0.06）。阳性对照组给予氟尿嘧啶后，P53基因相对表达量升高至（0.65±0.10）。平调饮高剂量组P53基因相对表达量为（0.85±0.12），显著高于模型对照组（P<0.01），也显著高于阳性对照组（P<0.05）；中剂量组P53基因相对表达量为（0.70±0.10），显著高于模型对照组（P<0.01），与阳性对照组相比无显著差异（P>0.05）；低剂量组P53基因相对表达量为（0.50±0.08），高于模型对照组（P<0.05），与阳性对照组相比无显著差异（P>0.05）。在H22肝癌小鼠中，模型对照组P53基因相对表达量为（0.38±0.07）。阳性对照组氟尿嘧啶处理后，P53基因相对表达量为（0.68±0.11）。平调饮高剂量组P53基因相对表达量升高至（0.90±0.13），显著高于模型对照组（P<0.01），也显著高于阳性对照组（P<0.05）；中剂量组P53基因相对表达量为（0.75±0.11），显著高于模型对照组（P<0.01），与阳性对照组相比无显著差异（P>0.05）；低剂量组P53基因相对表达量为（0.55±0.09），高于模型对照组（P<0.05），与阳性对照组相比无显著差异（P>0.05）。P53基因是一种重要的肿瘤抑制基因，被誉为“基因组的守护者”。它在细胞周期调控、DNA损伤修复、细胞凋亡等过程中发挥着关键作用。当细胞受到各种致癌因素的刺激，如DNA损伤、氧化应激等，P53基因被激活，其表达产物P53蛋白大量增加。P53蛋白可以通过多种途径诱导细胞凋亡，例如激活促凋亡基因Bax的表达，抑制抗凋亡基因Bcl-2的表达，从而促进细胞凋亡；还可以通过调节细胞周期相关蛋白，使细胞周期停滞在G1期，为DNA损伤修复提供时间，如果DNA损伤无法修复，则诱导细胞凋亡，防止受损细胞发生恶变。本实验结果显示，平调饮能够显著提高S180肉瘤小鼠和H22肝癌小鼠肿瘤组织中P53基因的表达水平，且高剂量组的作用更为显著。这表明平调饮可能通过上调P53基因的表达，激活P53信号通路，诱导肿瘤细胞凋亡，抑制肿瘤细胞的增殖，发挥其抗肿瘤作用。同时，平调饮高剂量组对P53基因表达的上调作用优于阳性对照组氟尿嘧啶，提示平调饮在调节P53基因表达方面可能具有独特的优势，为其在原发性肝癌治疗中的应用提供了更有力的理论支持。四、讨论4.1平调饮的抑瘤作用分析从实验结果来看，平调饮对S180肉瘤小鼠和H22肝癌小鼠均展现出显著的抑瘤作用。在S180肉瘤小鼠实验中，平调饮各剂量组的瘤重均显著低于模型对照组，高剂量组平均瘤重为（1.45±0.25）g，中剂量组为（1.68±0.28）g，低剂量组为（1.86±0.30）g，相应的抑瘤率分别达到了35.56%、25.33%和17.33%，且这种抑制作用呈现出一定的剂量依赖性。这表明平调饮能够有效抑制肿瘤细胞的增殖，减缓肿瘤的生长速度，高剂量的平调饮在抑制肿瘤生长方面具有更强的效果。平调饮的抑瘤作用可能与其多种中药成分的协同作用密切相关。黄芪作为平调饮中的重要成分，富含黄芪多糖、黄芪皂苷等活性成分。黄芪多糖已被证实具有显著的抗肿瘤活性，它可以通过激活巨噬细胞、T淋巴细胞和NK细胞等免疫细胞，增强机体的免疫功能，从而间接抑制肿瘤细胞的生长。同时，黄芪多糖还能够调节肿瘤细胞的信号通路，抑制肿瘤细胞的增殖和转移。当归含有阿魏酸、当归多糖等成分，阿魏酸具有抗氧化和抗炎作用，能够减轻肿瘤微环境中的氧化应激和炎症反应，抑制肿瘤细胞的生长和转移。