药品生物等效性试验步骤及保存要求

药品生物等效性试验步骤及保存要求生物等效性（BE）试验是评价仿制药与原研药在体内吸收速度和程度一致性的核心手段，其结果直接影响药品的研发进度与上市合规性。试验流程的规范性、样本及药品保存的科学性，是保障数据可靠性的关键。本文从试验实施逻辑与实操细节出发，系统阐述BE试验的核心步骤与保存要求，为医药研发从业者提供参考。一、生物等效性试验核心步骤（一）试验设计：科学框架的搭建BE试验需基于药代动力学（PK）原理设计，核心目标是比较受试制剂（TestProduct）与参比制剂（ReferenceProduct）的PK参数（如AUC、Cmax、Tmax）。试验类型：优先采用随机、双盲、交叉设计（如两周期两序列设计），通过“洗脱期”（通常为药物7个半衰期以上）消除周期间残留效应，减少个体差异对结果的干扰。高变异药物（如变异系数＞30%）可采用重复设计（如四周期设计），以提高试验效力。样本量计算：基于参比制剂PK参数的变异系数（CV），通过统计公式（如Schuirmann法）计算所需受试者数量，确保90%置信区间的统计学效力（一般需18~36例健康志愿者，特殊情况如抗肿瘤药可选用患者）。方案审批：试验方案需明确目的、设计、受试者标准、给药/采样时间点、检测方法、统计模型等，经伦理委员会审批后实施，确保符合《药品临床试验质量管理规范》（GCP）要求。（二）受试者筛选与入组：控制变量的关键受试者的同质性直接影响试验结果的可比性，需严格筛选：入选标准：健康志愿者（特殊药物如抗肿瘤药可选用患者），年龄18~55岁，体重指数（BMI）19~26kg/m²，无肝肾功能异常、胃肠道疾病、药物过敏史，近3个月未使用影响代谢的药物（如肝药酶诱导剂/抑制剂）。排除标准：妊娠/哺乳期女性、烟酒依赖者、实验室检查（血常规、肝肾功能等）异常者、近期接种疫苗或参与其他临床试验者。知情同意：向受试者充分说明试验流程、风险与受益（如可能的不良反应、时间成本），签署知情同意书，确保自愿参与。（三）试验实施：从给药到样本处理的全流程管控试验实施需严格遵循方案，确保“时间窗”与操作一致性：给药准备：试验药品需按说明书储存（如冷藏、避光），给药前核对批号、有效期、剂量。受试者需空腹（或按方案要求进食标准化餐），给药时记录精确时间（如“____08:00:00”）、剂量、药品状态（如是否溶解完全）。样本采集：按预设时间点（如给药前0h，给药后0.5h、1h、2h…24h）采集静脉血（或尿液），采集量根据检测需求确定（如血浆检测需5~10mL全血）。采集后立即处理（如30分钟内离心），避免溶血、凝固。样本处理与标记：血液样本在4℃、3000rpm条件下离心10分钟，分离血浆/血清后分装至冻存管，标记受试者编号、采集时间、样本类型（如“ID-001_0h_血浆”），记录处理时间（如“____08:15离心完成”）。（四）样本分析与数据处理：从实验室到统计学的闭环样本分析的准确性与数据统计的科学性，是判断等效性的核心：分析方法验证：采用经过验证的检测方法（如LC-MS/MS、HPLC），验证指标包括特异性（无内源性干扰）、线性（覆盖PK浓度范围）、精密度（日内/日间RSD＜15%）、准确度（回收率85%~115%）、稳定性（冻融、长期保存的变化率＜15%）。样本检测：在规定时间内（如采集后24小时内）完成检测，记录原始数据（如峰面积、保留时间），异常值（如浓度超出线性范围）需复测并调查原因（如是否操作失误）。统计分析：计算PK参数（AUC₀₋ₜ、AUC₀₋∞、Cmax、Tmax），采用方差分析（ANOVA）和双单侧t检验评价等效性，判断90%置信区间是否落在80%~125%范围内（或法规规定的其他范围）。二、关键环节的保存要求（一）生物样本保存：从短期到长期的全周期管理生物样本（血浆、血清、尿液等）的稳定性直接影响检测结果，需分阶段管控：短期保存：处理后的样本如需短期（数小时至2天）保存，可置于4℃冰箱，避免反复开盖；如需转运，使用冰袋保温（温度2~8℃），并记录转运时间、温度。长期保存：需转移至-20℃或-80℃冰箱（根据药物稳定性选择），冻存管需密封防漏（如使用螺口管并旋紧），避免样本挥发或污染。保存期限至少为试验报告批准后2年（或按法规要求延长）。冻融管理：样本解冻后应尽快检测，如需重复检测，冻融次数不超过3次（每次冻融后记录时间、温度），避免降解（如蛋白类药物易因反复冻融失活）。（二）试验用药品保存：从储存到分发的全链条合规试验药品的质量稳定性是试验等效性的前提，需严格遵循以下要求：储存条件：按药品说明书要求储存，如常温（10~30℃）、冷藏（2~8℃）、冷冻（-20℃以下），需避光、防潮（如使用棕色瓶、干燥剂），避免与易挥发、腐蚀性物质同存。有效期管理：定期检查药品有效期，过期药品立即报废并记录（如“____报废批号XXX药品，数量XX”）；开封后的药品按规定使用（如西林瓶开启后剩余药液需丢弃，避免污染）。分发与回收：建立药品分发台账，记录受试者给药时间、剂量、剩余量；试验结束后回收剩余药品，核对“分发量=使用量+回收量”，回收药品按规定销毁或返还申办者。（三）试验文件保存：从原始记录到报告的全周期存档试验文件是合规性审查的核心依据，需满足可追溯、防篡改要求：文件类型：包括试验方案、伦理批件、知情同意书、受试者病历、样本检测原始数据（如色谱图）、分析报告、统计报告等，需纸质+电子备份。保存期限：按法规要求保存（如中国GCP要求保存至试验药物批准上市后5年，或更长），电子文件需加密存储（如设置访问权限），防止篡改。保存环境：纸质文件需防火、防潮、防虫（如使用档案柜、除湿机），电子文件定期备份（如每周备份至云端+本地硬盘），确保数据安全。