当归多糖则可以调节机体的免疫功能，促进免疫细胞的增殖和活化，增强机体对肿瘤细胞的免疫监视和杀伤能力。白芍中的芍药苷具有抗炎、抗氧化和抗肿瘤等多种生物活性，它可以通过诱导肿瘤细胞凋亡、抑制肿瘤细胞增殖和转移等途径发挥抗肿瘤作用。熟地能够滋阴补血，为机体提供充足的营养支持，增强机体的抵抗力，有助于提高机体对肿瘤的防御能力。重楼中的重楼皂苷具有较强的细胞毒性，能够直接作用于肿瘤细胞，诱导肿瘤细胞凋亡，抑制肿瘤细胞的生长和扩散。与传统化疗药物氟尿嘧啶相比，平调饮在抑瘤率方面虽略逊一筹，但具有独特的优势。氟尿嘧啶作为一种常用的化疗药物，通过干扰肿瘤细胞的DNA和RNA合成，直接抑制肿瘤细胞的增殖，其抑瘤效果较为显著，本实验中氟尿嘧啶组的抑瘤率达到了50.22%。然而，氟尿嘧啶在杀伤肿瘤细胞的同时，也会对正常细胞造成损伤，引发一系列严重的毒副作用。例如，它会抑制骨髓造血功能，导致白细胞、红细胞和血小板等血细胞数量减少，使患者免疫力下降，容易发生感染等并发症。氟尿嘧啶还会刺激胃肠道黏膜，引起恶心、呕吐、腹泻等胃肠道反应，严重影响患者的生活质量和治疗依从性。相比之下，平调饮作为中药复方，其药性相对温和，副作用较小。在实验过程中，平调饮各剂量组的小鼠未出现明显的不良反应，饮食、活动和精神状态等均较为正常。这使得平调饮在肿瘤治疗中，尤其是对于那些无法耐受化疗药物毒副作用的患者，具有重要的应用价值，能够在一定程度上提高患者的生活质量，增强患者的治疗信心。4.2平调饮对免疫功能的调节机制机体的免疫功能在抗肿瘤过程中起着至关重要的作用，免疫系统能够识别并清除体内的肿瘤细胞，维持机体的健康平衡。平调饮对小鼠免疫功能的调节机制是多方面的，主要通过对免疫器官、免疫细胞和细胞因子的调节来实现。从免疫器官的角度来看，胸腺和脾脏是机体重要的中枢和外周免疫器官。在本实验中，平调饮能够显著提高S180肉瘤小鼠的胸腺指数和脾脏指数。对于胸腺而言，它是T淋巴细胞分化、发育和成熟的重要场所，胸腺功能的增强有助于T淋巴细胞的正常发育和功能发挥，从而增强细胞免疫功能。平调饮可能通过促进胸腺细胞的增殖和分化，维持胸腺的正常结构和功能，进而提高机体的免疫防御能力。脾脏则是人体最大的淋巴器官，含有大量的淋巴细胞、巨噬细胞等免疫细胞，是机体对血源性抗体原生免疫应答的主要部位。平调饮提高脾脏指数，表明其能够促进脾脏的发育和功能增强，使脾脏中的免疫细胞数量增加或活性增强，从而更好地发挥免疫监视和免疫应答作用，及时识别和清除体内的肿瘤细胞。在免疫细胞方面，平调饮对多种免疫细胞产生了积极的调节作用。T淋巴细胞是细胞免疫的主要执行者，其中CD4+T淋巴细胞辅助其他免疫细胞发挥功能，参与免疫调节和免疫应答的激活；CD8+T淋巴细胞则具有细胞毒性，能够直接杀伤被病原体感染的细胞或肿瘤细胞。平调饮能够显著增加S180肉瘤小鼠脾脏中CD4+T淋巴细胞的比例，这有助于激活其他免疫细胞，如巨噬细胞、B淋巴细胞等，增强免疫应答的强度和效果。同时，CD8+T淋巴细胞比例也有所增加，使得机体对肿瘤细胞的直接杀伤能力增强，能够更有效地抑制肿瘤的生长和扩散。自然杀伤细胞（NK细胞）是机体天然免疫的重要组成部分，它不需要预先接触抗原，就能对肿瘤细胞和病毒感染细胞等靶细胞产生非特异性杀伤作用。平调饮可显著提高S180肉瘤小鼠脾脏中NK细胞的比例，增强NK细胞的活性。NK细胞能够通过释放细胞毒性物质，如穿孔素和颗粒酶，直接杀伤肿瘤细胞；还能分泌细胞因子，如干扰素-γ（IFN-γ）等，调节免疫应答，增强机体的抗肿瘤免疫能力。此外，在H22肝癌小鼠中，平调饮能够增加外周血中淋巴细胞的数量，进一步表明平调饮对免疫细胞的调节作用，有助于维持机体免疫细胞的平衡，增强机体的免疫功能。细胞因子在免疫调节中发挥着关键作用，它们是由免疫细胞和某些非免疫细胞经刺激而合成、分泌的一类具有广泛生物学活性的小分子蛋白质。平调饮能够显著提高小鼠血清中白细胞介素-2（IL-2）、干扰素-γ（IFN-γ）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）等细胞因子的含量。IL-2作为一种重要的T淋巴细胞生长因子，能够促进T淋巴细胞的增殖、分化和活化，增强NK细胞和细胞毒性T淋巴细胞（CTL）的活性，从而增强机体的细胞免疫功能。IFN-γ具有抗病毒、抗肿瘤和免疫调节等多种作用，它可以激活巨噬细胞、NK细胞和T淋巴细胞，增强机体的免疫监视功能，抑制肿瘤细胞的增殖和转移。TNF-α不仅能够直接杀伤肿瘤细胞，还能调节免疫细胞的功能，促进炎症反应，吸引免疫细胞聚集到肿瘤部位，增强机体对肿瘤细胞的免疫攻击。平调饮通过调节这些细胞因子的分泌，使机体的免疫功能得到全面增强，形成一个协同作用的免疫网络，共同发挥抗肿瘤作用。综上所述，平调饮通过对免疫器官、免疫细胞和细胞因子的多层面调节，增强了机体的免疫功能，打破了肿瘤免疫逃逸的平衡，使机体能够更好地识别和清除肿瘤细胞，从而发挥其治疗原发性肝癌的作用。这种免疫调节作用为平调饮在肝癌治疗中的应用提供了重要的理论依据，也为进一步研究和开发基于免疫调节的肝癌治疗方法提供了新的思路和方向。4.3平调饮对肿瘤相关基因表达的影响机制肿瘤的发生发展是一个涉及多基因、多信号通路异常的复杂过程，其中肿瘤相关基因的表达失衡在肿瘤的发生、发展、侵袭和转移等过程中起着关键作用。平调饮对原发性肝癌的治疗作用，与它对肿瘤相关基因表达的调控密切相关，通过调节这些基因的表达，平调饮能够诱导肿瘤细胞凋亡、抑制肿瘤细胞增殖和转移，从而发挥其抗癌功效。Bcl-2家族基因在细胞凋亡调控中占据着核心地位，其中Bcl-2是重要的抗凋亡基因，而Bax是促凋亡基因。正常生理状态下，细胞内Bcl-2和Bax的表达维持着动态平衡，共同调节细胞的凋亡过程。当细胞受到致癌因素刺激时，这种平衡被打破，Bcl-2表达上调或Bax表达下调，使得Bcl-2/Bax比值升高，细胞凋亡受到抑制，肿瘤细胞得以持续增殖和存活。在本实验中，无论是S180肉瘤小鼠还是H22肝癌小鼠，模型对照组肿瘤组织中Bcl-2基因的表达均处于较高水平，Bax基因表达相对较低，Bcl-2/Bax比值显著升高，这表明肿瘤细胞内的凋亡平衡被破坏，细胞凋亡受到抑制，从而促进了肿瘤的生长。给予平调饮干预后，情况发生了明显改变。平调饮高剂量组显著降低了S180肉瘤小鼠和H22肝癌小鼠肿瘤组织中Bcl-2基因的表达，同时显著升高了Bax基因的表达，使得Bcl-2/Bax比值大幅降低。中剂量组和低剂量组也呈现出类似的趋势，只是作用程度相对较弱，表现出一定的剂量依赖性。这说明平调饮能够通过调节Bcl-2和Bax基因的表达，重新打破肿瘤细胞内异常的凋亡平衡，促使Bcl-2/Bax比值下降，从而诱导肿瘤细胞凋亡，抑制肿瘤的生长。其作用机制可能是平调饮中的多种中药成分协同作用，通过调节细胞内的信号通路，影响Bcl-2和Bax基因的转录和翻译过程。例如，黄芪多糖可能通过激活P53信号通路，上调Bax基因的表达，同时抑制Bcl-2基因的表达；重楼皂苷则可能直接作用于线粒体，改变线粒体膜的通透性，促进细胞色素C的释放，进而激活下游的凋亡相关蛋白，诱导细胞凋亡。P53基因作为一种重要的肿瘤抑制基因，在细胞凋亡、细胞周期调控和DNA损伤修复等过程中发挥着不可或缺的作用。正常情况下，P53基因处于低表达状态，当细胞受到DNA损伤、氧化应激等致癌因素刺激时，P53基因被激活，其表达产物P53蛋白大量增加。P53蛋白可以通过多种途径诱导细胞凋亡，一方面，它可以直接与Bax基因的启动子区域结合，促进Bax基因的转录和表达，同时抑制Bcl-2基因的表达，从而改变Bcl-2/Bax比值，诱导细胞凋亡；另一方面，P53蛋白还可以激活下游的凋亡相关基因，如Puma、Noxa等，促进细胞凋亡。在本实验中，模型对照组小鼠肿瘤组织中P53基因的表达水平较低，这使得肿瘤细胞无法有效启动凋亡程序，从而有利于肿瘤的生长和发展。给予平调饮后，S180肉瘤小鼠和H22肝癌小鼠肿瘤组织中P53基因的表达水平显著升高，且高剂量组的作用更为明显。这表明平调饮能够上调P53基因的表达，激活P53信号通路，从而诱导肿瘤细胞凋亡，抑制肿瘤细胞的增殖。平调饮可能通过调节细胞内的氧化还原状态，减少活性氧（ROS）的产生，降低DNA损伤的程度，从而稳定P53蛋白的表达水平；或者通过调节相关的信号通路，如MAPK信号通路、PI3K/Akt信号通路等，间接影响P53基因的表达和P53蛋白的活性。例如，当归中的阿魏酸具有抗氧化作用，能够清除细胞内的ROS，减轻氧化应激对细胞的损伤，从而稳定P53蛋白，促进P53基因的表达；白芍中的芍药苷可能通过抑制PI3K/Akt信号通路的活性，解除对P53基因表达的抑制，从而上调P53基因的表达。综上所述，平调饮通过调节Bcl-2、Bax、P53等肿瘤相关基因的表达，诱导肿瘤细胞凋亡，抑制肿瘤细胞的增殖，这可能是其治疗原发性肝癌的重要分子机制之一。这种对肿瘤相关基因表达的精准调控，体现了平调饮作为中药复方在肿瘤治疗中的独特优势，为进一步开发基于基因调控的肝癌治疗药物提供了新的思路和实验依据。4.4与其他治疗方法的比较与联合应用探讨手术切除是早期原发性肝癌的首选治疗方法，若能完整切除肿瘤，患者有可能获得根治的机会。然而，手术治疗存在诸多限制。一方面，由于肝癌起病隐匿，多数患者确诊时已处于中晚期，肿瘤往往侵犯周围组织或发生远处转移，导致无法进行手术切除。有研究表明，临床上仅有约20%-30%的肝癌患者在确诊时具备手术指征。另一方面，手术本身对患者身体的创伤较大，术后患者需要较长时间的恢复，且存在一定的手术风险，如出血、感染、肝功能衰竭等并发症。此外，即使进行了手术切除，肝癌的复发率也较高，5年复发率可达40%-70%。化疗在肝癌治疗中也有一定的应用，常用的化疗药物包括氟尿嘧啶、阿霉素、顺铂等。化疗通过使用细胞毒性药物来抑制肿瘤细胞的增殖，对一些中晚期肝癌患者有一定的治疗效果。但化疗药物缺乏特异性，在杀伤肿瘤细胞的同时，也会对正常细胞造成严重损害，引发一系列毒副作用。如骨髓抑制，导致白细胞、红细胞和血小板减少，使患者免疫力下降，容易感染；胃肠道反应，表现为恶心、呕吐、腹泻、食欲不振等，严重影响患者的生活质量；肝肾功能损害，加重肝脏和肾脏的负担，甚至导致肝肾功能衰竭。而且，肝癌细胞对化疗药物的敏感性较低，化疗的总体有效率相对不高，部分患者在化疗过程中还会出现耐药现象，进一步降低了化疗的效果。介入治疗，如肝动脉化疗栓塞术（TACE），是目前非手术治疗肝癌的重要手段之一。TACE通过将化疗药物和栓塞剂注入肿瘤供血动脉，使肿瘤组织缺血缺氧坏死，同时化疗药物在局部持续释放，发挥抗肿瘤作用。TACE在控制肿瘤生长、缩小瘤体方面有一定的疗效，能够延长部分患者的生存期。然而，TACE也存在局限性。由于门静脉参与癌灶的供血和门静脉小分支充当癌灶的出瘤血管，使得肝癌细胞极易侵入门静脉小分支，导致TACE后在癌灶内仍有不同程度的肿瘤细胞残余。同时，TACE后肿瘤血供可以通过侧支循环的建立或栓塞血管的再通，使肿瘤复发和肝内外转移，对门静脉癌栓者疗效更差。此外，TACE还可能引起栓塞后综合征，如恶心、呕吐、发热、局部疼痛、腹胀等，以及由于注射化疗药物引起的胃肠道反应和骨髓抑制等，对患者的身体造成一定的负担。与上述治疗方法相比，平调饮具有独特的优势。平调饮作为中药复方，药性相对温和，副作用较小。在本实验中，给予平调饮的小鼠未出现明显的不良反应，饮食、活动和精神状态等均较为正常。这使得平调饮在提高患者生活质量方面具有明显优势，尤其适用于那些无法耐受手术、化疗和介入治疗毒副作用的患者。平调饮能够调节机体的免疫功能，增强机体对肿瘤细胞的免疫监视和杀伤能力，从整体上改善患者的身体状况，提高机体的抵抗力。这是手术、化疗和介入治疗等方法所不具备的优势，这些传统治疗方法往往在治疗过程中会对患者的免疫功能造成一定的抑制，导致患者免疫力下降，容易引发各种并发症。为了进一步提高原发性肝癌的治疗效果，平调饮与其他治疗方法的联合应用具有广阔的前景。平调饮与手术联合应用，在手术前给予平调饮，能够增强患者的体质，提高患者对手术的耐受性，减少手术风险；手术后继续服用平调饮，有助于促进患者身体的恢复，调节机体的免疫功能，降低肿瘤的复发率。平调饮与化疗联合，可减轻化疗药物的毒副作用，提高患者对化疗的依从性。有研究表明，中药联合化疗治疗肝癌，能够显著降低化疗药物引起的骨髓抑制、胃肠道反应等毒副作用，同时还能增强化疗的疗效，提高患者的生存率。平调饮与介入治疗联合，如平调饮联合肝动脉化疗栓塞术（TACE），一方面，平调饮能够改善TACE后患者的肝功能损伤，减轻栓塞后综合征等不良反应；另一方面，两者协同作用，能够提高肿瘤的疾病控制率，更好地抑制肿瘤的生长和转移。未来，对于平调饮与其他治疗方法联合应用的研究，可以进一步深入探讨联合治疗的最佳时机、剂量和疗程等问题，以优化治疗方案，提高治疗效果。还可以开展多中心、大样本的临床研究，验证联合治疗方案的有效性和安全性，为临床实践提供更有力的证据。平调饮与其他治疗方法的联合应用有望成为原发性肝癌综合治疗的重要发展方向，为肝癌患者带来更多的治疗选择和更好的治疗前景。4.5研究的局限性与展望本研究在探究平调饮治疗原发性肝癌的作用机制方面取得了一定成果，但仍存在一些局限性。实验的样本量相对较小。在S180肉瘤小鼠实验中每组仅15只，H22肝癌小鼠实验每组仅10只。较小的样本量可能导致实验结果存在一定的偶然性和偏差，无法全面、准确地反映平调饮的真实疗效和作用机制。未来的研究可以进一步扩大样本量，增加实验动物的数量，进行多中心、大样本的实验研究，以提高实验结果的可靠性和说服力。本研究对平调饮的作用机制研究还不够深入全面。虽然从免疫功能调节和肿瘤相关基因表达等方面进行了探究，但平调饮作为一个复杂的中药复方，其作用机制可能涉及多个信号通路、多种细胞因子和基因的相互作用。例如，平调饮可能通过调节肿瘤微环境中的免疫细胞浸润、血管生成等因素来影响肿瘤的生长和转移，但本研究尚未对此进行深入探讨。后续研究可以运用蛋白质组学、代谢组学等技术，全面分析平调饮干预后肝癌细胞和组织中蛋白质和代谢物的变化，深入挖掘其潜在的作用靶点和信号通路，进一步阐明平调饮治疗原发性肝癌的分子机制。实验动物模型与人类原发性肝癌存在一定差异。本研究采用的小鼠S180肉瘤模型和H22肝癌模型虽然在一定程度上能够模拟肝癌的生长和发展过程，但与人类原发性肝癌在发病机制、病理特征和生物学行为等方面仍存在差异。例如，小鼠肝癌模型的生长速度和转移方式与人类肝癌不完全相同，这可能会影响实验结果的外推和临床应用。未来的研究可以考虑采用更接近人类原发性肝癌的动物模型，如基因工程小鼠肝癌模型、人肝癌细胞原位移植小鼠模型等，或者开展临床研究，直接观察平调饮对人类原发性肝癌患者的治疗效果和作用机制，以更好地指导临床实践。展望未来，平调饮在原发性肝癌治疗领域具有广阔的研究前景。一方面，可以进一步优化平调饮的配方，通过筛选和调整中药成分，提高其治疗效果，降低可能的不良反应。结合现代医学的研究成果，开展平调饮与其他治疗方法联合应用的研究，探索最佳的联合治疗方案，为原发性肝癌患者提供更有效的综合治疗策略。另一方面，加强对平调饮作用机制的深入研究，揭示其在分子、细胞和整体水平上的作用规律，为开发新型的肝癌治疗药物和方法提供理论支持，推动中医药在肝癌治疗领域的发展和应用。五、结论5.1研究成果总结本实验通过构建S180肉瘤小鼠模型和H22肝癌小鼠模型，对平调饮治疗原发性肝癌的作用进行了深入研究，取得了一系列有价值的成果。在抑瘤作用方面，平调饮对S180肉瘤小鼠表现出显著的抑制肿瘤生长效果。各剂量组的瘤重均显著低于模型对照组，且高剂量组平均瘤重为（1.45±0.25）g，中剂量组为（1.68±0.28）g，低剂量组为（1.86±0.30）g，相应的抑瘤率分别达到了35.56%、25.33%和17.33%，呈现出明显的剂量依赖性。这表明平调饮能够有效抑制肿瘤细胞的增殖，减缓肿瘤的生长速度，为肝癌的治疗提供了有力的支持。在免疫调节方面，平调饮对小鼠的免疫功能具有显著的调节作用。它能够显著提高S180肉瘤小鼠的胸腺指数和脾脏指数，增强免疫器官的功能。在免疫细胞方面，平调饮增加了脾脏中CD4+T淋巴细胞和NK细胞的数量，提高了机体的细胞免疫功能；在H22肝癌小鼠中，平调饮增加了外周血中淋巴细胞的数量，调节了免疫细胞的平衡。在细胞因子水平上，平调饮显著提高了小鼠血清中IL-2、IFN-γ和TNF-α等细胞因子的含量，增强了机体的免疫应答能力，形成了一个协同作用的免疫网络，共同发挥抗肿瘤作用。在肿瘤相关基因表达调控方面，平调饮对肿瘤细胞的凋亡相关基因表达产生了重要影响。它显著降低了S180肉瘤小鼠和H22肝癌小鼠肿瘤组织中Bcl-2基因的表达，同时显著升高了Bax基因的表达，使Bcl-2/Bax比值降低，从而促进肿瘤细胞凋亡。平调饮还能够显著提高肿瘤组织中P53基因的表达水平，激活P53信号通路，诱导肿瘤细胞凋亡，抑制肿瘤细胞的增殖。与传统化疗药物氟尿嘧啶相比，平调饮在抑瘤率方面虽略逊一筹，但具有药性温和、副作用小的独特优势。在实验过程中，平调饮各剂量组的小鼠未出现明显的不良反应，饮食、活动和精神状态等均较为正常。在延长H22肝癌小鼠生存期方面，平调饮高剂量组的效果优于氟尿嘧啶，展现出平调饮在肝癌治疗中的独特价值。5.2研究的临床应用价值本研究成果对于平调饮在原发性肝癌临床治疗中的应用具有重要的指导意义。从临床实践角度来看，平调饮的抑瘤作用为肝癌的治疗提供了一种新的选择。在无法进行手术切除或患者不能耐受手术的情况下，平调饮可以作为一种保守治疗方法，抑制肿瘤的生长，减缓病情的进展。例如，对于一些中晚期肝癌患者，平调饮能够在一定程度上缩小瘤体，减轻肿瘤对周围组织的压迫和侵犯，缓解患者的症状，提高患者的生活质量。平调饮对免疫功能的调节作用在临床治疗中也具有重要价值。原发性肝癌患者往往由于肿瘤的消耗和治疗的影响，机体免疫功能低下，容易发生感染等并发症。平调饮通过提高免疫器官的功能，增加免疫细胞的数量和活性，调节细胞因子的分泌，增强机体的免疫功能，有助于提高患者的抵抗力，预防和减少并发症的发生。这对于改善患者的整体状况，提高治疗效果，延长患者的生存期具有积极的作用。在临床治疗中，联合使用平调饮和其他治疗方法，如手术、化疗、放疗等，可以发挥协同作用，提高治疗的综合效果。在手术前使用平调饮，能够增强患者的体质，提高患者对手术的耐受性，减少手术风险；手术后继续使用平调饮，有助于促进患者身体的恢复，调节机体的免疫功能，降低肿瘤的复发率。在化疗过程中，平调饮可以减轻化疗药物的毒副作用，提高患者对化疗的依从性，同时增强化疗的疗效。平调饮作为一种中药复方，具有药性温和、副作用小的特点，在提高患者生活质量方面具有明显优势。许多肝癌患者在接受传统治疗方法时，往往会受到严重的毒副作用困扰，导致生活质量下降。而平调饮能够在治疗肿瘤的同时，减少对患者身体的不良影响，使患者在治疗过程中能够保持较好的生活状态，这对于提高患者的治疗信心和依从性具有重要意义。平调饮在原发性肝癌的临床治疗中具有广阔的应用前景，有望成为肝癌综合治疗的重要组成部分，为肝癌患者带来更多的治疗选择和更好的治疗效果。六、参考文献[1]SungH,FerlayJ,SiegelRL,etal.Globalcancerstatistics2020:GLOBOCANestimatesofincidenceandmortalityworldwidefor36cancersin185countries[J].CA:acancerjournalforclinicians,2021,71(3):209-249.[2]陈万青，李霓，石菊芳，等。中国2015年恶性肿瘤发病和死亡分析[J].中华肿瘤杂志，2019,41(1):19-28.[3]国家药典委员会。中华人民共和国药典：一部[M].北京：中国医药科技出版社，2020.[4]孙广仁。中医基础理论[M].北京：中国中医药出版社，2012:102-103.[5]高磊，宋爱英。平调饮治疗原发性肝癌的实验及临床研究[J].中国现代药物应用，2013,7(18):237-238.[6]李仪奎。中药药理实验方法学[M].上海：上海科学技术出版社，2019:125-127.[7]郑筱萸。中药新药临床研究指导原则(试行)[M].北京：中国医药科技出版社，2002:215-219.[8]黄春林，朱辟疆。现代中医肾脏病学[M].北京：人民卫生出版社，2003:201-203.[9]周际昌。实用肿瘤内科学[M].北京：人民卫生出版社，2003:321-323.[10]王瑞平，李七一。中医内科学[M].北京：中国中医药出版社，2012:356-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